低浓度胶原酶差速消化法分离纯化小鼠Leydig细胞的研究

目的 建立简单快速获得Leydig细胞的分离纯化新方法.方法 分阶段应用低浓度胶原酶,采用差速消化法分离纯化小鼠睾丸内的Leydig细胞.将不同阶段获得的细胞分别培养,观察其原代生长情况.采用免疫荧光染色,观察培养的Leydig细胞内的标志性酶--3β羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)、胆固醇侧链裂解酶(CYP11A1)和17α羟化酶(CYP17A1)的表达情况.结果 使用低浓度胶原酶短时间重复三次消化,以第二次消化获得的Leydig细胞纯度最高69.6%±4.16%,增殖能力最强.培养7 d后纯度增高至90%.原代培养的各个阶段均可检测到睾酮合成酶谱的表达.结论 应用低浓度胶原酶差速消化法可以获得大量高活力的Leydig细胞,原代培养效果理想,细胞功能保存完好.     

小鼠胚胎神经干细胞的体外培养与鉴定

目的通过改进和优化神经干细胞(NSCs)的体外培养方法,为进一步研究NSCs的生物学行为提供基础。方法孕14 d的美国癌症研究所(ICR)小鼠,无菌条件下剪取前脑皮质,采用机械法分离原代细胞进行培养,采用机械法复合酶消化法对原代细胞进行传代和培养。以1%胎牛血清诱导分化。应用免疫荧光方法行巢蛋白(nestin),β-微管蛋白Ⅲ(β-tubulinⅢ),胶质纤维酸性蛋白(GFAP)染色,对培养的细胞进行鉴定。结果从胚胎小鼠前脑皮质中分离得到的细胞具有连续传代形成克隆球的能力,克隆球呈nestin免疫反应阳性;加入胎牛血清可诱导分化为β-tubulinⅢ和GFAP阳性细胞。结论机械法分离胚胎小鼠前脑皮质细胞,机械法复合酶消化法对原代细胞进行传代和培养,能够成功获得胚胎小鼠前脑的NSCs。     

酶消化法分离脐带干细胞

目的 研究酶消化法从脐带组织中分离干细胞的可能性,为心血管组织工程研究提供一个新的种子细胞来源.方法 采用胶原酶胰酶消化新鲜脐带组织,将获得的细胞传代培养,观察基本生物学特性,流式细胞仪鉴定细胞表面分子,以不同方法将其向骨、脂肪和心肌细胞方向诱导,分别采用Von Kossa、油红O染色和免疫组织化学染色对分化的细胞进行鉴定.结果 新鲜分离的脐带细胞在培养72h后,开始贴壁,传代培养后,细胞逐渐纯化,流式细胞仪分析这些细胞表达CD13、CD29、CIN4、CD90、CD105、CD166和MHC-Ⅰ,而不表达CD31、CD34、CD45、CD106和MHC-Ⅱ.在成骨细胞和成脂肪细胞诱导培养后,Von Kossa染色和油红O染色阳性.在5-氮胞苷诱导4周后,免疫组织化学染色心肌特异性抗体肌动蛋白a-actin和肌钙蛋白T阳性.结论 脐带组织中含有丰富的干细胞,酶消化法能够成功分离出脐带干细胞.     

乳兔窦房结的定位及其取材和纯化培养

目的　定位乳兔窦房结的位置并取材和纯化培养 ,观察并初步判断培养窦房结细胞中起搏细胞的光镜、电镜结构特点。方法　新生 2 4h内乳兔心脏连续石蜡切片 ,HE染色 ,光镜下判断窦房结的位置并测定、计算其大小 ;差速贴壁结合BrdU处理行窦房结组织原代细胞纯化培养 ,观察培养窦房结细胞形态变化 ,搏动频率及光镜、电镜结构。结果　乳兔窦房结位于上腔静脉根部前壁向下至界沟后外约 0 .32mm处 ,呈倒置的三角形 ,大小 1 .51mm× 0 .68mm× 0 .0 7mm ;培养的窦房结细胞主要有3种形态细胞 :梭形、蜘蛛形、多边形 ,其中梭形细胞最多 (59.6 %± 7.3 % ) ,搏动频率最快 (1 4 5± 9)次 /min ,肌原纤维稀少 ,细胞器不发达 ;而心房肌细胞培养无此特征细胞。结论　培养的乳兔窦房结细胞中 ,细胞体积小 ,搏动频率快 ,所占比率高的梭形细胞是窦房结的起搏细胞。     

尿路移行上皮细胞的培养鉴定

为建立尿路上皮细胞分离，培养，扩增的常规，获得构建组织工程学泌尿系器官所需的大量尿路移行上皮细胞，分别采用刮削法和组织块法分离出尿路上皮细胞，在角化细胞培养基（Keratinocyte-SFM)中培养，观察细胞形态，扩增情况，并用免疫组化方法检测细胞类型特异性蛋白质。结果：尿路移行上皮细胞生长良好，呈现出典型的移行上皮形态特征。细胞经10次传代后仍扩增迅速，免疫组化染色显示CKAE1／AE3阳性，CK34βE12阴性。提示该常规中细胞分离方法可靠，传代顺利，扩增迅速；尿路上皮细胞经10次传代仍保持其固有生物学特性，未见老化。     

新生大鼠肺泡Ⅰ型细胞的原代培养及鉴定

目的探讨新生大鼠肺泡Ⅰ型上皮细胞(AECⅠ)的分离、纯化及原代培养方法,为主要以AECⅠ损伤为特征的肺部疾病研究提供模型。方法采用弹性蛋白酶联合胶原酶Ⅰ的消化方法,分离肺组织细胞,然后用肺Ⅰ型上皮细胞顶膜蛋白α(T1-α)单克隆抗体及免疫磁珠进行阳性选择的方法纯化AECⅠ,最后进行原代培养;通过锥虫蓝染色检测细胞活力,倒置显微镜观察细胞生长及形态特征,细胞免疫荧光法检测细胞表面特异性抗原的表达。结果每只鼠可获得AECⅠ(1.4±0.4)×106个,纯度90.5%±3.4%,活力93.4%±3.0%。接种于玻璃培养皿48h后倒置显微镜下观察细胞开始粘附伸展,呈克隆样生长,在4～6天时汇合成薄的单层状。免疫荧光显微镜观察新鲜分离的AECⅠ特异标志物水通道蛋白-5(AQP5)阳性,呈现绿色荧光;AECⅡ标志物前表面活性蛋白C(proSP-C)阴性;培养后的AECⅠ免疫荧光染色呈AQP5阳性。结论利用弹性蛋白酶联合胶原酶Ⅰ消化,免疫磁珠进行阳性选择的方法可成功分离出高产量、高纯度的鼠AECⅠ,能满足体外进一步对AECⅠ生理功能的研究,也可为研究AECⅠ损伤修复机制提供细胞培养的模型。     

大鼠胰岛β细胞原代分离培养及近膜钙离子测定技术研究

目的 探讨一种简单易行的大鼠胰岛β细胞的原代分离及培养方法,并探索近细胞膜钙离子的测定技术.方法 雄性SD大鼠胰腺用V型胶原酶消化分离得到胰岛,胰酶逐级消化胰岛,分离出β细胞,从而建立大鼠胰岛β细胞分离、原代培养方法.用近膜钙离子荧光探针FFP-18/AM孵育、负载β细胞,利用激光共聚焦技术测定β细胞近膜钙离子的分布和变化.结果 原代分离获得的胰岛具有良好的活性,β细胞经鉴定纯度较好.激光共聚焦测定FFP-18/AM负载胰岛β细胞,近膜钙离子呈蓝色荧光,不均匀分布于近细胞膜附近.结论 建立了大鼠胰岛β细胞的原代分离、培养方法,以及β细胞近膜钙离子测定技术.     

大鼠脂肪组织来源的干细胞向成骨方向诱导分化的初步研究

目的探索大鼠脂肪组织来源的干细胞的分离、培养的方法，以及在特定条件下向成骨细胞分化，探讨其作为骨组织工程种子细胞的可行性。方法取4周龄SD大鼠附睾处脂肪，成骨诱导培养基培养，组织化学、免疫细胞化学染色以及组织学定量检测其分化情况。结果从成体大鼠脂肪组织中培养出脂肪组织来源的干细胞，能稳定增殖传代，CD44、波形蛋白免疫组化染色阳性，证明其中胚层来源。在地塞米松、维生素C、β-甘油磷酸钠的诱导下，脂肪组织来源干细胞的碱性磷酸酶活性增高，出现钙结节，四环素荧光染色阳性证实有新骨形成。碱性磷酸酶定量和钙定量随诱导时间延长表达增加。结论从脂肪组织中可获得具有多向分化潜能的干细胞，并能在体外稳定增殖传代，经诱导后可分化为成骨细胞，有可能成为骨组织工程较理想的种子细胞之一。     

婴幼儿血管瘤内皮细胞的体外培养及冻存

目的 研究婴幼儿血管瘤内皮细胞的体外分离培养及进行冷冻保存,探讨建立血管瘤内皮细胞库的可能性.方法 应用胶原酶消化结合免疫磁珠法分离获得血管瘤内皮细胞,以含20%胎牛血清的EGM-2培养液进行培养.vWF免疫荧光染色鉴定所培养内皮细胞及其纯度.按慢冻速融原则对血管瘤细胞进行液氮冻存、复苏,比较未冻存和复苏血管瘤内皮细胞的活力、形态、增殖能力、低密度脂蛋白摄取能力以及细胞凋亡率.结果 CD31免疫磁珠阳性分选获得高纯度的原代血管瘤内皮细胞,复苏后细胞存活率约为未冻存细胞的94.8%,二组细胞形态学无明显差异,生长曲线相似,增殖能力差异无统计学意义,冻存内皮细胞的凋亡率较未冻存细胞高,但无统计学意义.结论 胶原酶消化结合免疫磁珠法能获得高纯度的血管瘤内皮细胞,冻存的血管瘤内皮细胞复苏后仍保持较高的活力及体外增殖能力,为血管瘤的后续实验研究提供了稳定的细胞来源.     

体外直接共培养兔肾血管内皮细胞和成骨细胞

目的观察兔肾血管内皮细胞（renal vascular endothelia cells，RVECs）和兔骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells，RMSCs）诱导的成骨细胞（osteoblasts，OB）直接共培养是否具有良好的细胞相容性，探索二者共培养的合适比例。方法抽取兔骨髓，离心法获取RMSCs，经条件培养基获得OB并鉴定；取兔双肾行三步梯度筛网法获得RVECs并鉴定。二种细胞按OB与RⅥ1Cs3：1、2：1及1：1比例直接共培养及各自单独培养，倒置显微镜及Masson染色观察生长情况，碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）染色观察细胞增殖分化能力。结果共培养细胞增殖快于单一细胞，OB与RVECs2：1比例培养优于3：1和1：1，增殖最快。从OB的ALP染色阳性率看，和RVECs共培养的OB染色阳性率比单纯OB高，OB与RVECs2：1比例培养的阳性率最高，表明RVECs能显著增强OB的ALP活性。结论RVECs和RMSCs诱导的OB体外直接共培养具有良好的细胞相容性，可促进OB的增殖分化，促进其ALP的分泌，提高OB的成骨能力。二者按OB与RVECs2：1混合培养是较佳比例。     

Breastfeeding perceptions in communities in Mangochi district in Malawi

Aim: To investigate mothers’ perceptions of breastfeeding and influences from their social network. Methods: A cross‐sectional survey was carried out in Mangochi district, Malawi where questionnaire data from 157 rural and 192 semi‐urban mother–infant pairs were obtained. Results: The proportion of mothers who thought that exclusive breastfeeding should last for 6 months and those who reported to have actually exclusively breastfed were 40.1% and 7.5% respectively. Of those who reported practising exclusive breastfeeding for 6 months, 77.5% stated that exclusive breastfeeding should last for 6 months. This opinion was independently associated with giving birth in a Baby‐Friendly facility, OR = 5.22; 95% CI (1.92–14.16). Among the mothers who thought that exclusive breastfeeding should last for less than 6 months, 43.9% reported having been influenced in their opinion by health workers. Infant crying was the most common (62.4%) reason for stopping exclusive breastfeeding. Conclusion: The findings illustrate the positive impact health workers can have, as well as the need to raise awareness of the benefits of exclusive breastfeeding among both health workers and mothers. Furthermore, continued counselling of mothers on how to deal with stressful infant behaviour such as crying may assist to prolong exclusive breastfeeding.     

胶原成分在儿童系膜增生性肾小球肾炎中的变化

目的观察系膜增生性肾小球肾炎（ＭｓＰＧＮ）系膜区胶原成分的变化。方法应用链菌素亲生物素过氧化酶连接法观察了３０例轻度ＭｓＰＧＮ肾穿刺活组织标本和正常的肾小球系膜区Ⅳ型胶原及其α链（α１、α３、α５链）、Ⅵ型胶原及Ⅰ型胶原的变化。结果（１）正常肾脏组织中，Ⅳ型胶原及其α１（Ⅳ）链分布于系膜区和基底膜，α３（Ⅳ）、α５（Ⅳ）链分布于基底膜，Ⅵ型胶原分布于系膜区、肾小球基底膜和间质，Ⅰ型胶原仅分布于肾间质。（２）在轻度ＭｓＰＧＮ时，系膜区内Ⅳ型胶原及其α１链、Ⅵ型胶原含量较正常对照明显增多（Ｐ＜０．０１）；当系膜区系膜细胞超过４个时，Ⅰ型胶原开始在肾小球内出现，且在硬化肾小球内Ⅰ型胶原均呈阳性；α３（Ⅳ）、α５（Ⅳ）链与正常对照比较无明显变化，硬化肾小球α３（Ⅳ）、α５（Ⅳ）染色呈阳性。结论系膜区胶原成分增多可先于系膜细胞增生，并随系膜细胞增生而增多，间质胶原成分Ⅰ型胶原，不但出现于硬化肾小球内，而且出现于系膜细胞增生较重时     

Achalasia in siblings in infancy

Achalasia is rare in children, more so familial. We report two siblings with familial achalasia who presented in their infancy with vomiting and failure to thrive. Achalasia can be misdiagnosed as upper gastrointestinal obstruction as happened in one of our siblings. Esophageal contrast roentgenography is diagnostic. Both the children were treated successfully by transabdominal esophagomyotomy with fundoplication.     

哮喘大鼠气道重塑中尾加压素-的表达变化

目的：研究哮喘大鼠气道重塑血清和支气管肺泡灌洗液（BALF）中尾加压素 Ⅱ（U-II）含量的变化及其作用。方法：32只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为正常对照组、哮喘2周组、哮喘4周组和哮喘8周组,每组8只。以卵清白蛋白(OVA)致敏与激发建立哮喘大鼠气道重塑模型,图像分析技术测量大鼠支气管壁总面积和平滑肌面积,计算单位基底膜周径(Pbm)的支气管壁厚度(Wat)和平滑肌厚度(Wam),ELISA法测定血清和BALF中U-II的含量。结果：哮喘各组Wat及Wam均明显高于正常对照组（P<0.01）;哮喘组血清和BALF中U-II含量均显著高于正常对照组（P<0.01）,其中哮喘8周组血清和BALF中U-II含量显著高于哮喘4周组和哮喘2周组（P<0.01）,哮喘4周组也显著高于哮喘2周组（P<0.01）。各组大鼠BALF中的U-II含量与Wat及Wam呈正相关,BALF与血清中U-II含量亦呈正相关。结论：哮喘大鼠气道重塑血清和BALF中U-II含量增加;且U-II含量的变化与气道重塑相关。［中国当代儿科杂志,2010,12（4）：287-289］     

Cardiomyopathy in children in Ahmedabad

A clinical study and follow up of 20 children with cardiomyopathies upto age of 16 years are presented. The DCM was most common variety followed by RCM and HCM in pediatric age group. SHMD presenting with cardiomyopathy were common in infancy and early childhood. Cardiomyopathies presented most frequently between 2–5 years and 10–16 years age group with DCM having almost equal distribution. Clinical presentation of various types is described, despite of vigorous decongestive and vasodilator treatment in advanced cases, course was rapidly downhill and prognosis is poor in general.     

转流术治疗小儿精索静脉曲张

目的 采用转流术治疗小儿精索静脉曲张，重新建立精索静脉通道，使静脉回流受阻立即得到改善，消除因睾丸淤血而造成的损害，以利睾丸的正常发育。方法 对28例30侧(左侧26例，双侧2例)精索静脉曲张与腹壁下静脉进行吻合，通过腹壁下静脉，髂静脉转流，手术在放大镜下应用显微外科技术进行，其中28侧用精索静脉主干，2侧结扎一条属支，用另一条静脉进行吻合。结果 通畅率为100％。术后扩张迂曲静脉团消失，阴囊下坠感消失。术后随访24例，时间为3个月-10年。除1例二次手术证实为一条静脉属支漏扎而复发外，另23例全部治愈。结论 精索静脉曲张转流术效果明显优于结扎术，可减少因睾丸淤血对其造成的进一步损害，且术后复发率低。     

北京地区2007年儿童A群轮状病毒腹泻的流行病学研究

目的 研究北京地区急性腹泻儿童中A群轮状病毒(RV)感染的流行病学特点.方法 收集2007年4月至12月我院肠道门诊就诊的2039例急性腹泻患儿的粪便标本,采用标记金的A群RV单克隆抗体,以免疫层析双抗体夹心法定性检测A群RV抗原.结果 2039份粪便标本中,621份检测到A群RV,总检出率为30.5%(621/2039),其中男430例(69.2%),女191例(30.8%).RV感染者中,以6个月～2岁年龄段的患儿为最多,共571例(91.9%).检出率以10～12月份最高,均在30%以上,其中高峰出现在11月份,达43.4%.北京地区18个区县的统计数据显示,距市区较近的区县RV抗原检出率较低,边远区县较高.少部分患儿合并肠道细菌感染.结论 A群RV为北京地区2岁以下儿童急性腹泻病的主病原,6个月～2岁婴幼儿是A群RV的易感人群,10～12月份为北京地区的流行高峰.在流行季节对肠道细菌感染患儿常规进行A群RV抗原检测有助于避免漏诊和进行更合理的治疗.     

Poisoning in children in Japan

The Japan Poison Information Centre (JPIC) received 31510 inquiries about poisoning in children under 6 years old being exposed to poison in the fiscal year 1995. The most frequently implicated products were tobacco (20%) and the peak age for ingestion of household products was 1 year and younger (83.3%). Especially, the inquiries related to children less than 1 year old were 35.7% of the cases. In contrast, the American Association of Poison Control Centers (AAPCC) data showed that the most common poisonings were due to pharmaceutical products and the inquiries related to children less than 1 year old were only 12.1%. The objective of this report was to find out the poison exposure in children in Japan and to compare the data with that of AAPCC.     

Cocaine use in pregnancy in Amsterdam

To study the effects of cocaine use in pregnancy in Amsterdam, clinical data on cocaine-using pregnant women ( n = 21) and their offspring ( n = 23) were obtained retrospectively (1987–1994) at the Academic Medical Center, Amsterdam. Infants exposed to cocaine had a median gestational age of 39 weeks and a median birth weight of 3090 g. There were six preterm infants, two small-for-gestational-age infants and five infants with a small head circumference. Three infants had a congenital malformation. One infant (Potter's syndrome) died shortly before birth. One infant had congenital syphilis, four had intracerebral abnormalities on ultrasound and four had abnormal neurologic symptoms in the neonatal period. One infant died after 21 days of life. At follow-up four infants showed abnormal development. In 12 of the 23 infants (52%), one or more possible effects of cocaine were found.