肺结核、肺癌患者外周血结核分枝杆菌及其L型的检测方法

目的：建立检测血液中结核分枝杆菌及其Ｌ型的简便方法,并对其临床应用进行评价。方法：将红细胞裂解后离心检测,建立ＰＣＲ法、直接培养法、溶血离心培养法、溶血离心涂片法和滴片法。结果：１３例肺结核和２５例肺癌患者中,肺结核和肺癌患者外周血结核分枝杆菌ＰＣＲ检测的阳性数为８例中３例和１１例中３例;结核分枝杆菌及其Ｌ型直接培养法总阳性率为１７．６５％,溶血离心涂片法、溶血离心培养法、滴片法的总阳性率分别为９．５２％、４１．１８％和５８．８２％;肺结核和肺癌患者外周血结核分枝杆菌以Ｌ型为主,表现为抗酸或非抗酸。结论：肺结核和肺癌患者外周血存在结核分枝杆菌及其Ｌ型,并以Ｌ型为主;溶血离心培养法和滴片法结合免疫酶染色可常规用于检测血液中结核分枝杆菌及其Ｌ型。     

采用聚合酶链反应检测肺结核病患者中的结核杆菌

目的：建立一种快速，敏感及特异的早期诊断肺结核病方法。方法：采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，检测了６４例肺结核患者的外周血与痰标本结核杆菌－ＤＮＡ。结果：外周血结核杆菌－ＤＮＡ的阳性率为６７．２％（４３／６４），痰标本的阳性率为２９．６％（１９／６４）（Ｐ〈０．０５），结论：用ＰＣＲ技术诊断肺结核病，可提高临床检测的特异性和敏感性。     

斑点金免疫渗滤法检测结核分枝杆菌抗体在肺结核诊断中的应用

目的：探讨利用斑点金免疫渗滤试验（DIFGA）检测结核分枝杆菌抗体对肺结核临床诊断的应用价值。方法：应用斑点金免疫渗滤法检测了正常人和各类肺部疾病患者共313例血清中结核分枝杆菌抗体，并与痰液涂片法、结核菌培养法和PCR法进行方法学比较。结果：结核分枝杆菌抗体检测肺结核患者阳性率为80．77％．非结核性肺病患者阳性率为7．64％，正常人阳性率为3．08％。结论：斑点金免疫渗滤法检测结核分枝杆菌抗体对肺结核的诊断敏感性高，特异性好，对肺结核诊断有较高的应用价值，并且操作简便、快速，与涂片法、培养法和PCR相比，有明显优势。     

聚合酶链反应检测胸腔积液中结核菌的价值

目的本研究应用聚合酶反应（ＰＣＲ）技术对２１６例（结核性胸水１５６例，非结核性胸水６０例作为对照）胸水进行结核ＤＮＡ检测，并与传统的方法比较，结果表明结核组胸水的阳性率ＰＣＲ为５６．４％涂片抗酸染色为３．８％，培养为５．１％ＰＣＲ阳性率与涂片和培养比较，差异有显著性（Ｐ〈０．０１），非结核对照组胸水的阳性为１３．３％涂片，培养０％，提示ＰＣＲ技术检测胸水中结核菌ＤＮＡ是诊断结核性胸水的一种快速方法     

聚合酶链反应对肺结核的诊断价值

我们应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，检测临床诊断肺结核菌ＤＮＡ，同时检痰涂片及痰培养结核菌。结果ＰＣＲ的阳性率为７４．３０％，痰涂片阳性率为２．０８％，痰培养的阳性率为７．７０％。经统计学处理，前者均高于二者，Ｐ均＜０．００１。说明ＰＣＲ技术可快速高效检测肺结核病人结核菌的ＤＮＡ。     

聚合酶链反应检测泌尿系结核患者尿中结核杆菌

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对３４例泌尿系结核病人的２４小时尿液标本进行结核杆菌染色体中３３６－ｂｐ重复序列ＤＮＡ片段的扩增检测，阳性率为９４．１％。ＰＣＲ检测２４小时尿样中结核杆菌比尿沉淀物涂片法找抗酸杆菌（阳性率５６％）及结核杆菌快速培养法Ｂａｃｔｅｃ培养结核杆菌（阳性率７０．６％）更敏感。我们还用ＰＣＲ、涂片法、Ｂａｃｔｅｃ培养法检测了１０例非泌尿系结核者中结核杆菌，阳性结果分别为０、０、３     

聚合酶链反应在肺结核诊断上的应用及临床意义

结核病是长期以来危害人类生命健康的严重疾患 ,在我国结核病迄今仍是常见病。目前结核病确诊主要依靠痰涂片染色镜检抗酸杆菌和结核分枝杆菌的培养与鉴定。但痰涂片阳性率不高 ,培养一般需要 4～ 6周 ,时间较长。我院近两年来 ,应用聚合酶链反应(ＰＣＲ)技术检测了痰ＴＢ -ＤＮＡ 4 80份 ,血ＴＢ -ＤＮＡ150份 ,阳性率高 ,对肺结核病的诊断帮助较大。现报告如下。1　资料与方法1.1　临床资料　 4 80份痰标本中 ,肺结核 4 60份 ,2 0份非结核肺部疾病 ;150份肺结核病人外周血标本 ,自1998年 5月～ 2 0 0 0年 3月 ,从我院肺结核病区住院患者中…     

结核抗体与结核菌DNA联合检测对结核性膜炎的诊断价值

为观察胸水结核抗体与结构菌ＤＮＡ联合检测在结核性胸膜炎中的诊断价值，本文对１３４例不同时进行结核菌涂片，培养、结核菌ＤＮＡ扩增（ＰＣＲ法）及结核抗体（ＥＬＳＩＡ法）的检测。结果显示：７５例结核性胸水中，４项检查的阳性率依次为６．７％、１３．３％、６６．７％，８８．０％。经统计学处理，后２项显著高于前２项。结核抗体与结核菌ＤＮＡ同时阳性４８例，阳性吻合率６４．０％，５９例非结核性胸水中，涂片、培养均     

结核抗体在诊断结核病中的意义

目的分析胶体金法检测结核分枝杆菌抗体在肺结核诊断中的应用价值。方法采用胶体金法诊断试剂盒对260例肺结核患者，35例肺外结核患者和85例健康者共380例血清进行结核分枝杆菌抗体检测，同时用涂片法、培养法进行方法学对比分析。结果胶体金法检测肺结核患者结核分枝杆菌抗体阳性率82．7％，肺外结核阳性率77．1％，健康对照组仅为8．2％。结论胶体金法敏感性高，特异性好，对肺结核及肺外结核诊断有极高的参考价值，该方法操作简便，快速，与涂片法、培养法相比有明显优势，适合基层医疗机构推广应用。     

荧光定量聚合酶链反应技术检测痰结核分枝杆菌DNA及其临床应用研究

目的探讨荧光定量聚合酶链反应(fluoreseenee quantitative PCR，FQ-PCR)技术在肺结核诊断中的临床价值。方法对144例活动性肺结核的痰及30例健康对照者的痰进行FQ-PCR检测，并与痰涂片检查法、改良罗氏培养法结果进行比较。结果FQ-PCR检测痰结核分枝杆菌阳性率、痰涂片抗酸检查法阳性率、改良罗氏培养法阳性率分别为61．1％(88／144)、51．4％(74／144)、55．6％(80／144)，以FQ-PCR检测痰结核分枝杆菌阳性率为最高，FQ-PCR检测特异性为100％。结论FQ-PCR技术检测痰结核分枝杆菌具有较高的敏感性和特异性．该方法快速、准确．对肺结核的诊断有一定价值。     

套式PCR在检测结核分枝杆菌embB基因突变中的应用价值

目的采用套式PCR（二次扩增）替代传统PCR（一次扩增）扩增痰中结核分枝杆菌embB基因。探讨其在检测结核分枝杆菌embB基因突变中的应用价值。方法选取本院已确诊的活动性肺结核住院病人68例和非结核肺部感染病人16例，嘱其留取晨痰，分别进行套式PCR扩增和传统PCR扩增，再行产物分析。结果68例活动性肺结核病人传统PCR扩增embB基因阳性结果为29例，阳性率为42．6％。套式PCR扩增embB基因阳性结果为47例。阳性率为69．1％，两者比较差异有显著性（X^2=9．66，P〈0．05）；16例非结核病人传统PCR和套式PCR和检测结果均为阴性，两者特异度均为100％。结论检测结核分枝杆菌embB基因突变，套式PCR灵敏度高于传统PCR．两者特异度相同，套式PCR能快速、敏感、特异地扩增结核分枝杆菌embB基因片段。     

检测结核杆菌六种实验方法的比较分析

应用聚合酶链反应（PCR）、涂片抗酸染色、BACTEC快速培养、L－J法培养、ELISA测PPD－IgG和结核杆菌抗原六种方法对57例临床部病人和36例中枢神经系统（CNS）感染病人检测结核杆菌。结果表明，对肺部病人还是CNS感染病，PCR检测结核杆菌的阳性率最高，PCR对肺结核病人的敏感性和特异性分别为96．7％和100％，对结核性脑膜炎病人的敏感性和特异性均为100％，六种方法中敏感性最低的是涂片法，肺结核为33％，结核性脑膜炎为20％，BACTEC快速培养法敏感性（痰76．7％，CSF50％）L－J法（痰60％，CSF25％）；免疫学方法敏感性较高，但存在一定假阳性。实验结果表明，PCR技术是早期、快速和准确地诊同的有效方法。     

耐药肺结核患者痰标本中结核分枝杆菌L型四种检测方法比较

目的:比较耐多药肺结核患者痰标本中结核分枝杆菌L型的四种实验室检查方法及其临床意义.方法:对103例耐多药肺结核患者的痰标本分别采用萋-尼(Ziehl-Neelsen)抗酸染色法、改良罗氏培养法、聚合酶链反应(PCR)和结核分枝杆菌L型培养法进行检测.结果:结核分枝杆菌L型培养阳性率高于抗酸染色涂片、改良罗氏培养和PCR检测(P＜0.05～P＜0.005).结论:结核分枝杆菌L型培养可提高结核分枝杆菌的阳性检出率,对结核病的早期、快速诊断具有重要价值;耐多药肺结核患者有较高的结核分枝杆菌L型感染率,这也是结核病程缓慢变化、复发、难治的重要原因.     

聚合酶链反应对肺结核的诊断价值

对７０例肺结核和２０例其它肺部疾病患者行痰及血标本ＰＣＲ检测、痰培养和涂片镜检结核菌。结果表明肺结核组痰ＰＣＲ阳性率为６４．３％，血ＰＣＲ阳性率为１１．４％，培养阳性率为３０．０％，涂片阳性率为２４．３％。其它肺部疾病ＰＣＲ阳性率为１０％，血ＰＣＲ为０，涂片阳性率为０，培养阳性率为０，表明痰ＰＣＲ特异性好，敏感性高，且快速，与临床符合率较高，不失为结核病的诊断和鉴别诊断的一种可靠的方法。     

肺结核患者外周血中结核杆菌DNA检测的意义

用ＰＣＲ技术对肺强核患者外周血１０８例和痰９６例中结核杆菌ＤＮＡ进行检测，结果患者外周血和痰中结核杆菌ＤＮＡ阳性率分别为７７．７８％和５７．２９％；其中５２例患者外周血和痰标本配对同时检测总阳性率达９２．３％，提示外周血结核杆菌ＤＮＡ检测可提高肺结核诊断敏感性和阳性检出率，可作为肺结核诊断有用的指标。     

临床肺结核治疗中耐药性分析及对策

目的:了解从分离自肺结核患者的结核分枝杆菌耐药基因突变率及耐药情况,以利抗结核治疗中药物的合理选用。方法:对痰涂片阳性的新发初治和复治肺结核患者进行痰结核分枝杆菌培养,阳性菌株采用高、低两种药物浓度,四种抗结核药物耐药性测试,同时用实时PCR法对结核分枝杆菌的耐药基因和突变进行检测。结果:127例痰培养阳性菌株总耐药率为14.2%,其中初治耐药率8.1%,复治耐药率35.7%,对四种抗结核药物的耐药率依次为异烟肼8.7%,利福平2.4%,链霉素2.4%,乙胺丁醇0.8%。耐药基因检测结果,在初治组中rpoB和katG的突变率为12.1%(12/99)和10.1%(10/99);复治组中rpoB和katG的突变率为32.1%(9/28)和21.4%(6/28)。结论:分离自肺结核患者的结核分枝杆菌在初始治疗时已存在耐药性,而药物治疗有可能使其耐药性增加。结果表明抗结核治疗前及在治疗过程中对结核分枝杆菌进行耐药性及耐药基因检测对指导临床抗结核治疗很有实际意义。     

THE ROLE OF RAPID SLIDE CULTURE IN THE DIAGNOSIS AND MANAGEMENT OF PULMONARY TUBERCULOSIS

Rapid slide culture method using human blood medium was utilized for the primary culture of Mycobacterium tuberculosis and the results obtained were compared with results of smear examination of sputum specimens from fresh cases of pulmonary tuberculosis. Smear and rapid slide culture results of a total of 320 patients were analyzed. Slide culture was positive in 104 cases whereas smears were positive in 90 cases. Early culture confirmation in 7 days coupled with positivity better than smear examination, makes rapid slide culture a better method for diagnosis.KEY WORDS: Mycobacterium tuberculosis, Rapid slide culture, Bacteriological techniques, Colony count microbial     

DNA AMPLIFICATION OF A REPETITIVE SEQUENCE - IS 6110 IN THE EARLY DIAGNOSIS OF EXTRA PULMONARY TUBERCULOSIS

DNA amplification by Polymerase Chain Reaction (PCR) of a repetitive sequence specific for Mycobacterium tuberculosis, from clinical samples of extra pulmonary origin were evaluated. The 123 base pair fragment of the insertion element IS 6110 in Mycobacterium tuberculosis was amplified. A total of 50 samples were analysed by PCR and compared with culture on Lowenstein-Jensen medium (LJ) and the clinical findings of the patient. Out of the total 26 samples were positive by PCR, while only seven grew the bacilli in culture. 24 samples were negative by PCR and culture. All the seven samples that grew the bacilli on culture were positive by PCR. In remaining 19 cases that were positive by PCR but did not grow the bacilli clinical features, radiological findings and Mantoux test were strongly suggestive of M. tuberculosis. All the amplification negative cases had no positive evidence of tuberculosis but were being followed up. When correlated with culture and clinical history the sensitivity of PCR for the diagnosis of active tuberculosis was 100%. However, the specifity was only 55.8% as culture on LJ (Gold Standard) was positive in only 7 samples out of 26 samples that were positive by PCR.KEY WORDS: DNA Amplification, IS 6110, Mycobacterium tuberculosis.     

聚合酶链反应在结核病诊断上的应用研究

本文运用ＰＣＲ检测技术，对５５例正常人，３５例非结核性肺部疾病患者，１４６例肺结核病人作对照，用抗酸染色法以及分枝杆菌培养法作对比分析，检测结果为ＰＣＲ检测法阳性率明显高于涂片和培养法，特异性为９７．８％，敏感世为８０％。由于其方法简单，检测速度快，灵敏度高，为结核病的诊断和鉴别诊断提供可靠的依据。     

荧光PCR熔解曲线法对痰样本结核分枝杆菌耐药性检测价值及耐药特征分析

目的：评估荧光PCR熔解曲线法（熔解曲线法）检测肺结核患者涂阳痰样本结核分枝杆菌（MTB）对一线抗结核药物耐药性价值及耐药特征分析。方法：收集涂阳且培养阳性肺结核患者痰样本和相应MTB菌株各142例,采用熔解曲线法检测痰样本MTB对抗结核药物链霉素（SM）、异烟肼（INH）、利福平（RFP）、乙胺丁醇（EMB）耐药情况,同时采用液体药敏法对相应MTB菌株耐药性检测,对两种检测结果行方法学比较。结果：以液体药敏法为标准,熔解曲线法检测痰样本MTB对4种抗结核药物耐药性结果差异无统计学意义（P>0.05）,熔解曲线法检测SM、INH、RFP、EMB耐药性的敏感度分别为：78.57% (11/14),70.00% (14/20),100.00% (12/12),71.43% (5/7);特异度分别为：92.97%(119/128),96.72%(118/122),97.69%(127/130),100%(135/135);两者符合率分别为：91.55%(130/142),92.96%(132/142),97.89%(139/142),98.59%(140/142);Kappa值分别为：0.601,0.696,0.877,0.826。结论：与传统液体药敏检测相比,熔解曲线法检测痰样本MTB对抗结核药物SM、INH、RFP、EMB的耐药性效能一致,特异度和符合率均较高。该法对结核患者涂阳痰样本MTB耐药性检测有较好临床参考价值。