益气活血通络方对糖尿病神经病理性疼痛大鼠脊髓星形胶质细胞活性及JNK信号通路的影响

目的:探讨益气活血通络方防治糖尿病神经病理性疼痛(DNP)的作用机制.方法:高脂喂养联合单次小剂量注射STZ制备2型糖尿病大鼠,通过检测机械痛阈(MWT)和热缩足反应时间(TWL)判定DNP模型成功.Western blot检测脊髓JNK、p-JNK、GFAP蛋白表达;ELISA检测脊髓IL-1 β、IL-10和TNF...     

推拿按揉法对慢性坐骨神经挤压伤大鼠脊髓背角星形胶质细胞和神经元的影响*

目的：观察推拿按揉法对慢性坐骨神经挤压伤（CCI）大鼠星形胶质细胞和神经元的影响,探讨其治疗神经病理性疼痛的潜在作用机制。方法：将入组的40只SD大鼠随机平均分成5组（每组8只）,分别为空白组、模型组、推拿组、星形胶质细胞抑制剂组和星形胶质细胞抑制剂+推拿组。除空白组外的组别均建立CCI模型,造模后第4天起,推拿组接受按揉法干预,10分钟/次/天,星形胶质细胞抑制剂组鞘内注射氟代柠檬酸（fluorocitrate,FCA）,10ul/只/天,星形胶质细胞抑制剂+推拿组进行鞘内注射FCA和按揉委中穴联合干预,连续14天。观察各组大鼠各时间点的机械痛阈值情况,使用免疫荧光检测脊髓背角星形胶质细胞标志物（glial fibrillary acidic protein,GFAP）蛋白的表达,尼式染色法观测脊髓背角内神经元的形态、排列和数量的变化,并分析GFAP表达水平与神经元存活数量的相关性。结果：相较空白组,模型组机械痛阈值显著下降（P<0.01）;推拿干预后,推拿组阈值较模型组逐渐上升,累计治疗14天后具有显著差异（P<0.01）,注射FCA第7天起,星形胶质细胞抑制剂组和星形...     

针刺对慢性疲劳模型大鼠海马TLR4/NF-κB信号通路及星形胶质细胞的影响

目的：探究针刺对慢性疲劳模型大鼠海马TLR4/NF-κB信号通路及星形胶质细胞的影响。 方法：将SD大鼠分为对照组、模型组、针刺组,模型组和针刺组进行慢性束缚造模,造模后针刺组进行针刺干预。对各组大鼠进行旷场实验观察大鼠行为学变化;RT-PCR检测Tlr4、Nfkb mRNA表达;Western blot检测TLR4、p-NF-κB/NF-κB、MyD88、GFAP蛋白表达;免疫组化技术检测GFAP表达情况;Sholl分析星形胶质细胞突起形态变化。 结果：针刺可改善慢性疲劳综合征（Chronic fatigue syndrome,CFS）大鼠的行为学变化;模型组Tlr4、Nfkb mRNA表达升高,针刺组降低;与对照组相比,模型组TLR4、p-NF-κB蛋白表达升高,针刺组相对模型组TLR4、p-NF-κB蛋白表达降低,差异有统计学意义;与对照组相比,Western blot和免疫组化技术显示模型组GFAP蛋白表达下降,针刺组相对模型组GFAP蛋白表达上调,差异有统计学意义;Sholl分析结果显示模型组星形胶质细胞突起受到抑制,针刺能够修复CFS引起的星形胶质细胞突起抑制。 结论：针刺可以抑制CFS引起的神经炎症同时对星形胶质细胞起到调节作用,可能是其治疗CFS的机制之一。     

迷迭香酸通过MAPKs信号通路对H2O2诱导的星形胶质细胞凋亡的影响

目的 探究迷迭香酸通过MAPKs信号通路对H2O2诱导的星形胶质细胞凋亡的影响.方法 CCK-8法检测不同浓度迷迭香酸对U87细胞氧化应激损伤存活率的影响;酶标法检测乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)和线粒体活性氧(ROS);Western blot法检测细胞中磷酸化丝裂原活化蛋白酶P38 (p-P38MAPK)、...     

基于ERK信号通路抑制星形胶质细胞活化探讨益气活血通络方对糖尿病大鼠神经病理性疼痛的作用

目的：探讨益气活血通络方(YHTP)防治糖尿病神经病理性疼痛(DNP)的作用机制。方法：体内实验将90只SPF级SD雄性大鼠随机分为空白组、模型组、YHTP低剂量组(2.25 g·kg^-1)、YHTP中剂量组(4.5 g·kg^-1)、YHTP高剂量组(9 g·kg^-1)和甲钴胺组(0.175 mg·kg^-1)。除空白组外,其余5组采用高脂高糖饮食联合小剂量(35 mg·kg^-1)腹腔注射链脲佐菌素(STZ)构建糖尿病神经病理性疼痛模型。通过神经电生理检测DNP大鼠坐骨神经传导速度,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠脊髓组织白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)炎症因子水平,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大鼠脊髓组织中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和细胞外调节蛋白激酶(ERK)的mRNA表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠脊髓组织GFAP和磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK...     

补阳还五汤对脊髓损伤大鼠脊髓星形胶质细胞增殖的影响

目的 探究补阳还五汤对脊髓损伤大鼠脊髓星形胶质细胞增殖的影响。方法 采用改良Allen重物打击法制作脊髓损伤模型,将大鼠分为3组,即假手术组、脊髓损伤模型组、补阳还五汤组,各10只。造模干预1、3、5周后,巴索-比蒂-布雷斯纳汉(Basso-Beattie-Bresnahan, BBB)评分和斜板试验,评价大鼠后肢运动功能;皮层体感诱发电位波潜伏期,检测大鼠脊髓神经传导功能。于术后5周,HE染色,观察脊髓组织形态学变化的情况;免疫荧光染色,检测脊髓损伤区域中脊髓星形胶质细胞数量;蛋白质印迹法,检测脊髓组织中GFAP蛋白表达。结果 在造模干预1、3、5周后,模型组BBB评分及斜板试验倾斜角度显著低于假手术组(P<0.05),皮层体感诱发电位波潜伏期显著高于假手术组(P<0.05);补阳还五汤组BBB评分及斜板试验倾斜角度明显高于模型组(P<0.05),皮层体感诱发电位波潜伏期明显低于模型组(P<0.05)。在造模干预5周后,HE染色见补阳还五汤组脊髓组织结构较清晰,白质及灰质中坏死区减小,胶质疤痕减少,细胞及组织结构接近假手术组。在造模干预5周后,模型组大鼠脊髓组...     

基于NF-κB通路的芒果苷干预脂多糖诱导的细胞炎症作用机制研究

目的研究芒果苷对小鼠巨噬细胞RAW 264.7的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法采用脂多糖(LPS)诱导RAW 264.7细胞炎症模型。实验分四步:(1)细胞存活率实验分5组,即:空白组、LPS组、LPS+不同浓度(50、100、150μg/mL)芒果苷组。MTT法检测细胞存活率。(2)一氧化氮(NO)、白介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白介素6(IL-6)分泌实验分6组,即:空白组、LPS组、LPS和不同浓度芒果苷(50、100、150μg/mL)组、LPS+BAY 11-7082[核因子κB(NF-κB)抑制剂]组。Griess法检测NO分泌量,ELISA法检测IL-1β、TNF-α及IL-6分泌量。(3)诱导型一氧化氮合酶(iNOS)与环氧化酶-2(COX-2)mRNA及蛋白表达实验分组同细胞存活率实验。实时荧光定量PCR检测iNOS及COX-2 mRNA水平变化,Western blot检测iNOS及COX-2蛋白表达水平。(4)细胞质、细胞核中NF-κB表达实验分3组,即:空白组、LPS组、LPS+150μg/mL(终末浓度)芒果苷共处理组, Western blot检测细胞质、细胞核中NF-κB p65蛋白表达量。结果 (1)与空白组比较,LPS组显著降低RAW264.7细胞存活率(P0.05);与LPS组比较,50～150μg/mL芒果苷预处理对RAW264.7细胞增殖无显著影响(P0.05)。(2)与空白组比较,LPS组NO、IL-1β、TNF-α、IL-6分泌量显著升高(P0.05);与LPS组比较,除50μg/mL芒果苷预处理组NO、TNF-α分泌量无显著变化外(P0.05),其余各组NO、IL-1β、TNF-α、IL-6分泌量均显著降低(P0.05)。(3)与空白组比较,LPS组iNOS、COX-2 mRNA及蛋白表达量均显著升高(P0.05);与LPS组比较,50～150μg/mL芒果苷预处理组iNOS、COX-2 mRNA及蛋白表达显著下降(P0.05)。(4)与空白组比较,LPS组细胞质中NF-κB p65蛋白量减少,细胞核中则增多(P0.05);与LPS组比较,150μg/mL芒果苷预处理组细胞质中NF-κB p65蛋白量升高,细胞核中蛋白量减少(P0.05)。结论芒果苷可能通过抑制NF-κB信号通路,而抑制iNOS、COX-2表达及相关炎症因子的分泌,干预LPS诱导的RAW264.7细胞炎症。     

温胆汤含药血清对谷氨酸条件下原代星形胶质细胞P38MAPK及PKC的影响

目的:探讨温胆汤含药血清在谷氨酸(Glu)环境条件下对星形胶质细胞P38MAPK和PKC表达的影响。方法:将40只SD大鼠随机分为5组:正常组、氯氮平20mg/kg组、温胆汤40g/kg组、温胆汤30g/kg组、温胆汤20g/kg组,每组8只。正常组用等量生理盐水ig,氯氮平组ig 20 mg/kg,ig温胆汤生药40、30、20 g/kg,1次/d,8天后处死取血,制备含药血清。胶质原纤维酸性蛋白免疫染色法鉴定培养的星形胶质细胞纯度。星形胶质细胞在谷氨酸(0、5、10μmol/ml)条件下经含药血清处理,即谷氨酸对照组、正常血清组、氯氮平20mg/kg含药血清组、温胆汤40g/kg、30g/kg、20g/kg血清组,处理24h、36h和48h后,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞存活率;ELISA法检测P38MAPK磷酸化和非磷酸化及PKC蛋白表达的影响。结果:培养的星形胶质细胞纯度在95%以上。谷氨酸(0μmol/ml)条件下,温胆汤40g/kg、30g/kg含药血清组在3个时间段不同程度增加星形胶质细胞存活率;谷氨酸(5、10μmol/ml)条件下,温胆汤含药血清处理24h、36h后,温胆汤40g/kg、30g/kg、20g/kg含药血清组不同程度增加的细胞存活率;48h后,温胆汤40g/kg含药血清组增加的细胞存活率。谷氨酸(0、5、10μmol/ml)条件下,氯氮平20mg/kg含药血清组、温胆汤30g/kg含药血清组能显著上调星形胶质细胞P38MAPK蛋白磷酸化和非磷酸化的表达。谷氨酸(0、5μmol/ml)条件下,温胆汤40g/kg、30g/kg、20g/kg含药血清组显著降低星形胶质细胞PKC表达;谷氨酸(10μmol/ml)条件下,温胆汤40g/kg含药血清组显著降低星形胶质细胞PKC表达。结论:一定谷氨酸环境下温胆汤能不同程度的增加星形胶质细胞的存活率,能上调P38MAPK磷酸化和非磷酸化的表达及降低PKC蛋白的表达,从而间接反映出温胆汤能调节星形胶质细胞GJIC(细胞缝隙连接)的功能。     

银杏内酯B作用于星形胶质细胞对神经干细胞趋化影响的体外研究

[目的]考察银杏内酯B(GB)通过作用于脑微环境内星形胶质细胞(AC)对神经干细胞(NSCs)趋化的影响,并探讨其作用机制。[方法]利用Millicell小室建立体外趋化迁移模型,采用糖氧剥夺(OGD)方法损伤AC。GB(10、20、40μM)作用于AC 12 h,计数趋化迁移至Millicell小室下层细胞数目;采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测GB对AC趋化相关基因VEGF mRNA表达的影响。[结果]GB(10、20μM)作用于AC可显著增加GFP-NSC定向迁移数目(P0.05)。RT-PCR结果显示,GB(102、0μM)可显著上调AC VEGF mRNA表达(P0.05)。[结论]GB可以促进NSCs向损伤的AC趋化,这一过程可能是由VEGF介导的。     

黄芪甲苷调控STAT1/IκB/NF-κB信号通路抑制γ-干扰素诱导BV-2细胞激活

目的: 研究黄芪甲苷(ASI)对γ-干扰素(IFN-γ)诱导小胶质细胞激活的抑制作用及机制。 方法: 不同浓度的ASI(25,50,100 μmol·L^-1)预处理BV-2小胶质细胞2 h后,以IFN-γ刺激1.5 h或24 h,分别收集细胞培养基上清和细胞。分别以Griess和ELISA法检测培养基中一氧化氮(NO)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;qPCR法检测细胞中CD11b,TNF-α,白介素1β(IL-1β)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA水平;Western blot法检测细胞STAT1/IκB/NF-κB信号通路蛋白表达。 结果: ASI能显著抑制 IFN-γ诱导BV-2细胞NO和 TNF-α水平的升高(P<0.001);进一步研究表明,50 μmol·L^-1ASI能够显著抑制细胞IL-1β和TNF-α的mRNA表达(P<0.01,P<0.05),并表现出下调iNOS mRNA表达的趋势,但对BV-2细胞CD11b的mRNA水平无显著影响;同时,ASI显著抑制IFN-γ诱导上调的 pSTAT1,pIκB和pNF-κB的蛋白表达。 结论: ASI能够抑制IFN-γ诱导的小胶质细胞的激活,其机制与其抑制STAT1/IκB/NF-κB信号通路的激活,降低炎症状态下小胶质细胞IL-1β,TNF-α以及iNOS的基因表达,从而减少NO和TNF-α的生成有关。     

槲皮素对糖尿病大鼠肾脏p38MAPK/NF-κB信号通路的影响

目的:观察槲皮素对糖尿病大鼠肾组织中磷酸化丝裂原活化蛋白激酶p38(p-p38MAPK)、核因子-κB P65(NF-κB P65)表达的影响。方法:采用一次性腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型,随机分为正常对照组、糖尿病模型组、阳性对照组(骁悉11 mg/kg)、槲皮素25 mg/kg、槲皮素50mg/kg,8周后测定各组大鼠血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、24h尿蛋白并处死取双肾,计算各组大鼠肾脏肥大指数。光镜下观察肾小球病理形态学变化,免疫组织化学法测定肾组织p-p38MAPK的含量,Western blot测定肾组织NF-κB P65的含量。采用酶联免疫吸附(ELISA)法测定血清白细胞介素8(IL-8)、转化生长因子-β(TGF-β)、纤维连接蛋白(FN)、纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)。结果:与正常对照组比较,糖尿病模型组大鼠血清BUN、Scr含量,24 h尿蛋白,肾脏肥大指数均显著升高,糖尿病模型组血清IL-8、TGF-β、FN、PAI-1水平、肾组织p-p38MAPK及NF-κBP65表达显著升高。与模型组比较,槲皮素25、50mg/kg组大鼠血清BUN、Scr含量,24 h尿蛋白、肾脏肥大指数均显著降低,槲皮素25、50mg/kg组血清IL-8、TGF-β、FN、PAI-1水平、肾组织p-p38MAPK及NF-κBP65表达量显著降低,且明显改善肾小球病理变化。结论:槲皮素对糖尿病大鼠的肾脏保护作用可能通过调控肾脏p38MAPK/NF-κB信号通路,减轻炎症有关。     

基于NF-κB通路探讨六神胶囊对脂多糖诱导巨噬细胞RAW264.7炎症反应的影响

目的探讨六神胶囊的抗炎作用及机制。方法 RAW264.7细胞分为六神胶囊组和地塞米松组,六神胶囊按9.76、4.88、2.44、1.22、0.61、0.31、0.15μg/ml梯度稀释;地塞米松按250、125、62.5、31.25、15.63、7.81、3.91μg/ml梯度稀释,选择细胞存活率大于90%的最大3个六神胶囊浓度和最大无毒剂量的地塞米松进行后续实验。RAW264.7细胞分为空白组,地塞米松组,模型组及六神胶囊高、中、低剂量组。除空白组外,其余各组采用脂多糖诱导建立炎症模型。造模后六神胶囊高、中、低剂量组分别加入筛选浓度的高、中、低浓度六神胶囊溶液各1 ml;地塞米松组加入筛选浓度的地塞米松溶液1 ml;模型组和空白组加入1 ml培养液。24 h后收集细胞上清液检测一氧化氮(NO)的浓度,ELISA法检测细胞中白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)的含量,实时荧光定量PCR法检测细胞中IL-1β、TNF-α、IL-6和诱导型一氧化氮合酶(iNOS) mRNA表达,蛋白印迹实验检测核因子κB p65 (NF-κB p65)、磷酸...     

毒素清含药血清对脂多糖刺激下A549细胞NF-κB/MAPK信号通路的影响

目的:探讨复方毒素清对肺上皮细胞A549内核因子κB(NF-κB)和丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPKs)信号通路的影响,从细胞分子水平揭示毒素清治疗细菌性肺炎的作用机制。方法:LPS刺激肺泡上皮细胞A549,将培养好的A549细胞分为空白组(10%空白药物血清)、模型组(10%空白药物血清和1μg/ml LPS)、毒素清(14g/kg)组(10%含药血清和1μg/ml LPS)、毒素清(28g/kg)组(10%含药血清和1μg/ml LPS)、毒素清(56g/kg)组(10%含药血清和1μg/ml LPS),然后ELISA检测IL-1、IL-6、IL-8;实时荧光定量PCR测定TLR4mRNA和NF-κB mRNA的表达;Western Blotting检测P38MAPK、JNK46/54、ERK42/44总蛋白和磷酸化蛋白。结果:与空白组相比,模型组细胞L-1β、IL-6、IL-8、TLR4mRNA和NF-κB mRNA的表达以及P38MAPK、JNK46/54、ERK42/44蛋白的磷酸化水平均明显升高;与模型组相比,毒素清(14g/kg、28g/kg、56g/kg)的含药血清组L-1β、IL-6、IL-8、TLR4mRNA和NF-κB mRNA的表达以及P-P38MAPK、P-ERK42/44蛋白的磷酸化水平均明显降低,P-JNK46/54无显著性差异。结论:LPS能够激活肺上皮细胞A549内NF-κB和MAPK信号通路,诱导细胞因子的分泌。毒素清可通过抑制该两条信号通路,减少细胞因子的释放,从而减轻炎症反应。     

越南人参皂苷R7抑制LPS及TNF-α联合诱导大鼠星形胶质细胞C6的激活作用研究

该研究旨在探讨越南人参皂苷R7(R7)对LPS及TNF-α联合诱导下大鼠星形胶质细胞C6的激活抑制作用及机制。取对数生长的C6细胞,在无血清的DMEM培养基中饥饿培养24 h后,使用0.25%胰酶将其消化收集,按1.5×106个/mL密度接入培养板中培养过夜。实验分组如下:对照组(无药物处理),模型组(LPS 1 mg·L~(-1),TNF-α10μg·L~(-1)处理24 h),给药组(分别用6.25,12.5,25,50,75μmol·L-1R7,4μmol·L~(-1)L-NMMA预处理2 h后,再经过LPS 1 mg·L~(-1),TNF-α10μg·L~(-1)刺激24 h)。处理之后,CCK-8法检测细胞活力,Griess法检测培养基中NO含量,ELISA法检测培养基中IL-6,TNF-α浓度,实时定量PCR法检测细胞中相关炎症基因的表达,双荧光素酶报告基因法检测细胞中NF-κB信号分子的激活。研究发现,与模型组相对比,R7量效相关性降低C6细胞的NO释放水平,其IC50约为34μmol·L~(-1);同时,R7减少LPS及TNF-α刺激造成的细胞增殖。50μmol·L-1R7可以显著降低iNOS(P0.001),TNF-α(P0.001),IL-1β(P0.05)以及COX-2(P0.001)的基因表达,不能下调IL-6的基因表达,但可以减少TNF-α(P0.001)及IL-6(P0.001)的释放。进一步的研究表明,不同剂量R7(25,50,100μmol·L-1)均可显著抑制NF-κB转录活性(P0.05,P0.01及P0.001)。研究表明,R7可以抑制LPS及TNF-α联合诱导炎症因子基因表达及分泌,其作用可能与其抑制NF-κB转录活性相关,提示其在神经炎症相关中枢神经系统疾病中可能的治疗作用。     

升降散调控TLR-4/NF-κB信号通路对脂多糖诱导脓毒症大鼠心肌损伤的影响

目的研究升降散调控TLR-4/NF-κB信号通路对LPS诱导脓毒症大鼠心肌损伤的影响。方法采用腹腔注射LPS法构建急性脓毒血症大鼠模型,大鼠随机分为正常组(n=6),脓毒症模型组(n=6),中药组(n=6),抑制剂组(n=6),除正常组外,各组均腹腔注射注射脂多糖,miR-146a抑制剂组心肌内注射miR-146a抑制剂(0.2μl/g),中药组升降散灌胃。48 h后采集大鼠心肌组织,观察心肌组织切片病理改变,测定白介素-1(IL-1)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等因子的水平,及miRNA-146a、NF-κB mRNA、TNF-αmRNA、IL-6 mRNA、IL-1βmRNA活性水平。结果与正常组相比,各组IL-1、IL-6、TLR4及NF-κB蛋白水平升高(P0.05),模型组及抑制组TNF-α高于对照组(P0.05);模型组miR-146a、NF-κB、TNF-α、IL-6及IL-1基因表达增高(P0.01),中药组miR-146a及NF-κB表达增高(P0.05);抑制剂组NF-κB、TNF-α、IL-6及IL-1表达增高(P0.01)。与模型组相比,中药组、TNF-α、TLR4及NF-κB蛋白水平降低(P0.05),中药组miR-146a表达增高,而NF-κB、TNF-α、IL-1及IL-6基因表达降低(P0.05);抑制剂组IL-6、TNF-α、TLR4及NF-κB活性升高(P0.01),抑制剂组miR-146a表达降低(P0.01),NF-κB、TNF-α、IL-6及IL-1表达增高。与抑制剂组相比,中药组IL-1、IL-6、TNF-α、TLR4及NF-κB蛋白水平降低(P0.01),miR-146a基因表达增高,而NF-κB、TNF-α、IL-6及IL-1表达降低(P0.01)。结论升降散能减轻脓毒症大鼠心肌损害,其机制可能与其促进miRNA-146a表达,负反馈调节TLR-4/NF-κB信号通路,减轻抑制炎症反应有关。     

毛蕊异黄酮介导GP130/JAK/STAT信号通路对脊髓星形胶质细胞氧化损伤的影响

目的 探究毛蕊异黄酮介导糖蛋白130（GP130）/Janus酪氨酸蛋白激酶（JAK）/信号转导及转录激活因子（STAT）信号通路对脊髓星形胶质细胞氧化损伤的影响。方法 原代分离大鼠脊髓星形胶质细胞,并利用免疫荧光检测胶质纤维酸性蛋白（GFAP）进行鉴定。分别加入5、10、20 μmol·L^-1毛蕊异黄酮预处理脊髓星形胶质细胞12 h,然后加入100 μmol·L^-1过氧化氢（H₂O₂）处理24 h造成氧化损伤模型,细胞增殖与活性检测（CCK-8）法检测各组细胞增殖情况选择合适的毛蕊异黄酮处理浓度。实验分为空白组、模型组（H₂O₂ 100 μmol·L^-1）、毛蕊异黄酮组（毛蕊异黄酮 20 μmol·L^-1）、毛蕊异黄酮+LY294002组（毛蕊异黄酮 20 μmol·L^-1+LY294002 10 μmol·L^-1）、毛蕊异黄酮+Stattic组（毛蕊异黄酮 20 μmol·L^-1+Stattic 3 μmol·L^-1）。CCK-8法、免疫荧光检测各组细胞增殖情况,流式细胞术检测各组细胞凋亡和周期情况;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组细胞中磷酸化（p）-JAK2、p-STAT3、p-蛋白激酶B（Akt）、GP130、白细胞介素-6（IL-6）的蛋白表达水平。结果 与空白组比较,模型组细胞的增殖活力明显降低,细胞凋亡率明显升高（P<0.05）;与模型组比较,毛蕊异黄酮（20 μmol·L^-1）组细胞的增殖活力明显增加,细胞凋亡率明显降低（P<0.05）;与毛蕊异黄酮（20 μmol·L^-1）组比较,PI3K抑制剂LY294002和STAT3抑制剂Stattic均能明显降低细胞的增殖活力,增加细胞凋亡率（P<0.05）。与空白组比较,模型组细胞中p-JAK2、p-STAT3、p-Akt、GP130、IL-6的蛋白表达水平明显增加（P<0.05）;与模型组比较,各用药组p-JAK2、p-STAT3、p-Akt、GP130、IL-6的蛋白表达水平均明显降低（P<0.05）。结论 毛蕊异黄酮能够促进氧化损伤的星形胶质细胞增殖并抑制其凋亡,并能通过抑制磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/Akt通路磷酸化、JAK2/STAT3通路磷酸化起作用。     

基于p38 MAPK/iNOS信号通路探讨加味散偏汤对硝酸甘油诱导的大鼠偏头痛作用机制

目的：探讨加味散偏汤对硝酸甘油诱导的大鼠偏头痛的作用机制。方法：将72只SPF级Wistar大鼠随机分为空白组、模型组(硝酸甘油,10 mg·kg^-1)、利扎曲坦组(0.89 mg·kg^-1)、加味散偏汤高、中、低剂量组(12.96、6.48、3.24 g·kg^-1)。腹腔注射硝酸甘油建立大鼠偏头痛模型。测试大鼠眼眶和足底痛觉敏感[机械痛阈值(MPT)]行为学实验;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素-1β(IL-1β)等炎症因子水平;免疫组化法(IHC)检测大鼠三叉神经脊束核尾核(TNC)诱导性一氧化氮合酶(iNOS)的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠TNC区磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38 MAPK)/p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)和iNOS蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大鼠TNC区iNOS、p38 MAPK和IL-1β mRNA表达。结果...     

苦参素通过p38/JNK信号途径对海马神经元凋亡的影响

探讨苦参素(oxymatrine,OMT)对海马神经元凋亡的影响及其机制。采用MTT法测定OMT对海马神经元存活率的影响;生物化学法测定OMT对LPS诱导的海马神经元乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放率的影响;Hochest 33342染色观察海马神经元凋亡形态;实时定量PCR(Real-time quantitative PCR,RT-q PCR)方法检测海马神经元中Bax,Bcl-2,Caspase-3 mRNA的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot,WB)检测海马神经元中p38,p-p38,JNK,p-JNK,Bax,Bcl-2和Caspase-3的表达。结果发现,不同剂量的OMT(0.37~6.0 g·L~(-1))和海马神经元共培养24 h,海马神经元生长状态良好;LPS刺激后,海马神经元LDH释放率增加(P0.01),JNK和p38的磷酸化水平明显增加(P0.01),Bax/Bcl-2的比例及Caspase-3的表达上调(P0.01),海马神经元凋亡增加。OMT预处理后,能明显降低海马神经元经LPS刺激后的LDH释放(P0.05或P0.01),减少p38和JNK磷酸化水平,降低Bax/Bcl-2的比例及Caspase-3的表达(P0.01),海马神经元凋亡减少。综上,OMT能降低经LPS激活的p38和JNK磷酸化水平,下调Bax/Bcl-2的比例和Caspase-3的表达,从而抑制海马神经元凋亡。OMT通过p38/JNK信号途径抑制海马神经元的凋亡。