肝移植急性排斥反应者外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T淋巴细胞的变化

目的 探讨良性终末期肝病患者肝移植术后外周血CD4+CD25+叉状头螺旋转录因子(Foxp3)+调节性T淋巴细胞在急性排斥反应期的变化及意义.方法 2004年12月至2008年1月间,符合入选条件的良性终末期肝病患者共55例,按照术后是否发生急性排斥反应分为排斥组(14例)和无排斥组(41例).肝移植术前用流式细胞仪检测患者外周血CD4+CD25+Foxp3+T淋巴细胞占CD4+T淋巴细胞的百分率(简称CD4+CD25+Foxp3+T细胞百分率),出院后1年内每隔3～6个月复查;发生急性排斥反应时,于治疗前和治疗缓解后(3～6个月)复查.比较两组患者外周血CD4+CD25+Foxp3+T细胞百分率的变化,对排斥组发生急性排斥反应时外周血CD4+CD25+Foxr3+T细胞百分率与排斥反应活动指数(RAI的相关性进行统计学分析.结果 肝移植术前,排斥组与无排斥组外周血CD4+CD25+Foxp3+T细胞百分率的差异无统计学意义(P＞0.05).排斥组患者发生急性排斥反应时外周血CD4+CD25+Foxp3+T细胞百分率为(2.23±0.54)%,低于无排斥组的(2.99±0.86)%,差异有统计学意义(P＜0.01).排斥组中,患者发生急性排斥反应时外周血CD4+CD25+Foxp3+T细胞百分率低于未发生急性排斥反应时的(3.67±0.70)%,差异有统计学意义(P＜0.01).排斥组患者发生急性排斥反应时外周血CD4+CD25+Foxp3+T细胞百分率与RAI呈负相关(r=-0.80,P＜0.01).结论 监测肝移植受者外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T淋巴细胞的变化,可辅助诊断急性排斥反应及判断其严重程度.

Abstract：

Objective To investigate the expression of peripheral blood (PB) CD4+ CD25+ Foxp3+ regulatory T cells (Tregs) in patients with benign end-stage liver disease after liver transplantation and the relationship between levels of PB Tregs and acute rejection. Methods A prospective analysis was performed on 55 consecutive patients who underwent liver transplantation.Fourteen out of 55 cases suffered from acute rejection after liver transplantation were defined as rejection group,while the rest patients were classified into no acute rejection group. PB was obtained from liver transplant patients at different time points longitudinally: pre-transplant, post-transplant within one year and acute rejection. The circulating CD4+ CD25+ Foxp3+ Tregs in PB were measured by flow cytometry. Blood samples were drawn during acute rejection, at the same time, liver biopsies were performed. The circulating CD4+ CD25+ Foxp3+ Tregs were compared between two groups.Results There was no difference between two groups in levels of circulating CD4+ CD25+ Foxp3 + Tregs cells pre-transplant. However, the levels of circulating CD4+ CD25+ Foxp3+ Tregs in rejection group were decreased significantly as compared with no-rejection group (2. 23 % ± 0. 54 % vs. 2. 99 % ±0. 86 %,P＜0.01). The frequency of CD4+ CD25+ Foxp3+ T cells was negatively correlated with rejection activity index (RAI) (r = - 0. 80, P＜0. 01 ). Conclusion Monitoring PB CD4+ CD25+ Foxp3+ Tregs levels may be helpful in evaluating the immune state and act as a more sensitive marker for acute rejection diagnosis in the patients following liver transplantation.     

小剂量环孢素A联用细胞毒T淋巴细胞A4-Ig治疗器官移植排斥反应

目的　研究小剂量环孢素A(CsA)联用细胞毒T淋巴细胞A4 Ig(CTLA4 Ig)治疗器官移植排斥反应的效果。　方法　采用Ono′s方法建立大鼠心脏移植排斥反应动物模型 ,将实验动物分为 4组。A组 :对照组 ,未给予任何治疗 ;B组 :腹腔内注射CsA ,10mg·kg-1·d-1,连续 7d ;C组 :术后第 2天 1次性注射CTLA4 Ig 10 0 μg ;D组 :术后 1～ 7d连续腹腔内注射CsA ,2mg .kg-1.d-1,术后第 2天加用CTLA4 Ig 5 0 μg。观察移植心脏存活天数及术后IL 2含量和组织学变化。　 结果　A、B、C、D 4组大鼠移植心脏存活时间分别为 ( 7 2± 0 7)、( 19 4± 2 1)、( 3 1 6± 1 8)和 ( 2 4 6± 2 1)d ,与对照组相比 ,各治疗组大鼠心脏存活时间明显延长 ,差异有显著性意义 (q =3 2 7 83 ,P <0 0 5 ) ,D组与C组相比差异无显著性意义 (q =1 86,P >0 0 5 ) ;各治疗组术后IL 2含量明显减低 ,与对照组相比差异有非常显著性意义 (q=9 82 ,P <0 0 1) ;A、B、C和D组排斥反应分级分别为Ⅳ、Ⅲ、Ⅰ和Ⅰ级。　结论　CTLA4 Ig抗排斥反应能力比CsA强 ,小剂量CsA联合使用CTLA4 Ig能增强治疗排斥反应疗效 ,两者具有正协同作用。     

腹腔注射姜黄素延长小鼠移植心脏存活时间的作用及其机制

目的 探讨腹腔注射姜黄素对小鼠移植心脏存活时间的影响及其机制.方法 选择C57BL/6和Babl/c小鼠各30只,分别作为心脏移植的供、受者,进行小鼠腹部心脏移植.随机将受者分为对照组、小剂量组和大剂量组,在术前1 d至术后7 d每天分别给受者腹腔注射生理盐水、5 μg/μl和10 μg/μl的姜黄素溶液,注射量均为20μl/g.术后观察各组移植心脏存活时间;术后第7天,每组分别取3只受者的移植心脏行病理学检查,观察排斥反应情况.并采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测受者血清白细胞介素2(IL-2)、IL-4、IL-10及γ干扰素(IFN-γ)的水平,采用混合淋巴细胞反应检测受者T淋巴细胞对供者抗原的反应性,分别采用免疫印迹法和ELISA法检测受者T淋巴细胞核因子κB(NF-κB)p65核转位和NF-κB p65 DNA的结合活性.结果 对照组、小剂量组和大剂量组移植心存活时间分别为(8.0±3.3)d、(17.0±2.4)d和(23.0±2.2)d,三组间的差异均有统计学意义(P＜0.01).术后第7天,对照组、小剂量组和大剂量组移植心排斥反应分级分别为Ⅱ～Ⅲ、Ⅰ～Ⅱ和0～Ⅰ级.对照组、小剂量组和大剂量组血清IL-2和IFN-γ的水平依次降低,而血清IL-4和IL-10的水平依次增高,三组间各细胞因子的差异均有统计学意义(P＜0.01).小剂昔组和大剂量组的T淋巴细胞经供者T淋巴细胞刺激后,其增殖能力减弱,大剂量组尤其明显.小剂量组和大剂量组的T淋巴细胞NF-κB p65核转位减少,NF-κB 065 DNA的结合活性降低.大剂量组的该效应明显强于小剂量组(P＜0.01).结论 姜黄素能显著延长小鼠移植心脏存活时间,抑制心脏移植排斥反应,其机制可能是姜黄素能够抑制TH1型细胞和促进TH2型细胞因子的表达,使受者对供者抗原处于免疫低反应状态.     

RANTES在CD4+Tm细胞介导小鼠心脏移植急性排斥反应中的表达及意义

目的 探讨趋化因子RANTES在CD4+记忆性T淋巴细胞(Tm细胞)介导的小鼠心脏移植急性排斥反应中表达的变化及意义.方法 以Balb/c小鼠为供鼠,C57BL/6小鼠为受鼠,进行皮肤移植,提取并纯化受鼠脾脏中的CD4+ Tm细胞.分为两组进行实验:实验组,C57BL/6小鼠输注1×106个CD4+ Tm细胞,第2天以Balb/c小鼠为供鼠,进行颈部异位心脏移植;对照组,C57BL/6小鼠未输注CD4 Tm细胞,直接进行心脏移植.观察两组移植心脏存活时间和组织病理学改变,检测移植物中RANTES基因的相对表达量及RANTES在受鼠血清中的浓度.结果 皮肤移植受鼠脾脏中CD4+ Tm细胞达到26.83％.对照组受鼠存活时间为(7.67±0.21)d,实验组为(5.17±0.17) d(P＜0.01).对照组移植心脏急性排斥反应的评级为(2.67±0.14)级,实验组为(3.92±0.08)级(P＜0.01).实验组移植心脏中RANTES基因的相对表达量为对照组的(2.6±0.21)倍(P＜0.01).实验组血清中RANTES浓度为(223.6±16.79) pg/ml,对照组为(120.7±9.47) pg/ml(P＜0.01).结论 接受CD4+ Tm细胞输注的心脏移植受鼠,其体内RANTES的表达量明显增加,加速了急性排斥反应的发生.     

通过小鼠皮肤移植后心脏移植模型观察记忆性T淋巴细胞的变化和作用

目的 建立小鼠皮肤移植后心脏移植模型,观察记忆性T淋巴细胞的变化和作用,及其与皮肤移植后同种反应性记忆性T淋巴细胞过继转移模型的差异和机理.方法 应用显微外科技术及血管套管法,建立小鼠皮肤移植后心脏移植模型(实验组),并以心脏移植前输注或未输注记忆性T淋巴细胞的2个组作为对照(移植对照组和输注对照组),两对照组均未进行皮肤移植.心脏移植后每天触摸各组供心的搏动情况,观察各组移植心的存活情况及组织病理学改变,并对排斥反应进行分级;采用流式细胞仪检测各组受鼠体内CD3+ CD44high CD62L-记忆性T淋巴细胞表型的分布,应用体外混合淋巴细胞反应体系综合评价各组记忆性T淋巴细胞体外增殖程度.结果 皮肤移植前受鼠体内CD4+记忆性T淋巴细胞的比例为2.7％,移植后升至72.0％ (P＜0.05).移植对照组、输注对照组及实验组移植心脏的平均存活时间分别为7.33、4.83和3.5d,排斥反应评分分别为1B～2级、3A级和4级,体内CD3+ CD44highT淋巴细胞的比例分别为29％、55％和75％,CD3+ CD62L-T淋巴细胞群落中CD44荧光强度分别为215、274和380,以及MLR强度(吸光度值)分别为0.29、0.45和1.0,与两对照组相比,实验组移植心存活时间明显缩短、记忆性T淋巴细胞比例明显升高、MLR强度均明显增强及排斥反应程度更严重(P＜0.05或P＜0.01).结论 同种小鼠皮肤移植后心脏移植模型是一个更为贴近临床实际的动物模型,其同种抗原反应能力明显强于过继输注同种记忆性T淋巴细胞的小鼠心脏移植模型,有利于免疫记忆的相关研究.     

诱导体内产生一氧化碳对小鼠心脏移植排斥反应的抑制作用

目的 探讨用二氯甲烷(MC)诱导同种心脏移植受鼠体内产生CO以减轻排斥反应及延长受鼠存活时间的作用,并探讨其机制.方法 以C57BL/6小鼠为供者,Balb/c小鼠为受者,建立小鼠颈部异位心脏移植模型.实验分3组,MC 1组和MC 2组受鼠分别于术前1d至术后6d和至13 d,用含MC的橄榄油100 mg/kg灌胃,移植对照组受鼠术前1d至术后6d用等体积不含MC的橄榄油灌胃.术后监测移植心存活时间;检测受鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素10(IL-10)及叉状头螺旋转录因子(Foxp3)mRNA及蛋白的表达;检测移植心脏细胞间黏附分子-1(ICAM 1)及胱天蛋白酶3的表达;观察移植心组织病理学变化.结果 受鼠碳氧血红蛋白(COHb)浓度在MC灌胃前为(0.85±0.28)％,灌胃后3h达到峰值(5.24±0.45)％(P＜0.01).移植对照组、MC 1组、MC2组移植心脏的平均存活时间分别为6.3、12.1和19.4d,两MC组移植心存活时间较移植对照组明显延长(P＜0.01).与移植对照组相比,两MC组TNF-a和TNF-α mRNA、ICAM-1及胱天蛋白酶3的表达均得到明显抑制(P＜0.01);移植心肌淋巴细胞和单核细胞浸润的程度得到明显减轻,尤以MC2组最为明显.各组间血清IL-10和IL-10 mRNA及Foxp3蛋白和Foxp3 mRNA表达的差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 诱导同种心脏移植受鼠体内产生CO能明显减轻排斥反应,延长移植心存活时间,其主要机制可能与CO的抗炎症和抗凋亡功能密切相关,而并不依赖于Foxp3表达的上调.     

大鼠移植心脏的细胞凋亡及其与急性排斥反应的关系

目的 观察移植心脏的细胞凋亡现象及其与急性排斥反应的关系。方法 建立大鼠异位心脏移植模型,用ＨＥ梁色和原位末端标记（ＴＵＮＥＬ）技术检测移植心脏切片,进行排斥反应的病理分级,计算凋亡指数（ＡＩ）。结果 发生凋亡的细胞主要是心肌细胞,在各级排斥反应中均可见凋亡细胞存在,且ＡＩ与急性排斥发生的分级成正相关;各级的ＡＩ与０级（无排斥反应）比较,差异均有显著性。结论 细胞凋亡与移植心脏急性排斥反应的严重程     

抗CD8单抗与抗CD40L单抗联合应用对小鼠心脏移植后慢性排斥反应的影响

目的 探讨干预慢性迟发性超敏反应（DTH）与CD8^＋T淋巴细胞的细胞毒等效应机制对同种小鼠心脏移植后慢性排斥反应的影响。方法 建立小鼠颈部异位心脏移植模型，实验组以BALB／c小鼠为供者，C57BL／6小鼠为受者，术后0、2、6及14d腹腔注射抗CD8单克隆抗体（抗CD8单抗）200μg／d，术后0、2及4d腹腔注射抗CD40L单克隆抗体（抗CD40L单抗）250μg／d；同系移植对照组供、受者均为BALB／C小鼠，术后同期腹腔注射等量生理盐水；同种移植对照组以BALWc小鼠为供者，C57BL／6小鼠为受者，术后不使用上述单抗。观察各组移植心的存活时间及移植心组织病理学变化。结果同种移植对照组移植心的平均存活时间为7．3d；实验组与同系移植对照组移植心的存活时间均超过60d。同种移植对照组移植心呈典型急性排斥反应病理学改变；同系移植对照组移植心组织未见明显病理变化；实验组移植心呈现血管周围炎、间质纤维化和血管内膜增生等慢性排斥反应组织病理改变。结论 清除CD8^＋T淋巴细胞和阻断CD40／CD40L通路的处理方案虽可预防急性排斥反应，显著延长移植心的存活时间，但并不能阻止慢性排斥反应的发生。     

T淋巴细胞疫苗诱导大鼠移植心存活时间延长的机制探讨

目的 探讨Ｔ淋巴细胞疫苗（ＴＣＶ）对大鼠移植心脏存活时间的影响及其机理。方法 取经供者抗原致敏的受者脾细胞（１／３脾切除）制备ＴＣＶ,然后将其回注于自身腹腔,观察大鼠异位移植心脏的存活时间。结果 接种ＴＣＶ可明显延长大鼠同种移植心的存活时间;注射ＴＣＶ后,Ｔ淋巴细胞增殖反应增强,Ｂ淋巴细胞增殖反应未受影响;混合淋巴细胞反应（ＭＬＲ）降低;脾细胞及ＴＣＶ表型分析显示ＣＤ８＾＋细胞增多;抗体介导的补体     

输注供者CD8+CD28-调节性T淋巴细胞抑制大鼠肝移植急性排斥反应的作用

目的 评价具有免疫抑制作用的CD8+CD28-调节性T淋巴细胞(Treg)体内输注在抑制大鼠肝移植急性排斥反应中的作用.方法 建立近交系大鼠肝移植自发耐受及急性排斥反应模型.从肝移植自发耐受模型受者脾脏中分离CD8+CD28-Treg,于急性排斥反应模型建立前1 d输注给受者,比较不同的输注组间受者的存活时间和移植肝病理学表现.结果 来自自发耐受模型(LEW大鼠为供者,DA大鼠为受者)的CD8+CD28-Treg输注可以延长急性排斥反应模型(LEW大鼠为供者,BN大鼠为受者)受者的存活时间,由(14.0±2.2)d延长至(24.0±3.0)d(P＜0.01),移植肝病理学显示排斥反应程度减轻.结论 大鼠肝移植自发耐受模型受者体内诱导的CD8+CD28-Treg具有抑制急性排斥反应的作用,该免疫抑制作用具有抗原特异性.     

落新妇甙诱导混合细胞培养中活化的T细胞凋亡及其机制

目的探讨落新妇甙对混合细胞培养中活化的T细胞产生细胞毒T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)表达的影响。方法分离BALB/c小鼠心肌细胞(2×10~5/ml)和C57BL/6小鼠脾细胞(1×10~6/ml),前者作为刺激细胞,后者作为反应细胞,进行混合细胞培养。实验分为3组：(1)对照组,混合细胞培养采用RPMI-1640培养液；(2)落新妇甙组,在RPMI-1640培养液中加入落新妇甙15μg/ml；(3)落新妇甙+CTLA-4单克隆抗体组,在RPMI-1640培养液中加入落新妇甙15μg/ml和CTLA-4单克隆抗体9Hi0 30μg/ml。原位末端标记(TUNEL)法检测混合细胞培养中T淋巴细胞凋亡情况；逆转录一聚合酶链(RT-PCR)和免疫印记(Western blot)法检测T细胞CTLA-4表达情况。结果落新妇甙组的T细胞凋亡指数明显高于对照组(73．4%±12．5% vs 35．1%±9．2%,P＜0．01),T细胞CTLA-4的表达亦显著高于对照组(P＜0．01)。落新妇甙加CTLA-4单克隆抗体组的T细胞凋亡指数和CTLA-4表达与对照组的差异无统计学意义(P＞0．05)。结论落新妇甙诱导心肌细胞排斥反应中活化的T细胞凋亡可能与其增强T细胞中CTLA-4的表达有关。     

CXC趋化因子受体6在小鼠心脏移植排斥反应中的表达及意义

目的 研究CXC趋化因子受体6(CXCR6)在同种异体小鼠心脏移植中的表达及CXC趋化因子配体16(CXCL16)与CXCR6相互作用对移植物存活时间的影响.方法 以野生型Balb/c小鼠(H-2d)为供者(同种移植组),或以野生型C57BL/6小鼠(H-2b)为供者(同系移植组),以野生型C57BL/6小鼠为受者分别行小鼠腹腔异位心脏移植.测定同系和同种移植组小鼠移植心脏CXCR6mRNA的表达,并测定受者脾脏CD8+T淋巴细胞CXCR6的表达.另制作小鼠同种异位心脏移植模型(Balb/c小鼠为供者,C57BL/6小鼠为受者),将其分为实验组和对照组,实验组受者移植当天至发生排斥反应时腹腔注射抗CXCL16抗体,对照组受者同期注射对照抗体.记录两组移植心脏存活时间.进行CD8+T淋巴细胞的细胞毒试验,即用Balb/c小鼠脾细胞免疫C57BL/6小鼠后,获取C57BL/6小鼠脾脏CD8+T淋巴细胞,将Balb/c小鼠脾细胞与C57BL/6小鼠CD8+T淋巴细胞混合培养,分别加入抗CXCL16抗体、小鼠IgG(对照抗体)和抗CD40L抗体.结果 同种移植组移植心脏中CXCR6 mRNA的表达以及脾脏CD8+T淋巴细胞上CXCR6的表达均高于同系移植组和正常对照组.抗CXCL16抗体对CD8+T淋巴细胞的细胞毒活性无影响.与对照组相比较,实验组小鼠移植心脏存活时间并未明显延长.结论 小鼠心脏移植排斥反应中CD8+T淋巴细胞CXCR6的表达上升,阻断CXCL16/CXCR6相互作用并不能延长移植心脏的存活时间.

Abstract：

Objective To investigate the expression of CXCR6 in allograft rejection and effect of CXCL16/CXCR6 interaction on allograft survival Methods Intra-abdominal heterotopic heart transplantation was performed using wild type (WT) Balb/c mice (H-2d) (allogeneic) as donors or WT C57BL/6 mice (B6, H-2b) (syngeneic) as donors, and using WT B6 mice as recipients. The intragraft expression of CXCR6 and expression of CXCR6 in CD8+ T cells of the spleens from syngeneic and allogeneic recipients were examined. The allogeneic recipients were further divided into the experimental group (n = 5) and control group (n = 6) randomly. The experiment group and control group were injected with anti-CXCL16 mAb or control mAb respectively until rejection occurred. The cardiac allograft survival in experimental group and control group was evaluated. Results Rejected allografts showed higher expression of CXCR6 than syngeneic cardiac grafts. More importantly,expression of CXCR6 in CD8+ T cells was also up-regulated by allograft rejection. However, injection of anti-CXCL16 mAb could not inhibit cytotoxic activity of CD8+ T cells. Moreover, experimental group could not prolong the cardiac graft survival time as compared with control group. Conclusion Expression of CXCR6 in CD8+ T cells is up-regulated in allograft rejection.     

移植抗原特异性转基因CD8+T细胞对白细胞介素2的依赖性

目的研究白细胞介素2（IL-2）在调节移植抗原特异性转基因CD8^＋T细胞介导的免疫排斥反应中的作用。方法将经荧光染科CFSE标记后的C57BL／6小鼠和2CTg小鼠（CD4敲除鼠）淋巴细胞分别植入经致死剂量γ射线照射过的两组DBA／2J小鼠体内，检测CD4^＋与CD8^＋T细胞在体内分裂增殖的时相，并用胞浆内IL-2标志染色方法测定活化后T细胞表达IL-2的能力。以Balb／c小鼠为供者，糖尿病2CTg小鼠和2C Tg-IL-2KO小鼠（IL-2敲除鼠）为受者，进行胰岛细胞移植。观察CD8^＋ T细胞在介导移植排斥中的作用。结果DBA／2J小鼠输注了C57BL／6小鼠的淋巴细胞后，CD4^＋与CD8^＋T细胞分裂增殖均非常明显，前者表达大量IL-2，后者则不表达。DBA／2J小鼠输注了2CTg小鼠的淋巴细胞后。在完全没有CD4^＋T细胞存在的情况下，CD8^＋T细胞仍明显分裂增殖并大量表达IL-2。2CTg和2CTg—IL-2KO小鼠移植胰岛细胞后，前者迅速发生排斥反应，胰岛移植物的平均存活时间仅为8d，而后者胰岛移植物的平均存活时间〉50d。结论CD8^＋T细胞在产生和利用IL-2时有很大的可塑性。CD4^＋T细胞存在时，CD8^＋T细胞能有效利用CD4^＋T细来源的IL-2进行分裂增殖，在缺乏CD4^＋T细胞时，则利用自身来源的IL-2进行分裂增殖；移植抗原特异性CD8^＋T细胞的效应功能完全依赖于IL-2，排斥反应由CD8^＋T细胞介导时，阻断IL-2／IL-2受体通路可诱导移植物长期存活。     

硬膜外阻滞对妊高征大鼠子宫、胎盘组织CD4+及CD8+T淋巴细胞的影响

目的观察硬膜外阻滞对妊高征（PIH）大鼠子宫、胎盘组织CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞的影响。方法健康雌性Wistar大鼠,鼠龄3～4个月,体重230～300g,40只孕鼠于孕14d时随机分为4组（n=10）：对照组（A组）、PIH组（B组）、假手术组（C组）、治疗组（D组）。B组、C组、D组采用皮下注射甲基L-精氨酸甲酯的方法制备PIH模型,25mg/次,2次/d,连续7d；A组相同时点给予等容量生理盐水0．25ml；C组行硬膜外导管置入术；D组行硬膜外导管置入术,每天由导管注入0．125%布比卡因50μl,连续7d。孕22d时处死大鼠,测定子宫、胎盘组织CD4^＋、CD8^＋及CD4^＋mRNA、CD8^＋mRNA的表达水平。结果各组CD4^＋表达和CD4^＋mRNA表达差异无统计学意义（P＞0．05）；与A组比较,B组、C组CD8^＋表达降低（P＜0．05）；与B组和C组比较,D组CD8^＋表达和CD8^＋mRNA表达升高（P＜0．05）。结论硬膜外阻滞可增加PIH大鼠子宫、胎盘组织CD8^＋T淋巴细胞。     

RATG对CD4+细胞和CD8+细胞共刺激分子基因表达和细胞因子分泌的影响

目的 探讨兔抗人胸腺细胞多克隆抗体(RATG)在体外对CD4+细胞和CD8+细胞共刺激分子基因表达和细胞因子分泌的影响.方法 从正常成人外周血单个核细胞中分离和纯化CD4+细胞和CD8+细胞,加入RATG,37℃下培养.分别于24、48和72 h收集培养上清液和细胞,以不处理的细胞为正常对照,正常兔Ig处理的细胞作为阴性对照.采用实时聚合酶链反应技术检测培养细胞的细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA4)、CD154、Foxp3、OX40、γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素2(IL-2)、IL-10和IL-2受体(CD25)的基因表达水平,应用Multiplex检测技术测定培养上清液中IFIN-γ、IL-2、IL_4和IL-10的水平.结果 与正常CD4+细胞比较,加入RATG的CD4+细胞培养24 h,其CTLA-4、CD154、Foxp3、OX40、IFN-γ、IL-2、IL-10和CD25基因转录表达均上调,阴性对照CD4+细胞则无这些基因转录表达的上调.处理48 h后,CD4+细胞的CD154和IL-2的基因转录表达呈现下调现象,而CTLA4、Foxp3、0X40、IFN-γ、IL-10和CD25的基因转录水平均较24 h时明显降低.处理72 h后,CD4+细胞的CTLA4、Foxp3、OX40和CD25的基因转录表达再次呈现高水平,CD154和IFN-γ的基因转录表达上调表达不明显,而IL-2和IL-10的基因转录表达则呈现明显的下调.RATG处理的CD4+细胞培养上清液中的IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10浓度显著增加,以处理24 h的水平最高,而阴性对照者未测出.与正常CD8+细胞相比较,加入RATG处理的CD8+细胞培养24 h,其CTLA4、Foxp3、OX40、IFN-γ,、IL-2、IL-10和CD25的基因转录表达呈现明显上调,而CD154基因转录表达稍有下调.RATG处理48 h,CD8+细胞的CTLA4、Foxp3、OX40、IFN-γ和CD25基因转录表达仍维持在高水平,CD154基因转录表达仅仅呈现低水平的上调,IL-10基因转录表达水平显著下降,而IL-2的基因转录表达则明显下调.处理72 h,CD8+细胞的CTLA4、Foxp3、OX40、IFN-γ、IL-10和CD25的基因转录表达仍维持在高水平,CD154基因转录表达则呈现下调,而IL-2基因转录表达的下调更为显著.阴性对照CD8+细胞则未呈现这些基因转录的上调现象.RATG处理的CD8+细胞培养上清液中IFN-γ、IL-2和IL-10显著增多,以处理24 h的浓度最高,IL-4浓度升高的幅度较小,而正常CD8+细胞和阴性对照CD8+细胞几乎检测不到IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10.结论 在体外,RATG可以刺激CD4+细胞和CD8+细胞上调多种促进免疫抑制的共刺激分子基因表达,促进其分泌与免疫调节相关的IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10.     

异种心脏移植急性血管性排斥反应期组织因子与凝血的关系

目的探讨异种心脏移植后急性血管性排斥反应期移植心心肌中供、受者的组织因子与凝血的关系。方法供者为清洁级豚鼠,受者为清洁级SD大鼠。随机配对平均分为6组。建立异种心脏移植急性血管性排斥反应期动物模型。分别于移植术后0(未行心脏移植)、4、8、12、16和24h切取移植心脏,使用免疫组织化学染色法观察移植心的心肌凝血程度;同时采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)监测移植心心肌中组织因子的表达。结果移植后8h,移植心心肌凝血程度明显,并随移植时间延长逐渐加重。供者组织因子mRNA表达在移植后4h最强,随后逐渐减弱,至移植后16h消失;受者组织因子mRNA表达在移植后16h出现,随后逐渐增强。结论移植心心肌中的组织因子在异种心脏移植后急性血管性排斥反应期凝血中起重要作用,其中供者的组织因子可能与凝血的激发有关,受者的组织因子可能与凝血的加重有关。