AdMax系统构建腺病毒载体介导SCL基因转染Cajal样间质细胞及其表达

目的 构建含有人干细胞白血病(stem cell leukemia,SCL)基因的重组腺病毒载体,并观察其对豚鼠膀胱Cajal样间质细胞的转染及其介导SCL基因的表达.方法 采用PCR方法从含人SCL基因质粒中扩增SCL基因,连接到腺病毒穿梭质粒的多克隆位点上,构建重组穿梭质粒pDC315-EGFP/SCL,在脂质体介导下与腺病毒辅助大质粒pBHGlox(delta)E1,3Cre共转染293细胞,包装产生复制缺陷型重组腺病毒pDC315-SCL经HEK293细胞扩增,纯化后测定病毒滴度.通过观察绿色荧光蛋白的表达评估重组腺病毒对Cajal样间质细胞的转染率,RT-PCR法分析转染Cajal样间质细胞后SCL mRNA的表达.结果 PCR结果和Western blot法检测证实pDC315-SCL重组腺病毒载体构建成功,滴度达到1×1010 PFU/ml,对膀胱Cajal样间质细胞的转染率高达98%,RT-PCR法检测转染Cajal样间质细胞后SCL mRNA有表达.结论 成功构建pDC315-SCL重组腺病毒载体对Cajal样间质细胞有很强的转染能力,可介导SCL基因在Cajal样间质细胞的表达.     

小型猪胃肠道Cajal间质细胞超微结构的研究

目的明确小型猪胃肠道Cajal间质细胞(interstitialcellsofCajal,ICC)超微结构特点。方法麻醉后取小型猪胃肠组织小进行透射电镜观察。结果小型猪胃肠道壁内神经及Cajal间质细胞的突起相互连接形成网络,分布均匀。Cajal间质细胞的主要结构特点为:胞核清晰,完整的基膜,丰富的沿细胞膜分布的小空泡,细胞质内细胞器丰富,以线粒体最显著。以及内质网和发育良好的高尔基氏器,核糖体丰富,异染色质较多,沿核膜分布,其胞质突起围绕神经束形成不完整的“鞘”样结构。Cajal间质细胞之间、与神经元细胞、肌细胞之间形成很多的缝隙连接。结论Cajal间质细胞具有独特的超微结构特点,易于识别,且其超微结构特点与其功能相适应运动功能     

癌性腹水中的肿瘤相关淋巴细胞对小肠Cajal间质细胞损伤的实验研究

目的 观察癌性腹水中淋巴细胞对小肠Cajal间质细胞的影响,探讨癌性腹水所产生的胃肠蠕动功能障碍的病理生理学基础.方法 建立癌性腹水模型,进行腹水成分的鉴定及小肠Cajal间质细胞的病理学、超微病理学、c-kit免疫荧光及凋亡指标的检测.结果 癌性腹水中的淋巴细胞以T淋巴细胞为主,这些肿瘤相关的淋巴细胞可导致小肠Cajal间质细胞的损伤、凋亡.结论 肿瘤相关淋巴细胞可能造成小肠Cajal间质的损伤,是癌性腹水所产生的胃肠蠕动功能障碍的病理生理学基础.     

Cajal间质细胞介导胃动素兴奋胃起搏区运动的作用

Cajal间质细胞介导胃动素兴奋胃起搏区运动的作用     

卡巴胆碱对缺血/再灌注损伤肠道Cajal间质细胞的影响

目的： 观察缺血/再灌注损伤肠道Cajal间质细胞、炎症因子、氧自由基变化以及拟胆碱药卡巴胆碱对上述指标的影响。方法: 成年雄性SD大鼠, 随机分为手术对照（S）组、肠缺血再灌注（I/R）组和I/R+卡巴胆碱(I/R+CAR)组。 制备肠I/R模型,于夹闭后2.5 h处死动物, 取肠袋组织测定TNF-α含量、SOD活性和MDA含量;另取肠组织制作病理切片、进行Cajal间质细胞免疫组化染色。结果: I/R组肠组织中Cajal间质细胞阳性表达量比S组显著降低（P<0.01）, I/R+CAR组Cajal间质细胞阳性表达量显著高于I/R组(P<0.01）。I/R组MDA和TNF-α含量较S组显著升高(P<0.01)、SOD活性显著降低(P<0.01)。I/R+CAR组MDA和TNF-α含量与I/R组比较明显减少(P<0.01),SOD活性有所回升(P<0.05)。结论: 肠缺血/再灌注损伤时炎症因子及氧自由基增加,导致Cajal间质细胞损伤;卡巴胆碱可通过减少炎症因子释放及氧自由基损伤,减轻Cajal间质细胞的损伤。     

糖尿病豚鼠膀胱Cajal样间质细胞形态学变化及意义

目的 观察糖尿病豚鼠膀胱Cajal样间质细胞形态学变化,探讨糖尿病膀胱功能改变原因.方法 用链脲佐菌素单次注射建立豚鼠糖尿病模型,建模成功4周后,行尿动力学检查,采用组织冷冻切片、酪氨酸蛋白激酶受体单克隆抗体间接免疫荧光检测及透射电镜技术观察膀胱中Cajal样间质细胞变化.结果 与对照组相比,糖尿病豚鼠膀胱最大逼尿肌压显著降低,最大膀胱容量及膀胱顺应性显著明显增高.免疫荧光检测显示逼尿肌中KIT阳性细胞与逼尿肌组织面积百分比均明显小于对照组.电镜下可见Cajal样间质细胞内细胞器变性、减少,胞质广泛溶解,核周间隙增宽,与其他细胞间的缝隙连接显著减少、结构破坏、连接松散.结论 糖尿病豚鼠膀胱Cajal样间质细胞的数量减少和结构破坏可能是造成膀胱功能障碍的重要原因之一.     

糖尿病大鼠模型胃Cajal间质细胞、平滑肌细胞、神经和血管的超微结构研究

糖尿病大鼠模型胃Cajal间质细胞、平滑肌细胞、神经和血管的超微结构研究     

特洛细胞在不同组织中的分子标记研究现状

<正>特洛细胞（telocytes,TCs）是一种新发现的间充质来源的间质细胞,形态结构具有特异性和多样性,目前认为TCs可能对维持组织稳态和损伤修复有潜在的作用,参与不同疾病的发生发展[1]。TCs于2005年被L.M. Popescu教授等[2]在电镜下发现,认为其与Cajal间质细胞（interstitial cells of Cajal,ICCs）结构类似,遂将其命名为Cajal样间质细胞（interstitial Cajallike cells,ICLCs）。随着显微镜技术的发展及对TCs的深入研究,人们发现此类细胞与ICCs在分子标记上存在明显不同,     

胃肠运动起搏器——Cajal间质细胞研究进展

Cajal间质细胞 (interstitialcellsofcajal,ICC) 1 893年首次由西班牙神经解剖学家Cajal发现 ,ICC是胃肠道中与神经密切相关的一类特殊间质细胞 ,主要参与胃肠基本电节律 (basicelectricrhythm ,BER)调控和神经递质信号转导。而在一系列ICC相关性胃肠动力性疾病和胃肠基质肿瘤 (GastrointestinalStromalTumors,GIST)发病机制中的深入研究 ,为疾病的病因治疗提供了一个更新的思路     

阻断C-KIT导致小鼠小肠基本电节律紊乱及Cajal间质细胞缺失

目的观察小鼠小肠在体基本电节律、Cajal间质细胞的分布及阻断C-K IT对其的影响。方法新生的Balb/c小鼠,腹腔内隔天注射C-K IT抗体(ACK2)100μg,共5次,对照组注射生理盐水。于小鼠出生后第10天测定小肠在体基本电节律活动。用免疫组化方法观察小肠Cajal间质细胞的分布。结果对照组小鼠的小肠在体基本电节律活动表现为近似正弦波形,ACK2处理组表现无规律。ACK2处理组小肠基本电节律的频率及幅度为(3.515±1.033)次/m in和(0.045±0.016)mV,均显著低于对照组的(13.997±0.976)次/m in和(0.086±0.018)mV(P<0.01)。对照组Cajal间质细胞主要分布于肌间神经丛区(ICC-MY)及深肌层丛区(ICC-DMP),而ACK2处理组未能明显观察到其分布。结论阻断C-K IT可导致小鼠小肠基本电节律紊乱及Cajal间质细胞缺失。     

远细胞:概念、形态、分布和生理作用

远细胞(telocyte,TC)是近年来新发现并命名的一种间质细胞,因其与Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICC)形态相似,曾被称为Cajal样间质细胞(interstitial Cajal-like cells,ICLC).TC独特的突起结构被称为远足(telopodes),远足很细且极其长,呈念珠形.现已发现,多种形态学及免疫组化染色可以观察或标记远细胞.TC存在于人体内的多种空腔及实质性器官,如心脏、胃肠道、乳腺肺和支气管等.TC因其分布、存在的位置及独有的结构,目前推测其可能具有机械支持、引导组织形成与修复、参与细胞的再生与更新、免疫监视、神经传递等生理作用.     

干细胞因子对高糖环境下豚鼠膀胱Cajal样间质细胞c-kit mRNA及蛋白表达的影响

目的 观察干细胞因子(stem cell factor,SCF)对高糖环境下豚鼠膀胱Cajal样间质细胞c-kit mRNA及蛋白的表达影响.方法 胶原酶消化法原代分离培养豚鼠膀胱Cajal样间质细胞,培养24 h后分别加入葡萄糖浓度为5 mmol/L(正常对照组)、15 mmol/L(高糖组)培养基培养72 h后,高糖组分为高糖对照组、SCF干预组(50 ng/ml、100 ng/ml),分别继续培养24 h、72 h,应用RT-PCR、激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)分别检测膀胱Cajal样间质细胞c-kit mRNA和蛋白表达变化.结果 高糖对照组较正常对照组c-kit mRNA及蛋白表达均明显下降.24 h组中,SCF50 ng/ml较高糖对照组c-kit mRNA(P>0.05)和蛋白表达(P>0.05)差异不大,SCF100 ng/ml较高糖对照组c-kit mRNA(P<0.05)和蛋白表达(P<0.05)升高;72 h组中,SCF50 ng/ml组、SCF100 ng/ml组较高糖对照组c-kit mRNA(P<0.01)和蛋白表达均明显升高(P<0.01).结论 高浓度SCF可促进已发生形态、机能变化的离体膀胱Cajal样间质细胞c-kit表达上调.     

2.108 糖尿病大鼠模型胃Cajal间质细胞、平滑肌细胞、神经和血管的超微结构研究

目的观察糖尿病大鼠模型胃Cajal间质细胞、平滑肌细胞、神经和血管的超微结构改变,为糖尿病性胃轻瘫的发生提供理论依据.方法健康成年雄性SD大鼠50只,体重250～300g,随机分为2组.糖尿病组 30只;正常对照组20只.糖尿病组实验大鼠先稳定3天,然后给予禁食12h(晚8时至早 8时),自由饮水,晨8时大鼠乙醚麻醉后,糖尿病组给予四氧嘧啶45mg/kg经舌下静脉1次注射,饲养4个月,定期测定血糖浓度≥200mg/mL,同时尿糖在以上确定为糖尿病模型.正常对照组对照组给予等量生理盐水注射.大鼠颈椎脱位后,剖腹迅速剪取胃,沿胃小弯侧剖开胃,在装有Kreb's液的烧杯内仔细去除胃肠内容物,Kreb's液的组成为120.3NaCl,5 .9KCl,2.5CaCl2,1.2MgCl2,20.2NaHCO3,1.2NaH2PO4,11.5glucose.取胃底、胃体、胃窦组织各1块,并将组织平铺于滤纸上,2.5%戊二醛固定后,0.1mol/L的磷酸缓冲液冲洗,1%的四氧化饿后固定,0.1mol/L的磷酸缓冲液冲洗,乙醇梯度脱水,Epo n 812浸透包埋,半超薄切片1～2μm,染色后光镜下定位,确认粘膜层、粘膜下层、环形肌层和纵行肌层的位置.用瑞典LKB超薄切片机行超薄切片50nm,超薄切片用酒精醋酸双氧铀、再用柠檬酸铅染色,用HITACHI H-600透射电镜观察照相.结果糖尿病大鼠模型胃Cajal间质细胞数量减少.Cajal间质细胞超微结构的变化为Cajal间质细胞与其它的Cajal间质细胞之间、与平滑肌细胞之间、与神经末梢之间的连接显著减少,尚存的细胞间连接的结构也有破坏、结构不清,连接松散,线粒体肿胀、空泡样变、甚至溶解,细胞内的胞质广泛溶解,有大量的胞质内空泡形成,Cajal间质细胞内的细胞器数量较正常减少,核糖体减少,粗面内质网脱颗粒,核内异染色质明显.糖尿病大鼠模型胃平滑肌细胞排列紊乱,肌细胞内有很多较大的胞质溶解性空泡,线粒体肿胀、空泡样变、溶解.糖尿病大鼠模型胃神经末梢部分肿胀、溶解,肌间丛神经元的细胞核溶解坏死,胞质部分溶解,线粒体肿胀,嵴溶解,粗面内质网扩张,质部分溶解.糖尿病大鼠模型胃毛细血管管壁显著不平,管壁增厚、淤曲,连续性中断,胞质内有小空泡.结论糖尿病大鼠模型胃Cajal间质细胞、平滑肌细胞、神经和血管的超微结构改变,可能是胃肠功能紊乱--胃轻瘫的发生的病理基础.     

泻剂引起结肠壁形态学改变的临床意义

目的：探讨长期使用泻剂后便秘加重的形态学基础。方法：通过建立大鼠长期使用泻剂大黄后形成的泻剂结肠模型，观察了结肠肠壁结构，特别是肌间神经丛和Cajal间质细胞在光镜和电镜下的肜态学变化。结果：大黄引起肠壁出现广泛的慢性炎症，全层嗜酸性粒细胞浸润，粘膜下层明显水肿，肌问神经丛冲经元变性，Cajal间质细胞消失。结论：长期使用大黄所引起的肠壁神经系统损害、结肠慢波起搏细胞消失以及超敏炎症反应是泻剂加重慢传输型便秘的结构基础之一。     

电针对糖尿病胃轻瘫大鼠胃Cajal间质细胞自噬信号通路的影响

目的：探讨电针对糖尿病胃轻瘫大鼠胃窦Cajal间质细胞自噬信号通路及胃动力的影响。方法：42只SD大鼠随机分为对照组(15只)和建模组(27只)。采用腹腔注射链脲佐菌素联合高脂高糖饮食不规则喂养8周建立糖尿病胃轻瘫模型，将建模成功的大鼠随机分为模型组和电针组，每组12只。电针组采用电针“足三里”“三阴交”“梁门”穴治疗；对照组与模型组不予以任何治疗。干预结束后，检测各组大鼠血糖水平、尿糖水平、胃排空率和小肠推进率；激光共聚焦检测Cajal间质细胞自噬流；透射电镜观察Cajal间质细胞自噬状态及超微结构；Western blot法检测Cajal间质细胞中微管相关蛋白1轻链3(LC3)、p62、磷酯酰肌醇3-激酶(PI3K)、三磷酸磷脂酰肌醇(PIP3)、蛋白激酶B(PKB/AKT)、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)及磷酸化mTOR(p-mTOR)蛋白表达量。结果：与对照组比较，模型组大鼠胃排空率和小肠推进率显著下降(P<0.01)，血糖和尿糖水平显著升高(P<0.01),AMPK表达下降(P<0.05),LC3-II/LC3-I、p62...     

1.13胃肠动力的细胞基础

胃肠动力性疾病常见.但迄今为止对它的病理生理学机制认识不多,这亦是目前对此类疾病有效治疗缺乏的原因之一.胃肠道是一个复杂的器官,它有1亿个以上的神经细胞和2.5亿个以上的间质细胞,并是一个贮存大量激素和旁分泌物质的化学库.消化动力包括肠神经元,平滑肌细胞和Cajal间质细胞这三类细胞的功能整合.     

全层铺片技术显示胃肠道不同部位Cajal间质细胞

正Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICC),是西班牙神经解剖学家Santiago Ramony Cajal于1893年首次在胃肠道中发现的一类特殊间质细胞,与胃肠道平滑肌和神经纤维末梢在解剖学上有紧密联系,具有独立功能,既是胃肠起搏细胞,又具有传导神经递质的作用~[1]。ICC广泛存在于哺乳动物的整个消化道管壁内,按分布区域可大致分为:分布于胃、小肠和结肠内的环肌与纵行肌之间的肌间神经丛ICC;位于黏膜下环肌层表面的ICC;位于小肠深肌丛区域的ICC;广泛散布于环肌和纵肌肌束内的ICC~[2]。目前消化道全层铺片技术由于能够直观、全面地显示ICC的分布、形态以及形成的细胞网络,而成为研究胃肠神经系统的重要方法之一,但文献中却鲜少提及此方法的详细操作过程。已知ICC特异性表达由原癌基因c-kit编码的受体酪氨酸激酶     

干细胞与胃肠动力障碍性疾病的关系研究进展

胃肠动力障碍性疾病是一种常见的消化道疾病。干细胞的研究可能为胃肠动力障碍性疾病的治疗提供新的方法和思路。目前国内外关于干细胞与胃肠动力关系的研究甚少 ,主要包括以下方面。1　Cajal间质细胞与胃肠动力障碍性疾Cajal间质细胞 (ICC)在胃肠平滑肌运动中起着重要的作用 ,它是胃肠运动的起搏者和肠运动神经与肌肉间的信息传递者。人类多种胃肠动力障碍性疾病与ICC的减少和缺失有关 ,如贲门失弛缓症就是由于ICC的缺失造成食管下段肌层持续收缩所致 ,此外还包括 :斑点病的先天性巨结肠 ,Cha gasic巨结肠 ,获得性巨结肠 ,慢性便秘 ,…     

胃肠道Cajal间质细胞起搏功能的研究进展

正正常的胃肠运动功能依赖于节律性的胃肠蠕动,这种规律性的蠕动目前主要认为与肠神经系统及众多的神经递质有关,但其具体的调控机制目前尚有争议,主要争论的焦点在于肠神经系统所释放的神经递质是否直接作用于平滑肌细胞~([1-2])。近年来,越来越多的研究发现,Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICC)在胃肠动力调节方面扮演着至关重要的作用~([3])。因此,本文拟就从生理结构基础、起     

豚鼠前列腺Cajal间质细胞的超微结构特点及功能

目的:观察豚鼠前列腺Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICCs)的超微结构特点以及ICCs和前列腺神经及平滑肌细胞之间的超微结构联系。方法:制作豚鼠前列腺组织切片并进行免疫荧光染色,使用酪氨酸激酶受体(c-Kit)抗体标记ICCs。制作豚鼠前列腺超薄组织切片,在透射电镜下寻找ICCs并观察其超微结构特点以及与周围神经、平滑肌细胞之间的超微结构联系。结果:免疫荧光标记发现豚鼠前列腺间质内有较多的c-Kit阳性ICCs。电镜下发现豚鼠前列腺组织内存在和c-Kit阳性ICCs形态、分布一致,符合典型胃肠道ICCs超微结构特点的间质细胞,这些前列腺ICCs分布于平滑肌细胞之间,与相邻的神经末梢形成典型的突触样连接,和周围的平滑肌细胞之间紧密相连。结论:豚鼠前列腺ICCs具有介导前列腺神经信号,调控平滑肌活动的超微形态学基础。