AG490 对重症急性胰腺炎大鼠胰腺腺泡细胞凋亡的影响

摘要： 目的 探讨 AG490 对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠胰腺腺泡细胞凋亡及凋亡基因 FasL 和 Bcl-2 表达的影响。方法 健康 Wistar 大鼠 72 只, 按随机数字表法分为对照组(24 只)、 SAP 模型组(24 只)和 AG490 治疗组(24 只)。后 2 组采用 5%牛磺胆酸钠胆胰管内逆行注入诱导 SAP 大鼠模型, 3 组大鼠均于术后 6 h、 12 h、 24 h 心脏采血, 检测血清淀粉酶。剖腹取胰腺组织, 光镜下观察胰腺组织病理改变并进行病理学评分, TUNEL 法检测胰腺腺泡细胞凋亡指数, RT-PCR 检测胰腺组织 FasL、 Bcl-2 mRNA 的表达。结果 与对照组比较, SAP 模型组大鼠胰腺病理损伤加重, 病理评分增高, 血清淀粉酶明显升高, 胰腺腺泡细胞凋亡指数升高, FasL mRNA 表达明显升高, Bcl-2 mRNA 表达明显降低(P＜0.05 或 P＜0.01)。与 SAP 模型组相比较, AG490 治疗组大鼠胰腺病理损伤明显改善, 病理评分降低,血清淀粉酶明显降低, 胰腺腺泡细胞凋亡指数升高, FasL mRNA 表达明显升高, Bcl-2 mRNA 表达明显降低(P＜0.05 或 P＜0.01)。结论 抑制 JAK/STAT3 信号通路可能通过调节凋亡相关基因, 增加胰腺腺泡细胞凋亡, 从而减轻胰腺炎症反应及病理损害。     

Fas/FasL系统在肝癌组织中表达的意义

目的探讨Fas／FasL（Fas配体）在原发性肝细胞肝癌（HCC）组织中的表达及其与临床病理参数的关系。方法用免疫组化S-P法检测21例肝癌组织及10例癌旁组织Fas／FasL的表达。结果在肝癌和癌旁组织中Fas表达的阳性率分别为52、38％和80．00％（P〈0．05），FasL分别为66．67％和40．00％（P〈0．05）。肝癌组织中Fas、FasL表达与性别、年龄、肿瘤大小无关，与癌栓转移呈负相关，FasL与分化程度有关。结论肝癌细胞能下调Fas及上调FasL的表达而使凋亡受阻，可能是Fas系统在HCC的发生及发展过程中的致癌机制。     

Fas／FasL在原发性肾小球疾病患儿肾组织中的表达

目的：探讨凋亡受体Fas以及其特异性配体（Fas ligand ,FasL ）在原发性肾小球疾病患儿肾活检组织的表达及临床病理意义,为临床诊治原发性肾小球疾病患儿找到新的治疗靶点提供实验室依据。方法将研究对象分为病例组和对照组,病例组为原发性肾小球疾病患儿25例,行肾活检术,取其肾活检组织;对照组取5例行肾积水等手术患儿的正常肾组织（正常肾组织距离病变组织5 cm以上）。收集原发性肾小球疾病患儿的尿常规、血肌酐、尿素氮、24 h尿蛋白定量及肾活检病理报告等资料。采用免疫荧光技术分别检测Fas、FasL在病例组及对照组肾组织中的表达。分析Fas、FasL在肾脏病理组织中表达水平的相关性。分析 Fas、FasL表达水平与蛋白尿的关系。结果（1）肾组织内Fas及FasL的表达在局灶节段性肾小球肾炎（FSGS）、系膜增生肾小球肾炎（MsPGN）、微小病变型肾病（MCNS）组高于正常对照组,差异有统计学意义（P＜0．05）。Fas及FasL的表达以FSGS为最强,其次依次为MsPGN、MCNS ,提示Fas、FasL参与了肾脏的损害;（2）病例组25例患儿Fas以及FasL表达水平呈正相关（r＝0．437,P＜0．05）;（3）蛋白尿组和对照组 Fas及 FasL表达水平差异有显著性意义（P＜0．05）。结论 Fas、FasL可能参与原发性肾小球疾病的发生和发展。通过阻断Fas和FasL水平,可能会延缓原发性肾小球疾病的进展。     

环孢素 A对心肌缺血再灌注 Fas／Fas L蛋白表达及心肌细胞凋亡的影响

目的：探讨环孢素A （CSA ）对心肌缺血再灌注大鼠Fas／FasL蛋白表达的影响及CSA对心肌细胞的保护作用。方法选取30只SD大鼠随机分为假性手术组（S组）、缺血在灌注组（IR组）、CSA预处理组（CSA组）,每组各10只,CSA组给予每天10 mg／kg的CSA与腹腔内注射,10 d后建立大鼠心肌缺血再灌注模型,IR组及CSA组结扎左冠状动脉前降肢30 min后复灌注3 h ,S组仅行穿线处理,不进行结扎。分别于结扎前（T0）、再灌注即刻（T1）、30 min（T2）、60 min（T3）、90 min（T4）、120 min（T5）采用ELISA测定各组大鼠血清超敏肌钙蛋白I（cT‐nI）、肌酸激酶同工酶（CK‐MB）水平。于试验结束后采用流式细胞仪测定各组大鼠血清心肌细胞凋亡率、钙调神经磷酸酶（CaN）活性,采用免疫组织化学法测定Fas／FasL蛋白水平。结果与T0,IR组、CSA组T1～ T5时段cTnI、CK‐MB水平显著升高（ P＜0．05）。与 S 组相比,IR 组、CSA 组 T1～ T5时段 cTnI、CK‐MB 水平显著升高（P＜0．05）。CSA组T1～T5时段cTnI、CK‐MB水平显著低于IR组（P＜0．05）。与IR组,CSA组心肌缺血再灌注后心肌细胞凋亡率、CaN活性及Fas／FasL蛋白水平显著下降（P＜0．05）。结论 CSA预处理心肌缺血再灌注大鼠可通过抑制CaN信号降低大鼠心肌梗死面积,同时能有效减少Fas／FasL蛋白表达,延缓心肌细胞缺血再灌注损伤,具有保护心肌细胞作用。     

sPLA2在重症急性胰腺炎的变化及银杏苦内酯B对其影响

目的：探讨分泌型磷脂酶A：（sPLA2）在重症急性胰腺炎（SAP）的动态变化及银杏苦内酯B（BN52021）对sPLA2的影响。方法：180只Wistar大鼠随机分为阴性对照组（NC组，60只）、SAP模型组（SAP组，60只）、BN52021治疗组（BN组，60只）。每组按不同时相点（1、2．3、6、12和24h）分组每小组各10只，分别测定血淀粉酶和sPLA2活性水平，同时对胰腺组织进行病理学观察。结果：淀粉酶和病理学结果显示SAP制模成功，BN52021能降低SAP的血淀粉酶并改善其病理变化；sPLA2结果显示，SAP组在3、6、12和24h较NC组升高，差异有统计学意义（P＜0．05），BN组在1、2、3、6和12h较NC组升高（P＜0．05），BN组在1h较SAP组显著升高（P＜0．05），其余各个时相点差异均无统计学意义（P＞0．05）。结论：sPLA2在SAP中后期显著升高，对SAP的病情发展有重要意义，BN52021可降低SAP血淀粉酶并改善其病理变化，但对sPLA2无显著影响。     

异丙酚对油酸性急性肺损伤模型大鼠肺组织细胞凋亡的影响

目的:探讨静脉麻醉药异丙酚对油酸性急性肺损伤(ALI)模型大鼠肺组织细胞凋亡的影响。方法:取40只SD大鼠随机分成正常对照组、ALI组及异丙酚低、中、高剂量(4、8、16mg·kg-1·h-1)组。除正常对照组不输注油酸外,其余4组大鼠均于颈静脉输注油酸,之后各组输注相应药物4h腹主动脉放血处死,留取肺组织,光镜观察肺病理变化,流式细胞仪检测肺组织细胞凋亡率及凋亡相关蛋白Fas/FasL、Bax/Bcl-2的表达情况。结果:与正常对照组比较,ALI组肺组织细胞凋亡率显著升高(P<0.05);Bax、Fas和FasL蛋白表达均显著增强(P<0.05);Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.05)。与ALI组比较,异丙酚中、高剂量组肺组织细胞凋亡率、Bax、Fas和FasL蛋白表达均显著降低(P<0.05),Bcl-2蛋白表达均显著增强(P<0.05),但低剂量组上述指标变化均不显著。结论:异丙酚可能通过调控油酸性ALI时肺组织Bax/Bcl-2、Fas/FasL系统的活化而显著抑制肺组织细胞凋亡,减轻肺损伤,从而发挥一定的保护作用。     

灯盏花素对实验性肺纤维化大鼠的干预作用

目的探讨灯盏花素对博莱霉素致肺纤维化大鼠肺组织细胞凋亡、Fas/FasL表达以及氧自由基的影响。方法48只大鼠随机分为对照组(16只)、模型组(16只)以及灯盏花素组(16只),气管内注入博莱霉素复制大鼠肺纤维化模型,次日灯盏花素组每日腹腔内注射灯盏花素注射液10mg.kg-1,于d7及d28每组分别处死8只大鼠,运用流式细胞仪测定肺纤维化大鼠肺组织细胞凋亡率、Fas/FasL表达,用TAB法测定肺组织匀浆丙二醛含量以及肺组织匀浆羟脯氨酸含量。结果炎症期和纤维化期大鼠肺组织细胞凋亡率增加,Fas/FasL表达增多,丙二醛及羟脯氨酸含量增高(P<0.01),而灯盏花素能明显降低肺组织的凋亡率,降低丙二醛及羟脯氨酸含量,下调Fas/Fasl的阳性表达。结论灯盏花素能减慢肺间质纤维化的进程,对肺间质纤维化有一定的保护作用。     

重症急性胰腺炎大鼠单核细胞趋化蛋白1的表达

目的 探讨单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）在重症急性胰腺炎（SAP）发病及其相关的急性肺损害（ALI）中的作用。方法 48只雄性SD大鼠随机分为SAP组和手术对照组,采用向胆胰管逆行注射5％牛磺胆酸钠建立大鼠SAP模型,术后1、3、6和12h分别观察血清淀粉酶,胰腺和肺组织病理组织学改变,酶联免疫固相吸附试验（EUSA）法测定血清中MCP-1水平,免疫组织化学法和逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测胰腺和肺组织中MCP-1蛋白和MCP-1 mRNA的表达。结果 SAP组术后6、12h血清中MCP-1水平高于手术对照组（P〈0．05）,胰腺组织和肺组织中的MCP-1蛋白和MCP-1 mRNA的表达亦高于手术对照组（P〈0．05或P〈0．01）,且MCP-1的表达与胰腺和肺组织的病理学改变呈正相关。结论 MCP～1可能在SAP发病及其相关的ALI中起了重要的作用。     

丁酸钠对重症急性胰腺炎大鼠肺损伤的保护作用

目的探讨丁酸钠对大鼠重症急性胰腺炎（SAP）合并肺损伤的治疗作用。方法牛磺胆酸钠逆行胰胆管注射制作SAP动物模型,30只SD大鼠分成对照组、SAP组及丁酸钠（NaB）治疗组,检测胰腺湿/干重比值、胰腺及肺脏病理改变、肺脏细胞凋亡情况。结果 NaB治疗组肺组织湿/干重比值下降;NaB治疗组胰腺及肺组织病理改变明显减轻。NaB治疗组肺组织细胞凋亡指数显著高于SAP组。结论 NaB可以有效诱导SAP大鼠肺组织细胞发生凋亡,减轻肺损伤。     

参附注射液对重症急性胰腺炎大鼠NO和ET-1的影响

目的本研究通过对参附注射液在SD大鼠重症急性胰腺炎模型上的使用,观察其对血清及胰腺组织NO和ET-1的影响,探讨其作用机理,为临床使用提供实验依据。方法48只SD大鼠随机分为3组：假手术组（n=16）、SAP组（n=16）、SF组（n=16）。假手术组开腹后仅翻动肠管,SAP组、SF组以3％牛磺胆酸钠2mL／kg逆行注入胆胰管,复制重症胰腺炎模型。制模成功后,SF组大鼠,尾静脉注射参附注射液,假手术组、SAP组给予等量生理盐水,每12h1次。各组分别于制模后12h、24h两个时间点取材。观测腹水,检测血清淀粉酶及血清和胰腺组织NO、ET-1浓度,并计算ET1／NO比值,胰腺组织行HE染色光镜检查形态学变化。结果各时点血清淀粉酶活性、胰腺病理评分：SAP组、SF组显著高于假手术组（P〈0．01）,SF组低于SAP组（P〈0．01）;血清、胰腺组织内ET-1、NO浓度：SAP组、SF组显著高于假手术组（P〈0．01）,SF组显著低于SAP组（P〈0．01）;血清、胰腺组织内ET-1／NO比值,SAP组显著高于假手术组（P〈0．01）,SF组与SAP组相比降低（P〈0．05,P〈0．01）。结论SF组与模型组相比较,血清、胰腺组织NO、ET-1浓度下降差异有统计学意义,与此同时血清淀粉酶活性,胰腺湿干重比值降低,表明参附注射液可减轻胰腺组织损害,对胰腺组织有保护作用。     

头孢匹胺在重症急性胰腺炎小鼠中血胰屏障通透性的实验观察

目的：研究头孢匹胺（CPM）在重症急性胰腺炎（SAP）小鼠血胰屏障的通透性,为头孢匹胺防治胰腺组织感染提供理论依据。方法以20%L-精氨酸2 g·kg-1体重腹腔注射方法复制SAP模型。正常对照组和SAP模型组小鼠均尾静脉注射头孢匹胺42.5 mg·kg-1,在规定时间点取样,用高效液相色谱法（HPLC）测定血浆和胰腺组织中药物的浓度。结果头孢匹胺在正常动物组和SAP模型组血浆和胰腺中的处置均符合一室模型。正常动物组CPM对血胰屏障平均穿透率（PR）可达（49.2±38.4）%,血浆和胰腺组织中的t1/2分别为1.42 h和1.14 h,AUC分别为122.73 mg·h·L-1和69.88 mg·h·kg-1。SAP模型组PR平均可达（56.±34.7）%,与正常动物组相比无显著性差异,胰腺组织中t1/2、C0及AUC0-∞与正常动物组相近。结论头孢匹胺在SAP小鼠胰腺中有良好的分布,值得向临床推荐用于预防和治疗胰腺感染。     

乌司他丁对实验性急性胰腺炎胰腺组织病理学变化的影响

目的观察在牛磺胆酸钠溶液逆行胆胰管注射诱发的大鼠急性胰腺炎模型中,乌司他丁的应用对胰腺组织病理学改变的影响,探讨胰酶抑制在急性胰腺炎治疗中的作用和急性胰腺炎发生和加重的机制。方法雄性SD大鼠72只,随机分成4大组。分别是EP组（3%牛磺胆酸钠逆行胆胰管注射组）;TP组（3%牛磺胆酸钠逆行胆胰管注射后30min经股静脉注入乌司他丁组）;CP组（0.9%氯化钠注射液逆行胆胰管注射组）;OP组（假手术组,只行开关腹术）。每大组18只动物,每大组再随机分成A、B、C三组,每组6只动物,分别于制模后3、6、24h后取血处死,留取标本。观测指标有血清淀粉酶、血清IL-6水平并在光镜下对胰腺病变进行双盲的组织病理学评分。结果 EP组和TP组动物随制模时间的增加,胰腺病理组织学评分亦增高。TP组与EP组相比,制模后24h,胰腺病理损害差异非常显著。制模后6h,24h血清IL-6水平TP组（489.81±33.88）pg/ml和（652.22±40.39pg/ml）明显低于EP组（619.07±42.25）pg/ml和（903.35±48.44）pg/ml（P〈0.01）。结论在此牛磺胆酸钠逆行胆胰管注射诱发的大鼠AP模型中,乌司他丁的应用对于大鼠胰腺组织病理学的发展有非常显著的抑制作用,同时还能够有效抑制血液中炎性介质的产生,从而对于急性胰腺炎的病程产生干预。乌司他丁有望在临床急性胰腺炎患者的治疗中发挥更加积极的作用。     

Caspase-1抑制剂对实验性重症急性胰腺炎肝损伤的保护作用

目的：评价Caspase-1抑制剂二甲基苯甲酰羟甲酮对实验性重症急性胰腺炎（SAP）肝损伤的保护作用。方法：SD大鼠42只,随机分为3组：健康对照组（HC组,n=6）,SAP造模＋生理盐水组（SAP-S组,n=18）,SAP造模＋ICE抑制剂组（SAP-ICE-I组,n=18）。以5%牛磺胆酸钠逆行注入胰胆管诱发SAP模型。SAP-S组于造模后2h腹腔注射生理盐水1mL,12h后重复一次;SAP-ICE-I组于造模后2h腹腔注射ICE抑制剂。HC组模拟胰胆管穿刺操作,但不注射药物。结果：SAP-S组血清ALT、AST及IL-1β水平在6h时分别为（216±58）、（372±38）U/L、（277±45）pg/mL,12h时分别为（397±70）、（548±75）U/L、（309±35）pg/mL,18h时分别为（425±86）、（666±84）U/L、（312±46）pg/mL,显著高于HC组（P〈0.01）;SAP-ICE-I组3者水平显著降低（P〈0.01vsSAP-S）。HC组肝组织可见Caspase-1、IL-1β及IL-18 mRNA表达;SAP-S组3者表达水平显著上调（P〈0.01vsHC）;SAP-ICE-I组IL-1β及IL-18 mRNA的表达显著下调（P〈0.01 vs SAP-S）,Caspase-1 mRNA表达则无显著改变（P〉0.05）。结论：Caspase-1激活、IL-1β及IL-18的过度表达在SAP肝损伤过程中发挥重要的作用;ICE抑制剂可有效地改善肝脏功能损害。     

鼻咽癌外周血单个核细胞Fas/FasL的表达与预后的相关性研究

目的:研究凋亡相关基因Fas/FasL在鼻咽癌患者诱导化疗前后外周血单个核细胞中的表达,探讨其与鼻咽癌预后的相关性。方法:采用流式细胞仪对2002年收治的38例鼻咽癌诱导化疗前后及15例健康对照组外周血单个核细胞中Fas/FasL的表达进行检测,并结合临床资料进行分析。结果:5a生存率为65.8%(25/38),死亡13例。鼻咽癌患者外周血单个核细胞中Fas/FasL的表达明显高于健康对照组(P<0.05);Ⅲ+Ⅳa期的表达明显高于Ⅱ期(P<0.05)。化疗后与化疗前比较,Fas表达明显增高(P<0.05),FasL表达稍增高(P>0.05)。化疗前死亡组Fas/FasL的表达明显高于生存组(P<0.05);化疗后死亡组Fas的表达明显高于生存组(P<0.05),FasL的表达明显低于生存组(P<0.05)。生存组化疗后Fas/FasL明显高于化疗前(P<0.01,P<0.05)。死亡组化疗后Fas明显高于化疗前(P<0.01),FasL稍低于化疗前(P>0.05)。结论:外周血单个核细胞Fas/FasL的表达及诱导化疗前后的改变与鼻咽癌分期、预后有关,在鼻咽癌患者中对其进行检测可能具有重要临床意义。     

胰腺癌与局限性胰腺炎的超声鉴别诊断

目的：评价超声检查对局限性胰腺炎和胰腺癌的鉴别诊断价值。方法收集辽宁中医药大学附属第二医院2008年1月至2013年8月30例胰腺癌和30例局限性胰腺炎患者的病历资料进行回顾性分析，重点分析2组患者超声图像上是否存在病变部位形态、边界、胰管结构、血流信号、肿块内强回声的不同。结果胰腺癌组患者平均年龄为（57±11）岁，局限性胰腺炎组患者平均年龄为（48±9）岁，组间差异有统计学意义（ t ＝-3．53，P＜0．05）。局限性胰腺炎与胰腺癌组患者超声图像有胰管结构者占比[66．7％（20/30）比6．7％（2/30）]和内部强回声斑块者占比[40％（12/30）比0]差异有统计学意义（均P＜0．01）。结论胰腺癌与局限性胰腺炎发病年龄具有明显的不同，内部强回声斑块与胰管形态的超声成像在胰腺癌与局限性胰腺炎患者的鉴别诊断上存在一定的价值。     

抗癌中药复方协同顺铂对Fas/FasL介导SKOV3细胞免疫逃逸的逆转作用

目的研究抗癌中药复方(CHMP)药血清及其协同顺铂(DDP)对Fas/FasL介导SKOV3细胞免疫逃逸的逆转作用。方法根据前期研究结论制备抗癌中药复方(CHMP)1及CHMP2复方颗粒药最佳时相及剂量的药血清;观察CHMP与顺铂之间的协同作用;流式细胞术(FCM)分析对照组(A组)、CHMP1组(B组)、CHMP2组(C组)、顺铂组(D组)、CHMP1+顺铂(E组)、CHMP2+顺铂组(F组)等各组药血清对各实验组细胞SKOV3表面Fas/FasL分子及各实验组SKOV3细胞对JurkatT细胞凋亡的诱导。结果各组药血清处理72h后,SKOV3细胞表面Fas抗原表达率较对照组明显升高(P<0.01),SKOV3细胞表面FasL抗原表达率较对照组也显著降低(P<0.01)。但顺铂处理的SKOV3细胞FasL抗原表达与对照组相比显著提高(P<0.05)。SKOV3与JurkatT细胞共同培养时各组细胞凋亡率与对照组相比明显降低(P<0.05),联合用药与顺铂相比可减少JurkatT细胞的凋亡。结论 SKOV3细胞表面的FasL可能与JurkatT细胞表面的Fas结合,通过Fas/FasL途径诱导T淋巴细胞凋亡来逃避免疫系统的攻击。联合用药与顺铂相比可减少JurkatT细胞的凋亡,从而增加其对肿瘤细胞的杀伤活性。与化疗药顺铂具有协同作用,解毒化瘀复方与顺铂的协同作用优于补益复方。     

干扰素-γ通过Fas/FasL诱导MCF-7乳腺癌细胞凋亡的实验研究

目的：研究探讨干扰素-γ（Interferon-γ,IFN-γ）通过Fas/FasL诱导MCF-7乳腺癌细胞凋亡。方法：通过流式细胞技术（FCM）检测干扰素-γ作用后的细胞凋亡情况及Fas、FasL表达情况。结果：MCF-7乳腺癌细胞经干扰素-γ作用后凋亡细胞百分率增加,FasL表达与对照组相比也增加,差异有统计学意义（P〈0.05）,Fas表达无明显变化,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：干扰素-γ可通过Fas/FasL诱导MCF-7乳腺癌细胞凋亡。     

乌司他丁与奥曲肽联合治疗重症急性胰腺炎的疗效观察

目的：探讨乌司他丁与奥曲肽联合治疗重症急性胰腺炎（ SAP）的疗效。方法：125例SAP患者按随机数字表法分为对照组（n＝62）和观察组（n＝63）。对照组患者单用奥曲肽治疗,观察组患者采用乌司他丁、奥曲肽联合治疗,对比2组的总有效率、临床症状和体征改善时间、血及尿淀粉酶阳性率、C反应蛋白（ CRP）及炎症细胞因子水平、不良反应等指标。结果：治疗后,观察组患者腹痛缓解时间、胰腺水肿消退时间、住院时间明显短于对照组（ P ＜0.05）;观察组患者总有效率显著高于对照组（P＜0.05）;观察组患者血尿淀粉酶阳性率明显低于对照组（P＜0.05）;观察组患者CRP、白细胞介素-10（IL-10）、白细胞介素（ IL-15）和肿瘤坏死因子（ TNF-α）等指标明显优于对照组（ P＜0.05）;2组患者均未出现不良反应。结论：乌司他丁和奥曲肽联合治疗SAP的效果显著。