姜黄素对HepG-2细胞增殖与凋亡的影响

目的：检测姜黄素对肝癌HepG-2细胞增殖及细胞凋亡的作用,以及对核转录因子κB（NF-κB）表达的影响。方法：不同浓度（10,25,50,100 μmol/L）姜黄素处理肝癌HepG-2细胞不同时间后（16,24,48 h）,采用CCK-8法检测细胞增殖抑制率;50 μmol/L的姜黄素处理HepG-2细胞24 h后,用流式细胞仪检测细胞凋亡情况;不同浓度（10,25,50,100 μmol/L）姜黄素处理肝癌HepG-2细胞24 h后,用Western blot方法检测NF-κB p65蛋白的表达。结果：姜黄素能明显抑制HepG-2细胞的增殖,并呈时间和浓度依赖性（均P<0.05）;姜黄素作用后,HepG-2细胞凋亡率较对照组明显增高（P<0.05）;姜黄素能浓度依赖性抑制地HepG-2细胞 NF-κB p65蛋白的表达。结论：姜黄素能抑制HepG-2细胞增殖并促进其凋亡,其机制可能系通过阻断NF-κB信号通路有关。

     

环孢素A与他克莫司对人肝癌HepG-2细胞生物学行为的影响

目的探讨环孢素A（CsA）与他克莫司（FK506）对肝癌的增殖、凋亡、复发及转移的影响。方法培养人肝癌细胞HepG-2，分别经5、10、100、500、1000、5000μg／L的CsA、FK506处理24～48h后，采用噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖、流式细胞术测定细胞周期及细胞凋亡、荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测转化生长因子（TGF）-β细胞间黏附分子（ICAM）、骨桥蛋白（OPN）。结果肝癌细胞增殖能力48h明显受到抑制，CsA、FK506使G2期显著延长；FK506在小于100μg／L及CSA在小于1000μg／L时，随浓度增加，肝癌凋亡率逐渐增加，当两者分别超过100、1000μg／L时，则出现凋亡率减低；FK506、CSA分别在100、1000μg／L低浓度时对OPN无影响，在1000、5000μg／L高浓度时基因量显著增加。FK506在低浓度时对ICAM及TGF-β无影响，在高浓度时基因量显著增加；而CSA对两者无明显影响。结论CsA、FK506均对肝癌增殖有抑制作用，使G2期阻滞，促凋亡；低浓度时对肝癌转移无影响，高浓度时增加转移危险。     

缺氧对肝癌细胞系HepG2表达VEGF的影响

目的研究缺氧条件下肝癌细胞系HepG2表达血管内皮生长因子（VEGF）的变化。方法分别在缺氧（缺氧组）和有氧（对照组）条件下培养HepG2细胞．采用免疫组织化学染色、MTT比色、细胞计数和ELISA方法．检测2组VEGF表达、HepG2细胞生长情况和培养上清液中VEGF含量。结果缺氧培养可抑制HepG2细胞的生长．缺氧培养48和72h后．HepG2细胞的生长速度明显低于对照组相应时相（P〈0．05．P〈0．01）；缺氧培养24和48h后．HepG2细胞上清液中VEGF含量明显高于对照组相应时相（P〈0．05。P〈0．01）。结论缺氧可以促进肝癌细胞HepG2表达分泌VEGF．这可能是经导管肝动脉化疗栓塞术后VEGF高表达的原因。     

放射后肝癌细胞MMP-2表达、活性的变化及其对侵袭性的影响

目的 探讨放射后肝癌细胞侵袭潜能的变化及其机制.方法 以不同剂量(0、4、8Gy)高能X线照射人肝癌低转移潜能细胞株MHCC97L.明胶酶谱法检测放射后24、48、72、96 h细胞培养上清液金属蛋白酶(MMP)-2活性,细胞免疫荧光法检测放射后24、48和72 h细胞内MMP-2蛋白表达,Transwell法测定放射后48和96 h细胞的侵袭能力.结果 放射后细胞MMP-2蛋白分泌及活性增强并与放射剂量及时间相关,8 Gy放射后48 h MMP-2蛋白活性最高,达到对照组的2倍.0、4、8 Gy放射后48 h穿过transwell小室的细胞数分别为7.2±1.9、13.2±2.7和31.2±7.2(P＜0.05),放射后96 h组间差异无统计学意义.结论 放射后肝癌细胞侵袭潜能短暂增强,放射诱导细胞MMP-2分泌及活性增强是侵袭性增强的原因之一.     

siRNA对肝癌HepG2细胞β-catenin表达和细胞增殖的抑制作用

目的 研究siRNA对肝癌HepG2细胞β-catenin基因表达,β-catenin蛋白翻译及细胞增殖的抑制作用.方法 利用RT-PCR检测β-catenin基因表达,WesternBlotting方法检测肝癌HepG2细胞株β-catenin表达和HepG2细胞增殖曲线的变化.结果 shRNA转染后1dA和B组β-catenin表达弱于C和D组,2dA和B组β-catenin表达更弱,3d几乎未见表达.A和B组问比较无显著差异(P>0.05),A,B与C、D组比较相差非常显著(P<0.01).A,B两处理组细胞转染后每天所检测抑制率均显著高于对照组(P<0.01),表明细胞经A、B处理后生长受到明显抑制;两处理组细胞生长抑制率5d内逐渐增高.A与B和C与D组间差异无统计学意义(P>0.05).加入siRNA的两实验组(A,B组)β-catenin蛋白表达明显较少,对照C,D组β-catenin蛋白表达较多,提示siRNA抑制了HepG2细胞的β-catenin蛋白表达.结论 针对β-catenin的sbRNA能够抑制β-cateninmRNA表达,使胞浆中的β-cateninmRNA下降,细胞β-catenin蛋白表达明显减少,HepG2细胞增殖受到明显的抑制,这种作用对临床肿瘤有潜在的治疗价值.     

RNA干扰对骨桥蛋白不同片段表达的影响

目的 观察RNA干扰技术对肝癌细胞株内骨桥蛋白(osteopontin,OPN)不同片段的抑制效果,以期为针对OPN的靶向治疗提供更准确、有效的位点.方法 应用合成OPN序列特异性双链RNA(OPNi-A、OPNi-B、OPNi-C),转染人HEP G2肝癌细胞株,用荧光定量PCR和免疫组化检测比较OPN的mRNA和蛋白表达情况.结果 OPNi-A、OPNi-B、OPNi-C转染HEP-G2后,A片段的荧光强度大于B片段和C片段.RNA干扰HEP-G2细胞株48 h后,A、B、C、三个片段的OPNmRNA的△CT值分别从干扰前的8.31±1.58、8.78±1.49、8.25±1.51上升至12.14±1.43、10.22±1.97、10.48±1.88 (P＜0.05);三个片段的OPN蛋白水平免疫组化评分也从干扰前的6.44±1.67、5.43±2.05、5.45±2.52下降到2.84±1.52、4.43±1.65、3.95±1.43.结论 RNA干扰对肝癌细胞株内骨桥蛋白不同片段有不同的抑制作用.合成更具针对性的siRNA可能对抑制肝癌侵袭转移具有重要的科学和卫生经济学意义.     

5-aza-CdR对肝癌SMMC7721细胞株PDCD4基因甲基化及表达的影响

目的 研究5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-aza-CdR)在肝癌细胞株SMMC7721中对程序性细胞死亡因子4(PDCD4)表达的影响及可能机制.方法 培养肝癌细胞株SMMC7721,用5-aza-CdR处理肝癌细胞株SMMC7721,Western-blotting检测DNMT3b、PDCD4蛋白在处理前后的变化,甲基化特异性PCR即MSP检测PDCD4基因启动子区域甲基化水平.结果 1×10~(-6)mol/L、5×10~(-6)mol/L的5-aza-CdR作用于SMMC7721细胞后,DNMT3b表达水平降低,而PDCD4表达水平升高,且浓度之间有差异;MSP示药物处理前PDCD4启动子区域处于高甲基化水平,在用5×10~(-6)mol/L药物处理后,其启动子发生了去甲基化.结论 5-aza-CdR可以抑制DNMT3b在SMMC7721中的表达,且可能通过改变抑癌基因PDCD4启动子甲基化状态影响PDCD4表达.     

RNA干扰对肝癌细胞CDC20表达的影响

目的 观察RNA干扰(RNAi)对肝癌细胞株Hepal-6中CDC20表达的抑制作用.方法 设计针对小鼠肝癌细胞Hepal-6 CDC20 mRNA的小干扰RNA(siRNA),以阳离子脂质体包埋后转染鼠肝癌细胞Hepal-6,转染48 h后,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法 检测Hepal-6细胞CDC20 mRNA及蛋白质表达的变化.结果 siRNA各组与正常对照组和阴性对照组比较,CDC20 mRNA的表达均受明显抑制,并呈剂量依赖性(在100、50、25 nmol/L浓度下,Mixed siRNA组与正常对照组mRNA表达比较:0.370±0.058比0.840±0.044,0.480±0.081比0.900±0.068,0.830±0.062比1.010±0.054,各组P＜0.01);CDC20蛋白质的表达亦均受抑制(siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3及Mixed组与N-Cont或Blank组蛋白质表达比较:0.482±0.035/0.402±0.003/0.479±0.026/0.446±0.017比0.826±0.03l或0.835±0.024,各组P均＜0.01).结论 CDC20 siRNA可显著抑制小鼠肝癌细胞Hepal-6中CDC20 mRNA和蛋白质的表达.     

雷帕霉素对肝癌细胞生长和凋亡及DDAH2表达的影响

目的:观察雷帕霉素对肝癌细胞生长、凋亡及DDAH2蛋白表达的影响.方法:人肝癌HepG2细胞用不同浓度雷帕霉素(0,4,20,100 nmol/L)分别作用48 h后,用流式细胞法检测细胞周期和凋亡率,用Western blot法检测DDAH2蛋白的表达.结果:与对照组(雷帕霉素0 nmol/L)HepG2细胞比较,各浓度雷帕霉素(4,20,100 nmol/L)处理组HepG2细胞出现明显的G1期阻滞,凋亡率增加,及DDAH2蛋白表达降低(均P＜0.05),且均呈一定的浓度依赖性.结论:雷帕霉素能抑制肝癌细胞增殖并促进细胞凋亡,其机制可能与下调DDAH2表达有关.     

重组质粒载体pCMV-LRIG2转染BIU-87细胞株的效应研究

目的研究携带有LRIG2基因的重组质粒载体pCMV-LRIG2对膀胱癌细胞株BIU-87生物学行为的影响。方法用脂质体介导的基因转染技术，将携带有LRIG2基因的重组质粒载体pCMV-LRIG2转染至膀胱癌细胞株BIU-87，用G418筛选出抗性克隆后，Western blot检测转染前后LRIG2和EGFR蛋白表达水平变化，MTT法绘制转染前后细胞生长曲线，Transwell法检测转染前后细胞侵袭力，同质黏附实验观察转染前后细胞黏附能力。结果转染pCMV-LRIG2组LRIG2蛋白表达水平显著高于末转染组和空载体转染组；转染pCMV-LRIG2组细胞生长速度较未转染组和空载体转染组明显减慢，侵袭力显著低于未转染组和空载体转染组，而黏附能力显著高于未转染组和空载体转染组。结论LRIG2有类似于抑癌基因的作用，通过对EFG-EGFR信号转导途径发挥负反馈抑制作用，从而抑制BIU87细胞的生长、侵袭和转移。     

脆弱类杆菌脂多糖对正常人外周血单个核细胞分泌白细胞介素的影响

目的　通过研究脆弱类杆菌脂多糖 (LPS)对正常人外周血单个核细胞 (PBMC)分泌白细胞介素 2 (IL 2 )和白细胞介 4素 (IL 4 )的影响 ,探讨脆弱类杆菌感染的机制。　方法　采用脆弱类杆菌临床分离菌和标准菌株 (NCTC9343)提取的LPS ,以不同浓度作用于PBMC ,2 4h后收集培养细胞上清 ,运用ELISA法检测其IL 2和IL 4的含量变化。　结果　脆弱类杆菌LPS对正常人PBMC分泌IL 2有显著抑制作用 ,并呈明显的浓度依赖关系 (r=0 .80 2 4 ,P <0 .0 1)。脆弱类杆菌LPS对正常人PB MC分泌IL 4有显著刺激作用 (P <0 .0 5 ) ,但无浓度依赖关系。脆弱类杆菌临床分离菌与标准菌株LPS对正常人PBMC分泌IL 2和IL 4具有相同效应 ,两组之间无明显差异 (r =0 .10 95 ,P >0 .0 5 )。　结论　脆弱类杆菌LPS对正常人PBMC分泌IL 2有抑制作用 ,而对IL 4的分泌有刺激作用     

LRIG2基因在膀胱癌中的表达及临床意义

目的:了解LRIG2基因及其产物在膀胱癌中的表达情况及其与肿瘤分级分期的关系。方法:采用逆转录-聚合酶链反应和Western-blot技术检测了38例膀胱癌组织和16例正常膀胱黏膜组织中LRIG2mRNA和蛋白的表达情况。结果:膀胱癌组织中LRIG2mRNA和蛋白的表达水平显著低于正常膀胱黏膜组织;且分级和分期越高,LRIG2mRNA和蛋白的表达水平越低。结论:LRIG2基因有可能是一种新的抑癌基因,其缺失或表达水平下调会导致肿瘤细胞生长分化,提示其有可能成为肿瘤基因治疗的又一靶点。     

Nodal靶向RNA干扰对人肝癌细胞的影响

目的：观察RNA干扰技术对人肝癌细胞Nodal基因表达的干扰效应,探讨靶向Nodal基因在肝癌基因治疗中的可行性。方法：采用一段含针对Nodal特异shRNA序列的质粒载体,转染人肝癌细胞株SMMC-7721,观察其转染效率后,分别以实时荧光定量PCR和Western blot检测Nodal基因和蛋白的表达水平,并观察Nodal基因干扰对SMMC-7721细胞体外增殖的影响。结果：表达shRNA的质粒载体对SMMC-7721细胞有较高的转染效率,转染后可明显抑制SMMC-7721细胞Nodal基因和蛋白的表达,且对其体外增殖有明显抑制作用。结论：运用RNA干扰技术,可以有效地抑制肝癌细胞Nodal基因和蛋白的表达,并抑制细胞增殖,Nodal基因可望成为肝癌治疗的新靶点。     

Inhibitory effects of astragalin on lipopolysaccharide-induced inflammatory response in mouse mammary epithelial cells

Background

Tea brewed from the leaves of persimmon or Rosa agrestis have several medical functions including treating allergy, antiatopic dermatitis, and anti-inflammatory effects. The objective of this study was to investigate the molecular mechanisms of astragalin, a main flavonoid component isolated from these herbs, in modifying lipopolysaccharide (LPS)-induced signaling pathways in primary cultured mouse mammary epithelial cells (mMECs).

Materials and methods

The mMECs were treated with LPS in the absence or presence of different concentrations of astragalin. The expression of proinflammatory cytokines tumor necrosis factor α, and interleukin 6, as well as nitric oxide production were determined by enzyme-linked immunosorbent assay and Griess reaction, respectively. Cyclooxygenase-2, inducible nitric oxide synthase, toll-like receptor 4 (TLR4), nuclear factor-κB (NF-κB), inhibitor protein of NF-κB (IκBα), P38, extracellular signal-regulated kinase, and c-Jun N-terminal kinase were measured by Western blot.

Results

The results showed that astragalin suppressed the expression of tumor necrosis factor α, interleukin 6, and nitric oxide in a dose-dependent manner in mMECs. Western blot results showed that the expression of inducible nitric oxide synthase and cyclooxygenase-2 was inhibited by astragalin. Besides, astragalin efficiently decreased LPS-induced TLR4 expression, NF-κB activation, IκBα degradation, and the phosphorylation of p38, extracellular signal-regulated kinase in BMECs.

Conclusions

Our results indicated that astragalin exerts anti-inflammatory properties possibly via the inactivation of TLR4-mediated NF-κB and mitogen-activated protein kinases signaling pathways in LPS-stimulated mMECs. Thus, astragalin may be a potential therapeutic agent for bovine mastitis.