无细胞真皮基质与软组织填充

在整形外科的临床手术中常需对体表某些部位软组织的先天发育不足和后天凹陷畸形进行填充修整 ,填充物的填充修复是治疗的必要手段 ,因此纵观软组织填充物在整形外科的发展过程就是一个不断寻找理想填充物的过程。“理想”体现在以下几个方面 :①首先是安全 ,即优异的组织相容性 ,不引起毒性反应、炎症反应、异物反应、变态反应、无抗原性、无致癌性 ;②有一定的强度 ;③物理、化学稳定性好 ,耐腐蚀 ,不产生有毒物质的溶出物 ;④吸收少 ;⑤不移位 ;⑥操作简单、易塑形 ;⑧非磁性、易消毒、易储藏 ;⑦价廉易得。1　目前软组织填充物的概况1.1…     

无细胞真皮基质用于面部软组织填充整形术

目的：探讨软组织填充的新材料和新方法。方法：应用无细胞真皮基质进行面部凹陷及轮廓畸形的填充整复。结果：临床治疗15例，进行鼻部、颞部、颊部、唇颊沟及颏部填充，经6-20个月随访，移植物稳定，质柔软，形态自然，其中3例见少量吸收，经再次手术后矫正。结论：无细胞真皮基质是比较理想的软组织填充材料。     

无细胞真皮基质的研制

目前治疗大面积深度烧伤的方法是刃厚自体皮移植,后者因缺乏足够的真皮成分,常常造成瘢痕和挛缩.因此,研制一种含有足够量真皮成分的永久性皮肤替代物将具有很大的临床意义.将异体(或异种)皮用高渗盐溶液处理以去除表皮,去污剂处理以去除真皮中细胞成分,得到一种无细胞真皮基质.经光镜和透射电镜观察证实,它去除了表皮全层和真皮中所有细胞成分,保留了完整的基底膜复合物,胶原束结构和排列保持正常,弹力纤维亦正常存在.与AlloDerm相比,无细胞真皮基质具有以下主要优点:①由于延长去污剂的作用时间,真皮中残留的细胞成分被完全清除,因此制得的真皮基质更为理想;②AlloDerm用同种异体皮制备,而无细胞真皮基质除用同种异体皮外,亦可用异种猪皮制备,因此来源广泛,价格低廉.     

无细胞真皮基质的研制

目前治疗大面积深度烧伤的方法是刃厚自体皮移植。后者因缺乏足够的真皮成分，常常成造瘢痕和挛缩。因此，研制一种衾中足够量真皮成分的永久性替代物将具有很大的临床意义。将异体（惑异种）皮用高渗盐溶液处理以去除表皮，去污剂处理以去除真皮中细胞成分，得到一咱无细胞真皮基质。经光镜和透射电镜观察证实，它去除表皮全层中所有真皮中所有细胞成分，保完整的基底膜复合物，胶原束结构和旬保持正常，弹力纤维亦正常存在。与Ａｌ     

无细胞真皮基质的研制

目前治疗大面积深度烧伤的方法是刃厚自体皮移植 ,后者因缺乏足够的真皮成分 ,常常造成瘢痕和挛缩。因此 ,研制一种含有足够量真皮成分的永久性皮肤替代物将具有很大的临床意义。将异体 (或异种 )皮用高渗盐溶液处理以去除表皮 ,去污剂处理以去除真皮中细胞成分 ,得到一种无细胞真皮基质。经光镜和透射电镜观察证实 ,它去除了表皮全层和真皮中所有细胞成分 ,保留了完整的基底膜复合物 ,胶原束结构和排列保持正常 ,弹力纤维亦正常存在。与AlloDerm相比 ,无细胞真皮基质具有以下主要优点 :①由于延长去污剂的作用时间 ,真皮中残留的细胞成分被完全清除 ,因此制得的真皮基质更为理想 ;②AlloDerm用同种异体皮制备 ,而无细胞真皮基质除用同种异体皮外 ,亦可用异种猪皮制备 ,因此来源广泛 ,价格低廉     

无细胞异体真皮基质的研究进展

真皮能充当薄的断层自体皮移植物(STSGs)和培养的表皮自体移植物(CEAs)稳定的载体,足够厚的真皮能抑制创面收缩和瘢痕形成[1],并改善CEAs的存活[2-4].近年,通过酶和去污剂联合脱细胞技术,能去除异体真皮组织内诱导炎症-免疫反应的细胞和部分细胞外基质成分,制成充当复合皮(CS)真皮替代物(DS)的无细胞异体真皮基质(Allo-ADM).目前,Allo-ADM与STSGs或CEAs重叠移植,已在以烧伤为主的多学科的应用中取得较好的移植效果.本文就CS和Allo-ADM近10年来的发展进程加以概述.     

无细胞异种真皮基质的研究进展

预先从异种真皮内除去诱导免疫排异的上皮细胞和内皮细胞成分 ,得到保持真皮原有结构、以真皮胶原为主体的低抗原性真皮替代物 (DS),可减少或消除异种真皮移植后的排异反应。这一设想首先在异体无细胞真皮基质 (allo ADM)动物实验和临床应用方面得到证实[1,2 ] 。近年来 ,为进一步拓宽真皮替代物来源、摆脱异体皮肤存在的不足因素 ,人们再一次把目光转向无细胞异种真皮基质的研究应用。但物种间不仅有细胞 (特别是血管内皮细胞 )和组织蛋白等抗原差异 ,且人类还存在“天然”抗体等 ,这些是异种移植物难以应用于临床的关键因素。用胰蛋白酶或dispase与tritonX 10 0处理新鲜小猪皮 ,制成充当复合皮 (compositeskin,CS)真皮替代物的无细胞异种真皮基质 (xeno ADM),使其抗原性降到最低 ,可减缓或消除宿主对移植物产生的延迟型异种排斥反应[3 ] 。目前 ,国外对xeno ADM临床应用仍持审慎的态度 ,这是由于实验结果显示其有广泛的炎症反应导致的创面愈合不良[4,5] 。国内虽已过渡到临床应用 ,但移植效果颇有争议 ,且多数报告缺乏审慎的免疫学和病理学的检测依据。本文就xeno AD...     

异种脱细胞真皮基质、异体脱细胞真皮基质与自体皮瓣修复颌面部软组织缺损疗效对比

目的:对比异种脱细胞真皮基质、异体脱细胞真皮基质与自体皮瓣修复颌面部软组织缺损的临床效果。方法:收集76例颌面部软组织缺损患者的临床资料,26例进行异种脱细胞真皮基质修复术(异种组),25例进行异体脱细胞真皮基质修复术(异体组),25例进行自体皮瓣修复术(自体组)。对比三组患者住院时间、术后疼痛程度、移植物成活率及术后并发症。结果:异种组和异体组住院时间均短于自体组(P0.05),且异种组和异体组相比无统计学差异(P0.05);异种组和异体组VAS疼痛评分均低于自体组(P0.05),且异种组和异体组相比无统计学差异(P0.05);三组患者移植物成活率相比,差异无统计学意义(P0.05),异种组并发症发生率低于自体组(P0.01)。结论:在颌面部软组织缺损修复中,异种脱细胞真皮基质、异体脱细胞真皮基质具有与自体皮瓣相当的移植物成活率,且异种ADM和异体ADM能够减轻患者术后疼痛程度,减少并发症发生,缩短住院时间,安全可靠。     

无细胞真皮基质的制备及应用

无细胞真皮基质是指异体或异种皮经一系列处理后，保留原有胶原纤维成分及基本组织结构的一种永久性真皮替代物，其制作方法有互酶消化法，Dispase-TritonX-100法，高渗盐溶液-SDS法，平衡盐浸泡法等，与其他真皮基质相比，其具有来源广泛，低免疫原性，生物亲和性高，有利于黑色素细胞增生等特点，其既可用于创面修复，又可用作软组织的替代物，广泛应用于烧伤，整形，口腔，神经外科，眼科，耳鼻喉科等学科领域。     

脱细胞基质在软骨组织工程中的应用

目的 综述脱细胞基质(acellular matrix,ACM)在软骨组织工程中的应用与研究进展. 方法 广泛查阅近年国内外相关文献,进行回顾与综合分析. 结果 许多研究者联合采用了渗透溶液法、冷冻干燥法和理化交联法等技术对软骨ACM支架进行了改进.软骨ACM支架用于构建组织工程软骨的实验结果 与ACM的特性密切相关. 结论 ACM在软骨组织工程领域有着广泛的应用前景,其特性的改进与完善非常重要.     

应用异种脱细胞真皮基质修复黏膜缺损的近期疗效

目的介绍应用异种（牛）脱细胞真皮基质（acellular dermal matrix，ADM）修复耳鼻咽喉头颈外科术后黏膜缺损的临床效果。方法2006年10月-2007年3月，对12例患者术后黏膜缺损应用异种ADM一期修复。男10例，女2例；年龄18～76岁。其中鼻中隔偏曲、前中颅底黑色素瘤各1例；鼻前庭血管瘤1例：下咽癌1例，T2N2M0；颈段食道癌1例，T2N1M0；扁桃体癌3例，其中T2N0M0 2例，T3N1M0 1例：喉癌4例，均为声门区喉癌，其中T2N0M0 3例，T3N1M0 1例。下咽癌、颈段食道癌、扁桃体癌、喉癌的患者病理诊断均为鳞状细胞癌。结果术后12例患者均获随访6个月，所有患者术后3个月内应用内窥镜复查，修复膜均已替代缺损黏膜组织，局部功能恢复。其中下咽癌患者术后第5天出现咽瘘，经局部换药及对症处理10d后咽瘘愈合；前中颅底黑色素瘤患者术后第7天再次出现脑脊液鼻漏，经嘱患者卧床、通便、控制颅压，1周后症状消失，但术后2个月发现局部肿瘤复发，拒绝再次手术而行局部放疗，现仍带瘤生存。所有咽喉及颈段食道癌患者均经过放疗，1例扁桃体癌术后放疗2个月时局部复发及颈部转移，拒绝再次手术，现仍带瘤生存：颈段食道癌患者在放疗后3个月因口内大出血死亡。其余咽喉肿瘤患者未见肿瘤复发。结论异种ADM为修复头颈肿瘤术后黏膜缺损提供了一种新方法，手术操作简便，有一定临床应用价值。     

猪无细胞真皮基质对人皮肤成纤维细胞黏附及生长的影响

目的　比较成纤维细胞 (FB)在猪无细胞真皮基质 (ADM)上的黏附及生长特性 ,探讨 ADM作为组织工程化皮肤支架材料的可行性。　方法　 FB2 ml细胞浓度为 2 .5× 10 5/ ml,分别接种于经戊二醛交联、未经戊二醛交联、戊二醛交联不含基底膜和戊二醛交联并打孔形成网状的猪 ADM中孵育 ,相同数量 FB接种于空白培养皿中作为对照 ,接种后 1、3及 5天行细胞计数 ,黏附有 FB的 ADM行 HE染色观察。　结果　 FB在经戊二醛交联、未经打孔完整的ADM上的黏附增殖优于未经戊二醛交联或戊二醛交联并打孔的 ADM,是否含完整基底膜对成纤维细胞黏附增殖无明显影响。　结论　采用经戊二醛交联、完整的 ADM有利于 FB的体外培养 ,ADM经一定的修饰后可能作为组织工程化皮肤的支架材料。     

聚丙烯酰胺水凝胶在面部软组织填充中的应用

面部软组织填充尽管有多种方法,但迄今仍是美容外科倍受关注的课题,相对于自体真皮组织瓣、成型硅胶而言,聚丙烯酰胺水凝胶(polyacrylamidl hydrogel,PAHG)以其卓越的理化性质和良好的组织相容性,成为目前面部软组织填充材料的较好选择.我们自2001年6月至2003年2月应用PAHG完成面部软组织填充27例,效果满意.报道如下.     

脱细胞真皮移植部位血管细胞黏附分子1的表达

目的探讨血管细胞黏附分子1（vascular cell adhesion molecule 1,VCAM-1）在脱细胞真皮移植部位的表达变化和意义。方法取近交系小型香猪15只建立猪实验模型,分别于每只猪脊背两侧制作6cm×6cm各3处6个创面。随机分为三组,每组5只。A组为对照组,猪刃厚自体皮移植;B组异体脱细胞真皮与猪刃厚自体皮复合移植;C组J-1型（人）脱细胞真皮与猪刃厚皮复合移植。分别于移植术后3、9、21及30d观察移植皮片成活情况和面积,于移植后3、6、9、12、21及30d各时间点取移植组织标本,流式细胞仪检测VCAM-1的表达变化。结果移植术后3d各组移植皮片基底分离;9dA组皮片转红润基底粘连较紧密,揭开皮片可见渗血,B、C组皮片颜色次之,基底粘连不紧密;21d,A、B、C组移植皮片成活面积分别为94%±12%、92%±9%和91%±11%;术后30d各组移植皮片均愈合良好。各组VCAM-1表达,移植术后3d无明显差别;6dA组表达明显高于B、C组有统计学意义（P〈0.05）;9、12dB、C组明显高于A组有统计学意义（P〈0.05）;30d,各组VCAM-1表达均低于3d有统计学意义（P〈0.01）。结论同种和异种真皮基质移植部位VCAM-1表达高峰迟滞于自体皮移植;提示VCAM-1表达可能与脱细胞真皮活化、血管再生有关。同种和异种真皮移植物VCAM-1表达无差别。     

软骨脱细胞基质支架材料的软骨组织工程实验研究

目的应用软骨脱细胞基质作为支架材料，按照组织工程的原理再生软骨，为修复软骨缺损探索新的途径。方法取新西兰大耳白兔1只，体重2．4kg，按改良Courtman法对兔耳软骨行脱细胞处理后用于实验。选用纯种6月龄新西兰大耳白兔18只，雌雄不限，体重2．4～2．6kg。每只耳形成2处1cm×1cm软骨缺损，按修复方式不同随机分为3组，每组24处缺损。A组，软骨脱细胞基质加软骨膜；B组，软骨脱细胞基质；C组软骨膜，作为对照。术后每日观察兔耳修复区的大体变化，并分别于4、12周每组处死3只动物，于修复区切取标本，行HE染色、藏红花红一奥尔新蓝染色、II型胶原基因探针原位杂交实验。结果术后4周内A、B组大体形态无明显改变；术后12周可见修复区轻度增厚，触摸时质地较正常软骨稍硬。C组术后2周，2只2处修复区形成痂皮，术后5周痂皮脱落形成穿孔。术后4周，A、B组HE染色可见软骨脱细胞基质周边有轻度的炎性细胞浸润，以淋巴细胞为主，未形成包囊，藏红花红．奥尔新蓝染色均阴性；C组软骨缺损处的软骨膜塌陷，无细胞增殖现象；各组修复区均未见II型胶原基因探针原位杂交显色。术后12周，A组HE染色示部分软骨脱细胞基质内有新生细胞，细胞排列不规律，ECM嗜碱性增强，藏红花红-奥尔新蓝染色呈阳性，II型胶原基因原位杂交显色示新生细胞内均有大片棕黄色阳性染色区域；B组HE染色示软骨脱细胞基质无吸收现象，周边无包囊，炎性细胞消失，藏红花红一奥尔新蓝染色呈阴性，未见II型胶原基因原位杂交显色；C组HE染色示近软骨断端处可见部分形成新生组织，藏红花红一奥尔新蓝染色呈阳性，II型胶原基因原位杂交显色可见棕黄色阳性染色细胞。结论脱细胞软骨可诱导软骨膜细胞向其中生长而重建软骨，软骨膜和脱细胞软骨复合移植是软骨组织工程的另一种选择。     

新型脱细胞软骨基质三维多孔支架的制备

目的 探讨脱细胞软骨基质三维多孔支架的制备方法以及将其应用于关节软骨组织工程的可行性. 方法 取天然人软骨粉碎后,采用梯度离心法取100 nm～5μm软骨微丝,脱细胞处理后制备为质量体积比为3%的悬液,采用冷冻冻干法制备脱细胞软骨基质三维多孔支架.254nm紫外线和碳化二亚胺/N-羟基琥珀酰亚胺对支架进行交联.冷冻冻干后,对支架材料进行组织学及扫描电镜观察,测定支架孔径和孔隙率、吸水率,并采用MTT法分析支架浸提液毒性.分离培养犬BMSCs,用TGF-β1成软骨诱导后种植至支架,倒置显微镜、电镜观察细胞在支架上的生长、分化情况. 结果 组织学观察显示,三维多孔支架中无软骨细胞碎片残留,甲苯胺蓝染色、番红O染色、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色均呈阳性.扫描电镜显示支架内孔洞相互连通,孔径为(155±34)μm,孔隙率为91.3%±2.0%,吸水率为2 451%±155%.MTT法显示不同浓度支架浸提液与对照DMEM培养液吸光度值比较,差异无统计学意义(P＞0.05),支架无细胞毒性.倒置显微镜观察,细胞在支架上黏附良好;扫描电镜下细胞在支架上均匀分布,细胞呈圆形或椭圆形,并有基质分泌. 结论 制备的脱细胞软骨基质三维多孔支架去细胞彻底,保留了软骨ECM主要成分,无毒,具备合适的孔径和孔隙率,生物相容性良好,是软骨组织工程良好的支架载体.     

不同种属脱细胞真皮基质与自体刃厚皮复合移植近期效果的对比研究

目的　对比研究异体和异种脱细胞真皮基质 (acellular dermal matrix,ADM)与自体刃厚皮复合移植 ,应用在烧伤创面的近期效果 ,为全层皮肤缺损的无瘢痕修复寻求理想的皮肤替代物。　方法　 2 0 0 1年 9月～ 2 0 0 3年 6月 ,以两种 ADM分别与自体刃厚皮复合移植于 18例 度烧伤患者的切痂创面 ,以单纯自体中厚皮移植作对照 ,通过术后 2周自体皮成活率、术后 8周自体皮收缩率和温哥华瘢痕评分比较移植效果。　结果　三种移植方式术后 2周皮片成活率组间比较无差异 (P>0 .0 5 ) ;其中 14例患者术后第 8周随访 ,未见明显排斥反应 ,三种移植方式术后 8周皮片收缩率和瘢痕评分组间比较无差异 (P>0 .0 5 )。　结论　异体和异种 ADM在临床上具有相近的效果 ,均能用于受皮者的皮肤重建。     

超滤离心法降低重组人脱细胞真皮基质牛血清白蛋白残留量检测中基质效应的实验研究

目的 探讨采用超滤离心法减少重组人脱细胞真皮基质(recombination human acellular dermal matrix,rhADM)样品浸提液对ELISA方法检测牛血清白蛋白(bovine semm albumin,BSA)残留量的基质效应.方法 清洗rhADM后,制备rhADM生理盐水浸提液.取超滤离心管若干,分别加入1 mg/mL BSA溶液(预饱和方式1,记作PR1)、10μg/mL BSA溶液(预饱和方式2,记作PR2)和rhADM浸提液2 mL(记作rhADM1和rhADM2),1 500×g离心20 min,重复操作3次后取出离心管内管,放入未使用的15 mL离心管中,在PRI和PR2管中加入10μg/mL BSA溶液4 mL,rhADM管中加入rhADM浸提液4 mL,同上法离心后,收集滤液.用ELISA法测定BSA含量.计算不同预饱和方式下10μg/mL BSA溶液的BSA回收率(以未经处理的10μg/mL BSA溶液作为基础样品,分别记作R10和R20);计算滤液稀释倍数的对数与测定吸光度(A)值的相关系数,并与未经超滤离心处理的浸提液检测结果进行比较.结果 采用预饱和方式1处理后,PRI1BSA浓度为(23.80±1.58)μg/mL,R10为(9.04±0.24)μg/mL,BSA回收率为263.4%±16.9%.采用预饱和方式2处理后,PR2 BSA浓度为(8.64±0.24)μg/mL,R20为(8.12±1.01)μg/mE,BSA的回收率为106.5%±3.O%.预饱和方式2的回收率符合检测要求.不同预饱和方式下BSA回收率差异有统计学意义(P＜0.01).经超滤离心处理后,滤液稀释倍数的对数与A值之间的相关性明显提高,相关系数由-0727提高至-0.960.超滤处理后的相关系数符合检测要求.结论 超滤离心处理可以有效减少rbADM样品浸提液的基质效应对BSA残留量检测的影响;样品浸提液自身对超滤离心管的预饱和处理,可得到较为理想的BSA回收率.