PI3K/AKT/mTOR和MAPK/ERK信号通路在胃癌细胞中的相互作用机制

目的探讨磷脂酰肌醇3–激酶/蛋白激酶B/哺乳动物靶蛋白(PI3K/AKT/mTOR)、丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶(MAPK/ERK)两条信号通路对胃癌细胞功能的影响及相互作用机制。方法使用PI3K抑制剂LY294002、mTOR抑制剂AZD8055、MEK抑制剂AZD6244单独或联合作用于胃癌MGC-803细胞。应用CCK8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期;蛋白印迹法(Western blot)检测通路关键蛋白的表达。结果联合使用LY294002(25μmol/L)与AZD6244(125μmol/L)、AZD8055(0.1μmol/L)与AZD6244(125μmol/L)能够显著抑制胃癌MGC-803细胞的增殖活性,且联用组比单独作用组具有更强的抑制效果(P 0.05);联用组诱导细胞凋亡数量和阻滞于G0/G1期的MGC-803细胞数量增多,高于单独作用组(P 0.05)。与LY294002、AZD8055和AZD6244单独作用相比,LY294002与AZD6244、AZD8055与AZD6244联用组MGC803细胞p-AKT、p-P70S6K和p-ERK1/2蛋白表达明显受到抑制(P 0.05)。结论 PI3K/AKT/mTOR和MAPK/ERK两条信号通路在胃癌MGC-803细胞的生长中具有协同调控作用,对于两条信号通路的多靶点抑制能够更加明显的抑制癌细胞生长。     

PI3K/Akt/mTOR和MAPK/ERK信号通路在胃癌细胞生长中协同作用及机制

目的初步探讨PI3K/Akt/m TOR和MAPK/ERK信号通路在胃癌细胞生长中的协同作用。方法采用不同浓度的PI3K/Akt/m TOR和MAPK/ERK信号通路抑制剂rapamycin与PD98059分别单独及联合作用于胃癌细胞SGC-7901。采用CCK8法检测SGC-7901细胞增殖情况;实时荧光定量PCR检测关键基因m RNA的表达;蛋白印迹法(WB)检测相关蛋白的表达;流式细胞术检测细胞周期和凋亡的变化。结果 Rapamycin(12.5、25、50、100、150、200 nmol/L)与PD98059(25、50、100、200、300、400μmol/L)单独作用可抑制SGC-7901细胞增殖活性,联合作用也可抑制其活性,且联合组的抑制作用强于单独作用(P0.05)。与rapamycin、PD98059单独作用相比,联合组对AKT、m TOR、MEK、ERK基因m RNA表达和p-AKT、p-m TOR、p-MEK1/2、p-ERK1/2蛋白表达的抑制作用明显增强(P0.05)。联合组阻滞于G0/G1期的细胞比例显著增多,且具有更强的促凋亡作用。结论 PI3K/Akt/m TOR和MAPK/ERK信号通路在胃癌细胞生长中具有一定的协同调控作用。     

lncRNA PlncRNA-1对胃癌SGC-7901细胞生物学行为及PI3K/AKT信号通路的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)PlncRNA-1对胃癌SGC-7901细胞增殖、周期、凋亡和磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路的影响。方法采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测PlncRNA-1在SGC-7901细胞和正常胃黏膜上皮GES-1细胞中的表达水平,将体外培养的SGC-7901细胞分为未转染组(正常培养)、阴性组(转染阴性对照siRNA)和干扰组(转染PlncRNA-1-siRNA),qPCR检测SGC-7901细胞中PlncRNA-1表达水平,噻唑蓝(MTT)法检测SGC-7901细胞增殖活力,流式细胞仪检测SGC-7901细胞周期和凋亡情况,免疫印迹法检测PI3K/AKT信号通路相关蛋白PI3K、AKT、磷酸化(p)-AKT、细胞周期素D1(CyclinD1)和B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)蛋白表达情况。结果与GES-1细胞比较,SGC-7901细胞中PlncRNA-1表达水平明显升高,差异有统计学意义(P 0.05);与未转染组比较,干扰组细胞中PlncRNA-1表达水平、细胞增殖活力和细胞在S期、G2/M期所占百分比以及PI3K、p-AKT、CyclinD1、Bcl-2蛋白表达水平均明显降低,而细胞凋亡率和细胞在G0/G1期所占百分比明显升高,差异有统计学意义(P 0.05);但阴性组和未转染组之间各指标差异均无统计学意义(P0.05)。结论 PlncRNA-1在胃癌SGC-7901细胞中表达升高,干扰其表达可抑制SGC-7901细胞增殖并诱导细胞周期阻滞和凋亡,其作用机制与抑制PI3K/AKT信号通路的活化有关。     

PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白在胃癌中表达

目的探讨PI3K/AKT/m TOR信号转导通路中PTEN、p-AKT和p-m TOR蛋白在胃癌中的表达及其与临床病理特征的关系。方法应用免疫组化法检测胃癌、癌旁和正常胃黏膜组织中PTEN、p-AKT和p-m TOR蛋白的表达情况,并分析其与病理参数之间的关系。结果 PTEN在胃癌中的表达率为53.03%,在癌旁与正常胃黏膜中的表达率为84.85%和74.36%,p-AKT在胃癌中的表达率为56.06%,在癌旁与正常胃黏膜中的表达率为16.67%和2.56%,p-m TOR在胃癌中的表达率为90.91%,在癌旁和正常胃黏膜中的表达率分别为71.21%和5.13%,3组间差异均有统计学意义(P0.001)。PTEN的阳性表达与患者年龄、性别、肿瘤的直径、分化程度、浸润深度、淋巴结转移以及TNM分期均无关(P0.05)。p-AKT在胃癌中的表达与患者年龄、性别和肿瘤直径无关(P0.05),而与肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结转移和TNM分期有关(P0.05)。p-m TOR在胃癌中的表达仅与肿瘤浸润深度有关(P0.05),与患者年龄、性别、肿瘤的直径、分化程度、淋巴结转移以及TNM分期均无关(P0.05)。PTEN蛋白与p-AKT蛋白阳性表达率之间存在负相关关系且具有统计学意义(P0.05),p-m TOR蛋白与PTEN蛋白以及p-m TOR蛋白与p-AKT蛋白表达阳性率之间均无明显相关(P0.05)。结论 PTEN在胃癌组织中低表达,p-AKT和p-m TOR在胃癌组织中高表达,PI3K/AKT/m TOR信号转导通路可能参与了胃癌的发生与发展。     

白藜芦醇对胃癌MGC-803细胞增殖抑制作用

目的 探讨白藜芦醇对人胃癌MGC-803细胞株细胞周期影响及其机制.方法 采用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法和集落形成试验检测白藜芦醇对胃癌细胞的增殖抑制作用,流式细胞术检测细胞周期的改变,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测细胞凋亡抑制基因-2(bcl-2)、增殖基因c-myc的mRNA表达水平.结果 白藜芦醇可抑制胃癌细胞增殖和集落形成能力,低、高剂量组的抑制率分别为6.9%,17.6%和27.98%,63.39%,差异均有统计学意义(P＜0.05);白藜芦醇能使胃癌细胞周期阻滞于G_0/G_1期,明显下调胃癌细胞bcl-2、c-myc基因mRNA表达水平(P＜0.05);用药24 h后,白藜芦醇高剂量组bcl-2和c-myc基因相对表达量分别为(0.54±0.04),(0.58±0.05),与空白对照组(0.91±0.05),(0.85±0.03)比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 白藜芦醇可抑制胃癌MGC-803细胞增殖并使其细胞周期阻滞于G_0/G_1期,可能与下调bcl-2、c-myc基因表达有关.     

基于RNA-seq探讨二氢丹参酮Ⅰ抑制胃癌细胞增殖的作用机制

目的 为了阐明二氢丹参酮Ⅰ(DHTS)抗胃癌的作用机制,为其在临床应用中提供思路及数据支持。方法 采用RNA测序(RNA-seq)技术探索DHTS抗胃癌的具体作用机制。结果 发现4 353个差异基因表达。这些差异基因参与了肿瘤发生发展的多条信号通路,主要涉及PI3K/Akt/m TOR信号转导通路等。在测序结果中,有89个差异基因被注释到PI3K/Akt/m TOR信号转导通路,推测该信号转导通路和DHTS诱导胃癌细胞凋亡密切相关。Western-blot检测验证了DHTS可显著抑制PI3K、Akt及m TOR的磷酸化,且显著增加Caspase-3和LC3蛋白的表达水平,从而促进胃癌细胞凋亡和自噬,抑制胃癌细胞增殖。结论 DHTS促进胃癌细胞凋亡,是通过活性氧介导的氧化应激促进细胞凋亡,具体作用机制可能是:活性氧介导的氧化应激抑制PI3K/Akt/m TOR信号通路,从而诱导细胞凋亡以及自噬,进而抑制胃癌细胞的增殖生长。     

流式细胞术检测苦参素对人胃癌细胞系MGC-803凋亡的作用

目的:运用流式细胞术检测苦参素对人胃癌细胞系MGC-803的凋亡作用.方法:运用流式细胞术检测细胞凋亡率及凋亡相关基因蛋白Bcl-2和Bax的表达.结果:苦参素1mg/ml、2mg/ml作用24h后,流式细胞仪检测结果显示,细胞凋亡率与阴性对照组相比,差异具有显著性(P＜0.05);Bcl-2表达量明显减少,Bax表达量明显增加,差异具有显著性(P＜0.05).结论:苦参素对人胃癌细胞系MGC-803有诱导凋亡作用,其机制与上调Bax和下调Bcl-2表达有关.     

PI3K/Akt信号通路对胃癌细胞SGC7901细胞化疗效果的影响

目的运用磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂(phosphatidylinositol 3-kinases,PI3-K)LY294002[2-(4-吗啉基)-8-苯基-4氢-1-苯并吡喃-4-酮]作用于胃癌细胞系SGC7901,探讨抑制PI3K/Akt信号转导通路对胃癌细胞化疗敏感性的影响。方法采用MTT比色法,流式细胞术检测5-FU、DDP及ADM单独或联合PI3K抑制剂LY294002对人胃癌细胞SGC7901的抑制率、凋亡率。并分析单独及联合应用LY294002对SGC7901细胞周期的影响。Western-blot检测单独及联合化疗药后P-Akt蛋白在SGC7901细胞中的表达水平。结果单独使用化疗药5-FU、DDP及ADM均可抑制SGC7901细胞增殖、诱导其凋亡。当化疗药与抑制剂联合应用,对细胞的抑制作用明显增强,促凋亡作用增强,与对照组比较(P0.05)。细胞周期同步分析显示,单独用药均可将SGC7901细胞阻滞于G0/G1期。联合使用抑制剂使处于G0/G1期细胞增加。Western blot显示化疗药上调P-Akt蛋白的表达,联合使用抑制剂后SGC7901细胞P-Akt蛋白的表达与未使用抑制剂比较减弱,差异有统计学意义(P0.05)。结论阻断PI3K/Akt信号通路可提高化疗药5-FU、DDP及ADM对胃癌细胞株SGC7901的抑制率,凋亡率并使阻滞于G0/G1期细胞增多;LY294002通过阻断PI3K/Akt信号通路,抑制P-Akt蛋白表达,增强化疗药的敏感性;LY294002阻断PI3K/Akt信号通路对5-FU、DDP、ADM治疗胃癌有一定的协同或增强作用。     

RNA干扰NGAL基因表达对乳腺癌细胞增殖凋亡的影响机制研究

目的分析RNA干扰中性粒细胞相关载脂蛋白(NGAL)基因的表达对乳腺癌细胞增殖凋亡的影响及机制。方法利用蛋白质印迹(Western Blot)方法检测乳腺癌组织及人乳腺癌MCF-7、T47D和MDA-MB-231细胞株中NGAL的蛋白表达;小干扰RNA(siRNA)-NC及NGAL-siRNA转染人乳腺癌MCF-7细胞,未转染任何siRNA作为对照组,检测转染48 h后各组细胞中NGAL的蛋白表达情况;利用细胞计数试剂盒(CCK8)方法检测细胞的增殖情况;利用流式细胞仪检测细胞的凋亡;利用Western Blot方法检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、磷脂酰肌醇-3(PI3K)、丝氨酸苏氨酸激酶(AKT)及磷酸化的丝氨酸苏氨酸激酶(p-AKT)的蛋白表达情况。结果乳腺癌组织中NGAL的蛋白表达显著高于癌旁组织(P0.05),NGAL于乳腺癌MCF-7细胞中的蛋白表达最高,选择其作为后续研究;siRNA-NC组NGAL、Cleaved Caspase-3、PI3K及p-AKT蛋白表达和细胞存活率及凋亡率与相应的对照组比较差异无统计学意义(P0.05),而NGAL-siRNA组NGAL、PI3K和p-AKT蛋白表达及细胞存活率均显著低于相应的对照组(P0.05),NGAL-siRNA组的细胞凋亡率及Cleaved Caspase-3蛋白表达均显著高于相应的对照组(P0.05)。结论 NGAL基因在乳腺癌组织及细胞中高表达,抑制NGAL基因的表达会显著降低细胞增殖及促进细胞凋亡,其机制与PI3K/AKT信号通路的调控有关。     

雷帕霉素对卵巢癌细胞株生物学特性影响的实验研究

目的 探讨雷帕霉素对卵巢癌细胞株SKOV3增殖凋亡、周期分布的影响及可能的分子机制。方法 体外培养卵巢癌SKOV3细胞,MTT检测雷帕霉素对SKOV3细胞生长抑制率的影响;流式细胞术检测雷帕霉素对细胞凋亡、细胞周期的影响;蛋白印迹法检测雷帕霉素对mTOR通路蛋白PTEN、AKT、p-mTOR、mTOR、S6K及抗凋亡蛋白Bcl-2的影响。结果 雷帕霉素可抑制细胞增殖、阻滞细胞周期,加速细胞凋亡,呈现时间依从性,但作用24h其阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡的能力较低,与对照组比较无统计学差异(P>0.05)。其他各组与对照组比较有统计学差异(P<0.05)。同时雷帕霉素可引起细胞的G1阻滞,S期、G2-M期减少。蛋白印迹法显示SKOV3细胞经雷帕霉素处理后导致PETN上调,mTOR、p-mTOR及Bcl-2下调;对AKT的影响,作用24 h表达上调,48 h、72 h后表达下调,S6K表达无变化,各组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 雷帕霉素可抑制卵巢癌细胞株生长增殖,促进细胞凋亡,可能通过阻断mTOR通路、抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达来发挥抗肿瘤作用。     

前列腺癌细胞DU145同步化诱导的DNA损伤反应通路和PI3K/Akt通路对凋亡抑制因子基因API2(BIRC3)mRNA表达的影响

目的探讨在前列腺癌细胞DU145同步化培养后引起的DNA损伤反应通路和PI3K/AKT通路对凋亡抑制因子(IAP)基因API2(BIRC3)mRNA表达的影响,同时分析API2基因所在染色体是否存在特异性的异常。方法采用无血清的饥饿培养法使细胞同步在G0期;分别用含羞草碱(mimosine)、胸腺嘧啶(thymidine)和噻氨酯哒唑(nocodazole)使细胞同步在G1期、S期和G2/M期并引起DNA损伤反应,同时加入PI3K的特异性抑制剂ly294002以阻止PI3K/AKT通路。通过RT-PCR半定量法检测API2 mRNA在各个细胞周期相的表达情况。通过细胞遗传学的常规G式显带法,分析凋亡抑制因子基因所在的染色体是否存在特异性的异常。结果 mimosine同步化的G0/G1期细胞达到了78.04%,thymidine同步化的S期细胞达到62.19%,nocodazole同步化的G2/M 60.5%。API2基因位于染色体11q22-q23,存在易位,如t(11;12)(q;q)。API2mRNA的表达,非同步化的ly294002组分别与同步化的mimosine+ly294002组、nocodazole+ly294002组和thymidine+ly294002组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论前列腺癌细胞株DU145存在某些染色体的结构和数目异常,这些异常可能影响某些基因的表达。药物的同步化激活了DNA损伤反应通路和生存信号通路,再通过PI3K/Akt通路,而不是通过P53通路,在细胞周期的某个时相调控API2(BIRC3)mRNA的表达。     

穗花杉双黄酮对人胃癌细胞株MGC-803增殖抑制及凋亡的影响

目的:研究穗花杉双黄酮在体外对人胃癌细胞MGC-803增殖抑制及凋亡的影响。方法:应用MTT法检测穗花杉双黄酮对MGC-803细胞增殖的影响;应用流式细胞仪检测穗花杉双黄酮对MGC-803细胞凋亡的影响;应用Western bolt检测其对MGC-803细胞凋亡相关基因表达的影响。结果:穗花杉双黄酮在对MGC-803细胞给药24后,与空白组相比,能显著MGC-803细胞的增殖,且这种抑制成浓度依赖关系。AnnexinV/PI双染法结果显示穗花杉双黄酮能诱导MGC-803细胞的凋亡,且呈现浓度依赖关系,Western bolt结果显示,穗花杉双黄酮能上调Bax表达,下调Bcl-2表达。结论:穗花杉双黄酮能有效抑制人胃癌细胞的增殖并诱导其凋亡;其机制可能是通过上调Bax表达,下调Bcl-2而实现。     

垂体肿瘤转化基因1对结肠癌SW480细胞增殖的影响及其机制研究

目的 研究垂体肿瘤转化基因 1(Pituitary Tumor Tansforming Gene1,PTTG1)过表达对人结肠癌细胞SW480增殖和周期的影响及其可能机制。方法 采用脂质体转染法将pcDNA3.1(+)-PTTG1及空载pcDNA3.1(+)质粒转染人结肠癌SW480细胞,G418法筛选阳性克隆。Western blot法检测PTTG1和cyclin D、cyclin E、p21的表达。MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期。结果 （1）成功获得PTTG1高表达的SW480细胞pcDNA3.1(+)-PTTG1及对照pcDNA3.1(+)细胞,Western blot结果显示pcDNA3.1(+)-PTTG1细胞PTTG1表达量分别为pcDNA3.1(+)细胞和SW480细胞的3.58倍和3.42倍;（2）过表达PTTG1基因后,SW480细胞周期改变,G0/G1期细胞减少而S期和G2/M期细胞增加;细胞周期调控蛋白cyclin D和cyclin E表达升高,p21表达降低;SW480细胞增殖显著性加快。（3） 过表达PTTG1基因后,SW480细胞中PI3K/AKT信号活化增强,使用PI3K/AKT信号抑制剂LY29400干预后,细胞增殖减弱,周期蛋白cyclin D和cyclin E表达降低,p21表达升高。结论 PTTG1基因过表达可能通过活化PI3K/AKT信号加速SW480细胞从G1期向S期的转化促进细胞增殖,提示PTTG1蛋白可能成为结肠癌治疗的一个潜在靶点。     

miR-150基于PI3K/Akt信号通路调控乳腺癌细胞生物学特性的研究

目的探讨miR-150在乳腺癌组织中的表达,明确miR-150通过PI3K/Akt信号通路对乳腺癌细胞的增殖和凋亡能力的影响。方法 RT-PCR检测miR-150在乳腺癌组织和癌旁组织中的表达,将miR-150 inhibitors和阴性对照转染至人乳腺癌细胞系MCF-7,以空脂质体作为对照,RT-PCR检测转染结果,转染后培养48 h,MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡能力,蛋白免疫印迹法检测Cleaved caspase3、PI3K、AKT、p-AKT蛋白的表达。结果乳腺癌组织中miR-150的表达量显著高于癌旁组织(P0. 01);空白对照组和阴性对照组中miR-150的表达差异无统计学意义(P0. 05),miR-150-SiRNA组中miR-150的表达明显低于对照组(P0. 01);空白对照组和阴性对照组增殖率差异无统计学意义(P0. 05),而miR-150-SiRNA组细胞增殖率明显低于对照组(P0. 01);空白对照组和阴性对照组细胞凋亡率和Cleaved caspase3蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P0. 05),而miR-150-SiRNA组细胞凋亡率和Cleaved caspase3蛋白相对表达量均明显高于对照组(P0. 01); PI3K、p-AKT蛋白表达在空白对照组和阴性对照组间比较差异无统计学意义(P0. 05),miR-150-SiRNA组PI3K、pAKT蛋白表达显著低于对照组(P0. 01)。AKT蛋白在3组间比较差异无统计学意义(P0. 05)。在乳腺癌细胞中加入PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002,作用48 h,细胞增殖和凋亡结果与miR-150-SiRNA组一致。结论 miR-150在乳腺癌中高表达,干扰miR-150的表达能够显著抑制乳腺癌细胞系MCF-7的增殖,并通过上调Cleaved caspase来促进细胞凋亡,其调控作用可能与PI3K/AKT信号通路有关。     

Linc-ROR调控PI3K/AKT信号通路介导口腔鳞状细胞癌细胞增殖侵袭

目的探讨长链非编码RNA ROR(Linc-ROR)在口腔鳞状细胞癌(OSCC)组织和细胞中的表达水平以及对OSCC细胞增殖侵袭的调控。方法选取本院收治的90例OSCC患者的组织标本,采用实时荧光定量PCR分析OSCC组织及细胞中Linc-ROR的相对表达量。构建Linc-ROR过表达的OSC-4细胞系和Linc-ROR敲除的CAL-27细胞系,分别采用CCK-8、流式细胞术和Transwell方法检测Linc-ROR对OSCC细胞增殖、凋亡以及迁移侵袭能力的影响。采用Western Blot的方法检测Linc-ROR对PI3K/AKT通路的影响。结果与正常的口腔黏膜组织和细胞相比,Linc-ROR表达在OSCC组织和细胞中均显著上调(P0.05);与NC组相比,过表达Linc-ROR OSC-4细胞的增殖和侵袭能力得到显著升高,凋亡率显著下降(P0.05);与Sh-NC组相比,敲除Linc-ROR CAL-27细胞的增殖和侵袭能力受到显著抑制,同时凋亡率显著增加(P0.05);Linc-ROR过表达显著激活PI3K/AKT通路,而Linc-ROR敲除则抑制PI3K和AKT的磷酸化水平。结论 Linc-ROR在OSCC组织和细胞中均显著高表达;Linc-ROR过表达可明显促进OSCC细胞的增殖侵袭及抑制凋亡,作用机制是激活PI3K/AKT通路。     

PI3K/Akt通路在尼古丁促NCI-H1975细胞增殖及抑制凋亡中的作用

目的探讨PI3K/Akt通路在尼古丁促进人肺腺癌细胞NCI-H1975增殖及抑制其凋亡中的作用。方法不同浓度尼古丁(0 nmol/L、1 nmol/L、10 nmol/L、100 nmol/L、1μmol/L、10μmol/L)处理细胞72 h或者1%μmol/L尼古丁处理细胞不同时间(24、48、72 h)后,用RT-PCR、Western blot测PI3K/Akt通路及其下游分子(Bad、Caspase9、Fox O3a、m TOR)的mRNA和蛋白质变化情况;不同浓度尼古丁处理细胞1 h后,用Western blot测PI3K/Akt通路及其下游分子的磷酸化蛋白质(p-Akt、p-Bad、p-Caspase9、p-Fox O3a、p-m TOR)变化情况。结果随尼古丁浓度增大或者其作用时间延长,人肺腺癌细胞NCI-H1975中PI3K mRNA及蛋白质表达上调(P0.05),PI3K/Akt通路下游分子Bad、Caspase9、FoxO3a、m TOR mRNA及蛋白质表达下调(P0.05);蛋白质磷酸化水平(p-Akt、p-Bad、p-Caspase9、p-Fox O3a、pm TOR)随尼古丁浓度增大而增高(P0.05),具有浓度依赖性。结论尼古丁可能通过PI3K/Akt通路调节其下游多个靶分子的mRNA表达、蛋白质表达及磷酸化蛋白质从而调节人肺腺癌细胞NCI-H1975的增殖与凋亡。     

隐丹参酮对人肝癌HepG2细胞自噬及PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响

目的观察隐丹参酮对人肝癌HepG2细胞自噬的影响,并探讨其可能机制。方法体外培养HepG2细胞,采用CCK-8检测细胞活力,并计算IC_(50);Annexin V-FITC/PI双染法检测HepG2细胞凋亡;mRFP-GFP-LC3转染HepG2细胞,检测自噬流情况;Western blot分析检测自噬相关蛋白LC3,Beclin-1及PI3K/Akt/mTOR信号通路蛋白的表达。结果隐丹参酮可显著抑制HepG2细胞活力,并诱导细胞凋亡;隐丹参酮显著增加HepG2细胞自噬小体及自噬溶酶体数量(P0.05);隐丹参酮显著升高HepG2细胞LC3-II/LC3-I比值及Beclin-1表达(P0.05),同时降低p-PI3K/PI3K,p-Akt/Akt和p-mTOR/mTOR(P0.05)。结论隐丹参酮可诱导HepG2细胞自噬,其机制可能与抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路有关。     

PI3K-AKT信号传导通路与鼻咽癌的相关性的初步研究

目的探讨鼻咽癌患者磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K—AKT)信号转导通路及其鼻咽癌细胞株(CNE2)之间的关系。方法按诊断标准选取我院门诊、健康体检和住院病人鼻咽癌患者研究组和空白对照组,各5例。比较2组鼻咽癌患者磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K—AKT)信号转导通路及其鼻咽癌细胞株(CNE2)的相关性。结果研究组和空白对照组的PI3K和AKT的蛋白表达量明显高于正常值。而LY294002对CNE2细胞生长、增殖具有抑制作用,而且呈剂量依赖性。LY294002作用后鼻咽癌细胞株CNE2细胞的PI3K和AKT的蛋白表达均减弱。LY294002可以诱导CNE2细胞的凋亡。随着LY294002浓度的增加,凋亡率呈上升趋势,15、30、50nmol/L的LY294002作用后CNE2细胞所产生的凋亡率分别为(5.621±0.125)、(18.522±0.764)、(24.270±0.215),而空白对照组为(3.430±0.234),差异有统计学意义(P<0.05)。结论 LY294002与鼻咽癌鼻咽癌细胞株CNE2间存在显著负相关,并可以抑制鼻咽癌鼻咽癌细胞株CNE2的生长和增殖从而诱导其凋亡。磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K—AKT)信号转导通路的激活及其鼻咽癌细胞株(CNE2)之间存在显著正相关关系。     

紫草素调控PI3K/Akt/mTOR信号通路影响人子宫内膜癌细胞株RL95-2增殖、凋亡的实验研究

目的观察紫草素通过调控磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路对人子宫内膜癌(EC)细胞株RL95-2增殖、凋亡的影响。方法取对数期生长细胞,随机分为4组,对照组、研究1～3组,每组5个复孔,对照组、研究1～3组分别用终浓度为0、0.4、0.8、1.2μg/ml的紫草素进行干预。观察干预48 h后细胞形态学变化;采用MTT实验检测并对比干预24 h、48 h、72 h后细胞增殖情况;采用流式细胞术检测并对比干预48 h时细胞凋亡率;采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测干预48 h后PI3K、Akt、mTOR mRNA表达水平;采用蛋白免疫印迹法检测干预48 h后PI3K、mTOR蛋白表达及蛋白表达比值AKT/pAKT。结果 (1)倒置显微镜下观察,对照组细胞生长状态良好,3个研究组细胞数量减少、轮廓及遮光性增强,部分细胞胞浆可见空泡,细胞收缩变圆、部分漂浮状态,其中研究3组生长状态最差;(2)不同时刻MTT实验A值组间比较,差异均有统计学意义;3个研究组MTT实验不同时刻A值均低于对照组,研究3组低于研究1组和研究2组,研究2组低于研究1组,差异均有统计学意义;各组MTT实验A值随时间的延长呈显著增加趋势(P0.05);(3)细胞凋亡率组间比较,差异均有统计学意义;3个研究组细胞凋亡率均高于对照组,研究3组高于研究1组和研究2组,研究2组高于研究1组,差异均有统计学意义;(4)PI3K、mTOR mRNA和蛋白相对表达量、蛋白表达比值AKT/pAKT组间比较,差异均有统计学意义;3个研究组PI3K、mTOR mRNA和蛋白相对表达量、蛋白表达比值AKT/pAKT均低于对照组,研究3组低于研究1组和研究2组,研究2组低于研究1组,差异均有统计学意义;AKT mRNA相对表达量组间比较,差异无统计学意义。结论紫草素可通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制EC细胞株RL95-2的增殖,并且促进其凋亡,其中1.2μg/ml的紫草素干预效果最佳。     

MYCT-1基因特异的siRNA对GES-1细胞凋亡,增殖及细胞周期的影响

目的探讨沉默MYCT-1基因对GES-1细胞凋亡、细胞周期及细胞增殖的影响。方法采用siRNA转染GES-1细胞后分别应用AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞术检测其对细胞凋亡的影响,应用PI单染流式细胞术分析对细胞周期的改变,应用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测siRNA对细胞增殖的作用。结果siRNA转染GES-1细胞后,与对照细胞相比,细胞凋亡率明显增高(P<0.05);细胞增殖率降低(P<0.05),细胞周期检测表明细胞停滞于S期(P<0.05)。结论MYCT-1基因维持一定的表达水平对于正常细胞生长调控是必需的,MYCT-1基因对细胞周期的调控主要体现在S期向G1期的转变过程。