MTT比色法检测MGC803^T细胞毒效应的研究

用插入突变的膜结合型ＴＮＦ－α基因的重且逆转录病毒载体转染人胃癌细胞ＭＧＣ，获得膜结合型ＴＮＦ－α基因转染阳性的人胃癌细胞ＭＧＣ８０３（ＭＧＣ８０３＾Ｔ）。用ＭＴＴ比色法、＾３Ｈ－ＴｄＲ释放法检测ＭＧＣ８０３＾Ｔ及未转染的人胃癌细胞ＭＧＣ８０３（ＭＧＣ８０３＾Ｎ）细胞表面ＴＮＦ－α的细胞毒效应。结果表明，ＭＧＣ８００＾Ｔ对鼠纤维肉瘤细胞Ｌ９２９有杀伤作用，而对照细胞ＭＧＣ８００＾Ｎ无杀伤作用，说明     

细胞因子对人胃癌细胞胃癌相关抗原MG7Ag表达的调节

探讨细胞因子对人胃癌细胞胃癌相关抗原ＭＧ７Ａｇ表达的调节作用。用基因重组干扰素α（ＩＦＮ－α），干扰素γ（ＩＦＮ－γ），白细胞介素２（ＩＬ－２）和肿瘤坏死因子γ（ＴＮＦ－γ）体外诱导三株人胃癌细胞系ＳＧＣ７９０１，ＭＧＣ８０３和ＭＫＮ４５胃癌相关抗原ＭＧ７Ａｇ表达。ＩＦＮ－α和ＩＦＮ－γ对胃癌细胞ＭＧ７Ａｇ有促表达作用。ＩＬ－２对三株细胞ＭＧ７Ａｇ无调节作用；ＴＦＮ－α对细胞ＭＧ７Ａｇ表达调节是随     

细胞因子对人绒毛瘤细胞JARβHCG分泌的影响

人绒毛膜促性激素（ＨＣＧ）的分泌调节机制至今仍不详。本文以经绒毛瘤细胞ＪＡＲ作为人滋养层细胞的模型，研究了ＩＦＮα、ＴＮＦ－α、Ｍ－ＣＳＲＦ、ＴＧＦ－β、ＵＫ和ＮＧＦ等细胞因子对β－ＨＣＧ分泌的影响。结果显示，ＩＦＮα和ＴＮＦ－α能显著地促进βＨＣＧ的分泌的并具有剂量依赖性，ＵＫ则能显著地抑制β－ＨＣＧ的分泌，而Ｍ－ＣＳＦ、ＴＧＦ－β和ＮＧＦ则无明显作用。细胞活性实验表明，高浓度的ＩＦＮα、ＴＮＦ     

前列腺素E2对跨膜型和分泌型肿瘤坏死因子胞毒作用的影响

研究比较前列腺素Ｅ２（ＰＧＥ２）对两型肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）胞毒效应。跨膜型ＴＮＦα（ＴＭ－ＴＮＦα）和分泌型ＴＮＦα（Ｓ－ＴＮＦα）在杀伤靶细胞的同时,可引起靶细胞释放大量ＰＧＥ２（Ｐ〈０．０１）。用环氧化酶抑制剂消炎痛可部分或大部分阻断ＴＭ－ＴＮＦα诱导靶细胞产生的ＰＧＥ２（Ｐ〈０．０１）并县也可抑制ＴＭ－ＴＮＦα的细胞效应（Ｐ〈０．０１）,其抑制程度与ＰＧＥ２阻断程度一致。但消炎痛却不能     

转染TNFα基因对胶质瘤细胞致瘤性的影响

研究转染肿瘤坏死因子α（ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒα,ＴＮＦα）基因的胶质瘤细胞的致瘤性。方法运用ＭｏＭＬＶ逆转录病毒载体,将ＴＮＦα基因转导至人胶质瘤细胞ＳＨＧ－４４,用Ｇ４１８筛选出阳性细胞克隆,以细胞培养检测细胞生长抑制,以裸鼠接种研究其致瘤性。结果转染细胞培养上清液中ＴＮＦα含量分别为（５１９８．７±３７５７．４）和（３２１７．４±１１８０．６）ｐｇｍｌ（Ｐ＜０．０５）,其生物活性达３２０．０ｕｍｌ。运用ＲＴ－ＰＣＲ检测ＴＮＦαｍＲＮＡ特异性表达。细胞培养发现：转染ＴＮＦα基因的细胞生长受抑制,Ｇ２－Ｍ期缩短而Ｇ０－Ｇ１期延长。裸鼠接种试验发现转染ＴＮＦα基因的胶质瘤细胞致瘤性下降,早期出现明显坏死。未转染ＴＮＦα基因的胶质瘤细胞混有１０％的转染ＴＮＦα基因的细胞,其生长也受到抑制。结论转染ＴＮＦα基因的胶质瘤细胞的致瘤性下降。     

TNF—α拮抗胰岛素样生长因子—1对人α1（Ⅰ）胶原启动子？…

目的：探讨ＴＮＦ－α对胰岛素样生长因子－１（ＩＧＦ－１）激活人α１（Ⅰ）胶原启动子的作用。方法：构建含不同长短α１（Ⅰ）胶原启动子序列与氯霉素乙酰基转移酶（ＣＡＴ）报告基因的重组体ｐＣＯＬＨ１ ０．２７,ｐＣＯＬＨ１ ２．５用脂质体法瞬时转染至ＮＩＨ３Ｔ３细胞的人皮肤成纤维细胞中,加入ＩＧＦ－１或（和）ＴＮＦ－α,测定ＣＡＴ活性。结果;１００ｎｇ／ｍｌ ＩＧＦ－１可使转染至ＮＩＨ３Ｔ３细胞的ｐＣＯ     

复方血竭合剂治疗大鼠系膜增生肾小球肾炎的实验研究

目的：观察复方血竭合剂对系膜增生性肾小球肾炎（ＭｓＰＧＮ）模型大鼠的治疗作用。方法：根据献方法制作ＭｓＰＧＮ动物模型,观察复方血竭合剂对其肾损伤有关指标的作用。结果：复方血竭合剂可明显降低模型大鼠肾小球肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）的活性。结论：复方血竭合剂能抑制系膜细胞（ＭＣ）增生,减少系膜基质的积聚,其作用可能与其抑制肾小球分泌ＴＮＦ－α有关。     

小鼠造血干细胞因子基因克隆及在 C H O 细胞中的表达

目的： 克隆造血干细胞因子（ Ｓ Ｃ Ｆ）并在 Ｃ Ｈ Ｏ 细胞中表达。方法： 采用 Ｐ Ｃ Ｒ 方法从ｐ Ｒ Ｃ／ Ｃ Ｍ Ｖ（含 Ｓ Ｃ Ｆｃ Ｄ Ｎ Ａ）中钓取 Ｓ Ｃ Ｆ ｃ Ｄ Ｎ Ａ 膜外段活性区,克隆入真核表达载体ｐｃ Ｄ Ｎ Ａ３,转染入 Ｃ Ｈ Ｏ 细胞;用 Ｒ Ｔ－ Ｐ Ｃ Ｒ 方法检测 ｍ Ｒ Ｎ Ａ 水平表达及通过协同刺激骨髓细胞集落形成来检测转染细胞上清的生物活性。结果：转染 Ｓ Ｃ Ｆｃ Ｄ Ｎ Ａ 的 Ｃ Ｈ Ｏ 细胞可表达 Ｓ Ｃ Ｆｍ Ｒ Ｎ Ａ,其细胞培养上清可协同 Ｇ Ｍ － Ｃ Ｓ Ｆ刺激骨髓细胞形成集落数比 Ｇ Ｍ － Ｃ Ｓ Ｆ 单独作用高 ２ 倍,转染外源基因对细胞周期没有明显影响。结论：转染 Ｓ Ｃ Ｆｃ Ｄ Ｎ Ａ 在 Ｃ Ｈ Ｏ 细胞中表达,转染细胞上清协同 Ｇ Ｍ － Ｃ Ｓ Ｆ 刺激骨髓细胞集落的形成,而本身对集落的形成没有影响。     

骨巨细胞瘤细胞成分和细胞因子在溶骨中的作用

目的：探讨骨巨细胞瘤（ＧＣＴ）各细胞成分及肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）和白细胞介素－１（ＩＬ－１）细胞因子在骨吸收中的作用。方法：采用细胞分离技术和体外细胞溶骨模型，检测ＧＣＴ各细胞成分的骨吸收活性及ＴＮＦ－α和ＩＬ－１对这种活性的影响。结果：在溶骨模型中，多核巨细胞（ＭＧＣ）的数目越多，＾４５Ｃａ＾２＋的释放也越多；纤维母细胞样基质细胞（ＦＣ）组的＾４５Ｃａ＾２＋值明显高于无细胞对照组（Ｐ〈０     

前列腺素E2对跨膜型和分泌型肿瘤坏死因子胞毒作用的影响

研究比较前列腺素Ｅ_２（ＰＧＥ_２）对两型肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－ａ）胞毒效应。结果：跨膜型ＴＮＦａ（ＴＭ－ＴＮＦａ）和分泌型ＴＮＦａ（Ｓ－ＴＮＦａ）在杀伤靶细胞的同时,可引起靶细胞释放大量ＰＧＥ_２（Ｐ＜０．０１）。用环氧化酶抑制剂消炎痛可部分或大部分阻断ＴＭ－ＴＮＦａ诱导靶细胞产生的ＰＧＥ_２（Ｐ＜０．０１）,并且也可抑制ＴＭ－ＴＮＦａ的胞毒效应（Ｐ＜．０１）,其抑制程度与 ＰＧＥ_２阻断程度一致。但消炎痛却不能阻断 Ｓ－ＴＮＦａ诱导其敏感靶细胞产生 ＰＧＥ_２,也不能抑制 Ｓ－ＴＮＦａ对其敏感靶细胞的杀伤作用。结果提示,ＰＧＥ_２可能参与二型ＴＮＦａ胞毒效应的信号传导,但是二型ＴＮＦａ引起靶细胞ＰＧＥ_２水平升高的作用环节可能存在差异。     

反义N-ras-1基因对成纤维细胞生长因子诱导的血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的应用反义Ｎ－ｒａｓ１基因阻断成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）的促增殖作用，为防治以血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖为主要特征的血管损伤后再狭窄等心血管疾病提供进一步探索的途径。方法利用构建的含反义Ｎ－ｒａｓ１基因的逆转录病毒质粒（ｆｐＧｖ１－ＭＴ－ＡｎｔｉｓｅｎｓｅＮ－ｒａｓ１）转染于培养的血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ），ｆｐＧｖ１－ＭＴ逆转录病毒空载质粒及未转染质粒的细胞为对照，观察其对ｂＦＧＦ诱导的ＶＳＭＣ的影响。结果反义Ｎ－ｒａｓ１细胞数为（１６．８±１．３）×１０４（细胞／ｍｌ），空载质粒对照细胞为（３０．１±１．２）×１０４，两者差异有显著意义（Ｐ＜０．００１）；反义Ｎ－ｒａｓ１细胞３Ｈ－ＴｄＲ掺入率为７６４３±６７２（ｃｐｍ），空载质粒对照细胞为１５１３１±１３８（ｃｐｍ），两者差异有非常显著意义（Ｐ＜０．００１），同时应用反义Ｎ－ｒａｓ１基因的细胞ＲａｓｍＲＮＡ表达水平明显降低，其表达蛋白ｐ２１也明显降低。结论反义Ｎ－ｒａｓ１基因对ＶＳＭＣ及ｂＦＧＦ诱导ＶＳＭＣ增殖有抑制作用。     

急性淋巴细胞性白血病完全缓解期免疫功能,微小残留病及预…

目的 观察急性淋巴细胞性白血病（ＡＬＬ）完全缓解期免疫功能对微小残留病（ＭＲＤ）及预后的影响，。方法 检测ＩｇＨ和ＴＣＲｓ基因重排以反映ＭＲＤ，以外周血Ｔ细胞亚群、ＮＫ细胞、ＩＬ－２、ＩＬ－６、ｓＩＬ－２Ｒ、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－α等指标反映免疫功能，系统观察２５例ＡＬＬ患者完全缓解免疫功能与ＭＲＤ的变化。结果 刚获完全缓解时，ＣＤ４细胞、ＮＫ细胞、ＩＬ－２减少，ＴＮＦ－α，ｓＩＬ－２Ｒ、ＣＤｓ细胞     

Lipofectin介导DNA聚合酶α反义寡核苷酸抑制人胃癌细胞生长

目的 研究阳离子脂质体Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ（Ｌｉｐ）介导的ＤＮＡ聚合酶α（ＤＮＡ－ｐｏｌα）反义寡核酸（ＡＳＯＤＮ）体外抑制人胃癌细胞的生长。方法 合成与人ｐｏｌα催化亚基ｍＲＮＡ翻译起始区１８个碱基互补的寡核苷酸（ＯＤＮ）,与Ｌｉｐ混合制备Ｌｉｐ＋ＯＤＮ复合物,作用于ＭＧＣ－８０３、ＳＧＣ－７９０１人胃癌细胞２４ｈ后,细胞换液,继续培养２４ｈ,用噻唑蓝（ＭＴＴ）比色法测细胞存活状态,流式细胞术（     

大鼠肾脏系膜细胞转染人TGF—β1基因可增强MMP—2表达

目的 研究转化生长因子－β１（ＴＧＦ－β１）对培养的大鼠肾小球系膜细胞（ＭｓＣ）基质金属蛋白酶－２（ＭＭＰ－２）表达的影响。方法 采用Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ将人ＴＧＦ－β１基因转染培养的大鼠ＭｓＣ,经Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ鉴定其转染成功否;又分别应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ．Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ,酶谱分析法检测阳性表达人ＴＧＦ－β１的ＭｓＣＭＭＰ－２ｍＲＮＡ蛋白及酶活性变化。结果成功获得稳定过     

肿瘤坏死因子α基因转染人脑胶质瘤浸润淋巴细胞的实验研究

采用脂质体转染技术将能表达肿瘤坏死因子α（ＴＮＦ－α）基因的重组逆转录病毒质粒ｐＬ（ＴＮＦ－α）ＳＮ导入病毒包装细胞ＰＡ３１７，在细胞培养上清液中得到重组病毒，滴度为１．４×１０９ＣＦＵ／Ｌ。将此病毒上清液感染人脑胶质瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ），用Ｇ４１８筛选出能表达标记基因ＮｅｏＲ的阳性克隆，ＥＬＩＳＡ法测得ＮｅｏＲ阳性ＴＩＬ培养上清液中存在ＴＮＦ－α，可达５３０ｎｇ／Ｌ，Ｌ９２９依赖细胞法并测出上清液中有ＴＮＦ－α生物学活性。结果表明，我们构建的重组逆转录病毒可介导ＴＮＦ－α基因在人脑胶质瘤ＴＩＬ中的表达     

低密度脂蛋白对肾小珠系膜细胞,TGF—β和FN mRNA表达的影响

目的：观察低密度脂蛋白（ＬＤＬ）对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞（ＭＳＣ）生长及转化生长因子β（ＴＧＦ－β）和纤维连接蛋白（ＦＮ）基因表达的影响。方法：体外培养的ＭＳＣ培养液中加入ＬＤＬ共同孵育,采用＾３Ｈ－ＴｄＲ渗入法检测ＭＳＣ增殖情况,应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ检测ＴＧＦ－β ｍＲＮＡ、ＦＮ ｍＲＮＡ的表达,应用斑点杂交法检测抗ＴＧＦ－抗体对ＦＮ ｍＲＮＡ表达的影响。结果（１）ＬＤＬ刺激ＭＳ     

逆转录病毒中介TNF基因导入肿瘤浸润淋巴细胞的研究

利用重组有ＴＮＦ－α基因的逆转录病毒载体ＰＬＪ－ＴＮＦ转染包装细胞系φＣＲＩＰ和φ－ＣＲＥ，经Ｇ４１８选择后，分离到能产生重组ＴＮＦ－α基因的病毒粒子分泌细胞克隆ＰＬＪＣ－５，继而感染从胃癌组织中分离的肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ），并对基因转导后的ＴＩＬ细胞的增殖、表型、抗癌活性及ＴＮＦ分泌量进行了检测。结果表明：转导ＴＮＦ基因的ＴＩＬ对其细胞增殖和免疫分型无明显影响，而其抗瘤活性和ＴＮＦ分泌量较转导前有明显地提高。     

重组人白介素10对离体大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 观察重组人白介素１０（ｒｈＩＬ－１０）对血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖的影响。方法 离体培养大鼠胸主动脉 ＶＳＭＣ并分别接受不同浓度ｒｈＩＬ－１０、肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）、血小板源性生长因子（ＰＤＧＦ－ＢＢ）的刺激,采用ＭＴＳ／ＰＥＳ 法确定ＶＳＭＣ的增殖状态并与对照组比较。结果　与对照组相比,ＴＮＦ－α和ＰＤＧＦ－ＢＢ均对ＶＳＭＣ增殖具有明显的刺 激作用（Ｐ＜０．０５）。单独应用ｒｈＩＬ－１０对血管平滑肌细胞生长没有影响。在ＴＮＦ－α和ＰＤＧＦ－ＢＢ分别刺激下,ｒｈＩＬ－１０均可 抑制ＶＳＭＣ的生长（Ｐ<０．０５）。结论　ｒｈＩＬ－１０可抑制细胞因子和生长因子诱导的ＶＳＭＣ增殖。     

抗人粒细胞集落刺激因子单克隆抗体的研制

应用杂交瘤技术，用重组人Ｇ－ＣＳＦ（ｒｈＧ－ＣＳＦ）免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，然后将其脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞ＮＳ－１融合，成功地获得了多种能够分泌抗ｒｈＧ－ＣＳＦ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交癌细胞。对其中的２株杂交瘤细胞２Ａ６和２Ｃ２分泌ＭｃＡｂ的研究表明，它们能够特异性地和ｒｈＧ－ＣＳＦ结合，而与重组的人ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－２α和ＴＮＦ细胞因子无交叉反应，为抗Ｇ－ＣＳＦ特异性ＭｃＡｂ。这些杂交瘤细胞经反复冻存和复苏后，仍能稳定地分泌ＭｃＡｂ。     

肿瘤坏死因子α基因转导人脑胶质瘤浸润淋巴细胞的抗肿瘤活性研究

应用脂质体转染技术构建能表达肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）基因的重组逆转录病毒。采用鱼精蛋白促进法,将重组病毒介导ＴＮＦ－α基因转染人脑胶质瘤浸润淋巴细胞（ＧＩＬ）。在体外,转染后的ＧＩＬ（ＴＮＦ－α／ＧＩＬ）的抗肿瘤活性比ＧＩＬ＋ＩＬ－２强２～５倍。在荷瘤裸鼠体内,ＴＮＦ－α／ＧＩＬ能显著抑制肿瘤生长。因此,ＴＮＦ－α基因转染的人脑胶质瘤浸润淋巴细胞（ＴＮＦ－α／ＧＩＬ）是脑胶质瘤免疫基因治疗的一种有效的效应细胞