基于UPLC-Q-TOF-MS及数据自动处理技术的刺五加提取物中刺五加苷D及其代谢产物分析

目的:研究大鼠灌胃刺五加提取物后血浆和胆汁中刺五加苷D(M0)及其代谢产物。方法:大鼠灌胃给予刺五加提取物,分别采集给药后1h、1.5h、2h、4h、6h后肝门静脉血液和0～12h胆汁,采用UPLC-Q-TOF-MS技术结合Metabolynx XS软件,对大鼠血浆和胆汁中刺五加苷D及其代谢产物进行分析。结果:基于质谱裂解行为和文献报道,在大鼠血浆和胆汁中未检测到M0,但在血浆中检测到刺五加苷D代谢物(M1),在胆汁中检测到M1的进一步代谢物(M2)。其中M1和M2是作者未见文献报道的刺五加苷D的代谢产物。结论:刺五加苷D在大鼠体内是在去葡萄糖后,以葡萄糖醛酸化和去甲基化的形式被代谢。     

刺五加苷B的大鼠在体肠吸收特性研究

目的:考察刺五加苷B在大鼠肠道各区段的吸收动力学特性、吸收部位及吸收机制,以期为其现代制剂设计提供理论依据.方法:采用大鼠在体肠段灌流实验,研究了刺五加苷B的吸收部位和吸收动力学特征.结果:不同肠段药物的吸收量和校正的肠壁渗透率(P*w)按十二指肠、空肠、回肠和结肠的顺序依次下降;刺五加苷B经含肠道酶肠灌流液降解后,其含量按十二指肠、空肠、回肠和结肠的顺序依次下降;采用HPLC法,在血浆和胆汁中未检出刺五加苷B.结论:刺五加苷B生物利用度低是因为肠道酶代谢,引起刺五加苷B被降解,而不仅仅是吸收因素.     

基于 UHPLC-Q-TOF-MS 技术研究木犀草素及木犀草苷的体内代谢

目的 研究木犀草素和木犀草苷在大鼠体内的代谢转化。方法 应用 UHPLC-Q-TOF-MS 方法研究分别灌胃木犀草素、木犀草苷后大鼠血浆、尿和粪中的代谢产物。结果 在灌胃木犀草素的大鼠血浆、尿、粪中共检测到 25 种代谢产物;在灌胃木犀草苷的大鼠血浆、尿、粪中共检测到 20 种代谢产物,但未检测到其原型。结论 木犀草素在大鼠体内的主要代谢途径为氧化、甲基化、葡糖醛酸化和硫酸化;木犀草苷在大鼠体内的主要代谢途径为脱葡萄糖基反应生成木犀草素素后,再氧化、甲基化、葡糖醛酸化和硫酸化。黄酮苷类化合物口服后易被肠道菌群产生的水解酶代谢为苷元吸收入血。     

大鼠肠道菌群对芍药苷体外代谢转化的研究

为研究肠道菌群对芍药苷在体内吸收和代谢的影响,该课题在离体培养的大鼠肠道菌群中,加入芍药苷进行厌氧孵育,分析芍药苷在48 h内的变化过程,探讨体外大鼠肠道菌群对芍药苷的代谢转化。采用UPLC监测芍药苷在不同孵育时间点的变化,色谱条件为:WelchromTMC18色谱柱(4.6 mm×100 mm,5μm),流动相0.1%甲酸(A)-乙腈(B),梯度洗脱,流速0.4m L·min-1,柱温30℃;同时运用UPLC-Q-TOF-MS/MS对转化产物进行分析鉴定(ESI离子源,正离子模式检测),结合化合物精确相对分子质量和MS裂解碎片信息,并辅以保留时间及文献数据对代谢产物进行结构解析,分析芍药苷肠道代谢规律。结果发现孵育24 h后,芍药苷已经完全被代谢转化,得到的代谢产物包括芍药内酯苷、芍药内酯苷元、脱酰基-芍药内酯苷、脱酰基-芍药内酯苷元和芍药内酯B等。通过代谢途径分析发现,离体的大鼠肠道菌群先将芍药苷转化成芍药内酯苷,然后通过脱葡萄糖、脱苯甲酰基和四元环裂解重排等多个途径被进一步代谢,将芍药苷逐步转化生成相对分子质量更小、疏水性更强的代谢产物,从而更好被肠道吸收。     

大鼠肠道菌群对紫丁香苷体外代谢转化研究

目的观察大鼠肠道菌群对紫丁香苷的体外代谢转化作用。方法将紫丁香苷与离体大鼠肠道菌群的孵育液分别培养O、4、8、12、24、48 h后取样,经正丁醇萃取后采用HPLC和LC-MS法对代谢产物进行定性和定量分析;扩大培养24h的孵育液经正丁醇萃取后,采用ODS柱色谱和重结晶方法分离制备代谢产物NMR法鉴定其结构。结果大鼠肠道菌群对紫丁香苷具有显著的代谢转化作用。在0~48 h代谢组的孵育液中共检测到2个代谢产物芥子醇(M_1)和右旋丁香树脂酚(M_2)。12h时有81%的紫丁香苷被代谢转化,24 h时紫丁香苷已经完全被代谢转化;并且检测到12h之前的主要代谢产物为M_1,24h后的主要代谢产物为M2,且24h后未能检测到M_1。结论在离体条件下,大鼠肠道菌群可以在24h内将紫丁香苷完全代谢转化为M_1,然后再将M_1代谢转化为M_2,且8~12h内转化紫丁香苷的速率最快。     

基于UPLC-Q-TOF-MS及数据自动处理技术的 刺五加提取物中异嗪皮啶及其代谢产物分析

目的:分析大鼠灌胃刺五加提取物后血浆、胆汁、尿液和粪便中异嗪皮啶(M0)及其代谢产物。方法:健康雄性wistar大鼠按325 mg.kg-1的剂量灌胃给予刺五加提取物,分别采集给药后1,1.5,2,4,6 h肝门静脉血液并用SPE技术制备血浆;采集0～12 h胆汁并用SPE技术制备;0～12 h,12～24 h分别采集尿液和粪便样品并制备样品,采用UPLC-Q-TOF-MS技术和Metabolynx XS软件联合的方法分析。结果:在大鼠血浆、胆汁、尿液和粪便中检测到M0,在血浆和胆汁中检测到代谢物异嗪皮啶葡萄糖醛酸苷(M1)。其中M1是首次报道的异嗪皮啶代谢产物。结论:异嗪皮啶在大鼠体内以葡萄糖醛酸形式代谢,最终又以异嗪皮啶形式排出体外。     

木犀草素及木犀草苷在大鼠体内的代谢研究

目的研究木犀草素和木犀草苷在大鼠体内的代谢转化。方法应用UHPLC-Q-TOF-MS方法研究分别灌胃木犀草素、木犀草苷后大鼠血浆、尿和粪中的代谢产物。结果在木犀草素灌胃大鼠的血浆、尿、粪中共检测到25种代谢产物;在木犀草苷灌胃大鼠的血浆、尿、粪中共检测到20种代谢产物,但未检测到其原型。结论木犀草素在大鼠体内的主要代谢途径为氧化、甲基化、葡糖醛酸化和磺酸化;木犀草苷在大鼠体内的主要代谢途径为脱葡萄糖基反应生成木犀草素素后,再氧化、甲基化、葡糖醛酸化和磺酸化。黄酮苷类化合物口服后易被肠道菌群产生的水解酶代谢为苷元吸收入血。     

三叶豆紫檀苷在大鼠体内代谢的初步研究

目的 对三叶豆紫檀苷在大鼠体内代谢产物进行研究,初步推测其体内代谢途径.方法 收集大鼠灌胃给予三叶豆紫檀苷后的尿液和粪便,采用HPLC-MSn分析代谢物的色谱行为、电喷雾多级质谱信息,并与对照品和空白组大鼠对应代谢物比较.结果 三叶豆紫檀苷大鼠灌胃给药后尿液中检测到代谢产物高丽槐素和高丽槐素-3-O-磺酸,粪便中检测到代谢产物高丽槐素.结论 三叶豆紫檀苷在大鼠体内可广泛代谢,并推测了其体内代谢途径.     

连翘酯苷A、连翘苷的体外肠道菌群代谢研究

目的 研究连翘酯苷A、连翘苷经肠道菌群转化后的代谢产物及其代谢途径.方法 将连翘酯苷A、连翘苷分别与大鼠肠道菌群培养液体外厌氧温孵培养后,进行UPLC-TOF/MS鉴定分析.结果 在温孵液中检测到原药、连翘酯苷A代谢产物连翘脂苷E、连翘苷代谢产物1,3,4,6-tetrahydro-1-(3,4-dimethoxyph...     

大鼠肠道菌群对短小蛇根草苷体外代谢转化研究

为分析短小蛇根草苷经体外大鼠肠道菌群代谢转化的产物,在离体培养的大鼠肠道菌群中,加入短小蛇根草苷,采用HPLC检测代谢进程,采用UPLC-Q-TOF-MS鉴定肠菌代谢转化产物。结果显示,短小蛇根草苷容易被大鼠离体肠道菌群代谢,随着代谢时间的延长,短小蛇根草苷被代谢转化成多个代谢产物,该实验初步鉴定了3个代谢产物。研究结果表明短小蛇根草苷能够在大鼠离体肠道菌群中发生广泛的代谢。     

肠内菌群对积雪草苷的代谢转化研究

目的通过离体、在体实验研究大鼠肠道内菌群对积雪草苷的代谢作用,并确定代谢产物的化学结构。方法将积雪草苷加入大鼠肠内细菌的菌酶溶液中,温孵一定时间后,以TLC和LC-M S法检测体外实验代谢产物,LC-M S法检测在体实验大鼠尿、血中的代谢产物。结果发现了3个积雪草苷的代谢产物,鉴定了代谢产物的结构。结论积雪草苷可被大鼠肠内菌群代谢,原形物和代谢产物均为吸收入血成分。     

大鼠口服松果菊苷粪便中代谢物的HPLC-MS^n分析

目的：研究松果菊苷在大鼠粪便中的代谢物。方法：大鼠灌胃松果菊苷（100mg·kg^-1）后收集粪样，运用高效液相色谱和质谱联用技术检测松果菊苷的代谢产物。结果：在给药后大鼠的粪便中，发现并初步鉴定了4个主要代谢产物。结论：大鼠灌胃给予松果菊苷后，其粪便中的主要代谢产物为毛蕊花糖苷、去咖啡酰基毛蕊花糖苷、黄大花洋地黄苷及3,4-二羟基苯乙醇。     

高效液相色谱法测定刺五加粉中刺五加苷B和苷E的含量

目的：建立刺五加及其制剂中刺五加苷B和刺五加苷E的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法测定刺五加苷B和刺五加苷E的含量。结果：在同一色谱备件下．刺五加苷B在1．4728～7．3640μg范围内线性关系良好，回收率100．7％，RSD为2．6％；刺五加苷E在1．3056～11．7504μg范围内线性关系良好．回收率为101．9％．RSD为2．O％。结论：该分析方法简便易行，重现性好。     

体外培养刺五加生产刺五加苷B、E的研究

目的 探讨2,4-D和培养基对刺五加愈伤组织和体细胞胚胎生产刺五加苷B、E的影响,建立有利于刺五加苷B、E积累的刺五加体外培养体系.方法 将来自同一外植体的刺五加愈伤组织和体细胞胚胎分别诱导增殖或产生次级体胚,HPLC法测定培养物中刺五加苷B、E含量和培养物质量,考察培养物类型、培养基种类和激素对刺五加苷B、E生产的影响.结果 体细胞胚胎的质量虽略低于愈伤组织的质量,但体细胞胚胎生产刺五加苷B、E的能力优于愈伤组织.2,4-D对刺五加苷B、E含量影响较小,仅改变了培养物的质量.MS培养基处理中培养物的刺五加苷B、E产量优于1/2MS培养基.结论 刺五加体外培养物可以生产刺五加苷B、E,其产量取决于培养物类型、培养基种类和2,4-D浓度.     

肠道菌群对双黄连口服液中连翘苷和芦丁的代谢作用

目的：观察和比较大鼠、家兔肠道菌群对双黄连口服液中连翘苷和芦丁的代谢作用。方法：采用大鼠、家兔的新鲜粪便37℃厌氧培养，用HPLC-MS方法对代谢成分进行分离定量分析。结果：家兔肠道菌群对连翘苷和芦丁的代谢较快，而大鼠肠道菌群对连翘苷和芦丁的代谢过程相比较慢。结论：在离体条件下，双黄连口服液中连翘苷和芦丁可以被大鼠、家兔的肠道菌群代谢，但不同种属动物之间存在差异。     

RP-HPLC法测定糙叶五加不同部位中刺五加苷B和E

目的建立同时测定糙叶五加不同部位中的刺五加苷B和刺五加苷E的方法。方法采用RP-HPLC法,色谱柱为Lichrom C18(250 mm×4.6 mm,5μm)柱,柱温35℃,0.1%磷酸水溶液-乙睛梯度洗脱(0→15 min,90∶10;15→30 min,90∶10→84∶16),检测波长为220 nm,体积流量1.0 mL/min。结果刺五加苷B的线性范围为14.4～72.0μg/mL(r=0.999 9),平均回收率为98.97%;刺五加苷E的线性范围37.4～187.0μg/mL(r=0.999 7),平均回收率为99.13%。糙叶五加根、茎、叶中刺五加苷B的质量分数分别为:0.463 4、2.452 4、0.016 5 mg/g(n=3);刺五加苷E的质量分数分别为0.143 9、1.375 4、0.187 7 mg/g(n=3)。结论该方法简便快速,结果准确可靠。     

基于肠道菌群代谢的知母皂苷BⅡ体外代谢转化研究

目的通过大鼠肠道菌群体外实验,观察大鼠肠道菌群对知母皂苷BⅡ的代谢转化情况。方法收集大鼠新鲜粪便,将大鼠肠道菌加入厌氧培养液得到肠道菌孵育液,加入知母皂苷BⅡ,在厌氧环境中37℃温孵24 h,经沉淀离心,取上清液,采用高效液相色谱和薄层色谱方法对知母皂苷BⅡ降解情况和代谢成分进行分析。结果知母皂苷BⅡ在大鼠粪便孵育液中很快发生代谢转化,24 h后孵育液中已检测不到知母皂苷BⅡ,能检测出较高浓度的代谢产物。代谢产物经检测为知母皂苷AⅢ。结论离体培养的大鼠肠道菌可对知母皂苷BⅡ进行代谢,初步确定代谢产物为知母皂苷AⅢ。     

离体大鼠肠道菌群对淫羊藿苷的代谢研究

目的：考察大鼠肠道菌群对淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅱ的代谢情况，为研究淫羊藿苷的口服吸收机理打下基础。方法：将待测药物与新配制的大鼠肠内容物混悬液在37℃孵化，采用高效液相色谱法同时测定孵化前后溶液中淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅱ的浓度。结果：淫羊藿苷被肠道菌群迅速代谢成淫羊藿次苷Ⅱ，而淫羊藿次苷Ⅱ不被代谢。结论：研究淫羊藿次苷Ⅱ的吸收和代谢机理对于研究淫羊藿苷的口服吸收机理非常有必要。     

离体人肠道菌群对柚皮苷的代谢动力学分析

目的:研究人肠道菌群对柚皮苷的代谢程度与速度,为该成分的新药开发提供参考。方法:采集健康志愿者新鲜粪便制备肠道菌群混悬液,与柚皮苷在厌氧环境下孵育,运用HPLC监测柚皮苷浓度变化,HPLC-MS鉴定代谢产物结构。柚皮苷HPLC色谱条件为检测波长288 nm,流动相甲醇-0.1%磷酸溶液梯度洗脱。结果:柚皮苷与人肠道菌群共同孵育15 min后,柚皮苷色谱峰后面可见1个代谢产物;孵育至120 min时,柚皮苷代谢率100%。经HPLC-MS鉴定代谢产物为柚皮素。柚皮苷代谢过程符合非线性动力学过程。HPLC监测发现柚皮素可被进一步代谢,导致柚皮素峰面积降低。结论:柚皮苷可被人肠道菌群代谢,代谢速度快,代谢产物主要为柚皮素,可能存在柚皮苷的二级代谢产物。     

人肠道菌群对芒果苷体外代谢转化的研究

目的:研究离体人肠道菌群在体外对芒果苷代谢转化的情况.方法:芒果苷与人肠道菌群在厌氧条件下孵育,通过大孔树脂、制备液相等方法对代谢产物进行分离和纯化,并通过质谱、核磁等手段进行结构鉴定.结果:在与人肠道菌群共同孵育12 h后,芒果苷代谢物生成的量趋于平衡.代谢物经MS,1H和13C鉴定为芒果苷的苷元.结论:在离体条件下,芒果苷可被人肠道菌群代谢,主要代谢物为芒果苷的苷元(1,3,6,7-tetrahydroxyxanthen).