抗内皮细胞抗体检测方法

抗内皮细胞抗体检测方法周虹，胡伟新自１９７１年Ｌｉｎｄｑｕｉｒｔ和Ｏｓｔｅｒｌａｕｄ首次报道在某些炎性疾病中发现抗内皮细胞抗体（ＡＥＣＡ）以来，人们已发现多种疾病中存在ＡＥＣＡ，包括急性排异反应、血栓性血小板紫癜、Ｗａｇｎｅｒ肉芽肿、微型多动脉炎等。...     

抗内皮细胞抗体临床意义及致病机制

抗内皮细胞抗体 (ａｎｔｉ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌａｎｔｉｂｏｄｙ ,ＡＥＣＡ)被发现已有 2 0余年的历史 ,其抗原是位于内皮细胞表面的一簇异质性蛋白 ,该抗体可出现在与血管炎有关的多种自身免疫病当中 ,尤其是系统性血管炎 (ｓｙｓｔｅｍｉｃｖａｓｃｕｌｉｔｉｓ)和系统性红斑狼疮 (ｓｙｓｔｅｍｉｃｌｕｐｕｓｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ ,ＳＬＥ)等 ,为血管受损和血管炎的标记 ,在发病过程中与疾病的活动有很大的关系。然而有关抗内皮细胞抗体的认识还不甚清楚。本文就其临床意义、致病机制及抗体的检测方法作一简要回顾。1…     

膜突蛋白及其抗体对人肺微血管内皮细胞损伤机制的研究

目的 通过抗膜突蛋白单克隆抗体(MmAb)介导人肺微血管内皮细胞(HPMEC)损伤模型,探讨膜突蛋白及其抗体在肺血管损伤和肺动脉高压(PAH)形成过程中的作用.方法 以磷酸盐缓冲液(PBS)作为对照组,肿瘤坏死因子(TNF)-α、MmAb及TN-α+MmAb作为实验组分别作用于HPMEC,在不同时相应用免疫印记法检测细胞上清液中膜突蛋白表达量,流式细胞仪对细胞表面膜突蛋白抗原表达量和细胞凋亡进行检测,同时应用激光共聚焦显微镜和电子显微镜评判HPMEC形态和功能的变化,用独立样本t检验和单因素方差分析进行统计学处理.结果 ①TNF-α作用后HPMEC上清液中和细胞膜表面的膜突蛋白表达量均较对照组显著增加(P<0.01);②TNF-α+MmAb组致HPMEC凋亡率显著高于TNF-α组(31.4%与14.1%,P<0.01),亦显著高于MmAb组(31.4%与3.89%,P<0.01);③TNF-α+MmAb共同作用在激光共聚焦显微镜下可见HPMEC骨架结构F-actin功能丧失、逐渐出现核浓聚和细胞凋亡,在电镜下可见HPMEC微绒毛明显减少,近乎消失.结论 HPMEC有膜突蛋白表达,在TNF-α作用下细胞外可检测到膜突蛋白,MmAb可以对HPMEC造成损伤,主要表现为对数生长期的细胞出现骨架蛋白结构改变和早期凋亡.     

冠心病人血清中抗血管内皮细胞抗体水平的观察

本研究应用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）夹心法，以人脐静脉内皮细胞为抗原，检测２６名冠心病人血清中抗血管内皮细胞抗体的水平，同时以２５名正常人作对照。结果表明，冠心病人血清中抗血管内皮细胞抗体水平显著高于正常人组（Ｐ＜０．００１）；抗体水平的高低与临床心电图的改变有一定相应关系。提示冠心病人体内有异常的免疫应答存在，抗血管内皮细胞抗体可能是冠心病的免疫学发病机理内容的一部分。临床对该病的防治工作中，除考虑脂质代谢紊乱的纠正外，也应注意对病人免疫功能的调整。     

白塞病患者中抗内皮细胞抗体的研究

目的研究白塞病患者抗内皮细胞抗体(AECA)的阳性率,并分析其临床意义。方法以固定的人脐静脉内皮细胞为抗原,细胞ELISA法检测59例白塞病患者中AECA的阳性率,分析其AECA与临床生化指标的相关性。同时检测70例其他原发性系统性血管炎(包括大动脉炎28例,韦格纳肉芽肿20例,结节性多动脉炎8例,显微镜下多血管炎9例,变应性肉芽肿血管炎5例)、57例系统性红斑狼疮(SLE)、25例类风湿关节炎和85例正常对照者中AECA阳性率。结果以人脐静脉内皮细胞为底物,细胞ELISA法检测的白塞病患者的AECA阳性率为47.5%(28/59),与类风湿关节炎患者(4.0%)和正常人组(1.2%)相比,白塞病、其他系统性血管炎(68.6%)和SLE(45.7%)患者AECA阳性率明显增高(P<0.01)。白塞病患者中,AECA阳性病人具有皮肤针刺反应阳性率明显增多(P<0.05)。随诊的6例白塞病患者治疗前后AECA滴度和血沉的变化,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论白塞病患者有较高的AECA阳性率,且此抗体与白塞病的临床活动度明显相关,可作为观察其病情活动的指标之一。但其他原发性系统性血管炎和SLE患者亦有一定的AECA阳性率。     

抗内皮细胞抗体、细胞间黏附分子-1在SLE发病中的作用

对39例系统性红斑狼疮(SLE)活动期患者、25例SLE缓解期患者及25例健康对照者的血清IgG型抗内皮细胞抗体(IgG-AECA)阳性率、可溶性细胞间黏附分子-1(SICAM-1)水平进行检测.结果IgG-AECA的阳性率在SLE活动期组、SLE缓解期组及健康对照组间有显著差异(P均＜0.05);三组血清SICAM-1水平亦有显著差异(P均＜0.05).认为IgG-AECA及sICAM-1与SLE的发病及病情活动有相关性,可作为临床监测病情变化的指标.     

系统性血管炎抗内皮细胞抗体与抗中性粒细胞胞质抗体的相关性初探

目的以来源于大小血管内皮细胞的两种永生细胞株为底物,检测系统性血管炎血清中抗内皮细胞抗体(AECA),分析其与抗中性粒细胞胞质抗体(ANCA)的相关性。方法细胞酶联免疫吸附试验(Cyto-ELISA)法检测血清中AECA;间接免疫荧光法(IIF)及抗抗体结合内皮细胞表面的蛋白酶3(PR3)、抗MPO-ELISA检测血清中ANCA;IIF及抗PR3、抗MPO-ELISA检测细胞株中PR3及MPO;反转录—聚合酶链反应(RT-PCR)法检测细胞株中PR3及MPOmRNA。结果AECAEA(EA.hy926为底物所测AECA)阳性率33.6%(41/122),AECAHMEC(HMEC-1为底物所测AECA)37.7%(46/122),ANCA35.3%(43/122),AECAEA或AECAHMEC与ANCA串联诊断系统性血管炎敏感性分别为59.8%(73/122)或60.7%(74/122)。AECAEA与ANCA,AECAHMEC与ANCA分别行配对字2检验,差异均无显著性(P>0.05),符合率仅分别为49.2%及51.6%。EA.hy926和HMEC-1中蛋白水平及mRNA水平均无PR3和MPO的表达。结论EA.hy926与HMEC-1中无PR3、MPO蛋白水平的表达,ANCA与AECA可能是两种相互独立的抗体,串联检测可提高诊断敏感性。     

系统性血管炎中抗内皮细胞抗体的检测及其临床意义分析

目的研究抗内皮细胞抗体（AECA）在系统性血管炎中阳性率,并分析其临床意义.方法固定的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）为抗原,细胞酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测129例系统性血管炎,57例系统性红斑狼疮（SLE）、25例类风湿关节炎（RA）等患者和85名正常对照者AECA阳性率并分析系统性血管炎组AECA与临床生化指标的相关性.结果系统性血管炎（58.9%）和SLE（46%）患者的AECA阳性率明显高于RA（4%）和正常人组（2.4%）（P＜0.01）.AECA在不同系统性血管炎中阳性率分别为：白塞病（BD）48%（28/59）、大动脉炎（TA）79%（22/28）、韦格纳肉芽肿病（WG）65%（13/20）、结节性多动脉炎（PAN）63%（5/8）、显微镜下多血管炎（MPA）44%（4/9）、变应性肉芽肿血管炎（CSS）80%（4/5）.AECA阳性的TA患者的血沉（ESR）平均水平明显高于AECA阴性组（P＜0.05）.PAN、WG、MPA、CSS患者中,AECA阳性者ESR水平（P＜0.05）和伯明翰系统性血管炎临床活动评分标准（BVAS）值（P＜0.01）明显高于AECA阴性者,BD患者中,AECA阳性病人具有皮肤针刺反应阳性率明显增多（P＜0.05）.随诊的11例系统性血管炎患者治疗前后AECA滴度和ESR的变化,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论不同的系统性血管炎和SLE患者血清中均有较高的AECA阳性率,且此抗体与系统性血管炎的临床活动度明显相关,可作为观察病情活动的指标之一.     

抗中性粒细胞胞浆抗体相关抗原诱导人胎肾内皮细胞凋亡的研究

目的　探讨抗中性粒细胞胞浆抗体 (ANCA)相关抗原蛋白酶 3(PR 3)对体外培养人胎儿肾小球内皮细胞凋亡的影响及诱导机制。方法　采用ANCA阳性系统性红斑狼疮 (SLE)患儿外周血中性粒细胞分离纯化其细胞质中PR 3 ,并用该蛋白酶诱导培养人胎肾内皮细胞发生凋亡。观察不同剂量PR 3于不同时间点对内皮细胞存活情况及其形态学变化的影响。用碘化丙啶染色DNA以评价凋亡的发生率 ,观察核染色质固缩及DNA片段的形成。用琼脂糖凝胶电泳确定凋亡小体的形成和凋亡梯形。结果　ANCA阳性SLE患儿中性粒细胞胞浆蛋白酶PR 3以剂量、时间依赖性形式诱导人胎肾内皮细胞发生凋亡 [PR 3 10 μg·ml-1·2 4h-1细胞凋亡率为 (75 5± 2 6 5 ) % ],与阴性对照组 [(1 8± 1 2 ) % ]比较差异有显著性 (P <0 0 1)。凋亡的内皮细胞与培养基分离、悬浮、呈碘化丙啶强染的大小不等的碎片 ,核染色体固缩。DNA电泳提示凋亡核小体形成 ,出现凋亡梯形。结论　中性粒细胞胞浆蛋白酶PR 3可诱导胎肾内皮细胞凋亡 ,在ANCA相关性血管炎性疾病的发生发展中可能具有重要的病理生理意义     

循环内皮细胞损伤标记物与抗中性粒细胞胞质抗体相关血管炎活动性的联系

目的:探讨外周血液中内皮细胞损伤标记物循环内皮细胞( CECs)数量、可溶性血栓调节蛋白( sTM)、血浆血管性假血友病因子(vWF)、E选择素(ES)和血管细胞黏附分子1(VCAM-1)水平与抗中性粒细胞胞质抗体(ANCA)相关血管炎(AAV)活动性的联系. 方法:84例AAV患者,根据伯明翰评分(BVAS)评估血管炎活动性将其分为活动组(n =56,男性23例,女性33例,平均年龄48.1 ±16.8岁,BVAS评分13.6±2.4分)和缓解组(n =28,男性9例,女性19例,平均年龄50.2±16.4岁,BVAS评分0分).性别、年龄相匹配健康志愿者20例为对照组.免疫磁珠分离方法检测CECs数量,ELISA法检测血浆sTM、vWF、ES和VCAM-1水平,并分别比较三组上述指标的差异. 结果:活动组CECs、sTM、vWF和ES水平均显著高于健康对照组(P＜0.01).缓解组血CECs、sTM、vWF和ES与健康对照组比较无显著差异,活动组和缓解组血浆VCAM-1水平与健康对照组比较均无显著差异.与缓解组比较,活动组CECs[ (30±12)个/ml vs (17:±5)个/ml,P＜0.01]与sTM[ (9.5±6.8)ng/ml vs (6.1±3.4) ng/ml,P＜0.01]水平显著升高,但经血清肌酐(SCr)校正后,两组间sTM水平无显著差异.两组间血浆vWF和ES也无显著差异(P＞0.05).活动组sTM水平与SCr和尿蛋白水平呈正相关性,CECs、vWF、ES和VCAM-1水平与SCr和尿蛋白无相关性. 结论:循环内皮细胞数量与血管炎活动性密切相关,可作为临床判断ANCA相关血管炎活动性的重要指标.     

原发性高血压血管内皮细胞损害机制的研究和治疗进展

血管内皮是人体最大的内分泌、旁分泌器官,有重要生理功能,内皮功能不全与高血压密切相关。现综述高血压与内皮功能紊乱之间相互作用的病理生理机制以及在高血压治疗中改善内皮功能的思路。     

内皮细胞凋亡与动脉粥样硬化

内皮细胞凋亡在动脉粥样硬化形成过程中起重要作用。多种影响动脉粥样硬化的因素均影响内皮细胞凋亡。血管内膜损伤使内皮细胞凋亡增加,影响血管调节功能,促进平滑肌细胞增殖、迁移和血液凝固,因此内膜损伤可能启动动脉粥样硬化事件。对内皮细胞凋亡的研究将为揭示动脉粥样硬化的发生机制奠定基础。     

血管内皮细胞的氧化性损伤机理

近年来研究发现 ,内皮细胞 (EC)不仅仅是血液与间质组织间的一层半透性的屏障 ,而且还具有多种重要的生理功能如内分泌功能、抗血栓作用、调节血管张力等 ,在不同的器官还具有特殊的作用。内皮细胞损伤会引起内皮功能障碍 ,与高血压、动脉粥样硬化、心力衰竭等心血管疾病的发生、发展有密切关系。引起 EC损伤的因素很多 ,如细胞因子、活性氧、脂肪酶 (L PS)等 ,其中氧应激引起的内皮细胞氧化损伤是引起血管内皮功能障碍的一个重要原因 ,在心脑血管疾病的发生中起着重要作用 ,因此本文就血管内皮细胞的氧化性损伤机理进行探讨。1　内皮细…     

槲皮素对血管内皮细胞损伤的保护作用

目的 :研究槲皮素对血管内皮细胞损伤的保护作用及机制。　　方法 :实验分对照组、模型组和槲皮素组 ,用过氧化氢诱导血管内皮细胞损伤 ,四甲基偶氮唑蓝比色法检测细胞存活数量 ,放射免疫法测定细胞培养液中的内皮素及前列环素含量 ,用荧光法检测细胞内脂质过氧化产物丙二醛以评价脂质过氧化程度。　　结果 :槲皮素 5、2 0、40、80和 10 0 μmol/ L 促进培养的正常血管内皮细胞增殖 ,增加前列环素生成 ,减少内皮素基础释放量 ;75 μmol/ L过氧化氢可损伤培养的血管内皮细胞 ;槲皮素 5、2 0和 80 μmol/ L 可抑制过氧化氢损伤的血管内皮细胞释放乳酸脱氢酶、内皮素及促进损伤的内皮细胞释放前列环素。　　结论 :槲皮素具有保护血管内皮细胞损伤的作用 ,其机制可能与其抗脂质过氧化作用有关。     

New Insights into the Function and Regulation of Endothelial Cell Apoptosis

The sculpting of blood vessels to meet the changing requirements of the tissues they supply is essential for life. Many researchers believe that endothelial cell apoptosis plays an important role in this process. This belief is bolstered by the detection of endothelial apoptosis within remodeling vessels in vivo, the dramatic vascular phenotypes of mice in which regulators of endothelial apoptosis have been inactivated and the apparent dependence of angiogenesis on endothelial apoptosis in vitro. However, when examined carefully, the evidence for or against endothelial cell apoptosis playing an important role in vascular biology is largely indirect and is far from clear-cut. In this review, we will discuss the idiosyncratic process of endothelial cell apoptosis. We will then examine its complex regulation and weigh the in vitro and in vivo evidence that it plays a significant role in mammalian vascular biology.     

Antiendothelial Cell Antibody Levels in Healthy Normotensives with High Normal Blood Pressure

High normal blood pressure (HNBP) seems to be related to an increased cardiovascular risk in healthy normotensive subjects. According to the literature, elevated levels of antibodies against endothelial cell surface antigen antiendothelial cell antibodies (AECA) play an important role in the early stages of atherosclerosis process and in borderline hypertension. The aim of this study was to compare AECA levels of healthy normotensives with HNBP to those of healthy normotensives with normal blood pressure (NBP), matched for age, sex, and body mass index (BMI).

Methods. Ninety healthy normotensives with HNBP (43M, 47F; mean age, 48 ± 2.6 yrs; BMI 23.6 ± 1.5 Kg/m²) (Group A) and 80 healthy normotensives with NBP (41M, 39F; mean age, 46 ± 3 yrs; BMI 24 ± 1.8 Kg/m²) (Group B) were studied. Both group subjects were matched for sex, age, and BMI. AECA levels were determined in each subject using an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). AECA levels were expressed as mean values. Results. Twenty-five subjects from group A (28%) showed elevated IgG antiendothelial cell antibodies levels vs. three from group B (3.75%, p < 0.001). IgM AECA levels were elevated in 18 subjects from group A (20%) vs. two from group B (1.5%, p < 0.001). Conclusions. The present findings suggest that healthy normotensives with HNBP have significantly higher AECA levels of both classes (IgG, IgM) compared to healthy normotensives with NBP. This may have prognostic significance for the future development of essential hypertension in this group of healthy subjects.     

活化血小板释放产物对内皮细胞的损伤及丹酚酸B的保护效应

目的探讨活化血小板释放产物(PLTaRP)对内皮细胞的损伤作用及丹酚酸B的保护效应。方法分离健康人外周血血小板,以二磷酸腺苷激活后提取PLTaRP,并与EA.hy926人脐静脉内皮细胞株共培养,分为对照组、模型组、阳性对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,检测各组细胞活力及乳酸脱氢酶(LDH)释放水平。DAPI染色观察细胞核形态,比较各组细胞凋亡率。结果与对照组比较,模型组12 h内LDH含量持续升高,并呈时间依赖趋势(P<0.01),模型组、阳性对照组、低剂量组和中剂量组细胞存活率明显减低(P<0.05,P<0.01),高剂量组细胞存活率差异无统计学意义(P>0.05)。与模型组比较,低、中、高剂量组LDH含量明显降低(P<0.01)。结论 PLTaRP可刺激EA.hy926细胞株LDH释放增加,并呈时间依赖趋势,刺激12 h可使细胞活力明显下降。丹酚酸B可减少PLTaRP造成的LDH释放。高剂量丹酚酸B可明显抑制细胞凋亡。     

血管内皮细胞和原发性高血压

原发性高血压是常见的心血管疾病,其发病机制目前仍不明确。随着对血管内皮细胞的深入研究,发现原发性高血压的发生和血管内皮细胞有密切的关系。现从血管内皮细胞的生物学特性以及与原发性高血压的关系研究现状作一综述。     

肺栓塞患者血液中循环内皮细胞的变化

目的 :观察肺栓塞患者血液中循环内皮细胞 (CEC)的变化。方法 :全部研究对象 65例 ,对照组 3 2例 ,肺栓塞组 3 3例。按改良的Hladovec法测定血液中CEC ,在显微镜下观察并计数。结果 :肺栓塞组CEC明显高于对照组 ,有极显著性差异 (P <0 0 1)。CEC数值与性别无明显相关 (P >0 0 5 )。CEC与血浆中同型半胱氨酸水平及动脉血氧分压有明显相关 (γ =0 45 6γ =0 117,P均 <0 0 5 )。结论 :肺栓塞患者血中CEC明显高于正常水平。CEC的变化与动脉血氧分压及血浆同型半胱氨酸水平相关。