N-乙酰半胱氨酸激活蛋白激酶B通路减轻镉诱导的睾丸间质细胞凋亡

目的 探究N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine, NAC)基于蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,又称AKT)通路对镉诱导小鼠睾丸间质细胞凋亡的调控机制。方法 将小鼠睾丸间质细胞(TM3)分为对照组、镉染毒组(Cd, 5、10、20、30、40和50μmol/L)、NAC组(NAC,500μmol/L)及NAC+镉染毒组(500μmol/L NAC+20μmol/L Cd),其中NAC+Cd染毒组先用NAC预处理30 min,再联合镉染毒24 h。CCK8测定细胞存活率,Hoechst染色检测细胞形态,流式细胞仪分析细胞凋亡率,同时测定丙二醛(malondialdehyde, MDA)、谷胱甘肽(glutathione, GSH)含量,Western blot免疫印迹法分别检测AKT蛋白、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2, Bcl-2)和B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein, Bax)的表达水平。结果 镉可抑制TM3细胞增殖且存在剂量-效应关系。细胞形态观察发现,随着镉染毒浓度的增加,细胞缩...     

miRNA转录组学分析镉致小鼠睾丸间质细胞毒性作用机制

目的 运用转录组测序及生物信息学技术，探讨镉通过调控微小RNA(microRNA, miRNA)引起小鼠睾丸间质细胞(TM3)毒性的机制。方法 选取TM3为细胞模型，分为对照组(不予镉处理)和镉染毒组(20μmol/L CdCl₂),24 h后收获细胞提取总RNA,通过RNA质量检测后上机执行测序程序得到miRNA的表达谱。以差异倍数(fold change, FC)>2,P<0.05作为标准筛选显著差异表达miRNA,并采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR, qRT-PCR)对差异表达miRNA进行验证。同时，利用miRanda软件预测其靶基因，构建miRNA-靶基因互作网络并对靶基因进行基因本体学(gene ontology, GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes, KEGG)功能富集分析。结果 筛选出镉致TM3细胞毒性相关的26个显著差异表达miRNA,其中19个显著上调，7个显著下调。qRT-PCR对其中3个差异miRNA进行表达...     

Nano-Se对镉致睾丸间质细胞凋亡保护作用的研究

目的探究纳米硒(nano-selenium,Nano-Se)通过调节Bax/Bcl-2比值对镉(cadmium,Cd)致小鼠睾丸间质细胞(TM3)凋亡的保护作用。方法试验分为5组,即对照组、镉染毒组、低剂量纳米硒组、中剂量纳米硒组和高剂量纳米硒组。其中镉染毒剂量为20μmol/L;纳米硒处理剂量分别为5、10和20μmol/L。采用CCK-8检测细胞活力,Hoechst染色检测凋亡,通过Western Blot检测Bax和Bcl-2蛋白的表达以及Bax/Bcl-2比值的变化情况。结果:与对照组相比,Cd能使TM3细胞形态改变,造成细胞损伤,导致细胞活力明显下降(P0.05),使Bax/Bcl-2比值明显升高(P0.05)诱发TM3细胞凋亡。而与Cd组相比,Nano-Se能够抑制Cd对TM3细胞的毒性作用,提高细胞活力(P0.05),降低Bax/Bcl-2比值(P0.05)和TM3细胞的凋亡水平。结论 Nano-Se对Cd致TM3细胞毒性损伤具有保护作用,可能降低TM3细胞中Bax/Bcl-2比值,从而抑制TM3细胞凋亡。[营养学报,2019,41(6):601-605]     

CHOP通路在邻苯二甲酸单丁酯和邻苯二甲酸单(2-乙基)己酯联合暴露致小鼠睾丸间质细胞凋亡中的作用

目的探讨邻苯二甲酸单丁酯(monobutyl phthalate,MBP)和邻苯二甲酸单(2-乙基)己酯[mono(2-ethylhexyl)phthalate,MEHP]染毒致体外培养的小鼠睾丸间质细胞(TM-3)凋亡过程中CHOP通路的作用。方法将小鼠睾丸间质细胞分别暴露于0(对照)、50、100、200、400、800μmol/L的MBP和(或)MEHP溶液24、36、48 h后,采用CCK-8法测定细胞活性。将小鼠睾丸间质细胞分别暴露于完全培养基(对照)、MBP(400μmol/L)、MEHP(400μmol/L)和MEHP(400μmol/L)+MBP(400μmol/L)溶液24 h后,电镜下观察小鼠睾丸间质细胞内质网超微结构的变化。将小鼠睾丸间质细胞分别暴露于完全培养基(对照)及200、400、800μmol/L MBP和(或)MEHP溶液24 h,流式细胞术检测细胞早期凋亡情况,免疫印迹法检测内质网应激标志性蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和CHOP的表达水平。结果与对照组相比,各浓度MBP染毒组小鼠睾丸间质细胞的抑制率均较高,差异有统计学意义(P0.05);且随着MBP染毒浓度的升高,小鼠睾丸间质细胞的抑制率呈上升趋势。随着MBP染毒时间的延长,小鼠睾丸间质细胞的抑制率除100μmol/L组呈上升趋势外,其余浓度组均呈先上升后下降的趋势。与对照组相比,各浓度MEHP染毒组小鼠睾丸间质细胞的抑制率均较高,差异具有统计学意义(P0.05);且随着MEHP染毒浓度的升高,小鼠睾丸间质细胞的抑制率呈上升趋势。随着MEHP染毒时间的延长,小鼠睾丸间质细胞的抑制率在50μmol/L组呈上升趋势,在100μmol/L组呈先下降后上升的趋势,在400μmol/L组呈下降趋势,200μmol/L和800μmol/L组抑制率呈先上升后下降的趋势。与对照组相比,各浓度MBP+MEHP染毒组小鼠睾丸间质细胞的抑制率均较高,差异具有统计学意义(P0.05);且随着MBP+MEHP染毒浓度的升高,小鼠睾丸间质细胞的抑制率呈现上升趋势。随着MBP+MEHP染毒时间的延长,小鼠睾丸间质细胞的抑制率除200、400μmol/L组呈现逐渐上升趋势外,其余浓度组均呈先上升后下降的趋势。与对照组相比,各浓度MBP和(MEHP)染毒组TM-3细胞的早期凋亡细胞比例均较高,差异有统计学意义(P0.05);且随着染毒浓度的升高,MBP、MEHP和MBP+MEHP染毒小鼠睾丸间质细胞的早期凋亡细胞比例均呈现上升趋势。在同一染毒浓度下,睾丸间质细胞早期凋亡比例依次为MBP+MEHPMBPMEHP,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组相比,各浓度MBP和(或)MEHP染毒组小鼠睾丸间质细胞内GRP78和CHOP蛋白的表达水平均增加,差异有统计学意义(P0.05);且随着染毒浓度的升高,MBP和(或)MEHP染毒小鼠睾丸间质细胞内GRP78和CHOP蛋白的表达水平均呈逐渐上升的趋势。结论 MBP和(或)MEHP染毒可致内质网损伤,上调GRP78蛋白和CHOP蛋白的表达,这可能是MBP和(或)MEHP引起小鼠睾丸间质细胞凋亡的重要途径。     

活性氧在氯化镉诱导的小鼠睾丸间质细胞凋亡中的作用

目的 探究活性氧(reactive oxygen species, ROS)在氯化镉(cadmium chloride, CdCl₂)诱导的睾丸间质细胞毒性中的潜在作用及机制。方法 以不同浓度CdCl₂(0、5和10μmol/L)染毒小鼠睾丸间质TM3细胞24 h。CCK-8法检测CdCl₂对TM3细胞活性的影响;Hoechst33342染色法检测凋亡小体;DCFH-DA探针法检测TM3细胞ROS水平;1 mmol/L N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine, NAC)预处理1 h后用10μmol/L CdCl₂染毒TM3细胞24 h, Western blot检测细胞内促凋亡蛋白Caspase-9和cleaved Caspase-3的表达水平;RT-qPCR检测细胞内抗凋亡基因Bcl-2以及促凋亡基因Caspase-9和Caspase-3 mRNA表达水平。结果 CdCl₂染毒细胞24 h后,TM3细胞活力降低且凋亡小体数量增加。10μmol/L CdCl<...     

过氧化物酶体增生物激活受体γ共激活因子1-α对铅致小鼠睾丸支持细胞毒性的拮抗作用

目的研究过氧化物酶体增生物激活受体γ共激活因子1-α(PGC-1α)对铅致小鼠睾丸支持(TM4)细胞毒性的拮抗作用。方法将处于对数生长期的TM4细胞和慢病毒干扰技术构建稳定的PGC-1α过表达小鼠睾丸支持[PGC-1α(+)TM4]细胞株分别暴露于0(对照)、20、40、80、160μmol/L乙酸铅溶液染毒24 h。采用流式细胞仪检测细胞凋亡率,并测定细胞内Caspase-9、Caspase-3的活力。结果与对照组比较,各浓度乙酸铅染毒组TM4细胞和PGC-1α(+)TM4细胞的凋亡率均升高,差异均有统计学意义(P0.05);且随着乙酸铅浓度升高,TM4细胞和PGC-1α(+)TM4细胞的凋亡率均呈上升趋势。与相同浓度TM4细胞比较,各浓度乙酸铅染毒组PGC-1α(+)TM4细胞的凋亡率较低,差异均有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,各浓度乙酸铅染毒组TM4细胞和PGC-1α(+)TM4细胞内Caspase-9和Caspase-3的活力均升高,除20μmol/L乙酸铅染毒组TM4细胞内Caspase-3活力外,差异均有统计学意义(P0.05);且随着乙酸铅染毒浓度的升高,TM4细胞和PGC-1α(+)TM4细胞内Caspase-9和Caspase-3的活力均呈上升趋势。与相同浓度TM4细胞比较,各浓度乙酸铅染毒组PGC-1α(+)TM4细胞内Caspase-9和Caspase-3的活力较低,差异均有统计学意义(P0.05)。结论PGC-1α可能通过下调细胞内凋亡相关蛋白Caspase-9、Caspase-3的活力,来拮抗铅诱导的小鼠睾丸支持细胞凋亡。     

lncRNA DDX11-AS1靶向miR-299-3p调控宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的 探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)DDX11反义RNA1(DDX11 antisense 1,DDX11-AS1)靶向miR-299-3p对宫颈癌细胞增殖、迁移侵袭的影响。 方法 实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测宫颈癌组织、癌旁组织中DDX11-AS1和miR-299-3p表达水平。将小干扰RNA阴性对照(si-NC组)、DDX11-AS1小干扰RNA组(si-DDX11-AS1组)、miR-299-3p模拟物组(miR-299-3p组)、miRNA模拟物阴性对照组(miR-NC组)、si-DDX11-AS1+miRNA抑制物阴性对照组(si-DDX11-AS1+anti-miR-NC组)、si-DDX11-AS1+miR-299-3p抑制物组(si-DDX11-AS1+anti-miR-299-3p组)分别转染HeLa细胞。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)、transwell实验分别检测细胞活力、迁移侵袭能力。双荧光素酶报告实验和RT-qPCR验证DDX11-AS1对miR-299-3p的靶向调控作用。 结果 与癌旁组织相比,宫颈癌组织中DDX11-AS1表达显著升高,miR-299-3p表达显著降低(P<0.05)。与si-NC组相比,si-DDX11-AS1组HeLa细胞活力、迁移和侵袭细胞数显著降低(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-299-3p组HeLa细胞活力、迁移和侵袭细胞数显著降低(P<0.05)。与si-DDX11-AS1+anti-miR-NC组比较,si-DDX11-AS1+anti-miR-299-3p组HeLa细胞活力、迁移和侵袭细胞数显著升高(P<0.05)。miR-299-3p是DDX11-AS1的靶基因,DDX11-AS1负调控miR-299-3p表达。 结论 宫颈癌中DDX11-AS1呈高表达。沉默DDX11-AS1通过上调miR-299-3p能够降低宫颈癌细胞增殖、迁移侵袭能力。     

苯并[a]芘对小鼠睾丸支持细胞缝隙连接蛋白表达及细胞增殖的影响

[目的]探讨苯并[a]芘(BaP)在不引起小鼠睾丸支持细胞凋亡的情况下,对缝隙连接蛋白43(CX43)表达及细胞增殖的作用. [方法]取小鼠睾丸支持细胞系——TM4细胞,以二甲基亚砜为对照,0.5、10.0 μmol/L浓度的BaP同时染毒培养的TM4细胞,并于染毒的4h、72h后收集细胞,检测细胞的活力、增殖、凋亡情况,以及CX43的mRNA和蛋白的表达量. [结果]与对照组相比:BaP染毒4h时,两个染毒组细胞存活率、增殖、凋亡和CX43蛋白表达没有明显变化(P＞0.05),而CX43 mRNA的表达升高(P＜0.05);72h时,两个染毒组细胞凋亡无明显变化,而细胞存活率和增殖均下降(P＜0.05),CX43 mRNA和蛋白表达出现上升(P＜0.05). [结论]0.5、10.0 μmol/L浓度的BaP染毒小鼠睾丸支持细胞,可抑制细胞增殖,引起CX43 mRNA和蛋白表达升高.     

miR-96-5p靶向IRS1对麦芽酚铝致PC12细胞凋亡的影响

目的探讨miR-96-5p在麦芽酚铝致PC12细胞凋亡中的影响及其作用机制。方法于2021年1月, 取对数生长期的PC12细胞, 分为空白对照组和低、中、高剂量组, 分别采用0、100、200、400 μmol/L的麦芽酚铝处理24 h, 收集各组细胞, 采用流式细胞术检测细胞凋亡率, qRT-PCR检测miR-96-5p和胰岛素受体底物1(IRS1)mRNA表达水平, Western blotting检测半胱氨酸蛋白酶3(Caspase3)、活化型半胱氨酸蛋白酶3(Cleaved-caspase3)、IRS1、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、磷酸化葡萄糖合成激酶3β(p-GSK3β)蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因实验检测miR-96-5p和IRS1的靶向结合关系。采用miR-96-5p inhibitor转染PC12细胞24 h构建miR-96-5p抑制细胞和阴性对照细胞, 将细胞分为空白对照组、阴性对照组、铝染毒组、铝染毒+阴性对照组、铝染毒+miR-96-5p抑制组、miR-96-5p抑制组, 采用miR-96-5p inhibitor和IRS1 siRNA转染PC12细胞24...     

T-2毒素对小鼠睾丸间质细胞相关功能基因mRNA表达的影响

目的探讨T-2毒素对小鼠睾丸间质细胞相关功能基因mRNA表达的影响。方法对分离出的4~5周龄BABL/c小鼠睾丸间质细胞进行体外培养,分别暴露于含10 ng/ml hCG(对照)和10-9、10-8、10-7mol/L T-2毒素+10 ng/ml hCG的培养液中24h。采用RT-PCR方法检测相关功能基因(3β-HSD-1,P450scc和StAR)mRNA的表达水平。结果与对照组相比,10 ng/ml hCG+10-8mol/L T-2毒素和10 ng/ml hCG+10-7mol/L T-2毒素染毒组小鼠睾丸间质细胞3β-HSD-1 mRNA的表达水平及10 ng/ml hCG+各剂量T-2毒素染毒组小鼠睾丸间质细胞P450scc/HPRT、StAR/HPRT mRNA的表达水平均下降,差异有统计学意义(P0.05,P0.01);且随着T-2毒素染毒剂量的升高,10 ng/ml hCG诱导小鼠睾丸间质细胞3β-HSD-1、P450scc和StAR mRNA的表达水平呈下降趋势。结论 T-2毒素可通过抑制小鼠睾丸间质细胞3β-HSD-1、P450scc和StAR mRNA表达而对雄性小鼠产生生殖毒性。     

锌对镉致小鼠睾丸细胞凋亡及精细胞形态改变的保护作用

目的研究亚急性镉中毒致雄性小鼠睾丸细胞凋亡和锌干预作用。方法50只成年健康ICR小鼠,随机分为对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组和锌干预组,分别以不同剂量氯化镉溶液(0、0.4、0.8、1.6、1.6 mg/kg)行背部皮下注射,锌干预组同时给予硫酸锌溶液(3.50×10-4g/L)作饮用水自由饮用,连续染毒3周。检测精子活力、畸变和睾丸细胞凋亡。结果各组小鼠病理损伤自中剂量组开始出现,以高剂量组明显,锌干预组病理损伤小于高剂量组;各染毒组睾丸细胞凋亡率高于对照组,随剂量增加,低、中剂量组的凋亡率逐渐增高,而高剂量组凋亡率低于中剂量组,锌干预组凋亡率高于高剂量组。精子成活率随染毒剂量的增加而逐渐下降、畸形率则增加,呈剂量—反应关系;锌干预组精子成活率比高剂量组高,畸形率则显著降低。结论锌可降低镉中毒所致精子成活率下降和精子畸变率增高,但增加镉中毒时睾丸细胞凋亡率。     

p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路在多菌灵致小鼠睾丸支持细胞增殖抑制和凋亡中的作用

目的通过建立多菌灵致小鼠睾丸支持细胞(TM4)损伤模型,探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路在多菌灵致小鼠TM4细胞增殖抑制和凋亡中的作用。方法将TM4细胞分别暴露于0(对照)、1、2、5、10、20μmol/L多菌灵溶液和10μmol/L SB203580抑制剂溶液及10μmol/L SB203580+5μmol/L多菌灵溶液染毒48 h,采用CCK-8法检测细胞存活率。将TM4细胞分别暴露于0(对照)、5μmol/L多菌灵溶液和10μmol/L SB203580抑制剂溶液及10μmol/L SB203580+5μmol/L多菌灵溶液染毒48 h,采用碘化丙啶(PI)染色法检测细胞周期,采用Annexin V/PI双标法检测TM4细胞凋亡,采用Western blot法检测细胞P38 MAPK和p-P38 MAPK蛋白的表达水平。结果与对照组比较,5、10、20μmol/L多菌灵组TM4细胞的存活率均下降,差异有统计学意义(P0.01);且随着多菌灵暴露浓度的升高,TM4细胞的存活率呈下降趋势。与5μmol/L多菌灵组比较,10μmol/L SB203580+5μmol/L多菌灵组TM4细胞的存活率升高,差异有统计学意义(P0.01);而10μmol/L SB203580抑制剂组TM4细胞的存活率无明显改变。与对照组相比,5μmol/L多菌灵组TM4细胞的凋亡率增加,差异有统计学意义(P0.01);而10μmol/L SB203580抑制剂组的凋亡率无明显改变。与5μmol/L多菌灵组比较,10μmol/L SB203580+5μmol/L多菌灵组TM4细胞的凋亡率下降,差异有统计学意义(P0.01)。与对照组比较,5μmol/L多菌灵组TM4细胞G_1/G_0期细胞所占比例降低,而G2/M期和S期细胞所占比例升高,差异均有统计学意义(P0.01);而10μmol/L SB203580抑制剂组各期细胞所占比例均无明显改变。与5μmol/L多菌灵组比较,10μmol/L SB203580+5μmol/L多菌灵组TM4细胞仅G_2/M期细胞所占比例下降,差异有统计学意义(P0.01)。与对照组比较,5μmol/L多菌灵组TM4细胞的p-P38 MAPK蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P0.01);而10μmol/L SB203580抑制剂组的p-P38 MAPK蛋白表达水平无明显改变。与5μmol/L多菌灵组比较,10μmol/L SB203580+5μmol/L多菌灵组TM4细胞的p-P38 MAPK蛋白表达水平下降,差异有统计学意义(P0.01)。各组TM4细胞的P38 MAPK蛋白表达水平间比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论多菌灵通过激活p38 MAPK信号通路抑制TM4细胞增殖,并诱导细胞凋亡及周期阻滞,从而造成细胞损伤。     

纳米二氧化钛对小鼠睾丸支持细胞的细胞毒性研究

目的 探讨纳米二氧化钛对小鼠睾丸支持细胞(TM4)的毒性作用。方法 用浓度为0、25、50和100μg/ml的纳米二氧化钛染毒TM4细胞24h。使用细胞计数试剂盒(Cell counting kit-8,CCK8) 检测细胞存活率,应用流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞内活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平,试剂盒检测超氧化歧化酶(SOD)的活性和谷胱甘肽(GSH)的水平。结果 与对照组相比,随着纳米二氧化钛染毒浓度的升高,TM4细胞存活率逐渐下降,当浓度达到100μg/ml时,细胞存活率下降明显(P<0.05)。流式细胞仪检测发现,与对照组相比,随着染毒剂量的增加,各个染毒组的细胞凋亡率和ROS水平逐渐增加(P<0.05)。细胞SOD活性和GSH含量随着染毒浓度的增加而逐渐降低,且在100 μg/ml 剂量组与对照组相比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 纳米二氧化钛可以抑制睾丸支持细胞TM4的活性,诱导细胞凋亡,其毒性机制可能与细胞发生氧化应激有关。     

miR-17-5p与反式-7,8-二羟-9,10-环氧苯并芘诱导转化的人支气管上皮细胞生物学特性的关系研究

目的探讨miR-17-5p对反式-7,8-二羟-9,10-环氧苯并芘(anti-BPDE)诱导转化的人支气管上皮细胞(16HBE-T)的生物学特性方面的影响。方法运用逆转录定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-17-5p成熟体在16HBE-T和非转化对照细胞(16HBE-N)的相对表达水平。通过瞬时转染miRNA模拟物及抑制剂,改变16HBE-T中miR-17-5p的表达,分析转染后16HBE-T的增殖能力、细胞周期、细胞凋亡和软琼脂集落形成率等。结果转染前,16HBE-T中miR-17-5p表达水平是16HBE-N的2.35倍;转染后,转染miR-17-5p抑制剂组和转染miR-17-5p模拟物组中的miR-17-5p表达水平分别是16HBE-T的0.45和1.71倍。与抑制剂阴性对照组相比,转染了miR-17-5p抑制剂的试验组出现增殖能力下降、细胞周期阻滞和凋亡上升、克隆形成率下降。相反,转染了miR-17-5p模拟物的试验组与模拟物阴性对照组相比出现了增殖能力上调、凋亡减少,克隆形成率升高。结论 anti-BPDE恶性转化细胞中miR-17-5p成熟体表达水平改变能够影响16HBE-T的增殖能力、细胞周期和凋亡、克隆形成率,推断miR-17-5p在anti-BPDE致癌过程中发挥类癌基因作用。     

c-Jun氨基末端激酶在镉致小鼠脑原代星形胶质细胞凋亡中的作用

目的利用原代培养的小鼠脑星形胶质细胞(astrocytes,AS),探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号转导通路是否参与镉致小鼠脑星形胶质细胞凋亡的过程。方法原代培养的小鼠脑星形胶质细胞给予0~20μmol/L镉染毒0~24 h,倒置相差显微镜观察细胞形态变化;给予0~20μmol/L镉染毒9、12 h,采用MTT法检测细胞存活率;给予0~20μmol/L镉染毒12 h,采用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率;给予0~20μmol/L镉染毒0~12 h,采用蛋白印迹(Western blotting)法检测JNK磷酸化蛋白的表达水平。结果镉浓度为5~20μmol/L时,随染毒剂量的升高及作用时间的延长,细胞形态发生明显改变:细胞间网络连接松散,突起消失,胞体收缩成球形,贴壁能力下降,最终脱落,漂浮于培养液中。与对照组比较,各浓度镉染毒9、12 h后小鼠脑星形胶质细胞的存活率均下降,差异有统计学意义(P0.01);且随着镉染毒浓度的升高和染毒时间的延长,小鼠脑星形胶质细胞的存活率均呈下降趋势。与对照组比较,各浓度镉染毒12 h后小鼠脑星形胶质细胞的凋亡率均升高,差异有统计学意义(P0.01);且随着镉染毒浓度的升高,小鼠脑星形胶质细胞的凋亡率均呈上升趋势。与对照组比较,5~20μmol/L镉染毒3 h后小鼠脑星形胶质细胞内p-JNK表达量均升高,20μmol/L镉染毒6 h后小鼠脑星形胶质细胞内p-JNK表达量升高,10~20μmol/L镉染毒9、12 h后小鼠脑星形胶质细胞内p-JNK表达量均升高,差异有统计学意义(P0.05);与0 h比较,0~20μmol/L镉染毒3~12 h后小鼠脑星形胶质细胞内p-JNK表达量均升高,差异有统计学意义(P0.05);且随着镉浓度的升高和染毒时间的延长,小鼠脑星形胶质细胞内p-JNK的表达量均呈上升趋势。结论镉可能通过上调JNK磷酸化蛋白的表达水平来诱导小鼠脑星形胶质细胞的凋亡。     

砷和氟对大鼠睾丸组织caspase-3和caspase-9表达的影响

目的研究慢性砷染毒、氟染毒及联合染毒大鼠睾丸组织中caspase-3、caspase-9表达的变化。方法将40只健康清洁级雄性SD大鼠随机分为4组,分别为对照(普通饲料)组、砷染毒(高砷饲料,含砷量为10.000 mg/kg)组、氟染毒(高氟饲料,含氟量为16.844 mg/kg)组和砷氟联合染毒(高砷高氟饲料,含砷量为10.000 mg/kg,含氟量为16.844 mg/kg)组,每组10只。采用自由进食饲料方式连续染毒12周。采用TUNEL染色法测定生精小管细胞的凋亡率;采用免疫组化法测定睾丸间质细胞caspase-3、caspase-9的阳性表达水平。结果与对照组比较,各染毒组大鼠生精小管生精细胞的凋亡率均较高,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,各染毒组大鼠间质细胞caspase-3、caspase-9的阳性表达水平均较高,差异有统计学意义(P0.05)。且砷氟联合染毒组大鼠间质细胞caspase-3、caspase-9的阳性表达水平高于氟染毒组高砷染毒组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论砷及氟联合染毒所致大鼠睾丸组织的损伤及凋亡可能通过激活caspase-3或caspase-9等途径实现。     

低剂量氢醒对TK6淋巴母细胞生物学性状及miR-221表达影响

目的 探讨低剂童氮醌(HQ)对TK6淋巴母细胞的生物学性状及小分子非编码RNA(microRNA)-221(miR-221)表达的影响.方法 磷酸盐缓冲液(PBS)溶解HQ,以PBS处理组为对照组,分别以2.5、5.0和10.0 μmol/L HQ染毒TK6细胞为处理组.应用CCK-8试剂盒检测细胞活力和细胞增殖,通过磷脂结合蛋白(Annexin V)/碘化丙啶(PI)标记的流式细胞技术检测细胞调亡,用实时荧光定童-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测milR-221的表达改变.结果 细胞增殖以48 h最为明显,2.5、5.0和10.0 μmol/L组细胞增殖指数分别为1.33(P<0.05)、1.14(P<0.05)和1.12(P<0.05);milR-221表达改变以72h最为明显,2.5、5.0、10.0 p.μmol/L HQ组细胞milR-221表达量分别抑制了0.31倍(P<0.05)、0.39倍(P<0.05)和0.33倍(P<0.05).结论　低剂量HQ能抑制TK6细胞调亡和milR-221的表达,促进细胞增殖.     

尼古丁抑制小鼠睾丸间质细胞睾酮生成中的线粒体损伤作用

目的探讨尼古丁抑制小鼠睾丸间质细胞株(TM3)睾酮生成中对线粒体的损伤作用。方法尼古丁染毒处理TM3细胞24 h,采用CCK-8法检测细胞活性,流式细胞仪检测细胞凋亡,ELISA检测培养液睾酮水平,NAO探针染色检测线粒体质量,荧光酶标仪检测ATP水平,QPCR方法检测线粒体DNA拷贝数,western blot分析线粒体相关蛋白及睾酮合成关键酶蛋白的表达。结果 TM3细胞活性随尼古丁染毒剂量增加而降低;与对照组细胞相比,尼古丁在1～10μM剂量范围内对细胞凋亡率无明显影响,但诱导细胞睾酮水平显著降低(P=0.022,P=0.009和P=0.007);同时细胞线粒体质量(P=0.038,P=0.008和P=0.007)、线粒体DNA拷贝数(P=0.045,P=0.032和P=0.008)以及细胞ATP水平(P=0.037,P=0.007和P=0.005)也随尼古丁染毒浓度的增加而呈降低趋势。线粒体生物合成相关蛋白PGC1-α(P=0.007、P=0.003和P=0.002)、SIRT1(P=0.043,P=0.009和P=0.004)、COX I(P=0.036和P=0.008)以及线粒体睾酮合成酶蛋白St AR(P=0.009,P=0.007和P=0.005)和CYP11A1(P=0.007和P=0.006和P=0.001)的表达均随染毒剂量的升高而降低。结论尼古丁可抑制睾丸间质细胞TM3的睾酮生成,其机制可能与诱导细胞线粒体损伤及线粒体睾酮合成酶的表达降低有关。     

Caspase-3在微囊藻毒素-LR诱导大鼠睾丸支持细胞凋亡中的作用

目的研究微囊藻毒素-LR(MC-LR)染毒对大鼠睾丸支持细胞凋亡形态以及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)活力的改变。方法自健康18～20日龄SPF级SD雄性大鼠体内分离、培养睾丸支持细胞。用含MC-LR终浓度分别为0(对照)、1、10μg/ml的培养液培养48 h。采用Hoechst荧光染色法检测睾丸支持细胞的凋亡情况;采用caspase-3底物切除法检测caspase-3的活力。结果随着MC-LR染毒剂量的增高,大鼠睾丸支持细胞凋亡率升高。与对照组比较,仅10μg/ml MC-LR染毒的睾丸支持细胞caspase-3活力升高,差异有统计学意义(P<0.05);而1μg/ml MC-LR染毒睾丸支持细胞caspase-3活力略有降低,但差异无统计学意义。结论 MC-LR能诱导睾丸支持细胞发生凋亡,caspase-3在MC-LR诱导睾丸支持细胞凋亡中起重要调控作用。     

镉诱导293细胞凋亡与Caspase-3和p53表达关系

目的研究镉致细胞凋亡过程中Caspase-3和p53表达的变化,探讨Caspase-3和p53基因在镉致细胞凋亡中的作用。方法离体培养的转化人胚肾293细胞以40μmol/L氯化镉分别处理0~24h,N-乙酰半胱氨酸(NAC)和Caspase-3特异性三肽抑制剂(Z-DEVD-fmk)预处理组分别在镉处理前以5mmol/LNAC和10μmol/LZ-DEVD-fmk预处理24h和1h,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法测Caspase-3和p53水平,流式细胞Anexin-V-PI双染法检测细胞凋亡率。结果40μmol/L镉处理293细胞,6~24hCaspase-3基因mRNA水平显著增高,0~24h内p53基因mRNA无显著变化。40μmol/L镉处理293细胞,6~24h内Caspase-3相对分子质量20000的活性亚单位条带显著增强,与镉处理24h组比较,NAC预处理组Caspase-3相对分子质量20000的活性亚单位条带显著减弱(P<0·01),Z-DEVD-fmk预处理组无明显变化(P>0·05);40μmol/L镉处理293细胞,p53蛋白在6~24h表达增强(P<0·01),与单纯镉处理24h组比较,NAC和Z-DEVD-fmk预处理组p53蛋白表达无显著变化(P>0·05)。结论Caspase-3基因在镉诱导细胞凋亡过程中起着重要的作用。