p38信号通路在脂多糖诱导的大鼠系膜细胞产生白细胞介素1？…

目的 探讨ｐ３８信号通路在肾小球系膜细胞促炎介质白细胞介素１（ＩＬ－１）β表达中的作用。方法 采用免疫沉淀法,免疫复合物蛋白激酶测定,Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ检测ｐ３８信号通路在脂多糖（ＬＰＳ）诱导的肾小球系膜细胞炎症反应中的活化程度,应用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）和ＥＬＩＳＡ糖（ＬＰＳ）诱导的肾小系膜细胞炎症反应中的活化程度,应用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）和ＥＬＩＳＡ     

P38信号通路在脂多糖诱导的大鼠系膜细胞产生白细胞介素1β中的作用

目的探讨p38信号通路在肾小球系膜细胞促炎介质白细胞介素l(IL-1)β表达中的作用.方法采用免疫沉淀法、免疫复合物蛋白激酶测定,Western blotting检测p38信号通路在脂多糖(LPS)诱导的肾小球系膜细胞炎症反应中的活化程度,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和ELISA观察p38信号通路抑制剂SB203580对肾小球系膜细胞促炎介质IL-lβ mRNA和蛋白质表达的影响.结果脂多糖刺激肾小球系膜细胞引起p38信号通路活化,p38信号通路抑制剂SB203580对肾小球系膜细胞促炎介质表达有显著抑制作用.结论 p38信号通路在大鼠系膜细胞炎症反应产生炎症介质IL-1β中可能起主要的作用.     

白细胞介素1β通过p38信号通路上调大鼠肾小球系膜细胞骨调素mRNA的表达

目的 探讨p38信号通路(1938MAPK)在白细胞介素1(IL-1)β介导的大鼠肾小球系膜细胞表达骨调素(OPN)中的作用。方法 应用Western印迹检测p38MAPK在IL-1β诱导的肾小球系膜细胞炎症反应中的活化程度。应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法观察p38MAPK特异性阻断剂SB203580对IL-1β诱导的系膜细胞促炎症介质OPNmRNA的影响。结果 IL-1β以时间和剂量依赖方式刺激系膜细胞引起p38MAPK的活化，并明显上调系膜细胞OPNmRNA的表达。p38MAPK特异性抑制剂SB203580以剂量依赖性方式显著抑制IL-1β诱导的OPNmRNA的表达。结论 p38MAPK在IL-16介导的肾小球系膜细胞上调表达黏附分子OPN中起重要作用。     

p38信号通路激活与肾小球硬化的研究进展

肾小球硬化是各种肾小球疾病发展的最终结局,是慢性。肾小球肾炎进展的主要原因。细胞内信号通路在肾小球硬化中的作用是目前研究的热点。MAPK（有丝分裂原激活的蛋白激酶）是调节细胞内一系列病理、生理功能改变的重要信号通路,p38MAPK通路在炎症、应激、细胞周期、凋亡等多种细胞生理／病理过程发挥着重要的作用,本文综述如下。     

基于p38MAPK信号通路分析咪达唑仑对腰椎间盘突出症模型大鼠疼痛的影响CSCD

目的:探究基于p38MAPK信号通路分析咪达唑仑对腰椎间盘突出症模型大鼠疼痛的影响。方法:选取50只SPF级别SD健康大鼠,雌雄各半,随机分为正常组,模型组,低、中、高剂量组,模型组和低、中、高剂量组先建立腰椎间盘突出症模型。正常组、模型组大鼠腹腔注射生理盐水,低、中、高剂量组大鼠腹腔注射咪达唑仑,分别按30、60、90 mg/kg给药。采用酶联免疫吸检测大鼠血清中白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)、β-内啡肽(β-endorphin,β-EP)、P物质(substance P,SP)、神经肽Y(neuropeptide Y,NPY)水平,采用Western blot检测各组大鼠组织中p38 MAPK,基质金属蛋白酶3(matrix metalloproteinase-3,MMP3)蛋白表达。结果:模型组大鼠TNF-α、IL-1β、β-EP水平较正常组高,5-HT水平低于正常组(P<0.05);低、中、高剂量组大鼠TNF-α、IL-1β、β-EP水平较模型组下降、5-HT水平升高(P<0.05)。模型组大鼠较正常组SP、NPY水平上升(P<0.05);低、中、高剂量组较模型组大鼠SP、NPY水平下降(P<0.05)。模型组较正常组大鼠p38 MAPK、MMP-3表达上升(P<0.05),低、中、高剂量较模型组大鼠p38 MAPK、MMP-3表达下降(P<0.05)。结论:咪达唑仑可以改善腰椎间盘突出症模型大鼠的免疫炎症反应,可能是通过p38MAPK信号通路调控来实现的。     

复方中药糖耐康对高糖诱导大鼠系膜细胞ERK信号途径的影响

目的：观察复方中药糖耐康对高糖诱导大鼠系膜细胞中胞外调节蛋白激酶通路相关蛋白表达的影响。方法：大鼠肾小球系膜细胞按1×105/孔接种24孔板,实验分为6组：正常葡萄糖组、高糖对照组、中药糖耐康高、中、低浓度干预组、西药吡格列酮组。每组设平行孔4孔,培养24h后检测指标。用RT-PCR法测定各组细胞cPLA mRNA表达,用蛋白质印迹杂交方法（Western Blot）检测p-ERK、PCK-α、c-fos蛋白的表达。结果：治疗组cPLA mRNA、p-ERK、PCK-α、c-fos蛋白表达的水平比模型组均有不同程度的降低（P〈0.01,P〈0.05）。结论：糖耐康对糖尿病肾病肾脏的保护作用,可能是糖耐康抑制了PKC的活化,阻止了DAG-PKC转导途径向通过ras依赖的ERK的传导,并阻止了转录因子c-fos的活化,使不通过ras途径激活ERK的PKC无法激活相关转录因子。     

活血化瘀消癥通络中药对糖尿病肾病的干预作用

目的:观察活血化瘀消癥通络中药时糖尿病肾病大鼠的干预作用.方法:应用46只健康雄性SD大鼠,按体重随机分为正常组10只,另36只一次性腹腔注射链脲佐茵素方法制备糖尿病肾病大鼠模型,随机分为模型组(Madd)、贝那普利组、中药组各12只.成模1周后毒日同体积灌胃给予相应药物,正常组及模型组灌喂等量蒸馏水,连续给药23周后处死动物.检测实验动物的24 h尿蛋白定量、糖化血红蛋白、胆固醇、三酰甘油、血尿素氮、血肌酐,HE、PAS染色及电镜现察肾组织结构变化,免疫组化现察Ⅳ型胶原(CoUagenⅣ,Col-Ⅳ)的表达.结果:与模型组相比,中药组24 h尿蛋白定量、血脂、血尿素氮、血肌酐及Col-Ⅳ的表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),肾组织病理损害显著减轻.结论:活血化瘀消癥通络中药能降低糖尿病肾病大鼠尿蛋白,改善脂质代谢,改善肾功能,减轻肾组织病理损害.降低糖尿病肾病大鼠肾组织Ⅳ型胶原合成.     

Smad2反义寡核苷酸抑制高糖培养大鼠系膜细胞细胞外基质的分泌

目的观察Smad2反义寡核苷酸(ODN)对高糖培养的系膜细胞分泌纤连蛋白(FN)、Ⅳ型胶原(ColⅣ)的影响,探讨Smad2在肾小球硬化中的作用,寻找延缓肾小球硬化的新方法。方法设计、合成Smad2起始密码子部位的正义、反义和随机ODN,用脂质体法将ODN瞬时转染大鼠系膜细胞,并进行高糖培养。观察Smad2mRNA及蛋白的表达及其对系膜细胞细胞外基质(ECM)分泌的影响。结果转染Smad2反ODN义的大鼠系膜细胞,其Smad2mRNA及蛋白表达均降低,与高糖组、正义组和随机组相比差异有统计学意义(P<0郾05),与正常对照组相比无统计学意义(P>0.05)。高糖组、反义组、正义组和随机组培养上清液中FN含量(ng/ml)分别为84.19±6.81、57.65±5.05、78.72±9.13、77.13±7.36;ColⅣ含量(ng/ml)分别为55.27±4.75、22.31±3.24、46.23±2.02、45.92±1.21。反义ODN组FN、ColⅣ的含量均减少,与高糖、正义、随机ODN组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论反义Smad2ODN可抑制高糖刺激引起的系膜细胞Smad2FN和Col的表达上调,该研究结果为延缓肾脏纤维化提供了新的思路和治疗途径。     

p38信号通路对腹膜间皮细胞p27kip1和纤连蛋白的影响

目的 探讨p38有丝分裂素激活蛋白激酶(MAPK)对高糖诱导的人腹膜问皮细胞(HPMC)p27^kip1的表达和纤连蛋白(FN)分泌的影响。方法 同步化生长融合的HPMC在有或无p38 MAPK抑制剂SB203580的条件下和不同浓度的葡萄糖共同孵育。采用Bradford法测定细胞内总蛋白量。采用逆转录．聚合酶链反应(RT．PCR)方法检测p27^kip1 mRNA的表达。p27^kip1和p38 MAPK蛋白用Western印迹法测定。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定细胞培养液FN水平。结果 高糖刺激HPMC时细胞内总蛋白量、p27^kip1蛋白及细胞培养液里的FN蛋白水平明显升高。抑制p38 MAPK活性可有效阻断高糖介导的腹膜间皮细胞p27^kip1的表达及FN的分泌。结论 高糖通过p38 MAPK的活化可上调HPMC p27^kip1的表达和FN的分泌。     

艾塞那肽通过p38MAPK通路对成骨细胞促增殖和抗凋亡的作用研究

目的探讨艾塞那肽通过p38MAPK通路对成骨细胞促增殖和抗凋亡的作用机制。方法将小鼠成骨细胞MC3T3-E1Subclone 14分为对照组、艾塞那肽组、棕榈酸钠组、棕榈酸钠组+艾塞那肽组,分别使用相应试剂培养48 h。通过CCK-8和流式细胞术检测细胞活力与凋亡。通过Western blot检测细胞中P38MAPK、Cyclin D1、Caspase-3的蛋白水平。结果艾塞那肽对正常细胞活力无显著影响(P0.05),棕榈酸钠组的细胞活力显著低于对照组(P0.01),艾塞那肽+棕榈酸钠组的细胞活力显著高于棕榈酸钠组(P0.01);艾塞那肽对正常细胞凋亡无显著影响(P0.05),棕榈酸钠组的细胞凋亡率显著高于对照组(P0.01),艾塞那肽+棕榈酸钠组的细胞凋亡率显著低于棕榈酸钠组(P0.01);艾塞那肽对正常细胞中P38MAPK、Cyclin D1和Caspase-3蛋白水平无明显影响(P0.05),棕榈酸钠组的P38MAPK和Caspase-3显著高于对照组而Cyclin D1显著低于对照组(P0.01),艾塞那肽+棕榈酸钠组的P38MAPK和Caspase-3显著低于棕榈酸钠组而Cyclin D1显著高于棕榈酸钠组(P0.01)。结论艾塞那肽可以通过p38MAPK通路,减少Caspase-3蛋白并上调Cyclin D1蛋白的表达,抑制高脂环境下成骨细胞的凋亡并提高细胞活力。     

血管紧张素Ⅱ对NRK一52E细胞p38丝裂原激活蛋白激酶信号通路的影响

血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）可能通过核因子（NF）-κB途径促进肾小管上皮细胞分泌单核细胞趋化蛋白1（MCP-1），加重炎症反应，促进肾脏纤维化。     

复方桐叶烧伤油促进糖尿病足皮肤创面愈合及通过p38 MAPK信号通路调节糖尿病足大鼠皮肤组织AQP3表达

探讨复方桐叶烧伤油通过p38信号通路调节激酶（MAPK）信号通路对糖尿病足大鼠 皮肤组织水通道蛋白3表达的影响。方法 选取60只SD大鼠随机分为正常对照组（A组）、糖尿病足 溃疡组（B组）、复方桐叶烧伤油组（C组）、复方桐叶烧伤油+S B 2 0 3 5 8 0组（D组），各15只。 B组、C组、D组45只大鼠腹腔注射链脲佐菌素诱导糖尿病后构建糖尿病足溃疡模型；比较各组研究指 标。结果 C组创面愈合率显著高于B组，D组创面愈合率显著低于C组（P ＜0.001）；B组、C组、D组 组织中TNF -α、I L - 6、CRP水平均显著高于A组，C组组织中TNF -α、I L - 6、CRP水平均显 著低于B组，D组组织中TNF-α、IL-6、CRP水平显著高于C组（P ＜0.001）；B组、D组组织中 APQ3、p38蛋白表达量均低于A组（P ＜0.001）；C组组织中APQ3表达量低于A组（P ＜0.001），而 p38蛋白表达量显著高于B组，D组APQ3、p38蛋白表达量均极显著低于C组（P ＜0.001）。结论 复方 桐叶烧伤油促进糖尿病足皮肤创面愈合，通过激活p38 MAPK信号通路磷酸化上调糖尿病足大鼠皮肤组 织中APQ3表达。     

超分子水杨酸对兔耳痤疮模型p38MAPK/NF-κB信号通路的影响

目的：探究超分子水杨酸对兔耳痤疮模型p38MAPK/NF-κB信号通路的影响机制。方法：将30只实验兔随机分成正常对照组、2%超分子水杨酸（Salicylic acid,SA）组、30%SA组、夫西地酸组、模型对照组,每组6只,并予以相应外用药物干预,连续4周,并分别于用药2周后、用药4周后检测p38MAPK、NF-κB、IL-1β、IL-8蛋白的表达。结果：结果显示,随着用药时间的延长,各组的p38MAPK、NF-κB、IL-1β、IL-8均呈下降趋势。用药前,各组间p38MAPK、NF-κB、IL-1β、IL-8蛋白表达均差异无统计学意义（P>0.05）。用药2周后,2%SA组、30%SA组、夫西地酸组p38MAPK、NF-κB、IL-1β、IL-8低于模型对照组（P<0.001）;三个用药组之间p38MAPK、NF-κB、IL-1β两两比较差异无统计学意义（P>0.05）;2%SA组IL-8低于30%SA组、夫西地酸组（均P<0.05）;30%SA组与夫西地酸组IL-8差异无统计学意义（P>0.05）。用药4周后,三个用药组p38MAPK、NF-κB...     

p38丝裂原活化蛋白激酶介导抵抗素调节高糖刺激下人肾小球系膜细胞增殖的作用

目的 观察巨噬细胞因子抵抗素过度表达对高糖刺激作用下人肾小球系膜细胞p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路的影响，探讨抵抗素调控肾小球系膜细胞增殖及细胞外基质积聚的作用机制。 方法 通过转染携带野生型抵抗素基因的腺病毒载体 （Ad-resistin）构建过度表达抵抗素的人巨噬细胞模型，并与高糖刺激后的人肾小球系膜细胞共培养。3H-氚标胸腺嘧啶掺入法检测肾小球系膜细胞增殖。免疫细胞化学法检测系膜细胞激活蛋白1（AP-1）的表达。免疫荧光检测细胞外基质层粘连蛋白（LN）的表达。Western印迹检测系膜细胞内p38MAPK、转化生长因子(TGF)β1的表达并测定Smad2的磷酸化水平。 结果 Ad-resistin转染后，人巨噬细胞抵抗素 mRNA水平及蛋白表达均显著升高（P < 0.01）。与对照组比较，与过度表达抵抗素的人巨噬细胞共培养后，人肾小球系膜细胞p38MAPK、TGF-β1的蛋白表达显著增强；细胞内Smad2的磷酸化水平显著升高（P < 0.05）；肾小球系膜细胞出现明显的增殖（P < 0.01）；细胞外基质的合成增多（P < 0.05）。 结论 巨噬细胞因子抵抗素的过度表达可能通过p38MAPK信号通路，促进高糖刺激作用下肾小球系膜细胞的增殖及细胞外基质的异常积聚。     

斯伐他汀对糖尿病肾病大鼠肾小球系膜细胞p38信号通路的影响

目的研究糖尿病肾病大鼠肾小球系膜细胞p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）的表达及斯伐他汀对其的影响。方法分别以高糖、糖基化终产物（AGE）及过氧化氢孵育糖尿病大鼠肾小球系膜细胞（RMC），Western印迹法检测RMC的p38MAPK和TGF—β蛋白表达，p38MAPK特异性抑制剂SB203580及斯伐他汀预处理对其影响。结果高糖、AGE及过氧化氢均可单独激活p38MAPK，增加RMC的磷酸化（P）p38MAPK和TGF—β的蛋白表达；SB203580显著抑制TGF—β的蛋白表达（P〈0．05）；斯伐他汀抑制p38MAPK的活化并减少TGF—β的蛋白表达（P〈0．05）。结论p38MAPK可能是糖尿病肾病发生的始动信号之一。斯伐他汀可能通过抑制p38MAPK磷酸化而减少TGF—β的蛋白表达。     

缬沙坦对高糖上调系膜细胞细胞外调节蛋白激酶表达的影响

目的观察在高糖刺激下，系膜细胞细胞外调节蛋白激酶（ERKI／2）的活性变化以及缬沙坦对其影响，探讨缬沙坦保护肾脏作用的可能机制。方法原代培养大鼠肾脏系膜细胞，随机分为4组：低糖组（NG，d-葡萄糖5．5mmol／L）、高糖组（HG，d-葡萄糖30mmol／L）、甘露醇组（MG，d-葡萄糖5．5mmol／L＋甘露醇24．5mmol／L）和缬沙坦组（HG＋Val，d-葡萄糖30mmol／L＋缬沙坦10μmol／L）。用免疫细胞化学法及Western印迹法对系膜细胞中磷酸化ERK1／2（p-ERK1／2）的表达进行定位及半定量分析；RT—PCR法检测细胞中TGF-β1 mRNA的表达；放射免疫法测定各组细胞上清中Ⅳ型胶原的含量。结果高糖组系膜细胞中P-ERK1／2蛋白的表达较低糖组明显增高，并由胞质向胞核内转移，呈时间依赖方式（P〈0．01）；TGF-β1 mRNA及细胞上清液中Ⅳ型胶原水平均高于低糖组（P〈0．01）。而缬沙坦组上述指标均较同时相点高糖组显著降低，差异有统计学意义（P〈0．01）。甘露醇组与低糖组各指标间差异均无统计学意义。结论高糖可显著激活系膜细胞ERK信号通路，缬沙坦可抑制高糖的激活作用。     

灵芝对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞增殖及细胞周期的影响

目的：探讨灵芝对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞（MCs）增殖及细胞周期的影响。方法：用不同浓度的灵芝作用于高糖培养的MCs,采用MTT法观察其增殖情况,并通过流式细胞仪检测其细胞周期变化,MODIFIT LT软件分析。结果：（1）高糖组与正常组比较有统计学差异（P〈0.05）;其余各组与正常组比较无统计学差异（P〉0.05）,与高糖组比较有统计学差异（P〈0.05）,48h与24h比较有统计学差异（P〈0.05）,72h与48h、24h比较有统计学差异（P〈0.05）。苯那普利组与灵芝组比较无统计学差异（P〉0.05）。（2）培养48h时,高糖组相对于正常对照组G0-G1期细胞比例降低,S期细胞比例增高,细胞凋亡受到抑制（P〈0.05）;而不同浓度的灵芝、苯那普利均减低了高糖对系膜细胞的这种作用,使G0-G1期细胞比例增高,S期细胞数减少,促进过度增殖的系膜细胞凋亡（P〈0.05）。结论：灵芝通过抑制高糖诱导的MCs增殖并促使其凋亡,发挥对糖尿病肾病的保护作用。     

保肾通络方对KK-Ay小鼠及高糖培养下足细胞凋亡及p53通路的作用研究

目的:探讨保肾通络方对KK-Ay小鼠及高糖培养下足细胞凋亡及p53通路的影响。方法:将KK-Ay小鼠高脂饲料喂养建立糖尿病模型,造模成功后随机分为模型组(10只)与保肾通络方组(10只),另设10只C57BL/6J小鼠作为对照组;根据培养条件不同将体外小鼠肾小球足细胞(MPC5)分为正常对照组、高糖组、保肾通络方含药血清组。测定小鼠24 h尿蛋白定量(24 h-UTP)水平并进行肾组织病理学检查,CCK-8法检测足细胞活力,Western blot检测足细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、cleaved-caspase3及p53、p-p53的表达,TUNEL染色观察各组足细胞凋亡情况。结果:与对照组相比,模型组小鼠24 h-UTP显著升高(P<0.01),肾小球系膜细胞增生,细胞外基质增多,肾小球凋亡细胞比例及cleaved-caspase3蛋白表达增加(P<0.05),肾组织抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低,促凋亡蛋白Bax表达增加,p53磷酸化水平增加(P<0.01);保肾通络方干预使KK-Ay小鼠24 h-UTP显著降低(P<0.01),肾脏病理改善,肾小球凋...     

通过p38MAPK信号通路探讨仙灵骨葆胶囊对MC3T3-E1成骨分化的影响

目的 探讨仙灵骨葆胶囊含药血清对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞（MC3T3-E1）增殖分化的影响及与p38MAPK信号通路的关系。方法 用仙灵骨葆胶囊含药血清干预MC3T3-E1,CCK8法筛选最佳干预时间及浓度,试剂盒检测各组细胞ALP活性。将细胞分为A、B、C、D 4组,分别加入10%含药血清、10%空白血清、10%含药血清+SB203580、10%空白血清+SB203580,利用免疫印迹法（Western blot）检测p38丝裂原活化蛋白激酶（p38）、磷酸化p38（p-p38）、成骨相关转录因子2（Runx2）、骨形态发生蛋白2（BMP-2）的蛋白表达量,荧光定量PCR检测p38、Runx2和BMP-2 mRNA的表达水平。结果 与空白血清组相比,不同浓度的仙灵骨葆胶囊含药血清均能促进MC3T3-E1的增殖分化,提高ALP的活性,其中10%含药血清干预36 h的作用最为明显（P＜0.05）;与B组比较,A组p38、p-p38、Runx2、BMP-2蛋白及p38、Runx2、BMP-2 mRNA的表达明显增高（P＜0.05）;加入信号通路阻断剂SB203580后,C组与D组上述指标的表达明显降低（P＜0.05）;与C组相比,D组p38、p-p38、Runx2、BMP-2蛋白及p38、Runx2、BMP-2 mRNA表达更低（P＜0.05）。结论 仙灵骨葆胶囊含药血清能促进MC3T3-E1的分化生长,其作用机制可能与激活p38MAPK信号通路、上调成骨相关因子Runx2、BMP-2的表达有关。     

褪黑素对高糖条件下培养的大鼠系膜细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响

糖尿病肾病（DN）晚期肾脏细胞凋亡与肾功能恶化程度成正比，抑制凋亡则可延缓肾小球硬化。褪黑素（MT）是松果体分泌的神经内分泌激素，肾脏是其靶器官之一。研究显示MT对DN肾脏有明显的保护作用，但MT对DN晚期肾小球系膜细胞（MC）凋亡的影响尚未检索到有关报道。本试验选用大鼠MC为研究对象，来观察MT对高糖诱导的MC凋亡的影响。