通补消积饮对人肺腺癌A549细胞Cyclin D1蛋白表达的影响

目的研究通补消积饮对A549细胞Cyclin D1蛋白表达的影响。方法应用Western-blot法观察通补消积饮对A549细胞Cyclin D1蛋白表达的影响。结果通补消积饮低、中、高剂量组含药血清作用A549细胞48h后,Cyclin D1蛋白相对表达量分别为(0.739±0.051),(0.520±0.047),(0.395±0.035),通补消积饮各剂量组与空白血清组(0.881±0.062)比较,差异有统计学意义(P0.05,P0.01),在一定的时间内表现出明显的量-效关系。结论通补消积饮能明显抑制A549细胞Cyclin D1蛋白的表达。     

胃炎I号对胃癌前病变大鼠Wnt信号通路Wnt1，Wnt3a，Cyclin D1表达的影响

目的 探讨健脾化瘀解毒复方胃炎I号对胃癌前病变（GPL）的疗效及其分子学机制。方法 将SD大鼠随机分为空白对照组,模型组,维酶素组（ 0.2 g·kg-1）,胃炎I号组（7.5 g·kg-1）。采用N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍（MNNG）水溶液自由饮用、饥饱失常、耗气泻下法复制GPL大鼠模型。观察胃炎I号连续治疗 10周后对GPL 大鼠Wnt信号通路Wnt1、Wnt3a、细胞周期蛋白D1（Cyclin -D1）表达的影响。结果 模型组大鼠胃黏膜上皮的Wnt1、Wnt3a、Cyclin D1表达评分均较空白对照组 显著增加（P＜ 0.05,P＜ 0.01）;胃炎I号能显著拮抗模型组出现的上述变化（P＜ 0.01）。结论 胃炎I号能下调Wnt信号通路Wnt1,Wnt3a,Cyclin D1的表达,抑制Wnt/ β-catenin信号通路的异常激活,能在一定程度上阻断和逆转胃黏膜恶性转变。     

乳香提取物对大鼠乙酸胃溃疡β-catenin和Cyclin D1的影响

目的:探讨乳香提取物对大鼠乙酸胃溃疡β-catenin和Cyclin D1的影响。方法:用冰醋酸制备大鼠慢性胃溃疡模型,随机分为3组,分别灌服生理盐水、乳香提取物、奥美拉唑等。免疫组织化学方法检测30 d和60 d胃黏膜β-catenin和Cyclin D1的蛋白表达。结果:第30 d中药组、西药组β-catenin、Cyclin D1表达增强,与模型组比较,有显著性差异(P0.05);第60 d模型组、中药组和西药组β-catenin表达均无显著性差异(P0.05)。结论:乳香提取物能上调胃粘膜β-catenin、Cyclin D1的表达,加快细胞的增殖,而促进溃疡的愈合,可能是乳香生肌的作用机理之一。     

苏木含药血清联合顺铂对肺癌PG细胞的增殖抑制及Cyclin D1、CDK4蛋白表达的影响

目的:探讨苏木含药血清对人肺癌PG细胞株的增殖抑制作用及对Cyclin D1、CDK4蛋白表达的影响。方法:将肺癌PG细胞分为空白组、苏木组、苏木+顺铂组、顺铂组4组,四唑盐比色法(MTT)中各组根据血清浓度的不同分为20%、10%、5%、2.5%四组,观察各组PG细胞的增殖抑制作用;免疫荧光法中各组血清浓度为20%,采用激光共聚焦显微镜观察各组Cyclin D1、CDK4蛋白表达。结果:MTT法中10%、20%苏木组细胞的增殖抑制率明显,具有作用时间和剂量依赖性,但低于顺铂组和苏木+顺铂组,苏木+顺铂组PG细胞的增殖抑制率与顺铂组比较,差异无统计学意义(P0.05)。免疫荧光结果显示:与空白组比较,苏木组CDK4、Cyclin D1蛋白减少(P0.05),顺铂组和苏木+顺铂组CDK4、Cyclin D1蛋白的表达亦减少(P0.01);且顺铂组和苏木+顺铂组CDK4、Cyclin D1蛋白的表达低于苏木组(P0.05)。与顺铂组比较,苏木+顺铂组CDK4、Cyclin D1蛋白的表达差异无统计学意义(P0.05)。结论:苏木含药血清通过下调Cyclin D1、CDK4蛋白表达抑制PG细胞增殖。     

针灸对环磷酰胺所致骨髓抑制小鼠骨髓细胞周期调节蛋白Cyclin D1表达及细胞周期的动态影响

目的 探讨针灸抗化疗毒副反应,改善骨髓抑制、提高外周血白细胞数量的分子生物学机制。     

莪黄汤对结肠癌SW480细胞中β-catenin及下游靶基因cyclin D1表达的影响

目的:了解莪黄汤含药血清对人结肠癌SW480细胞增殖的影响及对Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin、cyclin D1蛋白表达的影响。方法:通过莪黄汤不同浓度含药血清处理SW480细胞,MTT法检测细胞增殖,流式细胞技术检测细胞周期,免疫组化及Western blot检测Wnt/β-catenin通路中β-catenin、Cyclin D1蛋白的表达。结果:MTT检测显示不同浓度莪黄汤含药血清在体外对结肠癌SW480细胞增殖有明显抑制作用,呈时间依赖及浓度依赖关系;流式细胞检测显示莪黄汤可抑制SW480细胞增殖,并提示莪黄汤可能在S期发挥作用,阻止细胞进入G2/M期,其中7.14g/kg组抑制作用最明显;免疫组化及Western检测提示莪黄汤可降低β-catenin及其下游cyclin D1蛋白的表达。结论:莪黄汤可能通过Wnt/β-catenin信号通路抑制SW480细胞增殖发挥抗肿瘤作用。     

祛痰化瘀利湿方对人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路β-catenin、Cyclin D1、MMP-7的调控作用

目的观察祛痰化瘀利湿方对人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路的调控作用。方法将GSK-3β选择性小分子抑制剂作用于正常人滑膜细胞,以激活Wnt/β-catenin信号通路。提取并检测胞核蛋白β-catenin的表达,从而确定最佳激活时间点。将对数生长期的滑膜细胞分为正常组、SB-216763激活组、祛痰化瘀利湿方组,分别采取相应的干预措施。Western blot方法检测滑膜细胞胞核蛋白β-catenin及其下游基因Cyclin D1和MMP-7的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测滑膜细胞培养上清液中Cyclin D1和MMP-7的表达。结果成功激活正常人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路,SB-216763干预后激活组胞核蛋白β-catenin及其下游基因Cyclin D1和MMP-7表达较正常组显著升高(P0.05);经中药含药血清干预后,祛痰化瘀利湿方组胞核蛋白β-catenin及其下游基因Cyclin D1和MMP-7表达与激活组相比显著下调(P0.01)。结论印证了GSK-3β作为选择性小分子抑制剂能够激活人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路;通路激活后,其下游基因Cyclin D1和MMP-7的表达显著升高;祛痰化瘀利湿方能够明显下调β-catenin、Cyclin D1、MMP-7的表达;提示从单一信号通路方面可阐释祛痰化瘀利湿方治疗骨性关节炎的分子作用机制。     

猪苓多糖通过HuR调节Cyclin D1表达抑制A549细胞增殖

目的研究猪苓多糖(polyporus polysaccharide,PPS)抑制肺癌A549细胞增殖的作用及其机制。方法设对照组和PPS低、中、高剂量组,用MTT实验、流式细胞术检测PPS对细胞增殖的影响,用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)法检测PPS对A549细胞Cyclin D1 m RNA表达水平及其稳定性的影响,用Western blotting检测PPS对A549细胞Cyclin D1蛋白、人抗原R(human antigen R,Hu R)蛋白表达及对Hu R蛋白胞浆及胞核内分布的影响。结果与对照组比较,中、高剂量的PPS作用后,A549细胞增殖明显受到抑制(P0.05),Cyclin D1 m RNA稳定性降低(P0.05),Cyclin D1 m RNA及蛋白表达减少(P0.05),Hu R总蛋白没有明显变化,但胞浆Hu R蛋白表达下降(P0.05),胞核Hu R蛋白表达升高(P0.05)。结论 PPS可抑制A549细胞增殖,其作用机制可能与改变Hu R在细胞内定位,从而降低Cyclin D1 m RNA稳定性及Cyclin D1蛋白表达有关。     

莪术含药血清抑制HSCs中Shh和Gli1表达的机制研究

研究莪术含药血清抑制活化的大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)中Hedgehog(Hh)信号通路关键因子Shh(sonic hedgehog),Gli1(glioma-associated oncogene homolog-1)表达的机制。清洁级SD大鼠均分2组,分别给予莪术水煎剂、生理盐水灌胃取血制备含药血清。体外培养大鼠HSCs,分为7组:空白组、模型组、Hh通路抑制剂组、莪术组、Hh通路抑制剂+莪术组、Hh通路激动剂组、Hh通路激动剂+莪术组。除空白组外,其余各组均给予100μg·L-1瘦素诱导后,各组再予以相应药物干预24 h,经MTT法检测HSCs增殖情况,RT-PCR法检测Shh,Gli1的mRNA表达,Western blot法检测Shh,Gli1蛋白表达及免疫荧光法检测Gli1蛋白表达。经瘦素活化的大鼠HSCs中Shh,Gli1的mRNA和蛋白表达均显著上调(与空白组比较P0.01)。Hh通路抑制剂、莪术含药血清分别干预后,Shh,Gli1的mRNA和蛋白表达显著下调(与模型组比较P0.01);莪术含药血清与Hh通路抑制剂协同干预后,Shh,Gli1 mRNA和蛋白表达显著下调(与模型组比较P0.01);Hh通路激动剂干预后,Shh,Gli1 mRNA和蛋白表达显著上调(与模型组比较P0.01)。用莪术含药血清干预Hh通路激动剂组后,Shh,Gli1mRNA和蛋白表达显著下调(与Hh通路激动剂组比较P0.01)。莪术含药血清可通过抑制瘦素诱导活化的HSCs中Shh,Gli1的表达,参与Hh信号通路抑制HSCs的活化,发挥抗肝纤维化的作用。     

透骨消痛胶囊含药血清对软骨细胞Cyclin D1 mRNA表达的影响

目的:观察透骨消痛胶囊含药血清对软骨细胞CyclinD1 mRNA表达的影响,探讨透骨消痛胶囊治疗骨性关节炎的可能作用机制.方法:采用抽签法将16只12周龄雄性新西兰大白兔随机分为空白组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,每组4只.低剂量组按5 mL·kg-体质量以5 mg·mL-1透骨消痛胶囊溶液灌胃,中剂量组按5 mL·kg-体质量以10 mg·mL-1透骨消痛胶囊溶液灌胃,高剂量组按5 mL·kg-1体质量以20 mg·mL-1透骨消痛胶囊溶液灌胃,空白组按5 mL·kg-1体质量以生理盐水灌胃.每天灌胃2次,连续7d,最后1d连续2次灌胃,中间间隔2h.末次灌胃后3h提取各组实验兔含药血清低温保存备用.将6只4周龄雄性新西兰兔处死,取其膝关节软骨,置入盛有Ⅱ型胶原酶的培养皿中进行消化,建立软骨细胞体外培养体系,并采用甲苯胺蓝染色法鉴定细胞功能.将体外培养的第3代软骨细胞随机分为空白组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,并分别加入含空白血清、低剂量中药血清、中剂量中药血清、高剂量中药血清的DMEM培养液中继续培养72 h后,采用MTT法检测软骨细胞的增殖情况,采用RT - PCR法检测CyclinD1 mRNA的表达,并在透射电子显微镜下观察细胞形态.结果:Ⅱ型胶原酶消化法成功建立了软骨细胞的体外培养体系,甲苯胺蓝染色可见软骨细胞内呈紫红色异染颗粒.干预72 h后,各组软骨细胞光密度值比较,差异有统计学意义(F=6.209,P=0.004);中剂量组、高剂量组软骨细胞光密度值高于空白组(P=0.005,P=0.002);中剂量组、高剂量组软骨细胞光密度值高于低剂量组(P =0.034,P=0.011).各组软骨细胞CyclinD1 mRNA表达量比较,差异有统计学意义(F=8.262,P=0.001);中剂量组、高剂量组软骨细胞CyclinD1 mRNA表达量高于空白组(P=0.002,P=0.001);中剂量组、高剂量组软骨细胞CyclinD1 mRNA表达量高于低剂量组(P =0.012,P=0.004);中剂量组、高剂量组可见较多处于分裂期的细胞.结论:透骨消痛胶囊的含药血清能促进软骨细胞G1期正性调节因子CyclinD1 mRNA的表达,从而促进软骨细胞增殖,这可能是透骨消痛胶囊在临床上治疗骨性关节炎具有较好疗效的部分机理,而有关透骨消痛胶囊治疗骨性关节炎的具体作用机制还需作更进一步的深入研究,以便为临床应用提供理论依据.     

丹龙醒脑方对脑缺血再灌注大鼠海马区神经干细胞增殖及Frizzled1、Dvl1、CyclinD1表达的影响

目的:探讨丹龙醒脑方对局灶性脑缺血再灌注模型大鼠海马区神经干细胞增殖,以及Frizzled1、Dvl1、Cyclin D1表达的影响。方法:将80只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、依达拉奉组、丹龙醒脑方7.4g/kg组和丹龙醒脑方14.8g/kg组,采用线栓法制备局灶性脑缺血再灌注模型,再灌注1d、3d和7d采用改良m-NSS法进行神经功能缺损评分,7d后取大鼠缺血侧海马组织,采用免疫荧光法检测海马区Brdu阳性细胞率;采用RT-q PCR法、Western Blot法分别检测Frizzled1、Dvl1、Cyclin D1 mRNA和蛋白表达。结果:1再灌注1d,与假手术组比较,其余各组神经功能缺损评分明显升高,而各组间差异无统计学意义;再灌注3d、7d,与模型组比较,依达拉奉组、丹龙醒脑方7.4g/kg组、丹龙醒脑方14.8g/kg组评分明显降低。2与假手术组比较,各组Brdu阳性细胞率增大,Frizzled1、Dvl1、Cyclin D1mRNA及蛋白的表达明显增强;与模型组比较,依达拉奉组、丹龙醒脑方7.4g/kg组、丹龙醒脑方14.8g/kg组Brdu阳性细胞率增大,Frizzled1、Dvl1、Cyclin D1mRNA及蛋白的表达明显增强。结论:丹龙醒脑方能改善神经缺损症状,促进脑缺血后海马区NSCs增殖,其机制可能与通过上调缺血再灌注后海马区Frizzled1、Dvl1表达水平,从而促进Wnt/β-catenin信号通路下游靶基因Cyclin D1的表达水平有关。     

肝癌组织中Survivin蛋白、PCNA的表达及其与预后的关系

目的:探讨人肝癌组织中Survivin蛋白及增殖细胞核抗原(PCNA)的表达及其与预后的关系。方法:应用免疫组织化学染色对46例原发性肝癌组织中Survivin蛋白与PCNA的表达情况进行检测,并结合临床预后进行分析。结果:46例肝癌组织中Survivin蛋白表达阳性率为67.4%;Survivin蛋白表达阳性者肝癌细胞增殖指数显著高于表达阴性者;Survivin蛋白表达阴性患者与表达阳性患者比较,1年生存率差异无显著性意义,但2年生存率前者显著高于后者。结论:Survivin蛋白对促进肝癌细胞快速增殖具有重要作用,Survivin蛋白的表达可以作为预后不良的重要指标。     

大黄素对血管平滑肌细胞周期调控蛋囱Cyclin D1表达的影响

目的：观察大黄素对人血管平滑肌细胞周期时相和CyclinD1表达的影响。方法：取对数增长期的平滑肌细胞，采用MTY法观察大黄素对平滑肌细胞增殖抑制的有效浓度范围，求出IC50并干预细胞；然后分别用流式细胞仪和Westemblot法进行细胞周期对相和Cyclin D1表达的测定。结果：与对照组比较，IC50对药物组G0／G，期细胞百分比升高，S期细胞百分比下降，Cyclin D1表达高峰延迟，表达量下调，细胞周期受阻于G0/G1期。结论：大黄素在抑制平滑肌细胞增殖的过程中通过下调Cyclin D1表达，阻滞了细胞周期的进程；是一种有效的抗平滑肌细胞增殖的药物。     

姜黄素通过调控TUFT1/AKT信号通路抑制肝细胞癌增殖、迁移及侵袭研究

目的:探讨姜黄素对肝细胞癌细胞系HCCLM3体外增殖、迁移及侵袭的影响及潜在分子信号机制。方法:利用不同浓度的姜黄素(0、30、60μmol/L对应为空白对照组、姜黄素处理组1、姜黄素处理组2)处理HCCLM3细胞,利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖情况,利用Transwell法检测细胞的迁移及侵袭能力改变;利用姜黄素(0、60μmol/L)处理HCCLM3细胞,利用qRT-PCR及Western blot法检测细胞内TUFT1表达改变及AKT蛋白磷酸化。结果:MTT实验结果显示,相较于空白对照组,姜黄素处理组1及姜黄素处理组2的HCCLM3细胞增殖能力显著降低(P<0.05)。Transwell迁移实验结果显示,相较于空白对照组,姜黄素处理组1及姜黄素处理组2的HCCLM3细胞迁移能力显著降低(P<0.05)。Transwell侵袭实验结果显示,相较于空白对照组,姜黄素处理组1及姜黄素处理组2的侵袭能力显著降低(P<0.05)。qRT-PCR实验结果显示,相较于空白对照组,姜黄素处理组2的HCCLM3细胞内TUFT1 mRNA表达水平显著降低(P<0...     

Survivin及Caspase-3在肝癌组织中的表达及临床意义

目的探讨Survivin和Caspase-3在肝癌组织中的表达、二者与标本临床病理特征的相关性及临床意义。方法应用免疫组织化学法检测92例肝细胞癌石蜡切片中Survivin和Caspase-3表达的情况并结合临床病理资料进行分析。结果Survivin在肝细胞癌标本中表达阳性率为61%,癌旁组织中阳性表达率仅10%;Caspase-3在肝细胞癌标本中表达阳性率为58%,癌旁组织中阳性表达率为85%。Survivin和Caspase-3在肝细胞癌中表达呈明显的负相关。Survivin的表达与肝细胞癌肿瘤大小、门静脉癌栓密切相关(P<0.05)。结论Survivin、Caspase-3参与了肝细胞癌的发展,Survivin可能通过抑制Caspase-3的活性从而发挥其抑制肝细胞癌细胞凋亡作用。     

叶下珠复方Ⅱ号对肝癌细胞增殖和胰岛素样生长因子-1受体信号通路转录的作用

目的:观察叶下珠复方Ⅱ号(CPUⅡ)对肝癌Huh7细胞增殖以及叶下珠复方Ⅱ号对胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)信号通路转录的影响,探讨叶下珠复方Ⅱ号抗肝癌作用机制。方法:采用小分子干扰RNA技术(siRNA)转染肝癌Huh7细胞,构建抑制IGF-1R的肝癌Huh7细胞(anti-IGF-1R Huh7),选择稳定表达的抑制IGF-1R的肝癌Huh7细胞,将肝癌Huh7细胞以及抑制IGF-1R的肝癌Huh7细胞分别分为4组:空白组,叶下珠复方Ⅱ号高、低质量浓度组(3.0,1.5 g·L-1)以及5-氟尿嘧啶(5-FU)组(0.03 g·L-1),采用噻唑蓝(MTT)比色法测定药物对各组细胞增殖的影响,通过实时荧光定量PCR(Real-time PCR)以及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测IGF-1R以及其下游相关指标mRNA及蛋白表达。结果:与空白组比较,转染(SASI_Hs01_00126196及SASI_Hs01_00126196_AS)序列肝癌Huh7 IGF-1R mRNA及蛋白表达量最低,选择该细胞进行实验。MTT比色实验结果表明,与空白组比较,叶下珠复方Ⅱ号能够抑制Huh7细胞以及抑制IGF-1R的肝癌Huh7细胞增殖,并且siRNA抑制IGF-1R基因表达后,叶下珠复方Ⅱ号还能继续抑制Huh 7细胞增殖,且IGF-1R,磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)和丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶3(Akt3)mRNA表达量进一步下降(P0.05)。结论:叶下珠复方Ⅱ号能够抑制Huh7细胞增殖,作用机制可能是抑制IGF-1R及其下游mRNA转录有关。     

升陷汤对肺纤维化大鼠肺组织Q-平滑肌肌动蛋白、肺表面活性蛋白D及TGF-β1 /Smads通路蛋白表达的影响

目的 观察升陷汤对肺纤维化大鼠肺组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、肺表面活性蛋白D(SP-D)及TGF-β1/Smads通路蛋白表达的影响,探讨其作用机制.方法 SPF级SD雄性大鼠60只,随机分为正常组、模型组、吡非尼酮组和升陷汤高、中、低剂量组.除正常组外,其余大鼠采用气管内注射硫酸博莱霉素建立肺纤维化模型,造...     

甲基莲心碱对人脐静脉血管平滑肌细胞增殖及Cyclin D1,P21Waf1/Cip1表达的影响

目的:观察甲基莲心碱对人脐静脉平滑肌细胞(HUVSMCs)增殖,Cyclin D1及P21Waf1/Cip1表达的影响,旨在探讨甲基莲心碱作用的分子机制。方法:采用MTT法和流式细胞仪观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及甲基莲心碱对HUVSMCs增殖的影响。用免疫印迹法检测Cyclin D1及P21Waf1/Cip1蛋白表达,以半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Cyclin D1及P21Waf1/Cip1rnRNA的表达。结果:AngⅡ对HUVSMCs有明显促增殖作用,其促增殖效应在24 h达到峰值,且在0.001-0.1μmol/L浓度范围内有剂量依赖关系。甲基莲心碱呈剂量依赖性地抑制AngⅡ诱导的HUVSMCs增殖,同时可抑制AngⅡ诱导的Cyclin D1蛋白及mRNA的表达,促进P21Waf1/Cip1蛋白及mRNA表达。结论:甲基莲心碱可通过下调Cyclin D1及上调P21Waf1/Cip1的表达阻滞细胞周期的进程,从而抑制血管平滑肌细胞的增殖,是一种有效的抑制血管平滑肌细胞增殖的药物。     

生存素和nm23-H1在肝细胞肝癌中的表达及临床意义

目的探讨肝细胞肝癌(HCC)中生存素(Survivin.)和nm23-H1表达的临床意义及两者的相互关系。方法采用免疫组织化学S-P法检测40例HCC及26例癌旁肝组织中Survivin和nm23-H1的表达。结果①Survivin、nm23-H1在HCC中的阳性表达率分别为57.5%(23/40)、42.5%(17/40),两者阳性表达率明显分别高于、低于癌旁肝组织(P<0.01);②Survivin的表达与HCC的分化程度、转移、癌栓有关(P<0.05),而与HCC患者的性别、发病年龄、原发肿块大小无关(P>0.05);③nm23-H1的表达与HCC的转移、癌栓有关(P<0.05),而与HCC患者的性别、发病年龄、原发肿块大小及分化程度无关(P>0.05);④在HCC中,Survivin与nm23-H1间的表达无明显相关性(r=0.125,P>0.05)。结论Suvivin和nm23-H1可作为反映HCC发生发展及预后判断的重要指标。