地塞米松通过稳定podocin的表达和分布抑制嘌呤霉素对小鼠肾小球足细胞的损伤

目的 观察嘌呤霉素（PAN)和地塞米松（DEX）对足细胞分子podocin表达和分布的影响,探讨DEX改善蛋白尿的机制。 方法 体外培养小鼠足细胞（MPC5）,分为对照组、PAN组和DEX组。对照组用含0.02% DMSO的RPMI-1640培养液培养;PAN组加入PAN;DEX组同时加入PAN和DEX。处理后8 h、24 h和48 h,观察细胞形态并摄像,用图像处理软件分析各组细胞形态及胞体面积的差异。用RT-PCR、Western印迹和间接免疫荧光染色检测各时间点podocin mRNA和蛋白的表达及分布。 结果 正常足细胞呈星形,胞体大并有树样突起,细胞相互连接。PAN刺激8 h,足细胞胞体面积缩小,为对照组的43%;24 h为10%;48 h为5.7%（P < 0.01）;部分足细胞足突及细胞连接消失。DEX组在8 h、24 h和48 h,足细胞胞体面积显著大于PAN组,分别为对照组的43.9%、26.2%及29.6%（P < 0.05）, 足突形态正常。PAN组podocin mRNA表达量呈下降趋势,蛋白表达量显著降低（P < 0.01）,分布异常。DEX组podocin mRNA和蛋白的表达量及分布与对照组相似,48 h时mRNA和蛋白的表达量均显著高于PAN组（P < 0.05）。 结论 DEX直接作用于足细胞,稳定podocin mRNA和蛋白的表达量及分布,该作用可能与其能保护足细胞及改善蛋白尿有关。     

IgA肾病患者尿足细胞数及肾组织podocalyxin表达与临床病理的相关分析

目的 探讨尿足细胞数和肾组织中足细胞顶膜区的特异性标记蛋白podocalyxin（PCX）的表达与IgA肾病(IgAN)患者临床和病理改变的关系。 方法 收集50例IgAN患者活检前3 d的每天晨尿和20例体检健康对照者的晨尿各100 ml,离心去上清于TXD3细胞离心涂片机上制成涂片。用抗人PCX单克隆抗体分别对尿沉渣涂片和肾组织切片进行免疫组化染色,于光学显微镜下计数尿足细胞排泄数,以及用计算机图像分析系统测量和计算肾小球PCX平均吸光度值。IgAN按Lee分级分成5组,并用Katafuchi半定量积分法记分。比较各组尿足细胞数和肾组织PCX平均吸光度值,并与各项病理指标评分和临床生化指标进行相关性分析。 结果 IgAN组尿中足细胞数显著高于健康对照组（P < 0.01）。IgAN Lee分级各组组间尿足细胞中位数两两比较,Ⅰ-Ⅱ级组低于Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ级组（P < 0.05）;Ⅲ级组显著低于Ⅴ级组（P < 0.05）;Ⅲ级组低于Ⅳ级组和Ⅳ级组低于Ⅴ级组,但差异无统计学意义。尿足细胞阳性率在Ⅳ、Ⅴ级组最高（100%）,在LeeⅠ-Ⅱ级组最低（55%）。IgAN患者随着Lee分级升高,肾小球足细胞PCX表达下调,两两比较结果显示,Ⅰ-Ⅱ级组显著高于Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ级组（P < 0.05）;Ⅲ、Ⅳ级组显著高于Ⅴ级组（P < 0.05）;Ⅲ级组稍高于Ⅳ级组（P > 0.05）。IgAN患者尿足细胞排泄数与肾小球PCX表达量呈负相关（r = -0.702,P < 0.01);与24 h尿蛋白量呈正相关（r = 0.465,P < 0.01）;与肾小球和肾小管病理积分均呈正相关（r = 0.233,r = 0.307,均P < 0.05）。肾小球PCX表达量分别与肾小球和肾小管病理积分呈负相关（r = -0.560,r = -0.377,均P < 0.05）;与24 h尿蛋白量呈负相关（r = -0.367,P < 0.05）。 结论 IgAN患者尿足细胞排泄量可反映肾组织足细胞缺失程度,肾小球足细胞损伤脱落可能参与IgAN的发生发展,其尿足细胞数有可能作为反映疾病进展的重要指标。     

一种成人肾病综合征患者尿沉渣足细胞分子nephrin及Podocalyxin检测方法

目的:探讨采用ELISA方法以尿AQP(Aquaporin)-2校正检测肾病综合征尿nephrin podocalyxin排泌,以帮助评估成人肾病综合征的诊断和病情。方法:入组71例经肾穿刺明确病理诊断的成人肾病综合征(NS)患者,包括20例增殖性肾小球疾病的患者,49例非增殖的患者和2例淀粉样变性患者。22例FSGS患者(其中13例确定FSGS亚型诊断)。选取10例健康志愿者作为研究对照组。用ELISA法测定尿nephrin,podocalyxin和AQP-2。以尿AQP2作为内参照校正尿nephrin(neph/AQP)和podocalyxin(PCX/AQP)。结果:尿neph/AQP和PCX/AQP正相关(R=0.616,P<0.001),正常人尿neph/AQP和PCX/AQP显著低于NS患者(P<0.05),增殖和非增殖性肾病综合征患者的尿neph/AQP和PCX/AQP差异无统计学意义(P>0.05),FSGS患者尿neph/AQP和PCX/AQP中显著高于其他NS患者(P<0.05),在IgMN患者尿neph/AQP和PCX/AQP增加,肾淀粉样变性患者的尿neph/AQP和PCX/AQP较少。对13例明确FSGS病理亚型诊断的患者尿neph/AQP和PCX/AQP进行评估,发现各组间差异无统计学意义(P>0.05),但以细胞型FSGS尿neph/AQP排泌最高,NOS型其次,顶端型再次,以脐部型最低。尿PCX/AQP则以细胞型FSGS排泌最高,NOS型其次,脐部型再次,顶端型最低。对于肾病综合征患者FSGS的诊断,ROC曲线分析表明,当尿neph/AQP取临界值为0.165时其灵敏度为0.864,而特异性为0.603,尿PCX/AQP取临界值3.056时其灵敏度为0.773,特异性为0.672。结论:采用ELISA方法的以AQP-2作为内参检测成人肾病综合征尿足nephrin,podocalyxin较为简便。IgMN患者尿neph/AQP和PCX/AQP增高,肾淀粉样变性患者的尿neph/AQP和PCX/AQP较低。FSGS患者尿neph/AQP和PCX/AQP高于其他肾病综合征患者,在FSGS亚型中以细胞型及NOS型稍高于其他亚型FSGS患者,该方法还有助于在临床肾病综合征患者中帮助诊断FSGS。     

厄贝沙坦对早期糖尿病肾脏疾病大鼠足细胞nephrin和podocin表达的影响

目的：观察厄贝沙坦（irbesartan）对糖尿病肾脏疾病（diabetic kidney disease,DKD）大鼠足细胞裂孔隔膜蛋白分子（nephrin和 podocin）表达的影响,探讨厄贝沙坦对DKD的防治作用。方法以高脂高糖喂养8周联合小剂量链脲佐菌素（30 mg/kg）建立DKD大鼠模型,将 DKD大鼠模型随机分为2组：厄贝沙坦组及模型对照组;另设正常对照组。厄贝沙坦组给予厄旦沙坦（50 mg·kg-1·d-1）,另外2组每日给予等量0.9%生理盐水灌胃。各组于治疗前及药物干预后第4、8、12周周末检测大鼠血糖浓度和尿微量白蛋白量;观察大鼠体质量、肾重、肾肥大指数、血清尿素氮、肌酐、总胆固醇、三酰甘油变化;光镜观察肾脏病理改变;应用免疫组化技术观察足细胞相关蛋白 nephrin、podocin肾组织分布与表达;采用 Western blot技术测定肾皮质 nephrin、podocin 蛋白的表达。结果应用厄贝沙坦干预后与DKD对照组相比,大鼠的尿微量白蛋白总量、肾肥大指数、血糖、尿素氮、血肌酐较模型对照组明显降低（P〈0.05）,体质量增加（P〈0.05）,病理改变减轻,nephrin和 podocin蛋白表达增加（P〈0.05）。结论厄贝沙坦能上调 nephrin和 podocin的表达水平,降低尿微量白蛋白排泄,延缓DKD的进展。     

足细胞上皮-间充质转分化与肾小球疾病

目的足细胞对于维持肾小球滤过屏障的稳定性极为重要。足细胞的损伤可导致肾小球滤过功能障碍和相关肾脏疾病的发生。上皮-间质转分化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是足细胞损伤的一种表现形式,也是多种肾小球疾病的始动因素之一。本文主要针对足细胞EMT的定义、具体表现、诱导因素、发生机制及相关肾小球疾病及其防治进行综述,以期阐明足细胞EMT最近研究进展,为相关肾脏疾病的治疗提供参考。     

舒洛地特对糖尿病高血压大鼠足细胞podocalyxin表达的影响

目的 研究舒洛地特对糖尿病高血压大鼠的肾脏保护作用和足细胞podocalyxin（PCX）表达的影响。 方法 链脲佐菌素（STZ）注射后,醋酸脱氧皮质酮（DOCA）+盐建立糖尿病高血压大鼠模型。设对照组（CTL组）、模型组（STZ+DOCA组）、舒洛地特治疗组（GAG组）和舒洛地特+替米沙坦治疗组（GAG+ARB组）,每组各6只大鼠。于建模后0、2、4、6和8周测尾动脉压、尿白蛋白和8周末尿N-乙酰-β-葡萄糖苷酶（NAG）。8周末取血检测胰岛素、血肌酐（Scr）、胆固醇（TC）、三酰甘油 （TG）、Na+、K+。HE、PAS染色观察病理改变和肾小球正切面足细胞计数。免疫组织化学检测podocalyxin在肾小球表达和分布。RT-PCR和Western印迹法检测podocalyxin mRNA和蛋白表达。 结果 （1）GAG+ARB组4周末血压显著低于STZ+DOCA组和GAG组（P < 0.05）。GAG组和GAG+ARB组TG、TC和胰岛素与STZ+DOCA组差异无统计学意义。（2）6周末GAG+ARB组尿白蛋白量显著低于STZ+DOCA组 [（52.9±7.6） mg/24 h比（102.2±6.9） mg/24 h,P < 0.05];8周末GAG组和GAG+ARB组尿白蛋白量均显著低于STZ+DOCA组（P < 0.05）,而GAG+ARB组尿白蛋白量显著低于GAG组[（33.8±6.8） mg/24 h比(85.2±8.7) mg/24 h,P < 0.05]。GAG+ARB组和GAG组尿NAG均显著低于STZ+DOCA组（P < 0.05）。（3）GAG组和GAG+ARB组肾小球硬化指数（GSI）和间质纤维化指数（IF）均显著低于STZ+DOCA组（P < 0.05）,各组肾小球正切面足细胞数差异无统计学意义。（4）与STZ+DOCA组相比,GAG组PCX mRNA和蛋白表达显著增加,而GAG+ARB组PCX表达显著高于GAG组。 结论 舒洛地特可通过增加足细胞podocalyxin表达,减轻糖尿病高血压大鼠蛋白尿和病理损伤,与替米沙坦联用有叠加作用。     

足细胞与肾小球损伤

随着体外培养技术的发展，已认识到肾小球足突细胞具有其特殊的结构和性质。它参加了初期及进行性肾上球损伤过程，其具有的多种表面抗原及受体结构成份亦可能涉及肾小球免疫损伤的病理过程，已获得的信息资料从根本上改变了人们对它的看法。     

足细胞与肾小球损伤

随着体外培养技术的发展，已认识到肾小球足突细胞具有其特殊的结构和性质。它参加了初期及进行性肾小球损伤过程，其具有的多种表面抗原及受体结构成份亦可能涉及肾小球免疫损伤的病理过程，已获得的信息资料从根本上改变了人们对它的看法。     

足细胞标志蛋白及足细胞疾病

肾小球内有三种固有细胞：系膜细胞、内皮细胞、足细胞。不同的病因可导致不同固有细胞的损伤，在临床上表现为不同类型的肾小球疾病。其中足细胞受损后，临床主要表现为蛋白尿，典型的表现为大量蛋白尿。蛋白漏出是肾小球疾病的常见表现，反过来也是加速肾小球硬化的一个重要因素。随着近年来对足细胞生物学研究的深入，尤其是在发现足细胞表达的一些特异性蛋白分子之后，足细胞现已被认为是参与各种原发或继发性肾小球疾病进展的关键细胞。     

足细胞细胞骨架改变与肾小球疾病的研究进展

足细胞位于肾小球基底膜外侧,其足突对维持正常肾小球滤过屏障的结构和功能起重要作用。足细胞细胞骨架包括中间丝、微管以及肌动蛋白。足细胞的肌动蛋白骨架紊乱在多种肾脏疾病中被广泛报道。本文就足细胞骨架蛋白的分类、功能、足细胞骨架调控通路及其潜在治疗靶点的研究进展进行综述。     

Paraneoplastic Glomerular Diseases

1. Download : Download high-res image (373KB)
2. Download : Download full-size image

     

肾病综合征患者肾组织podocin的表达

目的 观察不同病理类型&#65380; 不同激素反应性肾病综合征(NS)患者肾小球足细胞中podocin的表达和分布特征&#65377;方法 肾组织作冰冻切片免疫荧光双染色, 以激光共聚焦显微镜采集图像&#65377;与定位标志Ⅳ型胶原α3链比较&#65377; 受检NS患者21例, 其中局灶节段性肾小球硬化(FSGS)12例(难治性7例, 非难治性5例)&#65380; 微小病变(MCD)5例&#65380; 膜性肾病(MN)4例;正常肾组织对照3例&#65377;采用LSM 510图像处理系统进行处理&#65377;荧光强度以吸光度表示&#65377; 结果 (1)podocin在正常肾组织沿肾小球基底膜呈连续&#65380; 线形分布&#65377;部分FSGS患者podocin的分布呈点状&#65380; 短线条状, 少数患者未见podocin沉积&#65377;(2)FSGS患者肾小球中podocin表达量(80.5±33.5)与对照正常肾组织(138.4±38.1)比较,显著减少(P=0.0211), 其中难治性FSGS(67.2±30.5)与正常肾组织的差异有统计学意义(P=0.0131); 非难治性FSGS患者(99.0±31.0)与正常肾组织的差异无统计学意义(P=0.1585)&#65377;(3)MCD(112.1±47.6)&#65380; MN(92.5±34.8)患者podocin的表达量亦降低,与正常肾组织比较,无统计学意义(P=0.4497, P=0.1570)&#65377;(4)不同病理类型各组NS患者肾小球中podocin表达量的差异均无统计学意义(P > 0.05)&#65377;结论 FSGS的NS患者肾小球中podocin的表达减少, 难治性FSGS患者尤为明显, 部分FSGS患者podocin分布发生改变&#65377;podocin的检测可能在FSGS激素疗效评价方面有一定价值&#65377;     

中药合剂对早期糖尿病肾病大鼠足细胞nephrin和podocin表达的影响

也页目的：观察中药合剂（ TCM mixture）对糖尿病肾病（ DKD）大鼠足细胞裂孔隔膜蛋白分子（ nephrin和podocin）表达的影响,探讨其对DKD的防治作用。方法：高脂高糖喂养8周联合小剂量STZ（30 mg/kg）建立T2DM大鼠模型,将DM模型大鼠随机分为中药合剂治疗组（B）及T2DM模型对照组（A）;另设正常对照组（NC）。各组于治疗前及干预后4、8、12周末检测大鼠血糖浓度及尿微量白蛋白;第12周末称大鼠体重（ BW）、肾重（ KW）,计算肾肥大指数（ KW/BW）,观察血清尿素氮（ BUN）、肌酐（ Scr）、总胆固醇（ TC）、三酰甘油（ TG）变化;光镜观察肾脏病理改变;应用免疫组化技术观察足细胞相关蛋白Nephrin、Podocin肾组织分布与表达;采用Western blot技术测定肾皮质Nephrin、Podocin 蛋白的表达。结果：应用中药合剂干预后与T2DM模型对照组相比,大鼠的尿微量白蛋白总量、肾肥大指数、血糖、尿素氮、血肌酐较T2DM模型组明显降低（ P〈0.05）,体重增加（P〈0.05）,病理改变减轻,nephrin和podocin蛋白表达增加（P〈0.05）。结论：中药合剂能提高nephrin和podocin的表达,促进足细胞损伤修复,减少尿微量白蛋白的排泄,减缓糖尿病肾病的进展。     

尿足细胞及其相关分子在肾小球疾病中的表达

目的：探讨尿液检测局灶节段性肾小球硬化足细胞损伤与其他足细胞病之间的特点和差异。方法：入选原发性局灶节段性肾小球硬化（KSGS）患者54例,膜性肾病（MN）23例及微小病变（MCD）12例,正常对照20例。免疫荧光法计数尿足细胞,荧光实时定量PCR法定量尿沉渣足细胞相关分子nephrin、podocin、synaptopodin mRNA的表达水平,Western印迹法检测尿液WilmsTumor1（WT1）蛋白水平,免疫荧光法检测肾脏组织podocalyxin的表达及分布。结果：（1）FSGS组、MN组、MCD组和对照组尿足细胞阳性率分别是63％、34．8％、33．3％和0,FSGS组与其余各组相比差异均有统计学意义（P〈0．05）。FSGS组足细胞脱落数目显著高于MCD组、MN组和对照组（P〈0．05）,伴足细胞尿FSGS患者与不伴足细胞尿FS—GS患者相比,24h尿蛋白和血清白蛋白（Alb）差异均有统计学意义（P〈0．05）。（2）FSGS组尿沉渣足细胞nephrin mRNA表达水平显著高于MCD和MN组（P〈0．05）;FSGS组尿沉渣足细胞podocinmRNA表达显著高于MCD组（P〈0．05）,与MN组相比有升高趋势但差异无统计学意义;尿沉渣足细胞synaptopodin mRNA表达各组间差异无统计学意义。尿沉渣足细胞nephrin、podocin．synaptopodin mRNA的表达与24h蛋白尿无相关性。（3）FSGS组尿WT1蛋白量显著高于MCD和MN组。部分足细胞阴性患者尿液检测到WT1分子。（4）FSC-S患者肾组织podocalyxin较对照组、MCD和MN有明显的节段缺失。结论：局灶节段性肾小球硬化病患者足细胞损伤严重,尿足细胞与FSGS疾病活动相关。尿沉渣足细胞nephrin mRNA表达可以把FSGS与MCD和MN区分开来,尿WT1蛋白可能是足细胞早期损伤指标。     

小儿肾小球疾病62例甲皱微循环观察

目的 :探讨肾小球疾病患儿的甲皱微循环变化。方法 :应用甲皱显微镜对 6 2例肾小球疾病患儿的甲皱微循环变化进行观察 ,并与 70例正常儿童比较。结果 :①肾小球疾病患儿甲皱微循环的各项积分值、总积分值与正常儿童比较 ,有非常显著差异 (P <0 .0 0 1) ;②急性肾小球肾炎与肾病综合征患儿甲皱微循环各项积分值无明显差异(P >0 .0 5 ) ,而总积分值有明显差异 (P <0 .0 5 ) ;③病情轻、重患儿甲皱微循环各项积分值、总积分值比较有非常显著差异 (P <0 .0 1) ;④治疗前后甲皱微循环各项积分值、总积分值比较 ,差异非常显著 (P <0 .0 1～ 0 .0 0 1)。结论 :肾小球疾病患儿存在不同程度的微循环障碍 ,且随病情进展 ,变化显著。肾病综合征患儿微循环障碍较急性肾小球肾炎患儿明显。应用 6 5 4- 2及活血化瘀中药治疗后 ,甲皱微循环障碍明显改善。提示开展甲皱微循环检查不仅有助于小儿肾小球疾病的判断与疾病预后的估计 ,而且可用以指导治疗。     

发性慢性肾小球疾病与低分子量尿蛋白的关系

目的：观察原发性慢性肾小球疾病患者尿蛋白分子量与肾小管间质损害及临床指标之间的关系,探讨不同尿蛋白组份在原发性慢性肾小球疾病发病机制中的作用。方法：用聚丙烯酰凝胶电泳（ SDS-PAGE）银染法检测50例同步行肾活检诊断明确的原发性慢性肾小球疾病患者尿蛋白分子量。结果：据SDS-PAGE银染法,尿蛋白可分为四组类型：小球性蛋白尿组,生理性蛋白尿组,混合性蛋白尿23 kd组,混合性蛋白尿10 kd组。混合性蛋白尿10 kd组较23 kd组肾小管间质损害严重,肾小管间质损害评分、24 h尿蛋白定量、血清肌酐（Scr）水平均升高（P〈0.05）。结论：SDS-PAGE分型10 kd组尿蛋白对判断原发性慢性肾小球疾病肾小管间质损害程度有临床意义,其作为无创性检测手段,可以作为判断肾功能恶化速度及预后的指标。     

尿足细胞阳性IgA肾病患者不同蛋白尿水平临床病理分析

目的：探讨尿足细胞阳性的IgA肾病患者不同蛋白尿水平的临床病理特点.方法：选取原发性IgA肾病尿足细胞阳性患者41例,收集患者临床病理资料,根据尿蛋白水平分成3组：组1（≤0.5 g/24 h）（n=9）,组2（〉0.5 g/24 h,〈1.0 g/24 h）（n=14）,组3（≥1.0 g/24 h）（n=18）,比较3组临床病理特点.结果：（1）临床特点：组1患者收缩压、eGFR、UA均较组3差异有统计学意义（P〈0.05）,且这些指标在三组间随蛋白尿水平呈现递进表现.组2和组3仅在收缩压、UA方面差异有统计学意义（P〈0.05）;（2）病理特点：组1在节段性肾小球病变比例及间质炎细胞浸润方面较组3轻,差异有统计学意义（P〈0.05）;组1在节段性肾小球病变比例及节段损伤积分方面较组2轻,差异有统计学意义（P〈0.05）;组2和组3两组病理改变差异无统计学意义（P〉0.05）.结论：尿足细胞阳性的IgA肾病患者中,尿蛋白水平仍然是肾脏病轻重的一个指标,与临床病理关系密切.