重组人Shiga-EGF工程菌发酵工艺研究

目的研究表达重组人Shiga EGF(rhShiga EGF)融合蛋白工程菌的发酵条件。方法通过摇瓶试验优选适合工程菌生长、表达的培养基配方、pH及以乳糖替代IPTG作诱导剂等 ,并在 5L发酵罐上进行试验。 结果采用A3配方的培养基 ,在pH 6 .8条件下 ,以乳糖诱导表达 5h ,5L罐发酵工程菌菌密度 (A60 0nm)达到 15 ,菌体湿重 2 7g/L ,目的蛋白表达量约占菌体总蛋白的 15 %～ 2 0 %。结论确立以乳糖为诱导剂的发酵条件能降低目的蛋白制备成本     

重组人肝细胞生长因子真核表达载体的构建

目的构建重组人肝细胞生长因子(rhHGF)的真核表达载体,为后续毕赤酵母蛋白高效表达提供基础。方法根据酵母表达偏爱密码子合成rhHGFcDNA全长序列,将rhHGF和pGAPZαA质粒双酶切后行连接转化,构建穿梭载体pGAPZαA-rhHGF,并鉴定。结果重组真核表达载体pGAPZA-rhHGF经限制性内切酶分析,与理论值相符,测序结果未见碱基变异。结论成功构建了pGAPZαA-rhHGF真核表达载体,为后续毕赤酵母高效表达rhHGF蛋白提供了可行性。     

大肠杆菌表达重组人粒细胞集落刺激因子工程菌DH5α的发酵工艺研究

研究大肠杆菌表达重组人粒细胞集落刺激;因子（ｒｈＧ－ＣＳＦ）工程菌ＤＨ５α的发酵工艺。方法：采用发酵罐发酵,对影响工程菌生长和目标蛋白的表达条件如：工程菌发酵的培养基配方、ｐＨ值、诱导时间、分批补加营养物质等进行了优化。结果：根据优化的条件,２０Ｌ罐发酵工程菌,菌体收得量可达湿重１５．６ｇ／Ｌ。目标蛋白表达量约占菌体总蛋白的３０％。结论：此发酵工艺可以提高ｒｈＧ－ＣＳＦ工程菌菌体的得率和目标蛋白的表达。     

重组人Cu·Zn-SOD工程菌发酵工艺的研究

人Cu.Zn-SOD是一种重要的氧自由基清除剂,传统工艺是从动物血中提取得到,受原料来源的限制.从人胎肝中提取了hCu.Zn-SODcDNA构建了基因工程菌,同时对其表达产物的条件进行研究,着重探索了接种量、接种时机、pH、溶氧等因素,并优化了发酵条件.通过在5L全自动发酵罐上研究重组菌BL21的培养条件,确定了最适条件为:接种量2%,溶氧水平≥40%,初始pH6.5,培养过程中用3mol/LHCl调节pH在7.5.在此条件下,发酵最高水平达到酶活950U/ml,比活1400U/mg.     

新型重组人肿瘤坏死因子工程菌的发酵工艺研究

目的研究并建立新型重组人肿瘤坏死因子 (nrhTNF)的发酵工艺。方法通过探讨nrhTNF工程菌在试管和锥形摇瓶中的生长和表达规律 ,筛选并确定其最适宿主菌、最佳培养基及最佳诱导表达条件 ,然后在 5L自控发酵罐中进行分批补料培养。结果nrhTNF工程菌在 5L发酵罐中培养至终密度A60 0nm30左右时 ,目的蛋白的表达最高 ,保持在菌体总蛋白的 5 0 %附近 ,发酵时间为 12～ 13h。结论确定了周期短、产率高且稳定可靠的发酵工艺 ,为nrhTNF的工业化生产奠定了基础。     

表达GST-NK4工程菌的发酵工艺研究

目的建立重组GST NK4融合基因工程菌的发酵工艺。方法采用摇瓶、发酵罐发酵,对影响工程菌生长和表达的条件如pH值、诱导时间及诱导剂浓度等进行优化。结果根据优化的条件,15L发酵罐发酵11h ,菌体收获量可达到湿重(2 4 .6±0 .98)g/L ,目的蛋白质的表达量占菌体总蛋白质的5 0 %左右。结论确定了周期短、产率高且稳定可靠的发酵工艺     

重组人肝增强因子工程菌JM109的发酵工艺研究

目的：研究表达重组人肝增强团子（hALR）工程菌JM109的发酵工艺。方法：采用发酵罐发酵,优化工程菌发酵的培养基配方、pH值、诱导表达时间、补料方式等。结果：在pH6．9条件下,培养6h后诱导表达5h,同时补科,5L罐发酵工程菌,菌体收得量可达湿重33．0g／L。目标蛋白表达量约占菌体总蛋白的31．3％。结论：此发酵工艺可以较好地提高ALR工程菌菌体得率和目标蛋白表达量。     

重组人SOD工程菌发酵表达条件的优化

采用正交试验优化重组人超氧化物歧化酶工程菌的LB培养基,得到培养基最佳配比(g/L):蛋白胨12,酵母膏5,葡萄糖1和氯化钠10.以此为基础优化基因工程菌发酵条件,确定培养基初始pH 6.5～7.5,装液量20％,菌体密度(D600) 0.55～1.4,42℃诱导表达2～3h,目的蛋白相对表达量由优化前的25％提高至4...     

重组人肝细胞生长因子α的纯化与活性测定

目的纯化重组人肝细胞生长因子α(rhHGFα)包涵体,复性并测定其活性。方法大肠杆菌中表达的rhHGF琢以包涵体形式存在,表达量约占菌体总蛋白的25%。离心分离包涵体,用8mol/L尿素溶解,梯度稀释复性。经SephadexG75凝胶过滤和POROSHQ阴离子交换纯化,噻唑蓝法(MTT)测定活性。结果rhHGF琢纯度达到90%以上,其刺激肝细胞生长的活性达到rhHGF标准品的80%。结论建立了纯化rhHGF琢的技术路线,rhHGF琢具有刺激原代培养大鼠肝细胞生长的作用。     

大肠杆菌表达重组人粒细胞集落刺激因子工程菌DH5α的发酵工？…

目的 研究大肠杆菌表达重组人粒细胞集落刺激因子（ｒｈＧ－ＣＳＦ）工程菌ＤＨ５α的发酵工艺,方法：采用发酵罐发酵,对影响工程菌生长和目标蛋白的表达条件如;工程菌发酵的培养基配方,ｐＨ值,诱导时间,分批补加营养物质等进行了优化,结果：根据优化的条件,２０Ｌ罐发酵工程菌,菌体收得量可达湿重１５．６ｇ／Ｌ目标蛋白表达量约占菌体总蛋白的３０％,结论：此发酵工艺可以提高ｒｈＧ－ＣＳＦ工程菌菌体的得率和目标蛋白     

重组人肝细胞生长因子-β链的高效表达及包涵体纯化研究

目的　构建重组人肝细胞生长因子 - β链 (rh HGF- β)的表达体系。筛选高效表达工程菌株 ,分离纯化 rh HGF- β。方法　用工程菌诱导培养技术筛选 rh HGF- β的高效表达菌株。从诱导起始时间、诱导时间、温度、p H值、培养基组分等方面优化 rh HGF-β的表达体系。进一步对 rh HGF-β进行粗纯化 ,采用超声波破菌 ,溶菌酶破菌 ,高速离心反复洗涤获得包涵体。采用凝胶过滤层析纯化 rh HGF-β。结果　经十二烷基硫酸钠 -多丙烯酰胺冻胶电泳 (SDS- PAGE)及扫描分析目的蛋白的表达量达 3 0 % ,经纯化后可获得纯度在 90 %以上的 rh HGF-β。结论　建立了高效稳定的 rh HGF- β表达体系 ,获得实验室水平 rh HGF- β的分离纯化工艺方案     

重组胰岛素样生长因子—I基因工程菌的发酵研究

目的探讨胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)基因工程菌的摇瓶及发酵罐培养的一些发酵参数、诱导阶段的补料基质及诱导剂浓度对IGF-Ⅰ表达的影响.方法通过摇瓶培养和分批及补料分批发酵培养进行研究.结果在摇床转速为150、200、250 r/min条件下测得以葡萄糖为基准的Y△x/△ s分别为0.203、0.27、0.33干细胞产量分别为0.54、0.765、1.0g/L.平均生长速率分别为0.034、0.048、0.066 g/(L.h).细胞对数生长期分别为6、7 5、10h发酵罐上生物量由分批发酵的18(A600nm)提高到补料分批发酵的35(A600nm),表达量占细胞可溶性总蛋白质的10%.结论后期供纯氧与补料能延长对数生长期,提高乳糖浓度和诱导前用甘油作碳源有利于IGF-Ⅰ表达     

重组人血管内皮生长因子(hVEGF121)工程菌的发酵及表达产物的分离纯化

该研究优化了重组人血管内皮生长因子hVEGF121工程菌的发酵条件，考察乳糖诱导浓度和时间对目的蛋白表达量的影响。经乳糖诱导，目的蛋白以包涵体形式存在。通过菌体裂解、包涵体洗涤、裂解等初步纯化后，再经过DEAECellulose离子交换柱纯化和复性，经SDS-PAGE分析显示得到电泳纯的hVEGF121。     

重组人胰岛素样生长因子-Ⅰ工程菌高密度发酵工艺优化

目的优化表达重组人胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)工程菌的高密度发酵条件。方法考察培养基以及诱导时机、诱导剂量和诱导时间对蛋白表达的影响;用自控发酵罐进行分批补料培养实验,确定优化工艺条件。结果以2×YT+0.5%葡萄糖为发酵培养基,经0.8 mmol/L IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)诱导5 h,通过pH-stat反馈补料方式实现工程菌高密度发酵与目的蛋白高效表达,每1 L发酵液收获干菌体50.1 g,IGF-Ⅰ含量达5.25 g/L。结论建立了IGF-Ⅰ工程菌优化的高密度发酵工艺,为IGF-Ⅰ的下游纯化和工业化生产奠定了基础。     

重组胰岛素样生长因子-Ⅰ基因工程菌的发酵研究

目的探讨胰岛素样生长因子 Ⅰ (IGF Ⅰ )基因工程菌的摇瓶及发酵罐培养的一些发酵参数、诱导阶段的补料基质及诱导剂浓度对IGF Ⅰ表达的影响。方法通过摇瓶培养和分批及补料分批发酵培养进行研究。结果在摇床转速为 15 0、2 0 0、2 5 0r min条件下测得以葡萄糖为基准的Y△x △s分别为 0 .2 0 3、0 .2 7、0 .33。干细胞产量分别为 0 .5 4、0 .76 5、1.0 5 4g L。平均生长速率分别为 0 .0 34、0 .0 4 8、0 .0 6 6g (L·h)。细胞对数生长期分别为 6、7.5、10h。发酵罐上生物量由分批发酵的 18(A6 0 0nm)提高到补料分批发酵的 35 (A6 0 0nm) ,表达量占细胞可溶性总蛋白质的10 %。结论后期供纯氧与补料能延长对数生长期 ,提高乳糖浓度和诱导前用甘油作碳源有利于IGF Ⅰ表达     

重组人胸腺肽α1工程菌的高密度发酵

为实现重组人胸腺肽α１工程菌Ｅ．ｃｏｌｉ Ｔｏｐ１０／ｐＴｈｉｏ Ｈｉｓ－Ｔα的高密度高表达发酵,首先进行了培养条件的摸索,确定了该工程菌的最佳培养条件、诱导剂ＩＰＴＧ的浓度、诱导起始和结束时间,然后用５Ｌ自控发酵罐进行分批补料培养,发酵中采用分阶段限制性流加氮、碳源,保持溶解氧在３５％左右,结果经３ｍｍｏｌ／ＬＩＰＴＧ诱导５ｈ,３批重复发酵,最终菌体密度均达到６０Ａ６００以上（相当于干菌２５．６ｇ／Ｌ）,保持了并超过了该重组蛋白在试管和摇瓶中的表达量,融合蛋白Ｔｈｉｏ Ｈｉｓ－Ｔα的表达占菌体总蛋白的４２．４％左右,含量达到了５．７ｇ／Ｌ,相当于胸腺肽α１ ２．４ｇ／Ｌ,为胸腺肽α１的下游纯化和工业化生产奠定了基础。     

重组人白细胞介素-18工程菌的培养及高密度发酵

目的优化重组人白细胞介素-18的发酵工艺,以获得工程菌的高密度发酵和目的蛋白的高表达.方法在10L发酵罐中,研究重组人白细胞介素-18工程菌在不同的pH值、溶氧和诱导时间对工程菌生长和目的蛋白表达的影响.结果根据优化条件,连续三批重复发酵10L工程菌,最终菌体密度均达A600nm=28,菌体获得量均可达湿重50g?L-1以上.目的蛋白表达量均为40%以上.结论优化了重组人白细胞介素-18基因工程菌的发酵和表达条件,为规模化生产奠定了基础.     

肝细胞生长因子研究概况

肝细胞生长因子研究概况０５００２１河北省医学科学院符云峰肝脏具有很强的再生能力。肝脏被部分切除或受到药物（如四氯化碳）毒害后，剩余的或未受损害的肝细胞可以分裂增殖，使肝组织再生恢复到原来的体积。但肝细胞再生的机理并未十分明了。为探索细胞分裂周期的调控...     

重组人肝细胞生长因子β链体外生物学活性的测定

目的　建立一种稳定灵敏的方法用于检测重组人肝细胞生长因子β链 (rhHGF β)对原代培养成年大鼠肝细胞的增生作用。方法　利用噻唑蓝 (MTT)比色方法在多种实验条件下对rhHGF β进行生物学活性检测。结果　对于体外原代培养成年大鼠肝细胞 ,rhHGF β可刺激肝细胞的增生 ,且有剂量依赖效应。 结论　确定了原代培养肝细胞检测rhHGF β生物活性的最佳条件方案