人重组TNF-α在晶状体上皮细胞炎症损伤中的作用

目的研究TNF-α诱导的人晶体上皮细胞（HLE-B3）炎症损伤模型中细胞形态及性状的改变,探讨核因子-κB（NF—κB）信号通路在炎症损伤中的作用。方法将HLE-B3细胞分为两组,对照组加入普通培养液,观察组加入含TNF-α的培养液。观察两组细胞形态变化;划痕试验检测细胞迁移率变化;免疫组织化学、Western blot和荧光定量PCR法分别检测NF—κB蛋白及mRNA表达变化;ELISA法检测培养液中NF—κB下游因子IL-1和IL-6水平。结果观察组HLE-B3细胞伸长变细,迁移率明显增快,逐渐向成纤维细胞转化。刺激后NF—κB蛋白表达增多,并从胞质向胞核内转移。与对照组比较,TNF—α刺激后6hNF—κB蛋白及mRNA表蓝量均明显增高,12h时达到高峰;培养液中IL-1和IL-6水平刺激后亦明显增加。结论应用TNF-α进行诱导是建立HLE-B3细胞炎症损伤模型的有效方法;NF—κB信号通路被激活可能是开启炎症损伤的关键。     

急性坏死性胰腺炎大鼠心肌核因子-κB激活及重组葡激酶的干预作用

目的研究重症急性胰腺炎（SAP）心肌功能损害时心肌核因子-κB（NF—κB）的活化及葡激酶的干预作用。方法63只SD大鼠随机分为假手术组（n=9）、ANP组（n=27）、葡激酶干预组（n=27），ANP模型采用5％的牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射方法建立。干预自造模前2d腹腔注射葡激酶1．5mg／kg体重，一天2次，共4次。ELISA法测定制模后6h、12h、24h各时点血TNF—α、IL-6含量；RT—PCR检测心肌NF—κB mRNA的表达；免疫组化法检测心肌NF—κB蛋白的表达，常规观察胰腺及心肌组织的病理变化。结果ANP组术后6h大鼠心肌NF—κB mRNA及NF—κB蛋白表达异常增高，TNF—α、IL-6呈进行性升高，干预组胰腺及心肌组织的病理变化减轻。心肌NF—κB mRNA及蛋白表达下调，血TNF—α、IL-6明显下降，与ANP组比较，差异均显著（P〈0．05）。结论ANP大鼠的心肌损伤可能与循环中TNF—α、IL-6水平升高导致的心肌NF—κB活化有关。葡激酶对SAP并发的心肌损伤具有防治作用。     

苦瓜蛋白通过阻止核因子κB核转位抑制炎性因子生成

目的 研究苦瓜蛋白对载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠炎症因子核因子κB(NF-κB)蛋白核转位的影响,探讨苦瓜蛋白抗炎的分子机制.方法 40只6周龄雄性ApoE-/-小鼠,随机分为普食组、高脂高胆固醇组、高脂高胆固醇苦瓜蛋白组、普食苦瓜蛋白组.12周后眼球采血,ELISA测定血浆中炎性因子NF-κB、白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-6和γ干扰素(IFN-γ)及抗炎因子IL-10的水平,免疫组织化学检测主动脉壁IκB表达,RT-PCR和Western blot检测NF-κB和IκB表达.结果 ApoE-/-小鼠经高脂高胆固醇饲料喂养12周后,血液中炎症因子NF-κB、IL-1β、TNF-α、IL-6、IFN-γ水平均显著高于普食组(P＜0.01,n=5),但抗炎因子IL-10仍维持较高水平.经苦瓜蛋白干预后,血清中炎症因子水平下降,而抗炎因子IL-10水平并不上升.RT-PCR以及Western blot检测结果表明,苦瓜蛋白显著降低高脂高胆固醇饲料喂养小鼠动脉血管壁细胞核内NF-κB蛋白水平,阻止其核转位.与普食组比较,高脂高胆固醇组IκB被显著降解(0.19±0.05比0.74 +0.15,P＜0.05,n=5),但其经苦瓜蛋白干预后,这种降解作用得到显著的抑制(0.19±0.05比0.36±0.07,P＜0.01,n=5).结论 苦瓜蛋白通过减少IκB降解抑制NF-κB蛋白核转位而发挥抑制炎性因子生成的作用.     

红霉素衍生物抑制活化T淋巴细胞核转录因子-κB表达的研究

目的 通过观察红霉素衍生物9（S）-羟基红霉素对活化T淋巴细胞核转录因子（NF）-κB表达的影响．探讨红霉素衍生物在RA治疗中的潜在意义。方法 事先加入不同剂量的红霉素或9（S）-羟基红霉素后，用肿瘤坏死因子（TNF）-α诱导活化T淋巴细胞NF—κB表达，体外培养1h后，利用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法观察上述化合物对NF—κB的mRNA表达影响，利用Western Blot方法观察上述化合物对NF-κB蛋白水平表达的影响。结果 红霉素和9（S）-羟基红霉素均可抑制活化T淋巴细胞NF—κB的mRNA和蛋白表达，并与剂量呈相关性，在100μg／ml时红霉素和9（S）-羟基红霉素使NF—κB mRNA的相对表达分别降低36％、45％（P〈0．01），使蛋白表达分别降低46％，56％（P〈0．01）。结论 红霉素及其衍生物的抗炎活性可能是通过对活化T淋巴细胞NF—κB信号途径的作用实现的。提示红霉素衍生物在类风湿关节炎治疗中具有潜在意义。     

NF-κB信号通路关键蛋白I-κBα的磷酸化与结直肠癌组织发生发展的关联性

目的探究I-κB蛋白磷酸化在炎症因子高表达的结直肠癌组织中的作用。方法选取进行结直肠癌治疗的患者30例作为病例组,另选取进行肠镜活检且结直肠正常的患者30例作为对照组,观察比较两组血清白细胞介素(IL)-1、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α的表达水平,观察病例组癌组织、癌旁组织、正常组织中IL-1、IL-6、TNF-αmRNA表达量及Toll样受体(TLR)通路转录因子核因子(NF)-κB和I-κB的表达,I-κB与不同组织中炎症因子表达的关联性。结果病例组血清炎症因子IL-1、IL-6、TNF-α表达显著高于对照组(P0.05);癌组织中IL-1、IL-6和TNF-αmRNA表达量显著高于癌旁组织和正常组织,且癌旁组织上述指标显著高于正常组织,差异具有统计学意义(P0.05);NF-κB和β-actin在癌组织、癌旁组织和正常组织中的表达灰度值相比,差异不具有统计学意义(P0.05),但正常组织的I-κB蛋白表达量显著高于癌旁组织和癌组织,差异具有统计学意义(P0.001);病例组中I-κB的表达与组织中炎症因子IL-1(r=-0.551,P=0.031)、IL-6(r=-0.658,P=0.004)和TNF-α(r=-0.947,P=0.000)表达呈显著负相关。结论 I-κB表达缺失可能介导了结直肠癌中炎性因子的高表达,靶向调节I-κB具有潜在治疗前景。     

N-乙酰半胱氨酸对慢性阻塞性肺疾病大鼠炎症反应的抑制作用

目的探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠炎症反应的抑制作用。方法将50只SD大鼠随机分为正常组、模型组、NAC低、中、高剂量组(50、100、200 kg/mg NAC)。模型组及NAC组采用反复烟熏联合2次气管滴加脂多糖(LPS)复制COPD大鼠模型。对支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎性细胞进行计数,苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织病理形态,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测肺组织中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-8、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9含量及核因子(NF)-κB信号通路激活情况。结果与模型组比较,NAC低、中、高剂量组肺组织结构较为完整,有少量炎性因子浸润,炎性细胞数目,TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、MMP-2及MMP-9含量显著降低,p-IκBα表达显著下调,NAC中、高剂量组中p-核转录因子(NF)-κB p65表达显著上调(均P0.01)。结论 NAC能够通过阻断NF-κB信号通路抑制COPD大鼠炎症。     

脑心通对大鼠局灶性脑缺血脑组织炎症反应的影响

选择150只SD雄性大鼠，参照Longa等方法制成大鼠局灶性大脑中动脉阻断模型，均分为假手术组，生理盐水组，大、中、小剂量脑心通组（A、B、C1、C2、C3组），于术后6、24、48、72h和7d进行神经功能评分，观察脑含水量及组织病理学变化，并用免疫组化法观察NF—κB、IL-6、TNF—α、补体C3，变化。结果治疗后C1、C2、C3组NDS降低，病理损伤较轻，其中C1、C2组脑水肿明显减轻，NF—κB、IL-6、TNF—α、补体C3表达明显减少（P均〈0．05）。认为脑心通可能通过减轻脑水肿、降低脑内炎性因子表达，对大鼠缺血脑组织损伤起保护作用。     

腺苷A3受体在溃疡性结肠炎患者结肠黏膜中的异常表达和作用

目的研究腺苷A3受体/核因子-κB(NF-κB)信号通路在溃疡性结肠炎(UC)发病机制中的作用。方法经结肠镜获取UC患者结肠黏膜组织,采用免疫荧光和免疫印迹方法检测腺苷A3受体的分布和表达。采用免疫荧光方法检测腺苷A3受体与NF-κB p65信号分子在结肠黏膜上皮细胞的共定位表达。检测腺苷A3受体激动剂2-Cl-IB-MECA对人结肠上皮细胞系HT-29的NF-κB信号通路的激活及其下游炎性因子白细胞介素-8(IL-8)和IL-1β的表达水平的作用。结果 UC患者结肠黏膜上皮中腺苷A3受体表达显著下调,与正常对照比较差异有统计学意义(P0.01),腺苷A3受体与NF-κB p65信号分子共定位表达于结肠黏膜上皮细胞,NF-κB p65信号分子从上皮细胞质移位至细胞核。2-Cl-IB-MECA可下调肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的人结肠上皮细胞NF-κB p65的核转移和细胞核中的表达水平,也可明显降低IL-8和IL-1β蛋白分泌,与对照组比较差异均有统计学意义(P均0.05)。结论 UC患者结肠黏膜上皮细胞中腺苷A3受体表达下调,且NF-κB信号分子核转移。腺苷A3受体激活可抑制人结肠上皮细胞NF-κB信号通路及其下游炎性因子的表达,发挥抗炎效应。腺苷A3受体可能是UC患者的治疗靶标。     

溃疡性结肠炎患者血清促炎因子与抗炎因子的表达及其关系

目的 探讨溃疡性结肠炎（UC）患者血清促炎因子与抗炎因子的表达及其关系.方法 选择69例UC患者（UC组）,根据病情程度分为轻、中、重度,根据病理分级分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级;另选健康体检者60例作为对照组.采用ELISA法检测其血清TNF-α、IL-1β、IL-4和IL-13表达.结果 UC组血清TNF-α和IL-1β表达明显高于对照组,且随病情程度和病理分级升高而显著升高（P均＜0.05）;IL-4和IL-13表达明显低于对照组,且随病情程度和病理分级升高而显著降低（P均＜0.05）;UC组的血清TNF-α与IL-4、IL-13,以及IL-13与IL-4、IL-13均呈明显负相关（P均＜0.05）.结论 在UC发生、发展过程中,促炎因子与抗炎因子的动态平衡发生紊乱,促炎因子过度表达,且二者表达有密切关系.     

NF—κB在糖尿病患者心肌缺血／再灌注损伤中的作用

核因子-κB（nuclear factor kappaB,NF—κB）是一种重要的核转录因子,参与细胞炎症反应和氧化应激的信号传递,调控多种基因表达。糖尿病（diabetes mellitus,DM）患者全身和局部炎性反应增强,血清炎性标志物多增高,其产生的分子基础与NF—κB的异常表达相关。有研究显示,无论DM病程长短,DM患者体内多种组织均有NF-κB的异常表达。     

核因子-κB、细胞间粘附分子-1在C57BL／6小鼠实验性自身免疫性肝炎的表达

核因子（NF）-κB能诱导与免疫和炎症有关的多种细胞因子和粘附分子的表达，细胞间粘附分子-1（ICAM-1）是重要的炎症介质之一，在肝脏炎症、肝纤维化的发生及发展中起重要作用。本研究采用同种肝抗原S-100免疫小鼠，诱导建立实验性自身免疫性肝炎（EAH）模型，观察NF—κB、ICAM-1的表达，探讨NF-κB、ICAM-1在自身免疫性肝损伤中的可能作用机制。     

TNF-α诱导脑胶质瘤细胞凋亡过程中NF-κB、IκB活性的研究

目的探讨核转录因子-κB（NF-κB）及其抑制因子（ⅠκB）在肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱导人脑胶质瘤细胞株U251细胞凋亡过程中生物活性的变化。方法应用流式细胞仪检测TNF-α对U-251细胞生长的抑制和诱导凋亡作用。用免疫组化方法检测肿瘤细胞p65的表达，用Western blot检测IκB蛋白的变化。结果TNF-α可诱导U251细胞凋亡，激活细胞中p65并诱导ⅠκB降解；抗氧化剂二硫碳吡咯烷醇（PDTC）可抑制TNF-α诱导的ⅠκB的降解及NF—κB的激活，增强TNF-α诱导U251细胞的凋亡。结论TNF-α在诱导U251细胞凋亡的过程中可激活NF—κB。抑制NF—κB活性。可增强TNF-α诱导细胞凋亡的作用。     

霍奇金淋巴瘤IκBα基因第四外显子突变初步分析

霍奇金淋巴瘤（HL）临床治疗进展很快，但其发病机制仍不清楚。已知HL的发生、发展和核因子-κB（NF—κB）活性异常增高有关。IκBα是NF-κB最主要的抑制因子，IκBα基因异常可能参与HL的发生、发展。经典型HL细胞（HRS细胞）中IκBα第四外显子突变文献报道较少，本组以初发未经治疗的HL为研究对象，分析HL中IκBα第4外显子突变的特点、可能造成的蛋白结构异常及其病理意义。[第一段]     

涤痰汤对动脉粥样硬化兔炎性因子的影响

目的观察涤痰汤对动脉粥样硬化兔炎性因子核因子-κB(NF-κB)、E-选择素(E-selectin)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)以及白细胞介素-6(IL-6)的影响,探讨涤痰汤防治动脉粥样硬化的作用机制。方法应用高脂饲料制备动脉粥样硬化兔模型,随机分为6组,分别加入涤痰汤以及阿托伐他汀钙干预,用酶联免疫方法(ELISA)检测血清TNF-α和IL-6的含量;用荧光定量PCR检测TNF-α和IL-6mRNA表达;用Western blot检测NF-κB和E-selectin蛋白的表达。结果与动脉粥样硬化模型组比较,涤痰汤能显著降低动脉粥样硬化兔血清TNF-α和IL-6的水平,降低主动脉TNF-α和IL-6mRNA的表达,降低NF-κB和E-selectin蛋白的表达。结论涤痰汤能降低NF-κB、E-selectin、TNF-α以及IL-6等炎性因子的表达,这可能是涤痰汤防治动脉粥样硬化的作用机制之一。     

IL-8和NF-κB在慢性阻塞性肺疾病缓解期气道炎症中的作用

目的探讨白细胞介素-8（IL-8）和NF—κB在慢性阻塞性肺疾病（COPD）缓解期气道炎症中的作用。方法选择2003年3月至2005年9月河南省人民医院呼吸科COPD稳定期患者26例，诱导痰检测痰上清液IL-8水平，分离巨噬细胞并以免疫细胞化学法测定NF—κB P65的活性表达，检测外周血超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、IL-8水平，所有患者均测定肺功能（FEV1占预计值％、FEV1／FVC）。结果COPD稳定期诱导痰上清液IL-8水平显著高于正常组（P〈0．01）；巨噬细胞NF—κB P65胞核阳性表达显著高于正常纽，痰IL-8与巨噬细胞NF—κB的激活呈正相关，而与FEV1占预计值％呈负相关（P〈0．01）；外周血IL-8与对照组比较差异无显著性，但MDA显著高于对照组，SOD低于对照组。结论细胞因子IL-8和NF—κB在COPD缓解期诱导痰中有较高水平，提示IL-8在COPD气道炎症、气道阻塞发生发展过程中可能起着重要作用。注重COPD稳定期的治疗（抗氧化及气道内吸入抗炎药）可能会延缓COPD的发展。     

脑出血患者血肿周围组织TNF-α和NF-κB的表达

目的探讨脑出血后急性期血肿周围组织肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和核因子-κB（NF—κB）的动态表达情况。方法选择急性脑出血患者10例，于发病当日或次日行血肿清除术，利用术中所获得的血肿周围组织碎块进行研究。对照组为2例车祸脾破裂死亡者。所有标本均做HE染色，并用免疫组化方法检测TNF—α和NF—κB的动态表达情况。结果急性脑出血组TNF-α和NF-κB在所有标本均表达，于第1天表达升高，第3天达高峰，第7天下降，第14天基本接近正常表达水平；对照组TNF-α和NF-κB仅有少量表达或无表达。结论脑出血急性期血肿周围组织存在TNF-α和NF-κB的动态高表达，且有大量炎性细胞浸润，以中性粒细胞、淋巴细胞为主。     

核因子-κB和细胞因子在溃疡性结肠炎中的表达及其意义

目的: 探讨溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)患者肠黏膜活检组织中NF-κB的表达及其与细胞因子水平的关系.方法: 用免疫组化SP方法检测60例活动期UC内镜活检标本及30例正常对照石蜡组织中NF-κB表达情况, 同时用放免法检测UC组和正常对照组血清中IL-1β, TNF-α和IL-10的表达水平.结果: 60例UC组中NF-κB p65均为阳性表达,主要分布在结肠黏膜上皮细胞、腺上皮细胞和巨噬细胞. 对照组均为阴性和弱阳性表达,主要分布于上皮细胞. UC组的NF-κB p65表达平均灰度值与正常对照组比较差异有显著性(166.62±14.88 vs 142.30±19.01, P<0.05); 活动期UC组血清中IL-1β、TNF-α表达水平显著高于正常对照组(1.29±0.36 vs 1.29±0.36,4.47±1.08 vs 1.37±0.26, 均P<0.01), 而IL-10表达水平二组间差异无统计学意义. NF-κBp65的表达与活动期UC病情活动性及内镜分级有相关性( P<0.05或0.01).结论: NF-κB诱导、参与了UC的发生、发展过程, 并与UC病情活动性及内镜分级有较好相关性, 可客观反应UC的炎症活动情况; 促炎细胞因子IL-1β、TNF-α与抑炎性细胞因子IL-10的表达水平不一致, 可能与NF-κB诱导调控有直接关系.     

支气管哮喘中核因子κB治疗靶点

转录因子可能在慢性气道疾病的病理生理中扮演重要角色,并可能是一类新颖的抗炎治疗靶点。核因子κB（nuclear factor kappa B,NF-κB）可能是支气管哮喘（简称哮喘）发病的关键环节。NF—κB靶点的药理抑制剂和基因沉默均已初显平喘端倪。NF—κB亚单位是动物肺部变态反应性炎症和气道高反应性所必需。亚单位可能是哮喘NF-κB治疗靶点的未来研究重点与希望所在,尤其是c-Rel亚单位。     

前列腺素E1改善高糖联合肿瘤坏死因子α损伤肾小球系膜细胞株细胞及机制研究

目的 观察前列腺素E1（PGG）对高糖联合TNF-α诱导的大鼠肾小球系膜细胞株（HBZY-1）损伤的影响及机制.方法 将HBZY-1细胞分为正糖（NG）组、高糖＋TNF-α（HT）组、高糖＋ TNF-α＋不同浓度PGE1（HTP1～5）组,采用MTT法测定细胞增殖,ELISA与RT-PCR法测定细胞上清液中单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）、转化生长因子-β1（TGF-β1）以及白介素-6（IL-6）蛋白含量及mRNA表达,细胞免疫荧光法测定核因子-κB p65（NF-κB p65）核转位.结果 高糖联合TNF-α促进HBZY-1增殖,增加MCP-1、TGF-β1蛋白与mRNA,以及IL-6mRNA的表达（P＜0.05）,同时促进NF-κBp65的核转位;1 ng/ml的PGE1可抑制上述作用（P＜0.05）.结论 PGE1通过抑制NF-κB通路来抑制高糖联合TNF-α诱导的HBZY-1增殖,降低MCP-1、TGF-β1蛋白与基因,以及IL-6基因表达.     

Notch信号通路对人胰腺癌细胞NF—κB活性和侵袭能力的影响

背景：Notch信号通路在多种人类恶性肿瘤的发生、发展中起关键作用。研究显示Notch与NF—κB信号通路之间的交互作用可促进胰腺癌进展。目的：明确Notch信号通路对胰腺癌侵袭性的影响及其可能机制。方法：体外培养人胰腺癌细胞株BxPC3,以Notch-1siRNA下调其Notch-1表达,同时设置转染对照siRNA的阴性对照组和不予siRNA干扰的空白对照组。以Transwell细胞侵袭实验观察各组BxPC3细胞的侵袭能力,电泳迁移率变动分析（EMSA）检测NF—κB活性,蛋白质印迹法检测Notch-1、NF—KBp65、血管内皮生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶-9（MMP．9）蛋白表达。结果：经Notch-1siRNA干扰、Notch-1表达下调的BxPC3细胞,Transwell细胞侵袭实验穿膜细胞数较空白对照组和阴性对照组显著减少（26．5±1．3对78．5±2．4和76．7±2．2,P〈0．01）,NF—κB活性显著降低（P〈0．01）,NF-κB p65、VEGF、MMP-9蛋白表达显著下调（P〈0．05）。结论：Notch-1可通过激活NF—κB促进其下游基因VEGF、MMP-9表达,由此增强胰腺癌的侵袭性。