小半夏加茯苓颗粒含药血清对肝癌细胞凋亡及其Bcl-2表达的影响

目的:观察小半夏加茯苓颗粒含药血清对肝癌SMMC-7721细胞凋亡及凋亡相关基因Bcl-2表达的影响。方法:选用SD大鼠制备小半夏加茯苓颗粒及原方汤剂、环磷酰胺(CTX)含药血清。①采用ELISA法检测细胞凋亡相关基因Bcl-2表达。②FCM法观察细胞生长凋亡情况。结果:①与空白对照组比较,颗粒剂组细胞液中Bcl-2含量降低(P0.05),汤剂组显著降低(P0.01)。②与同时段内空白对照组比较,含药血清作用18 h后,环磷酰胺(CTX)组、汤剂组、颗粒剂组细胞存活率有所下降(P0.05);作用36 h后,CTX组、汤剂组细胞存活率显著下降(P0.01)。结论:小半夏加茯苓颗粒含药血清可下调肝癌SMMC-7721细胞Bcl-2基因表达,抑制其生长增殖,其作用机制可能与诱导细胞凋亡或细胞毒作用有关。     

小半夏加茯苓颗粒含药血清体外对肝癌细胞SMMC-7721生长增殖的影响

目的: 采用血清药理学的方法,观察小半夏加茯苓颗粒对肝癌SMMC-7721细胞的抑制作用。 方法: 设空白对照组、环磷酰胺(CTX)组、原方汤剂组及颗粒剂不同剂量组,分别制备成含药血清与体外培养的肝癌SMMC-7721细胞共孵,倒置显微镜观察各组SMMC-7721细胞生长形态变化以及用MTT法检测其细胞增殖抑制率。 结果: 与空白对照组比较,CTX组、原方汤剂组以及颗粒不同剂量组均使SMMC-7721细胞生长形态发生明显改变,细胞生长不良,细胞数量减少;MTT实验结果显示CTX组、汤剂组、颗粒不同剂量组对SMMC-7721细胞作用24 h、48 h、72 h后,细胞增殖抑制率逐渐升高(P<0.05)。各时段内各中药组对细胞的抑制率均低于CTX组(P<0.05),原方汤剂组与颗粒大剂量组无显著差异(P>0.05)。 结论: 小半夏加茯苓颗粒含药血清对体外培养的肝癌SMMC-7721细胞具有明显的抑制作用,且其作用呈现时间-效应关系和剂量-效应关系。     

小半夏加茯苓汤水提物特征图谱及其止吐药效物质基础的研究

目的:建立小半夏加茯苓汤的特征图谱,探索小半夏加茯苓汤止吐作用的有效物质基础。方法:采用HPLC建立小半夏加茯苓汤的特征图谱。实验分3批,每批取健康家鸽50只,均分为空白对照组、呕吐模型组、小半夏加茯苓汤(拆方、生半夏)高、中、低剂量组(0.6,0.3,0.15 g·kg-1),按分组给药,对照组和模型组给予同体积蒸馏水,每天1次,连续3 d。末次药后1 h用硫酸铜制作家鸽呕吐模型,以呕吐潜伏期、呕吐次数、呕吐频率为指标,观察小半夏加茯苓汤(原方)、拆方(生半夏+生姜)、生半夏水提物对模型家鸽的止吐作用。结果:HPLC测定显示小半夏加茯苓汤中姜酚含量较高,以6-姜酚为最高,占23个标记特征峰总峰面积的20%左右。原方及拆方对硫酸铜所致家鸽呕吐均有不同程度抑制作用,止呕强度趋势为原方>拆方>生半夏。结论:小半夏加茯苓汤及拆方水提物有一定止吐的作用,结合复方中姜酚含量较高的特征图谱,提示姜酚可能是本方药止吐药效的物质基础之一。     

小半夏加茯苓汤含药血清对小鼠胚胎干细胞体外增殖及分化的影响

[目的]研究小半夏加茯苓汤含药血清对体外培养的小鼠胚胎干细胞(ES)增殖及分化的影响.[方法]噻唑蓝比色法(MTT)检测小半夏加茯苓汤含药血清作用下24、48、72、96 h后的ES细胞活性.半定量逆转录-聚合酶链反应法( RT-PCR)检测小半夏加茯苓汤含药血清作用下ES分化为心肌细胞的能力,判断受试物的胚胎发育毒性.[结果]在促细胞增殖方面:小半夏加茯苓汤含药血清作用下的ES细胞,在连续培养24、48、72、96 h时,其活性水平均呈显著上升趋势,与其他组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).在促细胞分化方面:小半夏加茯苓汤含药血清对ES分化心肌细胞的肌球蛋白重链基因β-MHC的表达能力,与其他组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).[结论]小半夏加茯苓汤含药血清能够促进ES细胞增殖,并能促进ES细胞向心肌细胞分化,提示在该实验剂量下,小半夏加茯苓汤无明显胚胎毒性.     

小半夏加茯苓汤对H22荷瘤小鼠瘤体中颗粒酶B和穿孔素表达的影响

目的观察小半夏加茯苓汤对H22荷瘤小鼠瘤体中的颗粒酶B及穿孔素表达的影响。方法建立体内H22荷瘤小鼠模型,随机分为荷瘤模型组、小半夏加茯苓汤高剂量组、小半夏加茯苓汤中剂量组、小半夏加茯苓汤低剂量组、顺铂组,每组24只。接种次日开始给药,荷瘤模型组给予生理盐水10g·kg-1,1次/d;小半夏加茯苓汤高、中、低剂量组,分别给予含4g、2g、1g生药·ml-1小半夏加茯苓汤水煎剂40,20,10g·kg-1,1次/d;顺铂组腹腔注射0.9%氯化钠溶液稀释顺铂5mg·kg-1,分别于第1,4,7,10天各给药1次,实验第11日称重断髓处死小鼠,取瘤体。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组化(IHC)检测瘤组织中的颗粒酶B和穿孔素的表达量情况。结果与荷瘤模型组比较,小半夏加茯苓汤高剂量组体重明显升高(P0.05),小半夏加茯苓汤高、中剂量组瘤重明显降低(P0.05),顺铂组瘤重更低(P0.01);小半夏加茯苓汤高、中剂量组,顺铂组颗粒酶B、穿孔素基因表达量升高;各给药组颗粒酶B与穿孔素蛋白表达均显著升高(P0.01)。与顺铂组比较,各组小半夏加茯苓汤体重、瘤重显著升高(P0.01)。结论小半夏加茯苓汤升高H22荷瘤小鼠瘤体中的颗粒酶B及穿孔素表达量,这可能是诱导细胞凋亡的机制之一。     

藤茶总黄酮和二氢杨梅素含药血清对肝癌 HepG2细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨藤茶总黄酮和二氢杨梅素含药血清对人肝癌细胞株HepG2增殖的抑制及凋亡的影响.方法:采用血清药理学方法制备藤茶总黄酮、二氢杨梅素、环磷酰胺(CTX)含药血清以及对照血清,作用于肝癌HepG2细胞,MTT法检测各种血清对HepG2细胞增殖的影响;倒置相差显微镜观察各种含药血清作用后肝癌HepG2细胞的形态学变化;AnnexinV/7AAD双标记法流式细胞术检测早期细胞凋亡的情况.结果:MTT法和显微镜观察显示藤茶总黄酮和二氢杨梅素20%含药血清能不同程度抑制HepG2细胞增殖,可致细胞形态学改变;AnnexinV/7AAD双标记法检测显示藤茶总黄酮20%含药血清可促肝癌HepG2细胞早期凋亡,但二氢杨梅素20%含药血清对肝癌HepG2细胞早期凋亡没有影响.结论:藤茶总黄酮能抑制肝癌HepG2细胞的增殖,诱导其产生早期凋亡.     

小半夏加茯苓汤防治顺铂诱发大鼠异食癖的研究

目的 观察小半夏加茯苓汤(半夏、生姜和茯苓)(XBFD)对顺铂诱发的化疗性大鼠异食癖的防治作用;探讨其作用机制与P物质(SP)之间的关系.方法 予42只雄性Spragye-Dawly大鼠腹腔注射顺铂(3 mg/kg)建立化疗性异食癖模型,小半夏加茯苓汤连续灌胃5d,观察小半夏加茯苓汤对大鼠异食高岭土量、摄食试料量及一般情况的影响;分别用免疫组化法和实时荧光定量PCR法检测顺铂化疗72 h后大鼠延髓及胃窦SP蛋白和mRNA的表达情况.结果 小半夏加茯苓汤可降低化疗大鼠异食高岭土的量,增加化疗大鼠摄食试料量,改善大鼠的一般情况;同时可降低大鼠延髓和胃窦SP蛋白和mRNA的表达.结论 小半夏加茯苓汤可防治顺铂诱发的大鼠异食癖,此作用可能与降低延髓和胃窦SP的合成、释放有关.     

构树总黄酮诱导HepG2细胞凋亡及其机理研究

目的:探讨构树总黄酮诱导HepG2细胞凋亡的机理。方法:采用流式细胞术观察构树总黄酮对HepG2细胞周期、细胞内活性氧(ROS)水平的影响,用qRT-PCR测定c-Myc,p53,bax,bcl-2和caspase-3基因mRNA表达水平的变化。结果:构树总黄酮剂量依赖性抑制HepG2细胞增殖。62.5μg/ml的构树总黄酮作用24 h,显著抑制HepG2细胞增殖,增加凋亡细胞比例,并将HepG2细胞阻滞于G1期;100μg/ml的构树总黄酮作用24 h,显著上调HepG2细胞p53、bax、caspase-3的mRNA水平,显著下调cMyc、bcl-2的mRNA水平;200μg/ml的构树总黄酮作用HepG2细胞6 h,显著增加细胞内ROS含量。结论:构树总黄酮能调节HepG2细胞c-Myc、p53、bax、bcl-2和caspase-3基因表达,并通过氧化应激,诱导HepG2细胞进入线粒体凋亡途径。     

平肺口服液抑制肺成纤维细胞生长和诱导凋亡

目的采用血清药理学方法,研究平肺口服液对人胚肺成纤维细胞增殖及诱导细胞凋亡的作用。方法平肺口服液10g/kg和20g/kg分别灌服大鼠,第1～7天每日一次,第8～10天每日两次,于第11天早上末次灌服后2h腹主动脉无菌采血制备含药血清。采用噻唑蓝(MTT)比色法和流式细胞术分别检测平肺口服液含药血清对人胚肺成纤维细胞(CCC-HPF-1)增殖、细胞凋亡和细胞周期的影响。结果平肺口服液20g/kg灌服所得大鼠含药血清作用96h和120h分别能抑制CCC-HPF-1细胞增殖(P0.01);流式细胞术检测表明该含药血清作用96h能诱导CCC-HPF-1细胞发生凋亡(P0.05)和G1/G0期阻滞(P0.05)。结论平肺口服液能抑制肺成纤维细胞增殖,诱导细胞凋亡以及使细胞周期阻滞于G1/G0期,这可能有助于其预防放射性肺损伤。     

小半夏加茯苓颗粒对化疗呕吐家鸽脑干中5-HT的影响

目的：观察小半夏加茯苓颗粒对顺铂所致呕吐家鸽脑干中5-HT的影响,探讨其防治呕吐的作用机理。方法：采用家鸽腹腔注射顺铂制造呕吐模型,用高效液相色谱-电化学检测法（HPLC—ED）检测家鸽脑干组织中5-羟色胺（5-HT）的含量。结果：模型组家鸽脑干5-HT含量明显升高,与空白对照组比较,差异有非常显著性意义（P〈0．01）;药物干预后,西药对照组、原方汤剂组、颗粒剂小剂量组、抗延迟性呕吐组家鸽脑干5-HT含量较模型组降低,与模型组比较,差异有显著性或非常显著性意义（P〈0．05,P〈0．01）。结论：小半夏加茯苓颗粒止呕的机制与降低呕吐家鸽脑干组织中5-HT的含量有关。     

The anti-tumor effects of alkaloids from the seeds of Strychnos nux-vomica on HepG2 cells and its possible mechanism

To screen the anti-tumor effects of the four alkaloids: brucine, strychnine, brucine N-oxide and isostrychnine from the seed of Strychnos nux-vomica, MTT assay was used to examine the growth inhibitory effects of these alkaloids on human hepatoma cell line (HepG2). Brucine, strychnine and isostrychnine revealed significant inhibitory effects against HepG2 cell proliferation, whereas brucine N-oxide didn't have such an effect. In addition, brucine caused HepG2 cell shrinkage, membrane blebbing, apoptotic body formation, all of which are typical characteristics of apoptotic programmed cell death. The results of flow cytometric analysis demonstrated that brucine caused dose-dependent apoptosis of HepG2 cells through cell cycle arrest at G0/G1 phase, thus preventing cells entering S or G2/M phase. Immunoblot results revealed that brucine significantly decreased the protein expression level of cyclooxygenase-2, whereas increased the expression caspase-3 as well as the caspase-3-like protease activity in HepG2 cells, suggesting the involvement of cyclooxygenase-2 and caspase-3 in the pro-apoptotic effects exerted by brucine. Therefore, this paper indicate that the major alkaloids present in the seed of Strychnos nux-vomica are effective against HepG2 cells proliferation, among which brucine proceed HepG2 cells death via apoptosis, probably through the participation of caspase-3 and cyclooxygenase-2.     

红景天苷对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响简

 目的 观察红景天苷(salidroside)对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响, 探讨其抗肿瘤的可能机制。方法 以体外培养的人肝癌HepG2细胞作为研究对象, 倒置显微镜观察红景天苷对肝癌细胞形态的影响;采用MTS法检测红景天苷对细胞生长的抑制作用;采用流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测Bcl-2、Bax、caspase-3、caspase-8的表达。结果 红景天苷能显著抑制肝癌细胞HepG2增殖并促进其凋亡, 下调细胞Bcl-2 表达, 上调Bax、caspase-3及caspase-8的蛋白表达量。结论 红景天苷在体外对人肝癌HepG2细胞具有显著的抑制增殖和促进凋亡作用, 其机制可能与其调节凋亡基因Bcl-2、Bax、caspase-3与caspase-8的蛋白表达有关。     

肿节风复方含药血清对肝癌HepG2细胞增殖、端粒酶及凋亡的影响

目的： 观察肿节风复方含药血清对人肝癌细胞HepG2细胞增殖及凋亡的影响。 方法： 实验设阴性对照组（NS）、5-氟尿嘧啶（5-FU）组（0.025 g·kg^-1）和肿节风复方低、中、高剂量组（2.5,5,10 g·kg^-1）,灌服于大鼠后,提取含药血清。取上述含药血清分别作用于HepG2细胞24,48,72 h;MTT法测定细胞增殖抑制率;ELISA法测定端粒酶活性;荧光显微法及流式细胞术（Annexin V-FITC/PI法）检测肿节风复方含药血清对HepG2细胞凋亡的影响。 结果： 与对照组比较,肿节风复方含药血清低、中、高剂量组均能抑制HepG2细胞的增殖（高剂量组抑制率最高达42.5%）,呈现与时间-剂量依赖趋势;肿节风中、高剂量组能有效抑制HepG2细胞端粒酶活性,与对照组比较P < 0.05;肿节风复方含药血清具有诱导HepG2细胞凋亡的作用,与对照组比较P < 0.05,其中中剂量组作用24,48,72 h细胞凋亡率分别为（14.2±0.9）%,（30.6±1.0）%,（61.6±1.5）%。 结论： 肿节风复方含药血清能抑制HepG2细胞增殖、端粒酶活性,诱导HepG2细胞凋亡。     

青藤碱对人肝癌细胞HepG2增殖的抑制作用

目的:研究青藤碱对人肝癌HepG2细胞增殖的影响及其机制。方法:以不同浓度青藤碱处理体外培养的A549细胞,采用MTT法检测24h、48h、72h后HepG2细胞的增殖状态;流式细胞仪测定青藤碱处理过的细胞凋亡、细胞周期分布及凋亡率,相对定量RT-PCR测定Cox-2mRNA的表达、Western blot检测细胞凋亡相关基因Cox-2的表达。结果:青藤碱能显著抑制人肝癌HepG2细胞增殖,并具有时间和剂量依赖性。青藤碱处理组细胞早期凋亡率较对照组升高,呈时间剂量依赖性。相对RT-PCR结果显示其能下调HepG2细胞Cox-2mRNA的表达。Western blot检测Cox-2蛋白表达明显抑制。结论:青藤碱在体外能有效抑制肝癌细胞增殖。     

虎皮楠生物碱daphnioldhanin E诱导HepG2细胞类凋亡研究

目的研究虎皮楠生物碱daphnioldhanin E诱导人肝癌HepG2细胞死亡的机制。方法 HepG2细胞用daphnioldhanin E(10、30μg/mL)处理后,瑞姬氏染色法观察细胞形态变化,DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡情况,MTT法检测细胞凋亡抑制剂Z-VAD-FMK对daphnioldhanin E抗癌活性的影响,分光光度法检测caspase-3酶活性的变化。结果瑞姬氏染色显示,HepG2细胞经daphnioldhanin E处理48 h后,细胞体积增大,细胞核清晰可见,周围出现大量的胞浆空泡,但细胞膜仍保持完整;DNA琼脂糖凝胶电泳结果可见大量50～200 bp的片段;MTT法检测结果显示Z-VAD-FMK不能阻断daphnioldhanin E对HepG2细胞增殖的抑制作用;分光光度法测定显示,daphnioldhanin E给药组与对照组HepG2细胞caspase-3酶活性无明显变化,表明daphnioldhanin E对HepG2细胞的杀伤作用与caspase-3激活通路无关。结论Daphnioldhanin E可能通过类凋亡方式明显诱导HepG2细胞程序性死亡,该过程不依赖于caspase-3途径。     

益气健脾解毒方含药血清对奥沙利铂诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的影响

目的 探讨益气健脾解毒方含药血清对奥沙利铂诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及凋亡抑制基因(Survivin)、caspase-3及caspase-9表达的影响.方法 运用血清药理学方法制备大鼠益气健脾解毒方含药血清,将人肝癌HepG2细胞按随机数字表法分为中药组、化疗组、联合组和空白组,空白组加入10%空白血清;化疗组加入2μg奥沙利铂和10%空白血清;联合组加入2μg奥沙利铂和10%益气健脾解毒方含药血清;中药组加入10%益气健脾解毒方含药血清.采用MTT法检测细胞抑制率,采用Western blot法及RT-PCR法检测各组细胞Survivin、caspase-3、caspase-9蛋白及基因表达.结果 与空白组比较,中药组、化疗组及联合组人肝癌HepG2细胞抑制率明显增高(P<0.05).与化疗组及中药组比较,联合组Survivin[(0.151±0.054)比(0.288±0.089)、(0.375±0.063)]蛋白表达下调(P<0.05或P<0.01),Survivin mRNA[(0.205±0.091)比(0.487±0.073)、(0.725±0.092)]表达下调(P<0.05或P<0.01);caspase-3[(0.821±0.079)比(0.634±0.098)、(0.487±0.102)]、caspase-9蛋白[(0.901±0.047)比(0.709±0.054)、(0.402±0.012)]表达上调(P<0.05或P<0.01),caspase-3 mRNA[(1.928±0.226)比(1.564±0.195)、(1.287±0.312)]、caspase-9 mRNA[(2.063±0.517)比(1.536±0.084)、(1.019±0.182)]表达均上调(P<0.05或P<0.01).结论 益气健脾解毒方对奥沙利铂诱导HepG2细胞凋亡机制可能通过增强抑制Survivin及促进Caspase-3及caspase-9蛋白表达发挥作用.     

肉桂醛氧氟沙星酰腙诱导人胰腺癌细胞凋亡的实验研究

 目的 探讨肉桂醛氧氟沙星酰腙[N-(3-苯亚丙烯基)-6-氟-1, 8-(2, 1-丙氧基)-7- (4-甲基哌嗪-1-基)-喹啉-4 (1H)-酮-3-甲酰肼,肉桂醛氧氟沙星酰腙]诱导人胰腺癌BxPC-3细胞凋亡的作用及机制。方法 用不同浓度的肉桂醛氧氟沙星酰腙处理BxPC-3细胞,采用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)比色法,检测肉桂醛氧氟沙星酰腙对BxPC-3细胞的增殖抑制效应;采用形态学、TUNEL法和DNA琼脂糖凝胶电泳,检测细胞凋亡的发生;应用蛋白印迹技术检测凋亡相关基因 caspase-3,caspase-8,caspase-9,bcl-2,bax和细胞色素C的表达。结果 肉桂醛氧氟沙星酰腙在体外对BXPC-3细胞有显著增殖抑制效应,且呈浓度、时间依赖关系;在肉桂醛氧氟沙星酰腙作用下,BxPC-3细胞出现显著的细胞凋亡征象;Hoechst33258/PI荧光染色显示细胞固缩,核染色质聚集或断裂,形成凋亡小体;TUNEL实验统计细胞凋亡率显著高于对照组（P