线粒体DNA点突变有关的中国大家族母系遗传性高血压研究

目的 研究具有母系遗传性特点的原发性高血压中国大家系临床与遗传学特点。方法 对入选的1865例原发性高血压患者进行线粒体DNA测序分析,发现线粒体DNA点突变,对其进行家系随访,收集该家系成员临床资料进行分析,分析其遗传学特点。结果 该家系中母系成员高血压患病率高达55.6%,非母系成员高血压患病率15.6%（P＜0.01）;母系成员高血压发病年龄有提前的趋势[Ⅱ代（62.0±6.2）岁;Ⅲ代（46.3±5.8）岁;Ⅳ代（23.3±2.9）岁]母系成员血糖、总胆固醇、血钠明显高于非母系成员（P＜0.05）,而超声结果没有明显差异;遗传学分析发现母亲患病子代发病率明显高于父亲患病者（P＜0.05）,男女发病率没有差异（P＞0.05）;结论 该家系母系成员高血压发病率明显高于非母系成员,该家系符母系遗传特点,高血压发病与线粒体DNA突变有关,提示线粒体DNA突变可能与母系遗传性高血压发病有关,在高血压发病中发挥重要作用。     

母系遗传糖尿病线粒体基因突变的观察

采用PCR-RFLP、DNA直接测序技术对14个有明确母系遗传史的糖尿病家系进行线粒体基因筛查。结果14例先证者及对照组均未检出A3243G等3个线粒体基因突变位点。家系成员发现携带G3316A突变，T3394C突变，三例均为健康携带者。结论G3316A突变、T3394C突变不是糖尿病的独立致病因素。     

线粒体转运RNA基因突变与原发性高血压的相关研究

目的探究线粒体转运RNA(tRNA)基因突变与母系遗传原发性高血压(EH)的关联性。方法依据EH诊断和母系遗传判别标准,筛选2015年1月至2018年12月解放军总医院心血管内科收治的母系遗传EH患者17例(A组)、非母系遗传EH患者65例(B组)。选取同期来院进行健康体检的正常对照人群33名(C组)。对全线粒体DNA(mtDNA)进行测序并与线粒体基因文库MitoMap的修正剑桥序列进行比对,分析3组受试者线粒体tRNA基因突变率差异及其与母系遗传EH发生的关系。应用SPSS 19.0软件对数据进行分析。结果纳入人群中母系遗传EH占总EH 20.7%(17/82)。mtDNA序列对比分析发现,与C组(0.04%)比较,A组(0.28%,P=0.024)及B组(0.12%,P=0.046)患者线粒体tRNA基因总变异率明显升高,但A与B组间比较差异无统计学意义(P=0.076)。对A组患者进一步分析显示,仅有1个线粒体tRNA基因位点突变的先证者A06、A11和A13所在3个家系分别发生mtDNA A5823G、mtDNA T4386C与mtDNA C15910T突变,三个家系母系成员EH发病率分别为53.8%(7/13)、87.5%(7/8)和75.0%(9/12),发病率均较高,提示这3个位点突变可能与母系遗传EH发生密切关联。另外,mtDNA 5597缺失在A组(4例,23.5%)、B组(14例,21.5%)和C组(1例,3.0%)均出现。与C组比较,A组(P=0.002)与B组(P=0.002)患者mtDNA 5597缺失率均显著升高,但A组与B组间比较差异无统计学意义(P=0.127)。结论 mtDNA A5823G、mtDNA T4386C与mtDNA C15910T突变与母系遗传EH有较好的关联性,但mtDNA 5597缺失与母系遗传EH关系不大。     

线粒体DNA突变与原发性高血压相关性的研究进展

原发性高血压（EH）作为心脑血管疾病的主要危险因素,严重危害人类健康。前期研究发现,EH在许多家系中都存在母系遗传特性;因此,线粒体DNA（mtDNA）突变成为了探索EH发病机制的新目标。目前已发现多个与EH相关的mtDNA突变位点,这些突变被证实能够导致线粒体氧化磷酸化缺陷,ATP 合成降低,反应活性氧（ROS）增加和诱导线粒体介导的细胞死亡。据此推断,对线粒体功能障碍的深入研究将有望诠释母系遗传性高血压的分子发病机制,而且EH相关的mtDNA突变将有望成为母系遗传性EH诊断的遗传学标志物。鉴于此,本文将对EH相关的mtDNA突变和功能机制进行全面综述。     

母系遗传性肌病和心肌病:与线粒体性DNA tRNA~(Leu(UUR))的关系

线粒体基因组不同位点的突变都会影响到线粒体转译自身基因的功能和导致线粒体DNA(mtDNA)依赖性呼吸链复合体的部分缺陷,它们与临床上不同的线粒体疾患相关。一种新的母系遗传性疾病,特征为成人肌病和心肌病并存,而无神经系统受累,存在于单一的大家系的成员中。在指令 t-RNA的mtRNA 基因中,一种异质性的新的突变已被鉴定。该家系可供研究的21例中,5例临床发病,10例无症状母系成员,6例正常父系成员。家系中所有母系成员无论有无发病均存在蓬毛状红纤维。父系成员肌肉活检标本     

2型糖尿病合并线粒体糖尿病1例报告并文献复习

正线粒体糖尿病是一种特殊类型糖尿病,主要依靠基因检测来确诊,1992年van den Ouweland等首次报道了由线粒体tRNA~(Leu(UUR))基因nt3243A→G点突变引起的一个母系遗传糖尿病伴神经性耳聋的家系。临床工作中如发现患者线粒体糖尿病临床特征,可直接进行该突变的检测。该文通过1例2型糖尿病患者及其直系亲属的基因检测结果进行分析,并总结相关文献学习,报道如下。     

用变性高效液相色谱检测和脱氧核糖核酸测序方法对三个肥厚型心肌病家系β肌球蛋白重链基因突变的分析结果

目的:研究家族性肥厚型心肌病(HCM)的主要致病基因β肌球蛋白重链(MYH7)基因突变情况.方法:用变性高效液相色谱(DHPLC)检测和脱氧核糖核酸(DNA)测序方法对三个肥厚型心肌病家系成员的MYH7基因8、14外显子及附近上下游序列进行检测分析;另选正常对照者50例.结果:三个家系其中一个家系发现MYH7基因14外显子中存在Thr441Met突变,外显子8也存在一个点突变.另外两个家系均存在外显子8的C到T的突变,但表型不一.其中一个家系还存在内含子13和19的多态位点.此外,三个家系MYH7基因第3外显子均发现同义突变.结论:MYH7基因在肥厚型心肌病家系中具有较高的突变率.运用变性高效液相色谱技术,能够快速有效的进行基因突变筛查.     

线粒体tRNAGln对中国汉族人原发性高血压发病的影响

目的 检测线粒体tRNAGln在中国汉族原发性高血压患者中的突变情况,并对发生突变的患者临床特征进行分析,以观察线粒体tRNAGln突变与原发性高血压的关系,探讨原发性高血压病患者母系遗传的遗传标志和临床特点.方法采集并整理原发性高血压患者的一般资料、血常规、血生化及心脏彩色超声检查结果.分离白细胞并提取DNA,采用特...     

母系遗传性糖尿病伴耳聋家系患者的临床和 mtDNA A3243G点突变研究

目的 探讨母系遗传性糖尿病伴耳聋(MIDD)患者的临床及mtDNA A3243G点突变特点.方法 收集5个MIDD家系成员的临床资料,以及部分外周血白细胞DNA标本,检测mtDNA A3243G点突变情况.结果 5个家系患者共24例,平均发病年龄约33岁;临床表型包括MIDD、线粒体糖尿病、感音神经性耳聋、线粒体脑肌病伴乳酸血症和卒中发作以及线粒体心肌病等.主要临床表现为消瘦、乏力、耳聋、卒中样发作、心悸等症状.有16例患者进行了基因检查,12例发现mtDNA A3243G点突变.结论 MIDD家系成员的临床表型异质性明显,耳蜗神经及胰腺最易受累,mtDNAA3243G突变率较高.     

浙江地区汉族人线粒体DNA ND1基因T3394C突变与老年2型糖尿病

目的 探讨线粒体DNA ND1基因T3394C突变与老年2型糖尿病的关系. 方法 采用聚合酶链反应(PCR)产物直接测序法对340例无血缘关系的2型糖尿病患者(其中老年糖尿病组90例,非老年糖尿病组250例)和265例健康对照者(老年健康对照组130例,非老年健康对照组135例)的血细胞线粒体DNA进行突变位点检测,并用DNASTAR和Antheprot 5.0软件分析突变位点. 结果 老年糖尿病组、老年健康对照组和非老年糖尿病组分别检出5例、1例和2例T3394C突变.T3394C突变在老年糖尿病组和老年健康对照组之间分布差异有统计学意义(P＜0.05),在老年糖尿病组和非老年糖尿病组之间分布差异也有统计学意义(P＜0.05).蛋白质结构预测显示T3394C突变引起ND1蛋白二级结构改变. 结论 线粒体DNA ND1基因T3394C突变可能与老年2型糖尿病的发生有关.     

家族性原发性高血压与醛固酮合成酶基因多态性相关性研究

目的:探讨家族性原发性高血压与醛固酮合成酶(CYP11B2)基因-344T/C多态性的相关性及该基因-344T/C多态性频率分布特点。方法:以家系为基础进行原发性高血压家系—血压正常家系对照研究。原发性高血压家系(高血压家系组)34个,142例受试者;正常血压家系(正常血压家系组)31个,134例受试者。采用多聚酶链反应—酶切(PCR-RELP)技术,分析醛固酮合成酶基因多态性。基因型和等位基因频率用基因计数法。应用SPSS10.0统计软件,采用t检验或χ2检验进行分析。结果:高血压家系组的TT、CT基因型明显多于正常血压家系,两组比较,有极显著性差异(P<0.01);各代分别比较,均有极显著性差异(P<0.01)。在高血压家系组各代T等位基因发生频率与正常血压家系比较,有极显著性差异(P<0.01)。结论:家族性原发性高血压与醛固酮合成酶基因-344T/C多态性之间具有相关性。T等位基因频率增高,是原发性高血压患者家族中醛固酮合成酶基因-344T/C多态性分布特点,可能是家族性原发性高血压遗传的一个标志。     

新突变致复合杂合子家族性高胆固醇血症家系的基因检测

目的对临床诊断为遗传性高胆固醇血症纯合子患者所在家系成员的相关基因进行突变检测和分析,探讨该病的分子诊断方法和发病的可能分子机制。方法以该家系中3代共6人的基因组DNA为模板,用PCR对低密度脂蛋白受体（LDLR）基因的全部18个外显子和启动子以及载脂蛋白B-100（Apo B-100）基因3500-3531区域进行扩增,琼脂糖凝胶电泳鉴定后对PCR产物直接测序。测序结果与Gene Bank中该基因的正常序列对比找出突变,结合该家系成员临床表型证实突变。结果在ApoB-100的3500-3531区域未发现突变,而在先证者LDLR基因的第4外显子发现新的点突变685delA杂合性腺嘌呤缺失和386A〉G杂合错义突变,其父存在685delA杂合性腺嘌呤缺失,其母存在386A〉G杂合错义突变。结论证实家系先证者是存在LDLR突变的复合杂合子,发现的新的LDLR基因突变位点386A〉G和685delA分别来源于父系和母系的遗传,可能是该家系发病的分子基础。     

携带线粒体DNA ND4区12026A→G点突变的糖尿病家系临床特点

目的在以往工作的基础上，分析线粒体基因ND412026A→G突变的糖尿病家系临床特点。方法两个携带此点突变的家系共25人，收集相应临床资料，提取外周血基因组DNA，以PCR-RFLP法检测线粒体基因ND4区np12026突变，并分析其临床特征。结果两个家系中共发现13例该点突变，发现5例糖尿病患者，3例甲亢患者（其中1例合并糖尿病），未发现耳聋。结论线粒体基因ND412026A→G突变携带者的家系临床表现多样，并可能与自身免疫相关。     

线粒体DNA3161-3610片断基因突变与糖尿病的关系

104例糖尿病（DM）患者和50名正常无DM家族史对照者的基因测序研究显示，线粒体DNA3316G→A伴随3290 T→C、3421G→A点突变；3497C→T和3571C→T同时基因突变可能与DM发生有关。     

线粒体电压依赖阴离子通道对携带线粒体DNAA4263G突变的细胞株线粒体钙循环的影响

目的 研究线粒体外膜电压依赖阴离子通道(voltage-dependent anion channel,VDAC)在携带线粒体DNA (mitochondrial DNA, mtDNA) A4263G突变的细胞株线粒体钙循环中的作用. 方法 对该家系的4个母系成员(3个血压异常和1个血压正常者)和3名遗传背景相同的对照者建立了传代淋巴细胞系,利用共聚焦显微镜评价VDAC在携带mtDNA A4263G突变的高血压患者细胞线粒体钙循环中的作用. 结果 与正常对照者淋巴细胞比较,突变细胞株线粒体内钙荧光强度及线粒体膜电势(Δψm)降低,加入苍术苷(线粒体通道蛋白开放剂)后正常者线粒体内钙荧光强度增加,而突变携带者没有明显改变,但两者Δψm均降低,加入环孢素A(CsA)后可以抑制苍术苷作用. 结论 线粒体VDAC功能异常导致mtDNA A4263G突变携带者细胞线粒体对钙通透性增加,Δψm降低,加入苍术苷进一步导致Δψm降低,加入CsA后可以抑制苍术苷作用.     

TRβ基因突变致甲状腺激素抵抗综合征

目的 研究一甲状腺激素抵抗综合征家系的甲状腺激素受体β( thyroid hormone reecptorβ)的基因突变情况.方法 提取患者及其家系5名成员的外周血基因组DNA,PGR分段扩增TRβ基因1-10号外显子,产物直接进行DNA测序检测突变位点.结果 测序结果显示,该家系中有2名成员TRβ基因第10外显子1642位核苷酸发生C转换为A的错义突变,使该位点所编码的氨基酸由脯氨酸变为苏氨酸(P453T),此种突变为杂合子突变.结论 经基因测序检测诊断证实患者TRβ基因第10外显子存在P453T突变,该突变可能导致了甲状腺激素抵抗综合征发生.     

线粒体DNA ND1基因nt3394 T→C突变与老年人2型糖尿病

目的：了解线粒体烟酰胺腺嘌呤脱氧核苷酸（NADH）脱氢酶第一亚单位（ND1）基因中339位点T→C突变与我国老年人2型糖尿病的关系。方法：收集无血缘关系的208例老年2型糖尿病患者，同时以180例无糖尿病家族史的老年糖耐量正常者作为对照，用聚合酶链反应扩增。限糖尿病患者，同时以180例无糖尿病家族史的老年糖耐量正常者作为对照，用聚合酶链反应扩增、限制性内切酶HaeⅢ消化进行点突变筛选。结果：发现9例患者存在线粒体DNA ND1基因3394位点T→C突变（4．3％），非糖尿病者中仅有1例突变（0．6％），两组比较差异有显著性（P＜0．05）。结论：线粒体DNA ND1基因中3394位点T→C突变可能与我国老年人2型糖尿病的发病有关。     

RET原癌基因点突变所致多发性内分泌腺瘤病2B型一例家系研究

目的：研究1例中国家系中RET原癌基因点突变与多发性内分泌腺瘤病2B型（MEN－2B）发病的相互关系及其遗传特征。方法：收集1例MEN－2B患者术后甲状腺髓样癌肿瘤组织和外周血DNA标本及其父母外周血DNA标本运用PCR和逆转录PCR技术以及直接基因测序技术对上述标本中RET原癌基因16号外显子区域进行分子检测。结果：在患者肿瘤组织（c)DNA及其外周血DNA中均检测到RET原癌基因16号外显子918密码子处基因点突变,即：918Met(ATG）→Thr(ACG).且由基因测序图示,该突变为杂合子错义突变。而患者父母外周血DNA样本中均未发现上述RET原癌基因突变。结论：与国外报道相似,在中国MEN－2B患者中,也找到了RET原癌基因16号外显子基因点突变918Met(ATG)→Thr(ACG)。虽然其发病具有遗传倾向,但同样存在散发病例。MEN－2B发病的基因检测应成为该病的诊断治疗以及患者一级亲属早期诊断和临床干预的分子基础。     

肾集合管细胞上皮钠通道β亚单位R566X突变特点的家系分析

目的在疑诊Liddle’s综合征的家系患者中行基因突变筛查,明确患者的遗传型和表型。方法收集疑诊家系,包括临床资料和静脉血,300例正常健康者作为对照。候选基因为编码肾集合管细胞上皮钠通道(ENaC)β亚单位基因(SCNN1B,NCBI序列号6338),设计引物对SCNN1B所有外显子及其侧翼内含子序列进行基因扫描,聚合酶链反应(PCR)扩增目的片段,双脱氧末段终止法测序。结果发现先证者SCNN1B基因13外显子C1696T突变,其父亲、姐姐也携带同样基因突变,而300例正常对照中未发现此突变。分析提示该突变导致编码蛋白566位出现了编码终止,先证者的表型严重,并且高度类似原发性醛固酮增多症,而家系患者表型较轻,其表型异质性有待明确。结论 SCNN1B C1696T突变可引起编码蛋白R566X突变,从而导致Liddle’s综合征,但携带该突变的患者临床表型存在异质性,并且容易误诊为原发性醛固酮增多症,建议进一步优化原发性醛固酮增多症的诊治流程,并对有条件的患者及早行基因诊断。     

骨形成蛋白受体2基因突变Q433X导致恶性临床表型

目的探讨骨形成蛋白2型受体基因(BMPR2)突变与临床表型的关系。方法我们收集了一个包含四代成员的中国人FPAH家系,该家系中有3名成员被诊断为PAH。我们提取了该家系所有成员的外周血基因组DNA并利用PCR方法直接扩增BMPR2基因的13个外显子,扩增产物纯化后直接测序并分析其序列是否存在变异位点。结果该家系被诊断为肺动脉高压的3名成员均携带BMPR2基因c.1297C>T突变,此突变导致BMPR2蛋白433位的谷氨酰胺变为终止密码子(p.Q433X)。携带此突变的3名家系成员临床表型均较恶性,平均肺动脉压力达到72.7mm Hg,且均伴有心电图的异常改变。结论 BMPR2基因突变大约占到肺动脉高压突变总数的90%以上,是其最主要的致病基因。本研究中发现的BMPR2无义突变Q433X与恶性临床表型相关联,提示该突变在疾病的发生和发展中可能扮演重要角色。