基于HPLC-QAMS法多指标成分定量控制和化学计量学的穿龙骨刺片综合质量评价

摘要：目的:建立高效液相一测多评法同步检测穿龙骨刺片中焦地黄苯乙醇苷A1、毛蕊花糖苷、焦地黄苯乙醇苷B1、杯苋甾酮、淫羊藿苷、宝藿苷Ⅰ、原薯蓣皂苷、甲基原薯蓣皂苷、伪原薯蓣皂苷、薯蓣皂苷含量的方法。方法:以Agilent SB-C18（250 mm×4.6 mm, 5μm）为色谱柱,流动相选择乙腈-0.1%磷酸,采用梯度洗脱。检测波长分别为330 nm（检测焦地黄苯乙醇苷A1、毛蕊花糖苷和焦地黄苯乙醇苷B1）、243 nm（检测杯苋甾酮）、270 nm（检测淫羊藿苷和宝藿苷Ⅰ）和203 nm（检测原薯蓣皂苷、甲基原薯蓣皂苷、伪原薯蓣皂苷、薯蓣皂苷）。以淫羊藿苷为内参物,建立其它9种成分的相对校正因子,并计算各成分含量。采用SPSS 26.0统计软件对穿龙骨刺片中10种成分含量进行聚类分析和主成分分析。结果:焦地黄苯乙醇苷A1、毛蕊花糖苷、焦地黄苯乙醇苷B1、杯苋甾酮、淫羊藿苷、宝藿苷Ⅰ、原薯蓣皂苷、甲基原薯蓣皂苷、伪原薯蓣皂苷和薯蓣皂苷线性范围良好,相关系数（r=0.999 1～0.999 4）,加样回收率为96.94%～100.12%（RSD≤1.60%,n=9）。一测多评法所测结果与外标法差异无统计学意义。结论:该方法可用于同时检测穿龙骨刺片中10种成分含量。     

HPLC-一测多评法测定黄精及其饮片中6种成分的含量

目的:建立黄精及其饮片中薯蓣皂苷元、5-羟甲基糠醛、香草酸、芦丁、槲皮素及山柰酚6种成分的一测多评(QAMS)法。方法:采用高效液相色谱(HPLC)外标法同时测定黄精及其饮片中6种成分的含量[色谱柱为Diamonsil-C_(18);流动相为乙腈-水(梯度洗脱);5-羟甲基糠醛、香草酸、芦丁、槲皮素及山柰酚检测波长为254 nm(0～60 min),薯蓣皂苷元检测波长为202 nm(60～75min);流速为1.0 mL/min;柱温为30℃]。以香草酸为内标,分别计算出其余5种成分的相对校正因子(RCFs)并进行耐用性考察,并采用相对保留法对待测成分色谱峰进行准确定位,然后根据RCFs计算黄精药材中其他5种成分的含量,并与外标法测定结果进行比较。以黄精饮片进行方法验证,分别采用QAMS法和外标法测定其中6种成分的含量,比较两种方法含量测定差异。结果:HPLC方法学考察结果均符合相关要求。在线性范围内,薯蓣皂苷元、5-羟甲基糠醛、芦丁、槲皮素及山柰酚的RCFs分别为0.195、0.025、0.263、0.345、0.075,在不同试验条件下RCFs重现性良好。外标法和QAMS法两种方法测得的黄精药材及其饮片中6种成分的含量差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:建立的QAMS法可用于同时测定黄精药材及其饮片中6种成分含量。     

HPLC法测定不同产地穿山龙中原薯蓣皂苷、原纤细薯蓣皂苷、甲基原薯蓣皂苷、伪原薯蓣皂苷、薯蓣皂苷和纤细薯蓣皂苷

目的建立HPLC法同时测定不同产地穿山龙药材中原薯蓣皂苷、原纤细薯蓣皂苷、甲基原薯蓣皂苷、伪原薯蓣皂苷、薯蓣皂苷和纤细薯蓣皂苷。方法穿山龙药材粉末经50%甲醇超声处理。采用Agilent SB-Aq色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈–水,梯度洗脱;检测波长203 nm;体积流量1.0 m L/min;柱温25℃;进样体积20μL。结果原薯蓣皂苷、原纤细薯蓣皂苷、甲基原薯蓣皂苷、伪原薯蓣皂苷、薯蓣皂苷和纤细薯蓣皂苷在1.054 0~10.540 0、0.519 0~5.1900、0.287 0~2.870 0、0.021 2~0.212 0、0.061 4~0.614 0、0.061 4~0.614 0μg线性关系良好,r均大于0.999 0。平均加样回收率分别为100.19%、100.24%、99.87%、100.92%、99.36%、100.03%,RSD值分别为2.03%、2.51%、2.33%、3.07%、2.77%、3.41%。不同产地的穿山龙药材中原薯蓣皂苷、原纤细薯蓣皂苷、甲基原薯蓣皂苷、伪原薯蓣皂苷、薯蓣皂苷和纤细薯蓣皂苷的质量分数分别为1.587~4.837%、0.260~1.950%、0.477~1.317%、0.037~0.187%、0.801~3.813%、0.088~0.524%。结论该方法快速、简便、准确,可用于穿山龙药材的质量控制。     

HPLC测定骨骼风痛胶囊中薯蓣皂苷元的含量

目的建立骨骼风痛胶囊中薯蓣皂苷元的含量测定方法。方法采用HPLC,色谱柱为Hypersil ODS2（4.6mm×250mm,5μm）;流动相为甲醇-水（93∶7）;检测波长203nm。结果薯蓣皂苷元在0.7728～3.8640μg内与峰面积呈良好的线性关系,回归方程为Y=443254X＋18856,r=0.9991;平均回收率为97.87%,RSD为1.71%。结论本法可用于骨骼风痛胶囊的质量控制。     

穿龙薯蓣中甾体皂苷的分离与鉴定

目的 研究穿龙薯蓣Dioscorea ni pponica Makin根茎的化学成分.方法 采用硅胶柱色谱、ODS柱色谱以及制备HPLC等手段进行分离纯化,通过理化性质和波谱学技术进行结构鉴定.结果 从正丁醇层中分离得到5个甾体皂苷类化合物,分别鉴定为纤细皂苷(1)、薯蓣皂苷(2)、伪原薯蓣皂苷(3)、甲基原纤细皂苷(4)、原薯蓣皂苷(5).结论 其中化合物4为首次从穿龙薯蓣中分离得到.     

不同产地盾叶薯蓣质量综合评价比较

目的对采自3个不同产地的盾叶薯蓣的质量进行综合评价研究。方法利用HPLC法对3个不同产地共计12批的盾叶薯蓣中薯蓣皂苷、伪原薯蓣皂苷、薯蓣皂苷元的含量进行测定。结果湖北郧西、陕西安康、湖南安化3个产地中薯蓣皂苷的含量范围为0.4752%~0.8931%、伪原薯蓣皂苷的含量为0.7348%~1.0023%、薯蓣皂苷元的含量范围为2.3384%~5.6641%,经分析表明3个产地的盾叶薯蓣中有效成分有显著性差异(P<0.05)。结论地理条件对药材的有效成分的含量有显著的影响,由该实验得出陕西安康地区的盾叶薯蓣中3种有效成分含量均较高,质量较好,为盾叶薯蓣GAP的制定提供依据。     

HPLC测定骨骼风痛胶囊中薯蓣皂苷元的含量

目的 建立骨骼风痛胶囊中薯蓣皂苷元的含量测定方法。方法 采用HPLC,色谱柱为Hypersil ODS2(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相为甲醇-水(93∶7);检测波长203 nm。结果 薯蓣皂苷元在0.772 8~3.864 0 μg内与峰面积呈良好的线性关系,回归方程为Y=443 254X＋18 856,r=0.999 1;平均回收率为97.87%,RSD为1.71%。结论 本法可用于骨骼风痛胶囊的质量控制。     

骨骼风痛胶囊微生物限度的方法学验证研究

骨骼风痛胶囊由骨骼风痛片仿制而来,该药处方由穿山龙、鸡血藤、干姜3味药组成,用于治疗风湿痹痛,具有祛风除湿、活血通络、散寒止痛之功效,主要用于风湿痹痛。其中穿山龙具有祛风湿、止痛、舒筋活血、止咳平喘、祛痰之功效。目前国内发表的关于骨骼风痛胶囊大多数文章都是运用薄层色谱法对鸡血藤、穿山龙、干姜进行定性研究,以及利用高效液相色谱法测定穿山龙中薯蓣皂苷元的含量,     

HPLC法测定穿山龙中伪原薯蓣皂苷、薯蓣皂苷和延龄草苷的含量

目的:建立反相高效液相色谱法同时测定穿山龙中伪原薯蓣皂苷、薯蓣皂苷和延龄草苷的含量。方法:采用Zorbax SB-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈(A)-水(B),梯度洗脱(0～18 min,25%A线性变为36%A;18～40min,36%A线性变为90%A;40～55 min,90%A保持不变),流速1.0 mL.min-1,检测波长210 nm,柱温30℃。结果:伪原薯蓣皂苷、薯蓣皂苷和延龄草苷的色谱峰面积与浓度呈良好的线性关系,线性范围分别为9.80～588.0μg.mL-1(r=0.9994),20.20～1212μg.mL-1(r=0.9995),5.330～319.8μg.mL-1(r=0.9999);平均回收率(n=9)分别为97.3%,99.4%,97.6%。结论:该方法简便、准确,为穿山龙药材的质量评价提供了方法。     

骨骼风痛颗粒质量标准研究

目的：建立骨骼风痛颗粒的质量标准。方法：采用TLC对鸡血藤、干姜、穿山龙进行定性鉴别;采用HPLC对穿山龙中薯蓣皂苷元进行含量测定。结果：薄层鉴别特征明显,专属性强。HPLC法测定薯蓣皂苷元的线性范围是0．25—5．02μg（r=0．9995）,平均加样回收率99．35％,RSD=1．65％（n=9）。结论：该方法可以有效地控制骨骼风痛颗粒的质量。     

绵萆薢中甾体类成分的分离与鉴定Ⅱ

目的对绵萆薢的化学成分进行研究。方法将大孔吸附树脂、硅胶、Sephadex LH-20、正相硅胶、ODS等柱色谱与制备型高效液相色谱法相结合进行化合物的分离制备,并通过理化性质与核磁共振波谱数据鉴定化合物的结构。结果从绵萆薢中分离鉴定了12个单体成分,分别鉴定为原薯蓣皂苷(protodioscin,1)、甲基原薯蓣皂苷(methyl protodioscin,2)、原纤细皂苷(protogracillin,3)、甲基原纤细皂苷(methyl protogracillin,4)、伪原薯蓣皂苷(pseudoprotodioscin,5)、伪原纤细皂苷(pseudoprotogracillin,6)、26-O-β-D-glucopyranosyl-3β,23,26-triol-25(R)-furosta-5,20(22)-dien-3-O-α-L-rhamnopyranosyl(1→4)-[α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)]-β-D-glucopyranoside(7)、豆甾醇(stigmasterol,8)、β-谷甾醇(β-sitosterol,9)dioscoreavilloside A(10)、绵萆薢苷B(spongioside B,11)及粉背薯蓣G(hypoglaucin G,12)。结论在对绵萆薢的化学成分进行研究的过程中,分离鉴定了12个甾体类化合物。其中化合物5~8和10为首次从该种植物中分离得到,并首次对化合物7的核磁数据进行了报道。     

一测多评法测定五味健脑合剂中7种成分的含量

目的建立能同时测定五味健脑合剂中2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、6-姜辣素和8-姜酚含量的一测多评法(QAMS)。方法采用Agilent TC-C₁₈色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);柱温:30℃;以乙腈-1 mL·L^-1磷酸为流动相,梯度洗脱;流速:1.0 mL·min^-1;检测波长分别为320(检测2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷)和270 nm(检测朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、6-姜辣素和8-姜酚);以淫羊藿苷为内参物,测定2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、6-姜辣素和8-姜酚的相对校正因子(RCF),利用RCF计算指标性成分的含量,并与外标法(ESM)测定结果进行对比,验证QAMS的可行性。结果 7种成分分别在7.68～192.00,2.86～71.50,4.69～117.25,7.87～196.75,5.46～136.50,1.83～45....     

HPLC一测多评法同时测定胃疡灵颗粒中8种成分的含量

目的:建立HPLC一测多评法同时测定胃疡灵颗粒中肉桂酸、桂皮醛、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、芒柄花素、6-姜辣素、8-姜酚和10-姜酚的含量.方法:采用HPLC法,以Agilent SB-C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm)为色谱柱,流动相A为乙腈-甲醇(9:1),流动相B为0.1％ 磷酸溶液,梯度洗脱(0...     

基于连作障碍条件下穿山龙皂苷类活性成分的含量变化

目的采用高效液相色谱法对不同连作条件下穿山龙中的皂苷类活性成分进行含量测定,探讨不同连作条件对于穿山龙皂苷类活性成分含量的影响。方法采用RP-HPLC,色谱柱:Agilent TC-C_(18)(4.6 mm×250 mm,5μm);乙腈(A)-水(B)为流动相梯度洗脱;流速1.0 mL/min,柱温:35℃,检测波长:203 nm,计算皂苷类成分含量,并采用SPSS等软件对所得结果进行分析。结果吉林通化种植基地的穿山龙中,除了甲基原薯蓣皂苷为连作一茬3年时含量最高,其他三种皂苷类成分原薯蓣皂苷、纤细薯蓣皂苷、薯蓣皂苷均为正茬4年时最高,而后随着连作年限的增加,含量逐渐减少,并且原薯蓣皂苷与薯蓣皂苷含量呈正相关。结论穿山龙随着连作年限的增加,其皂苷类活性成分的含量也随之下降,说明连作障碍对其皂苷类活性成分的含量积累造成了影响,但正茬4年时其皂苷类成分总含量最高,提示正茬4年为采收最佳时间,这为该药材的质量控制及GAP规范种植提供了依据和示范。     

独圣活血片中8种成分的含量测定及聚类分析、主成分分析

目的建立能同时测定独圣活血片中延胡索乙素、紫堇碱、四氢小檗碱、儿茶素、表儿茶素、美迪紫檀素、香附烯酮和α-香附酮含量的HPLC法。方法采用HPLC法,色谱柱为Waters SunFire C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm),柱温:30℃;流动相:乙腈-1 mL·L~(-1)冰醋酸,梯度洗脱;流速:0.9 mL·min~(-1);检测波长分别为242 nm (香附烯酮和α-香附酮),280 nm(儿茶素、表儿茶素、美迪紫檀素、延胡索乙素、紫堇碱和四氢小檗碱)。采用SPSS 26.0统计软件对独圣活血片中8种成分的含量进行聚类分析和主成分分析。结果 8种成分分别在2.96～59.20,2.42～48.40,1.78～35.60,5.47～109.40,6.29～125.80,0.58～11.60,7.26～145.20,3.58～71.60μg·mL~(-1)范围内线性关系良好(r≥0.999 1);平均回收率分别为98.44%,96.94%,97.26%,99.06%,99.43%,97.28%,100.08%,98.75%,RSD值分别为1.19%,1.26%,1.56%,1.35%,0.75%,1.44%,0.60%,0.93%;10批样品聚类分析为2类。结论该方法操作简便、重复性好,可作为独圣活血片质量控制的科学依据。     

一测多评法同时测定血塞通片中5种皂苷类成分的含量

目的:建立一测多评法(QAMS)同时测定血塞通片中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd 5种成分的含量.方法:采用高效液相法,使用Waters Symmetry Shield RP18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),以乙腈-水溶液为流动相,梯度洗脱,流速1.3 mL·...     

甘草化学成分研究

目的研究甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.的化学成分,寻找其天然活性物质。方法采用硅胶柱色谱和Sephadex LH-20柱色谱分离化合物,运用理化性质和波谱技术确定所得化合物的结构。结果从甘草醇提物中分离得到6个化合物,经鉴定为:华良姜素(1)、甘草利酮(2)、芒柄花素(3)、甘草醇(4)、美迪紫檀素-3-O-葡萄糖苷(5)和甘草苷(6)。结论甘草中富含黄酮、香豆素类成分。     

一测多评法和指纹图谱在维血宁合剂质量控制中的应用

目的:采用一测多评(QAMS)法测定维血宁合剂中8个有效成分的含量,建立“中间体-成品”的HPLC指纹图谱,为其质量控制提供参考和依据。方法:采用高效液相色谱法,使用Acclaim120 C₁₈(250 mm×4.6 mm, 5μm)色谱柱,以甲醇(A)-0.2%磷酸水溶液(B)-0.1%磷酸(C)为流动相,进行梯度洗脱,流速为1.0 mL·min^-1,检测波长为210 nm,柱温为30℃。以虎杖苷为内参物,分别考察儿茶素、表儿茶素、白藜芦醇、槲皮素、木犀草素、染料木素和芒柄花素7个成分的相对校正因子。采用相对校正因子计算3批维血宁合剂提取液、清膏和成品中7个成分的含量和指纹图谱,与外标法(ESM)进行比较,验证QAMS法的准确性和可行性。结果:儿茶素、表儿茶素、虎杖苷、白藜芦醇、槲皮素、木犀草素、染料木素和芒柄花素的线性范围分别为1.066～53.300、1.062～53.100、4.384～219.200、1.118～55.900、1.036～51.800、1.110～55.400、1.040～52.000、0.530～53.000μg·...     

基于一测多评定量控制联合灰色关联度分析的颈痛颗粒综合质量评价

目的 建立高效液相色谱一测多评（QAMS）法同时测定颈痛颗粒中三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁、人参皂苷Rb₁、3''-羟基葛根素、葛根素、3''-甲氧基葛根素、洋川芎内酯A、藁本内酯、延胡索乙素、去氢紫堇碱、紫堇碱、羌活醇和异欧前胡素含量,并通过灰色关联度分析法对13种成分含量检测结果进行分析评价。方法 采用Shimadzu C₁₈色谱柱;以乙腈-0.1%磷酸为流动相梯度洗脱;检测波长为203 nm（三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁和人参皂苷Rb₁）、280 nm（3''-羟基葛根素、葛根素、3''-甲氧基葛根素、洋川芎内酯A、藁本内酯、延胡索乙素、去氢紫堇碱和紫堇碱）和315 nm（羌活醇和异欧前胡素）;采用外标法（ESM）测定13种成分的含量。以葛根素为内参物质,分别计算其与三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁、人参皂苷Rb₁、3''-羟基葛根素、3''-甲氧基葛根素、洋川芎内酯A、藁本内酯、延胡索乙素、去氢紫堇碱、紫堇碱、羌活醇和异欧前胡素的相对校正因子（f）,并计算上述12种成分的含量,比较ESM和QAMS法检测结果的差异,验证一测多评法的准确性和可行性。基于灰色关联度分析不同批次颈痛颗粒中13种成分QAMS法含量检测数据,对15批次颈痛颗粒质量进行综合评价。结果 三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁、人参皂苷Rb₁、3''-羟基葛根素、葛根素、3''-甲氧基葛根素、洋川芎内酯A、藁本内酯、延胡索乙素、去氢紫堇碱、紫堇碱、羌活醇和异欧前胡素分别在各自范围内线性关系良好（r≥0.999 2）,平均加样回收率（n＝9）在96.86%～100.37%（RSD≤1.65%）。所建立的f耐用性良好,HPLC-QAMS法计算值和ESM实测值之间无明显差异。灰色关联度分析结果显示15批次颈痛颗粒相对关联度在0.332 4～0.600 4,表明颈痛颗粒批次间呈现一定质量差异。结论 QAMS多指标成分定量控制联合灰色关联度分析法操作便捷、结果准确,可用于颈痛颗粒的综合质量评价。     

超高效液相色谱-质谱联用同时测定旋覆代赭汤中15种成分含量

目的 建立同时测定旋覆代赭汤中15种成分含量的超高效液相色谱-质谱联用(UPLC-MS/MS)方法。方法 采用Shim-pack GIST C₁₈(2.1 mm×100 mm,2.0μm)色谱柱,流动相用乙腈-0.1%甲酸,梯度洗脱,流速0.3 mL·min^-1,柱温35℃。采用ESI源,以MRM负离子模式检测。结果 甘草苷、甘草酸、甘草素、异甘草素、异甘草苷、芹糖异甘草苷、新甘草苷、绿原酸、隐绿原酸、阿魏酸、异绿原酸A、异绿原酸C、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re和6-姜辣素在各自浓度范围内线性关系良好(r> 0.998 6),平均回收率在97.0%～103.1%,精密度、重复性、稳定性均符合要求。结论 建立的方法简单、准确性好,可为旋覆代赭汤及其制剂的质量控制提供参考。