RP-HPLC测定2种桃叶珊瑚属药用植物中的桃叶珊瑚苷

目的 测定桃叶珊瑚、峨眉桃叶珊瑚中的桃叶珊瑚苷.方法 药材用70%乙醇回流提取,RP-HPLC法测定,色谱柱为Symmetry shield RP18柱(250 mm ×4.6 mm,5μm);流动相用甲醇-水(12:88);检测波长203 nm;柱温25 °C;流速1.0 ml·min-1.结果 桃叶珊瑚苷在203 nm处有最大吸收,在0.72～2.88μg线性关系良好(r2=0.9998),桃叶珊瑚、峨眉桃叶珊瑚中桃叶珊瑚苷的含量分别为4.31%、3.07%,平均回收率分别为98.94%、98.87%,RSD分别为2.04%、1.74%(n=6).结论 所建方法操作简便,重复性好,专属性强,准确可靠.     

桃叶珊瑚苷对前列腺癌的抑制作用及机制的体内外研究

目的 探讨桃叶珊瑚苷（AU）调节蛋白激酶B(Akt)/双微体同源基因2(MDM2)/p53信号通路对前列腺癌（PC）细胞增殖和肿瘤生长的影响。方法 将前列腺癌细胞PC3分为对照组、50μmol/L AU组、100μmol/L AU组、SC79(Akt激活剂)组（5μmol/L）、100μmol/L AU+SC79组,考察各组细胞的克隆能力和增殖能力,检测细胞凋亡率及细胞中Akt/MDM2/p53信号通路相关蛋白表达。建立异种移植肿瘤裸鼠模型,并将建模成功的裸鼠分为肿瘤组、AU组（80 mg/kg）、SC79组（50 mg/kg）和AU+SC79组（80mg/kg AU+50 mg/kg SC79）,每组10只,每天给药1次,共21 d。末次给药后,称定肿瘤质量,检测肿瘤组织中细胞核相关抗原（Ki-67）及Akt/MDM2/p53信号通路相关蛋白表达。结果 细胞实验中,与对照组比较,50μmol/L AU组、100μmol/L AU组细胞克隆形成数、增殖率和Akt、MDM2蛋白的磷酸化水平均显著减少/降低（P<0.05）,细胞凋亡率、p53蛋白表达水平均显著升高（P<0.05）,但SC79组各指标变化趋势相反（P<0.05）;100μmol/L AU+SC79组与100μmol/L AU组比较,克隆形成数、增殖率和Akt、MDM2蛋白的磷酸化水平均显著增加/升高（P<0.05）,细胞凋亡率、p53蛋白表达水平均显著降低（P<0.05）,但与SC79组比较各指标变化趋势相反（P<0.05）。体内实验中,与肿瘤组比较,AU组裸鼠的肿瘤质量及组织中Ki-67阳性表达和Akt、MDM2蛋白的磷酸化水平均显著降低（P<0.05）,p53蛋白表达水平显著升高（P<0.05）,但SC79组裸鼠的上述指标变化趋势相反（P<0.05）;AU+SC79组与AU组比较,裸鼠的肿瘤质量及组织中Ki-67阳性表达和Akt、MDM2蛋白的磷酸化水平均显著升高（P<0.05）,p53蛋白表达水平显著降低（P<0.05）,但其与SC79组比较各指标变化趋势相反（P<0.05）。结论 AU可通过抑制Akt/MDM2/p53信号通路从而抑制PC细胞增殖及肿瘤生长。     

峨眉桃叶珊瑚不同部位桃叶珊瑚苷的含量比较

目的测定峨眉桃叶珊瑚叶、干皮、果实和枝中桃叶珊瑚苷的含量,为峨眉桃叶珊瑚资源合理开发利用提供依据。方法采用高效液相色谱法测定桃叶珊瑚苷含量,色谱柱:SymmetryshieldTM RP18柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相:甲醇-水(12∶88);检测波长:203nm;流速:0.8mL·min-1;柱温:25℃。结果桃叶珊瑚苷在峨眉桃叶珊瑚的叶、干皮、果实和枝中的含量分别为3.82%,1.51%,9.60%和0.07%。结论峨眉桃叶珊瑚果实和叶中桃叶珊瑚苷的含量较高,入药部位应为果实和叶。     

苦杏仁酶法转化桃叶珊瑚苷为桃叶珊瑚苷苷元的分析

目的：对桃叶珊瑚苷的苦杏仁酶法转化和桃叶珊瑚苷苷元的LC—MS色谱分析进行研究。方法：从苦杏仁中提取苦杏仁酶，用3，5-二硝基水杨酸（DNS）法测定苦杏仁酶的活力；将苦杏仁酶与桃叶珊瑚苷在37℃温孵60min后，低温乙酸乙酯萃取获得苷元，并对苷和苷元分别在流动相为甲醇-水（10：90）条件下的LC—MS色谱行为进行分析。结果：苦杏仁酶的酶活力为174U&#183;mg-1，桃叶珊瑚苷苷元的转化得率为31．41％，得到的苷元纯度在93．23％以上。结论：本方法简单经济，获得的苷元纯度高，低温密封能保持苷元稳定。     

桃叶珊瑚苷的稳定性初步考察

目的：研究光线、温度、弱酸、弱碱及氧化作用对桃叶珊瑚苷的影响，考察其稳定性。方法：利用高效液相色谱法、薄层色谱法，通过与对照样品比较，观察变化的情况。结果：桃叶珊瑚苷容易受温度、弱碱、氧化作用的影响而发生变化，干燥样品相对比较稳定。结论：桃叶珊瑚苷提取、分离时一定要在短时间内完成，真空干燥后密封保存，这样能够保证桃叶珊瑚苷的相对稳定。     

高效液相色谱法测定车前草中桃叶珊瑚苷的含量

目的建立测定车前草中桃叶珊瑚苷含量的高效液相色谱法。方法以Nucleosi17-C     

HPLC-ELSD法测定杜仲皮、叶和种子中桃叶珊瑚苷的含量

Objective：To determine the content of aucubin in the barks, leaves and seeds of Eucommia ulmoides with HPLC-ELSD. Method： An HPLC-ELSD method was set up using Inertsil ODS-3 C18 （4.6 mm × 250 mm, 5μm） column. The mobile phase consisted of methanol - water（8： 92） ,with a flow rate of 1.0 mL·min^-1. The temperature of drift tube heater was 112. 9 ℃and the gas was flowing at the rate of 2. 8 L · min^-1. Results：The linear range of aucubin determination was 1.04 ～ 20. 9μg. The barks, leaves and seeds of Eucommia ulmoides were analyzed,the contents in them were 0. 999%, 1. 031% and 2.498%. The average recovery of aucubin were 98.2% ,97.3% ,97.5% ;RDS were 1.8% ,2. 1% ,2.0%. Conclusion：The method is simple and rapid with reproducibility for the determination of aucubin in the barks,leaves and seeds of Eucommia ulmoides.     

不同工艺干燥的玄参中桃叶珊瑚苷含量比较

目的 建立测定玄参中桃叶珊瑚苷含量的高效液相色谱法,探讨不同干燥工艺对玄参质量的影响.方法 分别对鲜玄参进行自然晾晒干燥、烘箱干燥和微波真空干燥;采用Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水(5:95),检测波长为206 nm,柱温为30℃,流速为1.0 mL/min.结果 桃叶珊瑚苷进样量在0.11～1.81 μg与峰面积呈良好线性关系(r=0.999 7,n=6);采用微波真空干燥和自然晾晒干燥的玄参中桃叶珊瑚苷含量远高于烘箱干燥的玄参.结论 高效液相色谱法测定玄参中桃叶珊瑚苷含量,方法专属性好、准确、稳定可靠.微波真空技术用于中药玄参的干燥,不仅工艺简单、干燥时间短,而且能较好地保留桃叶珊瑚苷等有效成分.     

桃叶珊瑚苷通过调节小胶质细胞M1/M2极化抑制神经炎症

目的:探究桃叶珊瑚苷(aucubin)对脂多糖(LPS)诱导建立的体外神经炎症模型的影响。方法:用LPS诱导N9细胞激活建立体外神经炎症模型,加入桃叶珊瑚苷处理细胞24 h,对细胞上清一氧化氮(NO)含量和细胞活力进行检测,显微镜拍摄细胞形态,免疫荧光法检测小胶质细胞特异标志物Iba-1水平,Flowsight检测CD11b水平和CD86/CD206比值,并用试剂盒检测IL-4,IL-10,TGF-β,IL-1β,IL-6,TNF-α水平。结果:与模型对照组比较,桃叶珊瑚苷组可有效改善细胞形态,降低细胞上清NO含量,降低细胞标志物CD11b水平和CD86/CD206比值,并调节炎症因子的释放。结论:桃叶珊瑚苷可能是通过调控炎症因子的释放,促进小胶质细胞由M1型向M2型转化,从而抑制N9小胶质细胞的激活,最终抑制LPS诱导的神经炎症。     

杜仲中槲皮素、京尼平苷及桃叶珊瑚苷对小鼠成骨样细胞系MC3T3-E1增殖和分化的影响

目的 对杜仲抗骨质疏松的药效成分进行初步筛选。方法 采用小鼠成骨细胞MC3T3-E1体外培养模型, 通过MTT法测定细胞增殖, ELISA方法测定碱性磷酸酶(ALP)活性, 观察杜仲中槲皮素、京尼平苷及桃叶珊瑚苷对成骨细胞增殖和分化的影响。结果 槲皮素促MC3T3-E1细胞增殖的有效浓度为10^-6 mmol/L, 桃叶珊瑚苷则为10^-5 mmol/L;10^-4 μmol/L京尼平苷在干预后4 d, 才逐渐显现出促进MC3T3-E1增殖作用。槲皮素(10^-5、10^-3 mmol/L)、京尼平苷(10^-3 mmol/L)和桃叶珊瑚苷(10^-3 mmol/L)可增加MC3T3-E1 ALP活性。结论 槲皮素、京尼平苷和桃叶珊瑚苷可促进成骨细胞的增殖和分化, 且作用强度具有浓度相关性和时间相关性, 可能为杜仲抗骨质疏松的药效物质基础。     

正交试验法优选杜仲叶中桃叶珊瑚苷和京尼平苷酸的提取工艺研究

目的建立杜仲叶中桃叶珊瑚苷和京尼平苷酸的最佳提取工艺。方法以杜仲叶为试材,乙醇作为提取溶剂,考察了水热浸提法、回流法、超声波法和微波法提取杜仲叶中的桃叶珊瑚苷和京尼平苷酸。采用正交试验考察了乙醇浓度、料液比、回流时间和提取次数对两者提取率的影响,确定最佳提取工艺。结果回流法提取效果最好,60%乙醇溶液、料液比1∶25、提取1.5 h、提取4次为优化提取方案。结论本工艺条件对杜仲叶中桃叶珊瑚苷和京尼平苷酸提取率高且稳定,为杜仲叶的深度开发与利用提供了依据。     

高效液相色谱法测定复方荔枝草颗粒剂中桃叶珊瑚苷的含量

目的建立测定复方荔枝草颗粒剂中桃叶珊瑚苷含量的高效液相色谱法.方法色谱柱为KF-C18柱(250mm×4.6mm,10tμm),流动相为甲醇-水-磷酸(30969.50.5);柱温为35℃;检测波长为203nm;流速为1.0mL@min1.结果线性范围0.05～0.80μg,平均回收率为84.46%,RSD为1.37%(n=9).结论本法简便、灵敏、重现性好,可作为该制剂的质量控制标准.     

绞股蓝皂苷调节HMGB1-RAGE信号通路对骨肉瘤细胞恶性生物学行为的影响

目的 探讨绞股蓝皂苷(Gyp)调节高迁移率族蛋白B1-晚期糖基化终产物受体(HMGB1-RAGE)信号通路对骨肉瘤细胞恶性生物学行为的影响及其机制。方法 使用不同浓度(0～400μmol/L)绞股蓝皂苷处理MG63细胞,CCK-8检测细胞活力。将MG63细胞分为对照组(Control组)、绞股蓝皂苷低、中、高浓度组(Gyp-L组、Gyp-M组、Gyp-H组,50、100、200μmol/L Gyp)、绞股蓝皂苷高浓度+过表达HMGB1阴性对照组(Gyp-H+pcDNA-NC组,200μmol/L Gyp+转染pcDNA-NC质粒)和绞股蓝皂苷高浓度+过表达HMGB1组(Gyp-H+pcDNA-HMGB1组,200μmol/L Gyp+转染pcDNA-HMGB1质粒)。Edu检测细胞增殖水平;Transwell小室和划痕愈合实验检测细胞侵袭和迁移能力;ELISA检测转化生长因子-β(TGF-β)、基质金属蛋白酶(MMP-9)和白介素-6(IL-6)水平;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测通路、凋亡及EMT相关蛋白。随后建立骨肉瘤移植小鼠模型,在体检验绞股蓝皂苷对骨肉瘤移...     

银杏内酯B对人结肠癌SW480细胞恶性生物学行为及ROS/XIAP信号通路的影响

目的 探讨银杏内酯B对人结肠癌SW480细胞恶性生物学行为及活性氧（ROS）/X连锁凋亡蛋白抑制剂（XIAP）信号通路的影响。方法 实验分为模型组（培养基+SW480细胞）、紫杉醇组（5 mg/L+培养基+SW480细胞）,以及银杏内酯B低、高剂量组（50,100μmol/L+培养基+SW480细胞）。采用四唑盐（MTT）法测定细胞增殖水平并计算存活率,流式细胞术测定细胞凋亡情况并计算凋亡率,Transwell法测定细胞迁移侵袭水平,荧光探针法检测活性氧（ROS）水平,反转录聚合酶链反应法及Western blot法测定细胞XIAP mRNA及蛋白表达水平。结果 与模型组比较,紫杉醇组及银杏内酯B低、高剂量组细胞存活率显著降低,凋亡率显著升高,细胞侵袭水平显著降低,细胞ROS水平及XIAP mRNA和蛋白表达水平均显著降低（P <0.05）。结论 银杏内酯B可有效抑制SW480细胞的迁移和侵袭并诱导其凋亡,其机制可能与抑制ROS/XIAP信号通路的激活有关。     

桃叶珊瑚苷对谷氨酸诱导的兴奋性神经毒性的抑制作用研究

目的 研究桃叶珊瑚苷对谷氨酸诱导的兴奋性神经毒性的抑制作用。方法 采用20 mmol·L^-1谷氨酸诱导PC-12细胞损伤建立神经毒性模型,加入1,5,10,20,40 μmol·L^-1的桃叶珊瑚苷处理24 h后,通过MTT法检测细胞活力,用流式细胞术检测细胞内Ca²⁺和活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,采用In Cell Western检测谷氨酸受体N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartic acid receptor,NMDA)亚基NMDAR1的水平,采用ELISA试剂盒检测细胞上清中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)水平。结果 谷氨酸20 mmol·L^-1作用24 h可使体外培养的PC-12细胞活力明显下降(P<0.01),细胞内Ca²⁺、NMDAR1蛋白水平和ROS、MDA、LDH水平明显增加(P<0.01),SOD水平明显降低。10 μmol·L^-1的桃叶珊瑚苷可以明显提高谷氨酸诱导后PC-12细胞的细胞活力(P<0.01),降低细胞内Ca²⁺、NMDAR1蛋白水平和ROS、LDH水平(P<0.01),升高细胞内SOD水平(P<0.01)。结论 桃叶珊瑚苷可能通过抑制NMDAR1的表达,从而降低细胞内Ca²⁺的堆积,并抑制氧化应激水平来改善谷氨酸诱导的PC-12细胞损伤,抑制谷氨酸诱导的兴奋性神经毒性。     

桃叶珊瑚苷通过激活ERβ途径抑制心肌细胞凋亡

目的探讨桃叶珊瑚苷(aucubin,AU)抑制心肌细胞凋亡发挥抗心肌缺血损伤从而改善急性心肌梗死后心功能的作用与可能机制。方法采用冠状动脉左前降支结扎法制作小鼠急性心肌缺血(myocardial infarction,MI)模型。采用超声心动、Masson染色检测小鼠心功能及梗死面积。建立肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)/放线菌酮(cycloheximide,CHX)诱导的大鼠H9c2心肌细胞损伤模型。采用IncuCyte活细胞成像、TUNEL、Western blot等方法探讨了AU的抗心肌细胞损伤作用及其作用机制。结果研究结果表明,AU可以改善心肌梗死小鼠的心功能,降低梗死面积,减少由TNF-α/CHX诱导的心肌细胞凋亡,降低caspase-3蛋白质表达,上调Bcl2/Bax比值;同时AU可使ERβ(estrogen receptorβ,ERβ)表达升高,且雌激素受体β抑制剂可阻断AU的抗凋亡作用。结论该研究证实,AU可以通过抑制心肌细胞凋亡发挥抗心肌缺血损伤从而改善急性心肌梗死后心功能的作用,其部分作用机制与ERβ通路的激活有关。     

HPLC测定怀地黄中桃叶珊瑚苷的含量

目的测定不同品种、不同产地怀地黄中桃叶珊瑚苷的含量,初步对怀地黄种质资源进行评价。方法采用HPLC,Dikma Diamonsil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,0.5μm),流动相为甲醇-水(5.5∶94.5),检测波长为206 nm。结果桃叶珊瑚苷在0.053 5~1.284μg间线性关系良好,回归方程为Y=539 696X+3 581.6(r=0.999 9),回收率分别为99.75%(鲜地黄)和99.61%(生地黄),RSD分别为2.86%和2.15%(n=6);不同品种、不同产地怀地黄中桃叶珊瑚苷含量不同。结论本法操作简单、灵敏、稳定,适用于怀地黄中桃叶珊瑚苷的含量测定。     

藏红花素抑制音猬因子信号通路对结直肠癌细胞恶性生物学行为的影响

目的探究藏红花素抑制音猬因子(Shh)信号通路对结直肠癌细胞恶性生物学行为的影响。方法 2021年 1月至 2022年 7月体外培养人结直肠癌细胞 SW620,使用不同浓度( 5、10、20、40、60、80 mg/L)的藏红花素处理 SW620细胞 24 h后, CCK-8法检测藏红花素对 SW620细胞的细胞毒性作用。将 SW620细胞分别用不同剂量藏红花素( 10、20、40 mg/L,藏红花素 L/M/H组)、 40 mg/L藏红花素 +1 μmol/L Purmorphamine(藏红花素 H+Shh通路激活剂组)、1 μmol/L Purmorphamine(Shh通路激活剂组)处理,另设置未经处理的对照( Control)组,检测 SW620细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力以及 Shh信号通路相关蛋白 Shh、平滑蛋白( Smo)、神经胶质瘤相关癌基因 -1(Gli-1)表达。结果藏红花素以剂量依赖性方式降低 SW620细胞活力。与对照组相比, Shh通路激活剂组 SW620细胞活力升高,克隆形成数、划痕面积愈合率、侵袭数、 Shh(1.47±0.09比 1.27±0.08)、 Smo(1.38±0.12比 1.15±0.09)、 Gli-1(1.25±0.09比 0.98±0.07)蛋白表达增加,细胞凋亡率减少( P<0.05),藏红花素 L组、藏红花素 M组、藏红花素 H组 SW620细胞活力下降,克隆形成数、划痕面积愈合率、侵袭数减少,凋亡率增加, Shh(1.07±0.12、0.85±0.11、0.52±0.08比 1.32±0.14)、 Smo(0.96±0.11、0.72±0.08、0.43±0.06比 1.19±0.12)、 Gli-1(0.76±0.09、0.61±0.09、0.37±0.06比 0.96±0.11)蛋白表达减少(P<0.05);与藏红花素 H组相比,藏红花素 H+Shh通路激活剂组 SW620细胞活力升高,克隆形成数、划痕面积愈合率、侵袭数增加,凋亡率减少, Shh(0.84±0.08比 0.52±0.08)、 Smo(0.81±0.09比 0.43±0.06)、 Gli-1(0.70±0.08比 0.37±0.06)蛋白表达增加(P<0.05)。结论藏红花素可抑制 SW620细胞增殖、迁移和侵袭,促进其凋亡,可能与抑制 Shh信号通路有关。