肿瘤细胞对DNA拓扑异构酶Ⅰ抑制剂的耐药研究进展

DNA拓扑异构酶(Topo)抑制剂作为一种新的抗癌靶点,在恶性肿瘤的治疗中有广阔的应用前景,然而耐药性的出现极大限制了其临床应用.Topo分Ⅰ,Ⅱ两型,就TopoⅠ抑制剂的耐药机理及可能的逆转途径进行综述.     

拓扑异构酶与卵巢恶性肿瘤耐药关系的研究进展

拓扑异构酶(topoisomerase,topo)是参与DNA拓扑结构调整和转录、复制、修复的重要工具酶,由活性Tyr残基向DNA发动亲核攻击,导致DNA单股或双股断裂.Topo蛋白的含量、活性、功能改变是卵巢癌耐药发生的重要机制之一,作用于相关信号传导通路的上游.TopoⅡ蛋白表达增加的卵巢癌患者预后较差.TopoⅠ、Ⅱ抑制剂如TPT、VP-16等在复发卵巢癌的有效率大致为13%～25%,现已成为二线用药的首选.     

65例早期宫颈癌耐药基因产物与临床预后关系的初步探讨

目的:探讨耐药基因产物P-糖蛋白(P-gp)、谷胱甘肽-s-转移酶(GST-π)、拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)、胸苷酸合成酶(TS)在宫颈癌中的表达及临床意义.方法:应用免疫组织化学方法检测65例宫颈癌中P-gp、TopoⅡ、GST-π、TS的表达,并分析其与临床预后之间的关系.结果:P-gp的表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移有关(P<0.05),与UICC分期、局部复发无关(P>0.05);TopoⅡ的表达与淋巴结转移、局部复发有关(P<0.05),与肿瘤分化程度、UICC分期无关(P>0.05);GST-π的表达与各个指标之间均有关(P<0.05);TS与淋巴结转移、UICC分期有关(P<0.05),与局部复发、肿瘤分化无关(P>0.05)。经多因素Cox比例风险模型分析显示:局部复发、淋巴结转移及TopoⅡ、GST-π的表达与宫颈癌患者术后生存率有关(P<0.05)。结论:联合检测宫颈癌中P-gp TopoⅡ、GST-π、TS对判断宫颈癌的预后十分必要;局部复发、淋巴结转移及TopoⅡ、GST-π的表达可作为宫颈癌患者独立的预后因素。     

卵巢癌拓扑异构酶Ⅱα表达与化疗敏感性的关系

目的 :研究卵巢癌拓扑异构酶Ⅱα表达与化疗敏感性的关系。方法 :采用免疫组化Envision法检测 81例上皮性卵巢癌TopoⅡα的表达 ,并予以 3～ 8个疗程以铂类为主的联合化疗。结果 :低分化卵巢癌TopoⅡα的表达明显高于中、高分化者 (P =0 .0 4 7) ,术前行化疗的卵巢癌TopoⅡα表达明显低于术前未化疗者 (P =0 .0 0 2 ) ,而复发性卵巢癌TopoⅡα表达再次升高 ;不考虑MDR1因素时 ,TopoⅡα与化疗敏感性间未见明显的相关性 (P =0 .0 73) ,而在排除MDR1影响后 ,TopoⅡα表达与化疗疗效间具有明显相关性 (P=0 .0 2 6 ) ,阳性表达时化疗效果好 ,未发现TopoⅡα的表达强度与化疗疗效间有相关性(P =0 .98)。结论 :TopoⅡα表达与卵巢癌分化程度有关 ,化疗影响TopoⅡα的表达 ,复发病例TopoⅡα表达重新增强 ,MDR1阴性时 ,TopoⅡα表达与化疗敏感性间具有明显相关性。因此 ,可以根据卵巢癌TopoⅡα表达情况 ,制定合理的化疗方案     

拓普替康耐药机制研究进展

拓普替康(topotecan，TPT)是半合成的水溶性喜树碱的衍生物，作为拓扑异构酶(topo)Ⅰ的抑制剂，已成为首选的二线化疗药广泛用于复发或耐药的卵巢癌实体瘤的治疗。而TPT耐药性的产生则限制其临床应用。本文综述了近年来TPT耐药机制和耐药逆转的研究进展。     

人卵巢上皮性癌顺铂耐药细胞系3AO/cDDP模型的建立及耐药机理的实验研究

目的：模拟临床卵巢上皮性癌化疗的用药特点建立顺铂耐药细胞系3AO／CDDP,检测LRP、MRP、P－gp、GSTπ和TopeⅡ表达。方法：以临床卵巢上皮性癌化疗用药的最低剂量换算终浓度,采用大剂量顺铂（10μg／ml）反复间歇24h暴露法建立顺铂耐药细胞系;用FCM法检测LRP、MRP、P－gp、GSTπ和TopoⅡ表达。结果：历时4．5个月建成顺铂耐药株3AO／cDDP,耐药性稳定,耐药指数1．62,与临床耐药倍数相近。3AO／cDDP细胞MRP、P－gp表达与3AO相比无明显变化（P＞0．05）,LPR、GSTπ表达明显升高（P＜0．005及P＜0．05）,Tope-Ⅱ含量明显降低（P＜0．05）。结论：3A0／cDDP是模拟临床用药特点建立的、研究顺铂耐药的理想模型;顺铂耐药与LRP、GSTπ表达升高及TopoⅡ含量降低有关,与MRP、P-gp无关。     

微血管密度、细胞增殖指数与子宫肉瘤生存分析探讨

目的:通过检测原始造血细胞抗原(CD34)和DNA拓扑异构酶IIα(TopoⅡα)的表达水平,反映子宫肉瘤生长、转移、复发的临床特点,探讨两种标记物用于监测子宫肉瘤病情及判断预后的意义。方法:应用免疫组织化学(IHC)法检测子宫肉瘤中CD34、TopoⅡα的表达水平。结果:除病理类型及分期外,CD34和TopoⅡα表达与患病年龄、初潮年龄、孕产次、月经周期及经期、是否绝经无关。低微血管密度(MVD)组和低细胞增殖指数(LI)组患者经不同范围的手术治疗,生存期有差别。手术治疗+辅助治疗组的两种标记物低值组与高值组对生存期的影响无统计学意义。高值组总体生存率低于低值组,Log-Rank检验,P分别为0.0035和0.0039。Cox模型多因素回归分析示:子宫肉瘤预后与病理类型、分期、是否切除双侧卵巢、TopoⅡα、CD34表达有关,与其它临床病理特征无关。结论:CD34-MVD可能是反映子宫肉瘤侵袭转移的特异性指标。TopoⅡα有望作为子宫肉瘤细胞增殖的特异性标记物。     

RNA干扰技术抑制卵巢上皮性癌耐药细胞Topo Ⅱα基因表达并逆转耐药的体外研究

目的 探讨RNA干扰技术抑制卵巢上皮性癌(卵巢癌)耐药细胞TopoⅡα基因的表达是否能逆转耐药.方法 (1)设计并筛选针对Topo Ⅱα基因的、沉默效果最佳的小分子干扰RNA(siRNA),将其克隆到psilencer4.1-CMV-neo载体上;将psilencer4.1-CMV-neo-Tope Ⅱα重组质粒转染至受试细胞,建立稳定转染重组质粒的细胞Topo Ⅱα siRNA(+)SKOV3/DDP.(2)采用RT-PCR技术和蛋白印迹法测定稳定转染细胞中TopoⅡαmRNA和蛋白的表达;分别采用四甲基偶氮唑蓝比色法、流式细胞仪和高效液相色谱法测定TopeⅡαRNA干扰前后细胞的耐药指数、细胞周期和细胞内顺铂含量的变化.结果 (1)转染psilencer4.1-CMV-neo-Topo Ⅱα质粒后能抑制SKOV3/DDP细胞中TopoⅡα基因的表达,TopeⅡα siRNA(+)SKOV3/DDP和SKOV3/DDP细胞中TopoⅡα mRNA的表达水平分别为0和0.92±0.08;两种细胞中TopoⅡα蛋白的表达水平分别为0.51±0.04和1.95±0.09,两者比较,差异有统计学意义(P<0.01).(2)SKOV3/DDP细胞转染Topo Ⅱα siRNA后耐药指数下降,TopoⅡα siRNA(+)SKOV3/DDP和SKOV3/DDP细胞的耐药指数分别为3.46和5.05,两者比较,差异有统计学意义(P<0.05).(3)TopoⅡα siRNA(+)SKOV3/DDP细胞的G_0/G_1期、G_2/M期细胞比例较SKOV3/DDP细胞增加,S期细胞比例减少(P均<0.05).(4)Topo Ⅱα siRNA(+)SKOV3/DDP细胞经20 μg/ml顺铂处理24 h后,其顺铂含量(157.20 ng)较SKOV3/DDP细胞(63.99 ng)升高,两者比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 阻断卵巢癌耐顺铂细胞中Topo Ⅱα基因的表达能逆转其对顺铂的耐受性.     

拓扑异构酶与卵巢恶性肿瘤耐药关系的研究进展

拓扑异构酶(topoisomerase，topo)是参与DNA拓扑结构调整和转录、复制、修复的重要工具酶，由活性即残基向DNA发动亲核攻击，导致DNA单股或双股断裂。Topo蛋白的含量、活性、功能改变是卵巢癌耐药发生的重要机制之一，作用于相关信号传导通路的上游。Topo II蛋白表达增加的卵巢癌患者预后较差。TopoI、II抑制剂如TPT、VP-16等在复发卵巢癌的有效率大致为13％-25％，现已成为二线用药的首选。     

内质网应激激活与依托泊甙和放线菌素D耐药绒癌相关性研究

目的探讨内质网应激激活与拓扑异构酶Ⅱα介导的依托泊甙(etoposide,VP16)和放线菌素D(actinomy-cin-D,Act-D)耐药绒癌的关系。方法采用间断诱导法诱导人绒癌细胞系JEG-3,分别建立绒癌ActD耐药细胞系JEG-3/ActDB1和VP16耐药细胞系JEG-3/VPC1。细胞计数法(cell counting kit-8,CCK-8)观察敏感细胞和耐药细胞的生长增殖规律和耐药指数;流式细胞仪检测细胞周期比例和染色体倍性变化;荧光定量PCR技术分别检测两种不同药物诱导的JEG-3耐药株中拓扑异构酶Ⅱα(TopoⅡα)和内质网应激(ERS)各个通路相关的基因mR-NA的表达水平。结果 (1)成功建立了绒癌耐药细胞系JEG-3/ActDB1和JEG-3/VPC1。其耐药指数分别为50.64±10.68和65.87±3.19。耐药株生长速度均较亲本细胞减慢,三者的染色体倍性差异无统计学意义。(2)在两种不同的耐药株中,TopoⅡα的表达水平均明显低于亲本细胞,而与ERS各个通路相关基因均有不同程度的激活。结论成功建立了针对ActD和VP16耐药的绒癌细胞系JEG-3/ActDB1和JEG-3...     

宫颈鳞状细胞癌ATP-TCA法体外药敏试验与耐药相关蛋白表达的关系

目的:探讨代表不同耐药机制的P糖蛋白(P-gp)、谷胱甘肽S-转移酶(GST-π)、DNA拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)、胸苷酸合成酶(TS)在原发宫颈鳞癌组织中的表达及其与临床病理参数的关系;分析三磷酸腺苷生物荧光法体外药敏试验(ATP-TCA)结果与耐药蛋白表达的关系。方法:收集32例宫颈鳞癌患者的新鲜癌组织制成单细胞悬液,采用ATP-TCA法成功检测上述细胞对11种化疗药物(共16种组合)的体外敏感性;采用EnVision二步法免疫组化检测32例宫颈鳞癌组织中P-gp、GST-π、TopoⅡ、TS蛋白的表达,并分析其与临床分期、肿瘤分化程度的关系。结果:耐药蛋白P-gp、GST-π、TopoⅡ、TS在宫颈鳞癌组织中的表达与临床分期、肿瘤分化程度无相关性;耐药蛋白P-gp表达与体外PTX+CBP耐药正相关(P=0.040);耐药蛋白TS表达与体外5-FU、5-FU+MMC、5-FU+DDP耐药正相关(P=0.015,0.012,0.006);TopoⅡ,GST-π蛋白表达与宫颈鳞癌体外耐药均无相关性。结论:体外药敏试验联合免疫组化检测,有可能用于宫颈鳞癌化疗前药敏预测。     

卵巢癌耐药基因的研究进展

目前对卵巢癌的治疗原则仍是以手术为主、辅以化疗等综合治疗。随着以顺铂、紫杉醇为基础的联合化疗方案广泛和标准化应用，化疗效果显著提高。但随之而来的肿瘤细胞的原发性和／或获得性耐药现象成为临床治疗的障碍。因此，探索耐药机制是解决耐药问题、改善化疗效果的关键。随着生命科学的飞速发展，分子生物学技术的不断改进，从基因组水平去研究耐药机制逐渐成为热点，本文就耐药基因研究进展综述如下。     

米非司酮和肿瘤多药耐药

多药耐药是临床肿瘤化疗失败的主要原因，为此必须寻找有效的耐药逆转剂。近年来发现米非司酮能通过以下途径逆转耐药：降低P－糖蛋白和多药耐药相关蛋白对药物的外排作用，增加细胞内药物浓度；阻断神经酰胺向葡萄糖基化神经酰胺的转化，促进细胞凋亡。而且与其他逆转剂相比，米非司酮所需浓度低，对人体无明显副作用，因此有较广泛的临床应用前景。     

转基因动物在卵巢肿瘤研究中的应用

转基因动物技术为人类恶性肿瘤模型的建立提供了有利工具。在妇科肿瘤研究方面，转基因动物，特别是转基因小鼠的出现，极大地推动了卵巢肿瘤研究的进展，尤其是在卵巢肿瘤的发生与进展机制、多药耐药及卵巢肿瘤的生物治疗等方面。因此，就转基因动物模型的研究基础与常用方法及其在卵巢肿瘤研究中的应用作一综述。     

核苷酸切除修复与卵巢癌顺铂耐药

DNA操作修复能力增强是导致卵巢顺铂耐药的主要原因之一。由铂-DNA加合物引起的DNA损伤修复主要通过核苷酸切除修复途径，该签字径涉及多种蛋白，包括损伤识别、切开、切除、修复合成和DNA连接等5个步骤，大量基础和临床研究表明核苷酸切除修复基因表达水平的增加与卵巢癌顺铂耐药相关联。应用基因治疗、化疗增效液晶或联合化疗抑制肿瘤细胞的DNA修复能力将增加卵巢癌患者顺铂敏感性。     

mRNA差异显示PCR技术在妇科肿瘤研究中应用

mRNA差异显示技术(differential display-PCR,DD-PCR)是在转录水平上研究基因表达差异的有效方法，可以比较多种样本间不同表达的基因。因该方法简便、敏感、可重复性强等特点，已成为研究肿瘤分子生物学基础的良好工具。综述DD-PCR技术在妇科肿瘤发生发展、耐药及转移机制研究中的应用。     

硬膜外自控镇痛在子宫动脉栓塞术治疗子宫腺肌病中的应用

目的：探讨病人硬膜外自控镇痛（patient controlled epidural analgesia,PCEA)在子宫动脉栓塞术（uterine arterial embolization,UAE)治疗子宫腺肌病中的应用。方法：选择75例行UAE治疗子宫腺肌病的患者，随机分成3组，Ⅰ、Ⅱ组术前开始予自自控镇痛24小时，予相同的镇痛模型，两种不同的药物配伍：罗哌卡配伍吗啡为Ⅰ组（n＝30），罗哌卡因，吗啡配伍氟哌啶为Ⅱ组（n=30)，Ⅲ组术后自觉疼痛时予传统的肌注四氢巴马汀（颅痛定）或盐酸哌盐啶（n=15)，比较三组术中和术后24小时内的镇痛效果。不良反应安全性。结果：PCEAⅠ组、Ⅱ组的镇痛效果优于Ⅲ组，结合不良反应其临床疗效为：Ⅱ组＞Ⅰ组＞Ⅲ组。结论：UAE治疗子宫腺肌病术中应用PCEA镇痛效果好，不良反应小，舒适。安全。     

卵巢癌顺铂敏感株C0C1与其耐药亚株C0C1/DDP间的差异蛋白组学分析

随着后基因组时代的到来及蛋白质组学理论及技术的迅速发展及完善，从蛋白质这一全新的角度探讨卵巢癌的顺铂耐药机制已成为可能。本研究采用差异凝胶电泳（difference gel electrophoresis，DIGE）技术比较分析了卵巢癌顺铂敏感株（C0C1）及耐药株（C0C1／DDP）的差异蛋白，期待找到与顺铂耐药相关的关键分子。     

应用定量逆转录聚合酶链反应技术检测子宫颈癌多药耐药基因的表达

应用定量逆转录聚合酶链反应技术检测子宫颈癌多药耐药基因的表达康山李琰宋藏珠孙玉敏宋俊芬周卫东多药耐药是提高肿瘤化疗疗效的主要障碍之一，对其研究的一个重要任务就是找出切实可行的检测方法。以前的研究表明，多药耐药基因（ＭＤＲ１）编码的跨膜糖蛋白Ｐｇｐ介导...     

心脏瓣膜置换术及二尖瓣球囊扩张术后分娩13例分析

目的：探讨心脏手术后产妇的分娩方式、抗凝剂的应用。方法：对１３例心脏手术后孕妇分娩的资料进行回顾性分析。结果：心脏手术后心功能Ⅰ～Ⅲ级，心脏手术后１年半以上可以妊娠并安全渡过孕产期；妊娠期口服华法令及分娩期应用肝素未增加母婴出血及新生儿畸形。结论：心脏瓣膜置换术者采用手术产为宜，二尖瓣球囊扩张术者以阴道分娩为宜。心脏手术后分娩前心功能达到Ⅰ～Ⅲ级、服用强心剂达到Ⅱ～Ⅲ级者，可安全分娩；妊娠期依据凝血酶原值服用抗凝剂，不增加分娩并发症。