多聚甲醛固定法检测MGC803^T细胞膜表面分子功能的研究

用插入突变的膜结合型ＴＮＦ－α基因的重组逆转录病毒载体转染人胃癌细胞ＭＧＣ８０３，获得膜结合型ＴＮＦ－α基因转染的阳性人胃癌细胞ＭＧＣ８０３（ＭＧＣ８０３＾Ｔ）。用多聚甲醛固定ＭＧＣ８０３＾Ｔ及未转染的人胃癌组胞ＭＧＣ８０３（ＭＧＣ８０３＾Ｎ），检测其细胞膜表面ＴＮＦ－α的细胞毒活性。结果表明，ＭＧＣ８０３＾Ｔ细胞对鼠纤维肉瘤细胞Ｌ９２９有杀伤作用，而对照细胞ＭＧＣ８０３＾Ｎ无杀伤作用，说明逆转录     

细胞因子对人胃癌细胞胃癌相关抗原MG7Ag表达的调节

探讨细胞因子对人胃癌细胞胃癌相关抗原ＭＧ７Ａｇ表达的调节作用。用基因重组干扰素α（ＩＦＮ－α），干扰素γ（ＩＦＮ－γ），白细胞介素２（ＩＬ－２）和肿瘤坏死因子γ（ＴＮＦ－γ）体外诱导三株人胃癌细胞系ＳＧＣ７９０１，ＭＧＣ８０３和ＭＫＮ４５胃癌相关抗原ＭＧ７Ａｇ表达。ＩＦＮ－α和ＩＦＮ－γ对胃癌细胞ＭＧ７Ａｇ有促表达作用。ＩＬ－２对三株细胞ＭＧ７Ａｇ无调节作用；ＴＦＮ－α对细胞ＭＧ７Ａｇ表达调节是随     

细胞因子对人绒毛瘤细胞JARβHCG分泌的影响

人绒毛膜促性激素（ＨＣＧ）的分泌调节机制至今仍不详。本文以经绒毛瘤细胞ＪＡＲ作为人滋养层细胞的模型，研究了ＩＦＮα、ＴＮＦ－α、Ｍ－ＣＳＲＦ、ＴＧＦ－β、ＵＫ和ＮＧＦ等细胞因子对β－ＨＣＧ分泌的影响。结果显示，ＩＦＮα和ＴＮＦ－α能显著地促进βＨＣＧ的分泌的并具有剂量依赖性，ＵＫ则能显著地抑制β－ＨＣＧ的分泌，而Ｍ－ＣＳＦ、ＴＧＦ－β和ＮＧＦ则无明显作用。细胞活性实验表明，高浓度的ＩＦＮα、ＴＮＦ     

前列腺素E2对跨膜型和分泌型肿瘤坏死因子胞毒作用的影响

研究比较前列腺素Ｅ２（ＰＧＥ２）对两型肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）胞毒效应。跨膜型ＴＮＦα（ＴＭ－ＴＮＦα）和分泌型ＴＮＦα（Ｓ－ＴＮＦα）在杀伤靶细胞的同时,可引起靶细胞释放大量ＰＧＥ２（Ｐ〈０．０１）。用环氧化酶抑制剂消炎痛可部分或大部分阻断ＴＭ－ＴＮＦα诱导靶细胞产生的ＰＧＥ２（Ｐ〈０．０１）并县也可抑制ＴＭ－ＴＮＦα的细胞效应（Ｐ〈０．０１）,其抑制程度与ＰＧＥ２阻断程度一致。但消炎痛却不能     

转染TNFα基因对胶质瘤细胞致瘤性的影响

研究转染肿瘤坏死因子α（ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒα,ＴＮＦα）基因的胶质瘤细胞的致瘤性。方法运用ＭｏＭＬＶ逆转录病毒载体,将ＴＮＦα基因转导至人胶质瘤细胞ＳＨＧ－４４,用Ｇ４１８筛选出阳性细胞克隆,以细胞培养检测细胞生长抑制,以裸鼠接种研究其致瘤性。结果转染细胞培养上清液中ＴＮＦα含量分别为（５１９８．７±３７５７．４）和（３２１７．４±１１８０．６）ｐｇｍｌ（Ｐ＜０．０５）,其生物活性达３２０．０ｕｍｌ。运用ＲＴ－ＰＣＲ检测ＴＮＦαｍＲＮＡ特异性表达。细胞培养发现：转染ＴＮＦα基因的细胞生长受抑制,Ｇ２－Ｍ期缩短而Ｇ０－Ｇ１期延长。裸鼠接种试验发现转染ＴＮＦα基因的胶质瘤细胞致瘤性下降,早期出现明显坏死。未转染ＴＮＦα基因的胶质瘤细胞混有１０％的转染ＴＮＦα基因的细胞,其生长也受到抑制。结论转染ＴＮＦα基因的胶质瘤细胞的致瘤性下降。     

TNF—α拮抗胰岛素样生长因子—1对人α1（Ⅰ）胶原启动子？…

目的：探讨ＴＮＦ－α对胰岛素样生长因子－１（ＩＧＦ－１）激活人α１（Ⅰ）胶原启动子的作用。方法：构建含不同长短α１（Ⅰ）胶原启动子序列与氯霉素乙酰基转移酶（ＣＡＴ）报告基因的重组体ｐＣＯＬＨ１ ０．２７,ｐＣＯＬＨ１ ２．５用脂质体法瞬时转染至ＮＩＨ３Ｔ３细胞的人皮肤成纤维细胞中,加入ＩＧＦ－１或（和）ＴＮＦ－α,测定ＣＡＴ活性。结果;１００ｎｇ／ｍｌ ＩＧＦ－１可使转染至ＮＩＨ３Ｔ３细胞的ｐＣＯ     

小鼠造血干细胞因子基因克隆及在 C H O 细胞中的表达

目的： 克隆造血干细胞因子（ Ｓ Ｃ Ｆ）并在 Ｃ Ｈ Ｏ 细胞中表达。方法： 采用 Ｐ Ｃ Ｒ 方法从ｐ Ｒ Ｃ／ Ｃ Ｍ Ｖ（含 Ｓ Ｃ Ｆｃ Ｄ Ｎ Ａ）中钓取 Ｓ Ｃ Ｆ ｃ Ｄ Ｎ Ａ 膜外段活性区,克隆入真核表达载体ｐｃ Ｄ Ｎ Ａ３,转染入 Ｃ Ｈ Ｏ 细胞;用 Ｒ Ｔ－ Ｐ Ｃ Ｒ 方法检测 ｍ Ｒ Ｎ Ａ 水平表达及通过协同刺激骨髓细胞集落形成来检测转染细胞上清的生物活性。结果：转染 Ｓ Ｃ Ｆｃ Ｄ Ｎ Ａ 的 Ｃ Ｈ Ｏ 细胞可表达 Ｓ Ｃ Ｆｍ Ｒ Ｎ Ａ,其细胞培养上清可协同 Ｇ Ｍ － Ｃ Ｓ Ｆ刺激骨髓细胞形成集落数比 Ｇ Ｍ － Ｃ Ｓ Ｆ 单独作用高 ２ 倍,转染外源基因对细胞周期没有明显影响。结论：转染 Ｓ Ｃ Ｆｃ Ｄ Ｎ Ａ 在 Ｃ Ｈ Ｏ 细胞中表达,转染细胞上清协同 Ｇ Ｍ － Ｃ Ｓ Ｆ 刺激骨髓细胞集落的形成,而本身对集落的形成没有影响。     

急性淋巴细胞性白血病完全缓解期免疫功能,微小残留病及预…

目的 观察急性淋巴细胞性白血病（ＡＬＬ）完全缓解期免疫功能对微小残留病（ＭＲＤ）及预后的影响，。方法 检测ＩｇＨ和ＴＣＲｓ基因重排以反映ＭＲＤ，以外周血Ｔ细胞亚群、ＮＫ细胞、ＩＬ－２、ＩＬ－６、ｓＩＬ－２Ｒ、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－α等指标反映免疫功能，系统观察２５例ＡＬＬ患者完全缓解免疫功能与ＭＲＤ的变化。结果 刚获完全缓解时，ＣＤ４细胞、ＮＫ细胞、ＩＬ－２减少，ＴＮＦ－α，ｓＩＬ－２Ｒ、ＣＤｓ细胞     

骨巨细胞瘤细胞成分和细胞因子在溶骨中的作用

目的：探讨骨巨细胞瘤（ＧＣＴ）各细胞成分及肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）和白细胞介素－１（ＩＬ－１）细胞因子在骨吸收中的作用。方法：采用细胞分离技术和体外细胞溶骨模型，检测ＧＣＴ各细胞成分的骨吸收活性及ＴＮＦ－α和ＩＬ－１对这种活性的影响。结果：在溶骨模型中，多核巨细胞（ＭＧＣ）的数目越多，＾４５Ｃａ＾２＋的释放也越多；纤维母细胞样基质细胞（ＦＣ）组的＾４５Ｃａ＾２＋值明显高于无细胞对照组（Ｐ〈０     

Lipofectin介导DNA聚合酶α反义寡核苷酸抑制人胃癌细胞生长

目的 研究阳离子脂质体Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ（Ｌｉｐ）介导的ＤＮＡ聚合酶α（ＤＮＡ－ｐｏｌα）反义寡核酸（ＡＳＯＤＮ）体外抑制人胃癌细胞的生长。方法 合成与人ｐｏｌα催化亚基ｍＲＮＡ翻译起始区１８个碱基互补的寡核苷酸（ＯＤＮ）,与Ｌｉｐ混合制备Ｌｉｐ＋ＯＤＮ复合物,作用于ＭＧＣ－８０３、ＳＧＣ－７９０１人胃癌细胞２４ｈ后,细胞换液,继续培养２４ｈ,用噻唑蓝（ＭＴＴ）比色法测细胞存活状态,流式细胞术（     

DHCC受体检测方法的研究

本文采用葡聚糖包裹的活性炭石(DCC)法、羟基磷灰石(HAP)法及等电聚焦电泳(IEF)法,在各种条件下检测了1.25(OH)_2D_3(DHCC)受体的含量。这3种方法得到的表现解离常数(Kd)分别等于4.2×10~(-9)mol/L、2.3×10~(-9)mol/L和6.4×10~(-9)mol/L;该受体蛋白分别在10nmol/L、8nmol/L和30nmol/L浓度的〔~3H〕DHCC处被饱和。该受体对D_3类似物的结合能力依次为1,25(OH)_2D_3>>25(OH)D_3>D_3≈E_2。我们所测佝偻病鸡3种组织中该受体含量依次为肠>输卵管壳腺>>肝。用DCC法,在4℃孵育2～5h,结合最稳定。用KTED缓冲液测得的胞液DHCC受体含量比用TED缓冲液高(P<0.05)。     

改进Bethesda方法和Nijmegen方法检测凝血因子Ⅷ抑制物的比较

目的 比较改进的Bethesda方法与Nijmegen方法检测血浆凝血因子Ⅷ(FⅧ)抑制物的可靠性及实用性.方法 自行改进Bethesda检测方法,将Nijmegen方法中的乏FⅧ血浆和Nijmegen正常混合血浆替换成缓冲液和通用参比血浆(UCRP)来制备标准曲线;在检测患者抑制物时将Nijmegen正常混合血浆替换成UCRP;以滴度≥0.6 BU/ml为抑制物阳性.分别采用改进Bethesda方法和Nijmegen方法对237例血友病A患者进行抑制物检测.结果 改进Be-thesda方法和Nijmegen方法检测的阳性率分别为5.5%(13/237)和8.4%(20/237),两者相比差异无统计学意义(P>0.05).对于滴度>0.7 BU/ml的抑制物,两种方法具有很好的一致性.两种方法阳性结果不同的抑制物水平均在0.6～0.7 BU/ml.结论 改进的标准Bethesda方法是一种简便、可行的检测方法,Nijmegen方法更有利于低滴度抑制物的检出.     

酶法和Jaffe速率法测定血清肌酐的结果比较

目的:了解酶法和Jaffe速率法测定血清肌酐结果的定量关系.方法:按各自方法将测得结果进行相关回归分析.结果:酶法和Jaffe速率法测定血清肌酐的回归方程式为Y=0.7X 46.8(Y为Jaffe速率法,X为酶法 ),相关系数r=0.9976.结论:Jaffe速率法和酶法结果不同,两者之间存在恒定偏倚.     

三种纤维蛋白原测定方法的比较

目的对3种测定纤维蛋白原(Fib)的方法--凝血酶凝固法、双缩脲法、传统盐析法进行比较.方法用以上3种方法进行Fib测定的重复性实验及对正常、高和低Fib值测定并测定血红蛋白(Hb)和乳脂蛋白对以上3种方法的影响度,测定结果进行t检验.结果在重复性实验中,凝血酶凝固法的精密度最高;对正常Fib值测定,双缩脲法和传统盐析法结果高于凝血酶凝固法,差异无显著性;对低Fib值测定,结果相反;对高Fib值测定,双缩脲法结果低于凝血酶凝固法,差异无显著性,而传统盐析法结果相反;Hb和乳脂蛋白对凝血酶凝固法的测定结果影响最小.结论凝血酶凝固法测定Fib的精密度高,有较强的抗Hb和乳脂蛋白干扰的能力.     

生物样本中过氧化脂质定量测定的三种方法比较

目的　探讨在生物样本体系中测定过氧化脂质 (L PO)的较理想方法。方法　用目前最常用的 FOX法 ,改进碘量法 ,TBARS法同时测定不同生物样本体系中的 L PO浓度 ,并以线型性 ,准确度 ,精确度 ,稳定性和检测效率等指标评估、比较此三种方法的优劣。样本体系包括萃取的低密度脂蛋白 (L DL) ,细胞培养上清液 ,人血浆。结果　在萃取的 L DL样本体系中 ,FOX法显示出对 L PO最敏感的检测效率 ,并具有良好的准确性和精确度。但在细胞培养上清液和人血浆中 ,改进碘量法和 TBARS法的质量评估指标则优于 FOX法。在准确度评估实验中 ,FOX法对人血浆中的加样回收率明显偏低 (6 1.92 %± 2 .92 % ,碘量法 99.0 0 %± 2 .6 5 % ,TBARS法 10 1.6 3%±12 .0 0 % ) ,重复性也差 (评估精确度的变异系数 CV:FOX法为 19.15 % ,碘量法 4 .36 % ,TBARS法 3.14 % )。在线型性评估和稳定性评估实验中 ,三种方法皆显示出良好的性能。在人血浆中 L PO浓度的测值 ,改进碘量法为(14 .189± 4 .889)μm ol/ L ,TBARS法为 (0 .936± 0 .4 6 2 )μmol/ L ,上述测值与其它作者的报道相近。结论　在相对纯净的样本体系中 ,FOX法显示出对 L PO最敏感的检测效能。但在复杂样本体系中 ,改进碘量法和 TBARS法测定 L PO的各项质量指标则优于 FOX     

口腔鳞癌体外药敏实验

目的 寻找适宜应用于临床的体外敏感药物实验方法。方法 对37例经病理确诊的口腔癌患者的口腔颌面部原代鳞状细胞癌，利用卡铂、5-氟尿嘧啶、平阳霉素、氨甲喋呤进行MTT法和SRB法药物敏感实验。结果 ①MTT法与SRB法所得结果差异无显著性（_P〉0．05）。②各药物的平均抑癌率依次为卡铂＋5-氟尿嘧啶〉卡铂〉5-氟尿嘧啶〉平阳霉素〉氨甲喋呤。结论 ①MTT法与SRB法适合临床需要。②口腔鳞癌的药物敏感性与药物有关。③联合用药效果比单药效果好。     

茯砖茶不同溶剂提取物抗氧化活性研究

目的 研究茯砖茶不同溶剂提取物体外抗氧化活性,并测定其总多酚、黄酮含量.方法 以抗坏血酸为阳性对照,采用二苯代苦味酰基（DPPH）、[2,2＇-连氨-（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二氨盐]（ABTS）及铁离子还原/抗氧化能力（FRAP）三种抗氧化模型,评价茯砖茶80％乙醇（总提物）、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水5种不同溶剂提取物体外清除DPPH、ABTS＋自由基能力和对铁离子的还原/抗氧化能力.结果 茯砖茶乙酸乙酯提取物总多酚含量最高,正丁醇提取物黄酮含量最高,分别为（291.38±5.24）、（222.86±6.12）mg/g.茯砖茶不同溶剂提取物均具有一定的抗氧化活性,清除ABTS＋自由基和铁离子还原/抗氧化能力为：总提物＞乙酸乙酯提取物＞正丁醇提取物＞水提物＞石油醚提取物;清除DPPH自由基的能力为：乙酸乙酯提取物＞总提物＞正丁醇提取物＞水提物＞石油醚提取物.茯砖茶总提物和乙酸乙酯提取物均具有良好的抗氧化活性,清除DPPH自由基能力的半清除率浓度（IC50）分别为0.048、0.043 g/L,清除ABTS＋自由基能力的IC50分别为0.025、0.027 g/L.茯砖茶抗氧化能力与总多酚含量呈正相关.结论 茯砖茶提取物具有良好的抗氧化能力,为开发功能性抗氧化剂提供科学依据.     

MTT法测定异博定逆转胃癌与结肠癌细胞多药物抗性的研究

用MTT法测定了钙通道阻滞剂异博定逆转胃癌和结肠癌的多药物抗性。结果表明异博定能有效地提高5－Fu、MMC、CDDP和ADM的细胞毒性作用，增强这些化疗药物杀伤肿瘤细胞的作用。     

双项目同测法测定ALT和AST

目的 探讨双项目同测法与单项目测定法测定ALT和AST结果的差异。方法 分别使用双项目同测法和单项目测定法测定定值血清和30例样本ALT和AST含量,并将定值质控血清分别做日内、日间精密度测定。结果 两方法测定结果相关性良好,γ=0.999,检测结果差异无显著性(P>0.05),ALT和AST日内变异分别为2.63％、2.47％,日间变异分别为3.84％、3.77％。结论 双项目同测法可以节约仪器通道,提高工作效率,节约资源,有一定推广应用价值。     

免疫比浊法和快速ELISA法定量检测D-二聚体的相关性探讨

目的探讨免疫比浊法(LIATESTD-D)和快速ELISA法(VIDAS D-D)两种D-二聚体定量方法的相关性。方法分别用LIATESTD-D和VIDAS D-D两种方法对108份健康体检及住院患者标本进行D-二聚体定量检测。对检测的结果作统计学分析。结果当D-二聚体检测值在500~1000万g/ml之间时r2=0.9947,两种方法之间有良好的相关性。当D-二聚体检测值<500 ng/ml和>1000 ng/ml时,相关系数分别为r1=0.9697和r3=0.9538,两种方法之间的相关性不理想。结论两种方法各有优势,实验室可以根据实际情况采取不同的方法检测。