复方青龙衣胶囊对人胃癌SGC-7901细胞凋亡的形态学影响

目的:研究复方青龙衣胶囊对人胃癌细胞SGC-7901细胞凋亡的形态学影响,探讨其抑制人胃癌细胞的作用机制.方法:复方青龙衣胶囊设定3个不同药物浓度梯度(终质量浓度分别为2.0×10-3,1.0×10-3,0.5 ×10-3 g·L-1及阳性对照药羟基喜树碱(HCPT,0.5×10-3g·L-1)预处理人胃癌细胞SGC-7901 48 h,透射电镜观察其对SGC-7901细胞超微结构影响;荧光显微镜下观察其对SGC-7901细胞凋亡形态的影响.结果:以不同浓度的复方青龙衣处理人胃癌细胞SGC-7901 48 h,透射电镜结果显示,对SGC-7901细胞的超微结构有影响,提示可诱导细胞凋亡;荧光显微镜结果显示,经Hoechest33258染液染色后的SGC-7901细胞随着给药剂量的增大,凋亡细胞比例逐渐增加.结论:复方青龙衣胶囊可诱导人胃癌细胞SGC-7901细胞发生凋亡.     

蛇六谷石油醚提取物对BECN1基因敲减的人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响

目的应用RNA干扰(RNAi)技术干扰BECN1基因的表达,探讨蛇六谷石油醚提取物对BECN1基因敲减的人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响。方法用前期实验构建成功的GV112(LV-BECN1-RNAi)重组慢病毒表达载体转染人胃癌SGC-7901细胞。MTT法检测蛇六谷石油醚提取物抑制胃癌细胞增殖的有效浓度,确定实验药物浓度。每24h(共120h)用CCK法检测人胃癌SGC-7901细胞KD+蛇六谷(BECN1基因敲减组)、NC+蛇六谷(阴性对照组)、CON+蛇六谷(空白组)的细胞活性。结果蛇六谷石油醚提取物能有效抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖,且呈明显的浓度依赖性(P0.01);当人胃癌SGC-7901细胞BECN1基因敲减时则会降低其抑制作用(P0.05)。结论 BECN1基因敲减能减弱蛇六谷石油醚提取物抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖的能力,这可能是通过调节BECN1基因的表达诱导细胞自噬,从而抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖。     

健脾解毒方对胃癌细胞凋亡及基因调控机制的研究

目的:研究健脾解毒方对胃癌细胞凋亡及基因调控机制。方法:96孔板接种对数生长期SGC-7901细胞,接种浓度是5×104个/mL,以10、20、40μg/mL健脾解毒方分别作用于胃癌SGC-7901细胞24 h。倒置显微镜下察细胞形态;MTT法检测细胞活力;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;JC-1染色检测线粒体膜电位;运用Real-time PCR检测B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)、细胞色素C (Cytochrome c)、自杀相关因子(Fas)、半胱氨酸蛋白酶-8 (Caspase-8)基因表达;Westernblot检测Bax、Cytochrome c、Fas、Caspase-8蛋白表达。结果:与对照组比较,20、40μg/mL健脾解毒方组细胞抑制率较高,差异均有统计学意义(P 0.05),并且呈剂量依赖性。与对照组比较,10μg/mL的健脾解毒方处理24 h后,SGC-7901细胞形态学未有明显改变;20μg/mL的健脾解毒方处理24 h后,SGC-7901细胞形态学发生改变,细胞变圆;40μg/mL处理后的细胞皱缩,数目明显的减少。10、20、40μg/mL健脾解毒方处理SGC-7901细胞后,分别有5.98%、14.94%和31.88%细胞出现凋亡。与对照组比较,10、20、40μg/mL健脾解毒方组细胞凋亡率显著升高(P 0.05),并呈浓度依赖性。随着健脾解毒方浓度的增加,SGC-7901细胞的线粒体膜电位呈浓度依赖性下降(P 0.05)。与对照组比较,10、20、40μg/mL健脾解毒方组处理SGC-7901细胞24 h后,SGC-7901细胞中的Bax、Cytochrome c、Fas、Caspase-8的基因表达明显升高(P 0.05,P 0.01),并呈剂量依赖性。20、40μg/mL健脾解毒方处理SGC-7901细胞24 h后,随着药物浓度的增加,Bax、Cytochrome c、Fas、Caspase-8蛋白表达含量也增加(P 0.05,P 0.01),且呈浓度依赖性。结论:健脾解毒方能够剂量依赖性的诱导细胞发生凋亡可能与影响细胞线粒体膜电位和Bax、Cytochrome c、Fas、Caspase-8蛋白的表达相关。     

反左金丸水提物对人胃癌细胞SGC-7901凋亡及bcl-2、bax基因表达的影响

目的:观察反左金丸水提物(waterextractsofRetro-zuojinPill,WERZP)对人胃癌细胞(SGC-7901)生长的抑制和凋亡诱导效果,及其对bcl-2和bax表达的影响。方法:采用MTT比色法观察不同浓度的WERZP对SGC-7901的生长抑制情况;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Hoechst33258染色观察细胞形态学变化以及Westernblot方法检测WERZP对人胃癌细胞SGC-7901中bcl-2、bax蛋白表达的影响。结果:WERZP作用SGC-7901细胞24h后,细胞存活率显著降低(P<0.05),且与时间、剂量呈依赖关系。流式细胞仪PI单染亚二倍体峰分析,0.1,0.5,1,5和10mg·mL^-1WERZP作用SGC-7901细胞24h,细胞凋亡率分别为(4.02±1.33),(36.10±0.23),(55.91±0.95),(56.50±1.55)和(60.27±3.58)%,其中(0.5～10)mg.mL^-1组与对照组(2.66±1.33)%比较差异均有统计学意义(P<0.01)。Hochest染色结果显示细胞出现核固缩状和颗粒状荧光等典型的凋亡学特征。WERZP可降低SGC-7901细胞bcl-2基因表达和增加bax基因表达。结论:WERZP对SGC-7901生长有明显的抑制作用并可诱导SGC-7901的凋亡,bcl-2基因表达降低和bax基因表达增加可能是其凋亡机制之一。     

鱼藤素通过AKT/FoxO1信号通路诱导胃癌细胞凋亡的作用机制

目的：研究鱼藤素(De)诱导SGC-7901胃癌细胞凋亡的其作用机制。方法：运用CCK-8细胞活力检测法考察不同浓度(10、20、40、60、80、100 mol/L)鱼藤素作用24、48 h对SGC-7901胃癌细胞的细胞毒性;将SGC-7901胃癌细胞分为对照组及20、40 mol/L鱼藤素药物组,给药作用24 h后,蛋白质印迹法检测p-AKTThr308、叉头框蛋白O1(FoxO1)、B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）等蛋白的表达水平;运用蛋白激酶B（AKT）基因转染使SGC-7901胃癌细胞中AKT过表达,然后给予20、40 mol/L鱼藤素给药作用24 h,以未用AKT基因转染的SGC-7901胃癌细胞作为对照组蛋白质印迹法检测p-AKTThr308、FoxO1、Bcl-2等蛋白的表达水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测FoxO1、Bcl-2、Bax mRNA的表达水平。结果：不同浓度的鱼藤素对SGC-7901胃癌细胞均具有一定的细胞毒性;20、40 mol/L鱼藤素给药作用24 h能够显著降低SGC-7901胃癌细胞中p-AKTThr308、Bcl-2等蛋白的表达水平,升高FoxO1的表达水平;与对照组比较,AKT基因转染后,SGC-7901胃癌细胞中p-AKTThr308、Bcl-2等蛋白表达水平升高,FoxO1蛋白表达降低,与模型组比较,20、40 mol/L鱼藤素给药作用后能够降低p-AKTThr308、Bcl-2等蛋白的表达水平,降低Bcl-2 mRNA的表达水平,升高FoxO1及Bax的表达水平。结论：鱼藤素能够通过作用于AKT/FoxO1信号通路诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡。     

复方苦参注射液对胃癌SGC-7901细胞侵袭转移能力的影响

目的:研究复方苦参注射液对胃癌SGC-7901细胞侵袭转移能力的影响。方法:体外培养胃癌细胞系SGC-7901,MTT法测定药物对细胞增殖的抑制作用,应用粘附试验、Transwell趋化运动和Matrigel侵袭实验,研究复方苦参注射液及其不同浓度下对SGC-7901细胞的粘附、运动以及侵袭能力的影响。结果:复方苦参注射液浓度在0.25、0.5、1.0、1.5 mg/ml时均有一定的抑制胃癌SGC-7901细胞增殖的作用,且呈明显的量效和时效关系。复方苦参注射液不同浓度处理SGC-7901细胞后,体外粘附、侵袭和运动能力呈剂量依赖性下降。经复方苦参注射液(1.5 mg/ml)作用后SGC-7901细胞CD44V6蛋白表达减弱,胞浆棕黄色颗粒减少。结论:复方苦参注射液可以抑制胃癌细胞生长,降低细胞粘附、侵袭和运动能力,其机制可能与抑制CD44V6蛋白表达有关。     

青龙衣含药血清抑制胃癌SGC-7901细胞生长和诱导凋亡

目的:探讨青龙衣含药血清对胃癌SGC-7901细胞增殖及凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:Wistar大鼠随机分为空白组、青龙衣低剂量(25 g·kg~(-1)·d~(-1)),中剂量(50 g·kg~(-1)·d~(-1)),高剂量(100 g·kg~(-1)·d~(-1))组及顺铂(5 g·kg·d~(-1))组,连续灌胃给药7 d,空白组灌胃给予等体积生理盐水;末次给药2 h后,颈动脉采血,制备青龙衣含药血清;分别采用噻唑蓝(MTT)比色法、流式细胞术、烟酸己可碱(Hoechst)染色、实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测青龙衣含药血清对SGC-7901细胞增殖、凋亡率、凋亡指数、凋亡相关基因及凋亡信号通路蛋白表达的影响。结果:与空白组比较,青龙衣含药血清对SGC-7901细胞的增殖具有明显抑制作用(P0.05),青龙衣含药血清处理48 h后的早期、晚期凋亡率,凋亡指数及促凋亡基因Bcl-2相关X蛋白(Bax),Bcl-2相关K蛋白(Bak)mRNA表达均升高,抗凋亡基因B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)mRNA表达降低(P0.05);青龙衣含药血清组β-链蛋白(β-catenin),细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)及原癌基因(C-myc)蛋白表达均明显降低(P0.05)。结论:青龙衣含药血清对胃癌SGC-7901细胞的增殖具有抑制作用,该作用可能与诱导凋亡及抑制分泌型糖蛋白(Wnt)/β-catenin通路的活化有关。     

β-咔啉类生物碱抑制SGC-7901细胞迁移和侵袭的机制研究

该研究主要探索β-咔啉类生物碱抑制SGC-7901细胞迁移和侵袭的机制与黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)基因表达的相关性。采用CCK-8法测定不同浓度条件下β-咔啉类生物碱对胃癌SGC-7901细胞的增殖抑制率;并通过Transwell小室测定β-咔啉类生物碱对SGC-7901细胞迁移与侵袭能力的影响;qRT-PCR及Western blot技术检测FAK基因mRNA及蛋白的表达差异。然后将si-FAK-1051重组质粒转染到SGC-7901细胞中,再次采用qRT-PCR及Western blot技术鉴定FAK基因沉默效果,最后采用同样的方法检测FAK基因沉默对胃癌SGC-7901细胞增殖和迁移的影响。随着β-咔啉类生物碱浓度增加,人胃癌SGC-7901细胞增殖抑制率逐渐升高,IC50=13.364 mg·L-1;阳性对照组(5-FU,5 mg·L-1)和β-咔啉类生物碱组中Transwell小室内SGC-7901细胞均可见显著减少(P0.01),且β-咔啉类生物碱组SGC-7901细胞数目较阳性对照组明显降低(P0.01);阳性对照组、β-咔啉类生物碱实验组FAK基因mRNA及蛋白表达水平较空白对照组显著降低(P0.05)。si-FAK-1051转染入胃癌SGC-7901细胞后,FAK基因的mRNA及蛋白表达被明显下调(P0.05),细胞增殖和细胞迁移能力也显著降低(P0.05)。β-咔啉类生物碱较5-FU具有更有效的抑制胃癌SGC-7901细胞迁移与侵袭能力,而该机制可能与β-咔啉类生物碱抑制FAK基因mRNA及蛋白表达水平有关。     

白花蛇舌草内生真菌BY1不同提取部位对人胃癌细胞SGC-7901增殖和凋亡的作用研究

目的:研究白花蛇舌草内生真菌BY1乙酸乙酯提取部位、氯仿提取部位、甲醇提取部位对人胃癌细胞SGC-7901(SGC-7901细胞)增殖和凋亡的作用。方法:体外培养SGC-7901细胞,采用MTT法测定BY1不同提取部位对SGC-7901细胞干预48 h的增殖抑制作用,采用Hoechst 33258染色法观察SGC-7901细胞的凋亡变化。结果:BY1不同提取部位对SGC-7901细胞均具有抑制作用,由强到弱依次为氯仿部位、乙酸乙酯部位和甲醇部位,对SGC-7901细胞半数抑制浓度(IC_(50))分别为177.37±11.53μg/ml、380.53±40.07μg/ml和1 077.80±40.17μg/ml。细胞凋亡形态可观察到核固缩、核碎片和聚集等,药物干预48 h后凋亡率增加呈剂量-效应关系。结论:白花蛇舌草内生真菌BY1对SGC-7901细胞具有良好的抑制作用,并可诱导其凋亡。     

重楼醇提取物对胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察重楼醇提取物对胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用MTT法检测重楼醇提取物对胃癌细胞增殖影响的情况;采用流式细胞术考察不同浓度重楼醇提取物作用胃癌SGC-7901细胞后,细胞周期和细胞凋亡的变化。结果:不同浓度的重楼醇提取物作用于胃癌SGC-7901细胞后,细胞克隆率显著降低,且与剂量呈依赖关系。细胞周期分析显示:重楼醇提取物能够导致S期阻滞,G2/M期细胞比例显著下降,Alinenv-FITC法检测发现7μg·m L-1的重楼醇提取物作用胃癌SGC-7901细胞24h后的凋亡细胞比例为23.28%,明显高于正常对照组,且存在剂量依赖性。结论:重楼醇提取物对胃癌SGC-7901细胞生长有明显抑制作用,并可诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡。     

软坚散结颗粒对人胃腺癌SGC-7901细胞EMT的抑制作用及相关机制

目的:上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)现象的发生发展是肿瘤转移的关键因素之一,对胃癌EMT现象的研究可能有助于控制胃癌转移。本课题旨在研究软坚散结方(RJSJ)对人胃腺癌SGC-7901细胞EMT的抑制作用并探讨相关机制。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法观察RJSJ对SGC-7901细胞的抑制作用;采用transwell方法观察RJSJ对SGC-7901细胞侵袭的抑制作用;采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)观测SGC-7901细胞EMT过程中锌指E盒结合同源盒蛋白1(Zinc finger E-box binding homeobox 1,Zeb1),锌指E盒结合同源盒蛋白2(Zinc finger E-box binding homeobox 2,Zeb2)以及E-钙黏蛋白(E-cadherin)mRNA和蛋白的表达。结果:(1)MTT结果显示,不同浓度RJSJ组均能有效抑制SGC-7901细胞的增殖(P0.05),RJSJ对SGC-7901细胞的抑制作用呈剂量和时间依赖。(2)transwell侵袭实验结果显示,不同质量浓度RJSJ(250,500,1 000 mg·L-1)对SGC-7901细胞的穿膜能力有不同程度的抑制作用(P0.05)。(3)Real-time PCR和Western blot结果显示,与空白组比较,RJSJ各组均能使E-cadherin mRNA和蛋白表达增加,Zeb1,Zeb2mRNA和蛋白表达减少,其中RJSJ高剂量组能够明显上调E-cadherin mRNA和蛋白表达,下调Zeb1,Zeb2 mRNA和蛋白表达(P0.05)。结论:RJSJ对SGC-7901细胞有直接的抑制作用;RJSJ对SGC-7901细胞EMT有抑制作用,其机制可能与下调Zeb1,Zeb2 mRNA及蛋白表达,上调E-cadherin mRNA及蛋白表达有关。     

半夏泻心汤及其拆方对胃腺癌SGC-7901细胞周期和凋亡的影响

目的:从细胞增殖、凋亡、细胞周期角度,研究半夏泻心汤治疗胃癌机制。方法:把半夏泻心汤拆分为苦降、辛开和补益3个组方,1×104细胞/孔接种于96孔板,药物浓度为4,2,0.5,0.125 g·L-1,MTT法检测细胞增殖;1×105/孔接种于6孔板,全方和苦降高、低浓度为0.5,0.125 g·L-1,辛开和补益高、低浓度为4,2 g·L-1,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡。观察半夏泻心汤及其拆方对胃癌细胞SGC-7901增殖、细胞周期和凋亡的影响,并与5-氟尿嘧啶(5-Fluorouracil,5-Fu)比较。结果:半夏泻心汤全方及苦降、辛开组方能够抑制SGC-7901细胞增殖,全方IC50为1.645 g·L-1,苦降组为1.446 g·L-1,辛开组为3.867 g·L-1;它们增加SGC-7901细胞S期和G0-G1期百分比,促进细胞凋亡,高浓度强于低浓度,但补益组方对此没有作用。结论:半夏泻心汤及其拆方能够一定程度的抑制细胞增殖,以苦降组为最,补益组作用甚微,其机制可能与药物阻滞细胞至G1/S期和诱导细胞凋亡有关。     

双苓扶正抗癌制剂对SGC-7901细胞增殖及c-myc基因表达的研究

目的：研究双苓扶正抗癌制剂对人胃癌细胞增殖及c-myc基因表达的影响。方法：采用MTT比色法,观察双苓扶正抗癌制剂（40～640 μg·mL^-1）5个剂量组单用及其与阿霉素（0.4,4.0 μg·mL^-1）及顺铂（0.1,1.0 μg·mL^-1）分别合用在体外对人胃癌SGC-7901细胞增殖的抑制作用；采用流式细胞技术检测该制剂（80～320 μg·mL^-1）对c-myc基因阳性蛋白标记率的影响。结果：双苓扶正抗癌制剂单用体外作用24 h,对人胃癌细胞增殖具有抑制作用,在40～640 μg·mL^-1剂量下,其抑制率随剂量增加而增加；与阿霉素(0.4,4.0 μg·mL^-1)或顺铂(0.1,1.0 μg·mL^-1)分别合用,可提高对人胃癌细胞的抑制率；在80～320 μg·mL^-1剂量下,可抑制c-myc基因的表达。结论：双苓扶正抗癌制剂单用对人胃癌细胞增殖具有抑制作用,且具有量效关系；与阿霉素或顺铂分别合用对人胃癌细胞的抑制作用具有协同效应；下调c-myc基因的表达可能是该制剂抑制肿瘤细胞增殖的作用机制之一。     

枳实消痞丸诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的研究

目的:从细胞增殖、凋亡和周期角度研究枳实消痞丸治疗胃癌的机制.方法:胃癌SGC-7901细胞阴性对照组加完全培养基,1 ×104细胞/孔接种于96孔板,将枳实消痞丸分为4,2,0.5,0.125,0.05 g·L-15个质量浓度加入,分别作用24,48,72 h,MTT法检测细胞增殖;1×105/孔接种于6孔板,加入2,0.5,0.125 g·L-13个质量浓度的药物,分别培养48,72 h,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡.结果:枳实消痞丸4,2,0.5,0.125,0.05 g·L-1质量浓度作用于胃癌SGC-7901细胞,抑制率依次降低;作用于24,48,72 h,抑制率渐增.枳实消痞丸增加了G0/G1期的细胞比率,促进细胞凋亡,高、中浓度强于低浓度.结论:枳实消痞丸抑制了细胞的增殖,具有时间和浓度依赖性,其机制可能与药物阻滞细胞于G0/G1期和诱导细胞凋亡有关.     

夏龙方对人胃癌SGC-7901细胞黏附和侵袭的影响

目的:观察夏龙方对胃癌细胞SGC-7901黏附、侵袭、移动等转移生物学行为的影响。方法:体外培养SGC-7901细胞,分为夏龙方50,100,200 mg·L-1(低、中、高剂量)组和对照组,采用Cytoselect 48-Well Cell Adhesion Assay检测胃癌细胞与基质黏附能力;利用Transwell侵袭转移模型评价夏龙方对胃癌细胞侵袭能力的影响、划痕实验观察夏龙方对SGC-7901细胞移动能力的影响。结果:终浓度100,200 mg·L-1夏龙方能显著降低SGC-7901细胞黏附能力,50～200 mg·L-1可抑制SGC-7901细胞侵袭,终浓度50 mg·L-1夏龙方可显著抑制SGC-7901细胞迁移。结论:夏龙方可降低SGC-7901细胞的黏附能力,侵袭能力,抑制细胞迁移。     

三叶青提取物对肺癌A549细胞的体外抑制作用

目的:探讨三叶青提取物对肺癌细胞A549的体外抑制作用。方法:采用体外细胞培养技术,用MTT法观察三叶青提取物对肺癌细胞A549体外抑制作用的时效、量效关系;琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡;RT-PCR法检测细胞凋亡相关基因BcL-2的表达。结果:三叶青提取物以1×10-3g·L-1的浓度与A549细胞共培养48 h,其细胞活性有显著降低;不同浓度的三叶青提取物和A549细胞共同培养,药物浓度为1×10-2、1×10-31、×10-4g·L-1的三叶青提取物对A549细胞活性有显著性抑制作用。琼脂糖凝胶电泳有明显的梯状条带;不同浓度三叶青提取物作用于A549细胞后,细胞BcL-2基因的表达随浓度的增加而降低。结论:三叶青提取物对A549细胞具有明显的体外抑制作用,其抑制作用与药物的浓度和作用时间呈明显正相关。     

Matrine induces apoptosis in gastric carcinoma cells via alteration of Fas/FasL and activation of caspase-3

Aim of the study

Matrine, an alkaloid purified from the chinese herb Sophora flavescens Ait, is well known to possess activities including anti-inflammation, anti-fibrotic and anticancer. In this study, the mechanism of matrine inducing the apoptosis of gastric carcinoma cells was investigated.

Materials and Methods

Proliferation of SGC-7901 cells was examined by MTT assay. Cellular morphology was observed under transmission electron microscope. Flow cytometry (FCM) was used to observe the apoptosis of SGC-7901 cells by staining with annexinV-FITC/PI. The expression levels of Fas/FasL in SGC-7901 cells were monitored by FCM analysis using an indirect immunoflurenscence method. Activity of caspase-3 enzyme was measured by spectrofluorometry.

Results

MTT assay showed that matrine inhibited SGC-7901 cells proliferation in a dose-dependent and time-dependent manner. Apoptosis induction was demonstrated by morphological changes under electron microscope and FCM analysis. Florescence intensity levels of Fas and FasL were found to be equally up-regulated after matrine treatment, which were both correlated with apoptosis rate. The activity of caspase-3 enzyme increased in matrine groups, positively correlated with apoptosis rate.

Conclusions

Matrine could inhibit cell proliferation and induce apoptosis of SGC-7901 cells in vitro. The apoptosis induction appears to proceed by up-regulating Fas/FasL expression and activating caspase-3 enzyme.