硒化壳聚糖逆转K562/ADM细胞多药耐药的实验研究

目的:研究硒化壳聚糖对人慢性粒细胞白血病耐阿霉素细胞株( K562/ADM) mdr-1基因/P-糖蛋白(P-gp)表达及功能的影响,为逆转肿瘤多药耐药提供新的途径.方法:硒化壳聚糖100,200 mg·L-1作用K562/ADM细胞24 h,应用RTPCR法和免疫印迹法检测mdr-1/P-gp表达的改变;应用高效液相色谱法检测细胞内阿霉素积聚浓度;应用MTT法检测阿霉素对K562/ADM细胞增殖的影响.结果:硒化壳聚糖可增强K562/ADM细胞对阿霉素的敏感性,增加细胞内阿霉素集聚浓度,200 mg·L-1硒化壳聚糖作用效果显著强于100 mg·L-1硒化壳聚糖(P＜0.01);硒化壳聚糖能明显抑制K562/ADM细胞mdr-1/P-gp的表达(P＜0.01),100 mg·L-1硒化壳聚糖可使mdr-1/P-gp表达分别下降(40.87 -3.19)％和(35.08±0.09)％,200 mg·L-1硒化壳聚糖可使mdr-1/P-gp表达分别下降(78.24±3.42)％和(79.61±0.23)％.结论:硒化壳聚糖可明显抑制K562/ADM细胞mdr-1/P-gp表达,增加细胞内阿霉素含量,恢复细胞对化疗药物敏感性,逆转mdr-1编码蛋白P-gp介导的多药耐药.     

硒化壳聚糖通过下调核因子КB途径增强ST1571对耐药K562/ADM细胞敏感性

目的研究硒化壳聚糖增强ST1571对多药耐药白血病K562/ADM细胞敏感性的作用,并进一步探讨其耐药逆转机制。方法应用MTT法检测ST1571单独和联合硒化壳聚糖对K562/ADM细胞增殖的影响,计算逆转倍数;应用流式细胞法检测细胞凋亡;应用免疫印迹法检测核因子КB(NF-КB)蛋白的改变。结果单独应用1μmol·L-1ST1571作用12,24,36 h,对K562/ADM细胞增殖抑制率分别为(19.15±1.64)%、(24.35±2.37)%和(26.37±2.39)。1μmol·L-1ST1571联合25~400 mg·L-1硒化壳聚糖作用K562/ADM细胞,随着硒化壳聚糖浓度和作用时间的增加,对细胞增殖抑制率也相应增加,呈剂量时间效应关系。硒化壳聚糖能够对K562/ADM细胞耐ST1571产生一定的逆转作用,明显增强ST1571对K562/ADM细胞的诱导凋亡作用(P0.05,P0.01),下调NF-КB蛋白表达(P0.01)。结论硒化壳聚糖能够增强K562/ADM细胞对ST1571的敏感性,其部分机制可能是通过诱导细胞凋亡,抑制细胞mdr-1基因表达,阻断细胞NF-КB信号通路来实现的。     

硒化壳聚糖对K562/ADM细胞增殖的影响及其与PI-3K/Akt信号途径的关系

目的 研究硒化壳聚糖对耐阿霉素慢性粒细胞白血病细胞株K562/ADM增殖的影响,探讨这种影响与PI-3 K/Akt信号途径的关系.方法 硒化壳聚糖作用K562/ADM细胞后,应用MTT法和克隆形成法检测硒化壳聚糖对细胞增殖和存活的影响,计算逆转倍数;应用免疫印迹法检测p-Akt蛋白表达的改变.结果 随着硒化壳聚糖浓度的增加,细胞增殖抑制率相应增加,存活率相应减少,呈剂量时间效应关系.硒化壳聚糖能够下调p-Akt表达(P＜0.01),明显增强ADM对K562/ADM细胞的增殖抑制作用(P＜0.05,P＜0.01),对细胞耐药产生一定的逆转作用.结论 硒化壳聚糖可通过抑制PI-3 K/Akt信号途径对耐药白血病细胞株K562/ADM产生增殖抑制和多药耐药逆转作用.     

硒化壳聚糖对K562/ADM细胞生物学行为的影响

目的 观察硒化壳聚糖对体外培养慢性粒细胞白血病多药耐药细胞株K562/ADM细胞生物学行为的影响.方法 硒化壳聚糖作用K562/ADM细胞12～24 h,应用流式细胞法检测细胞凋亡,软件拟合计算细胞周期;应用免疫印迹法检测P-gp的表达;应用RT-PCR法检测mdr-1 mRNA水平.结果 硒化壳聚糖能够明显增强ADM对K562/ADM细胞的诱导凋亡作用,阻滞细胞周期于G1期(P＜0.05,P＜0.01),下调P-gp表达和mdr-1mRNA水平(P ＜0.05,P＜0.01),硒化壳聚糖浓度越高,作用效果越明显.结论 硒化壳聚糖能够通过下调mdr-1基因和P-gp蛋白表达,阻滞细胞于G1期诱导凋亡来对体外培养的K562/ADM细胞耐药生物学行为产生影响.     

芒果苷诱导白血病K562细胞凋亡机制的研究

目的研究芒果苷诱导慢粒白血病细胞系K562细胞凋亡的机制。方法采用RT-PCR检测芒果苷(25~200μmol/L)处理(24、48、72、96h)后K562细胞中bcl-2 mRNA、bax mRNA、survivin mRNA基因表达变化;采用Western blotting方法检测K562细胞BCR/ABL融合蛋白质P210水平。结果芒果苷作用K562细胞后,P210蛋白质水平下调,并呈时间及剂量依赖性,bax基因表达显著上调,bcl-2基因表达轻度下调,survivin mRNA基因表达下调。结论芒果苷诱导K562细胞凋亡的机制可能是通过下调BCR/ABL融合蛋白质P210、bcl-2和sur-vivin mRNA基因表达及上调bax基因表达来实现的。     

番茄红素诱导K562细胞凋亡及机制的探讨

目的:研究番茄红素(lycopene)对人慢性髓系白血病K562细胞凋亡的影响,探讨其凋亡的作用机制。方法:用不同浓度(0,20,40,60μmol·L-1)的番茄红素作用K562细胞24,48,72 h,0μmol·L-1番茄红素为空白组。采用MTT法检测不同浓度的番茄红素作用24,48,72 h时K562细胞增殖抑制率;Annexin V/PI双染色法检测不同浓度的番茄红素作用48 h时K562细胞凋亡率;RT-PCR法及Western blot法检测不同浓度的番茄红素作用48 h时K562细胞中B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA及蛋白的表达。结果:与空白组比较,细胞增殖抑制率随番茄红素浓度升高而明显升高,细胞凋亡率逐渐明显增加,随番茄红素浓度明显升高,Bcl-2 mRNA及蛋白的表达明显降低,Caspase-3mRNA及蛋白的表达明显升高,均具有统计学差异(P0.05)。结论:番茄红素诱导人慢性髓系白血病K562细胞凋亡,其凋亡机制与下调Bcl-2及上调Caspase-3表达有关。     

黄芪总黄酮和毛蕊异黄酮对K562细胞的抑制作用及其机制研究

目的:探讨黄芪总黄酮(total flavonoids of Astragali Radix,TFA)和毛蕊异黄酮在体外实验条件下对人红白血病K562细胞凋亡及细胞周期的影响.方法:以K562细胞为实验对象,运用MTT方法测定不同浓度TFA和毛蕊异黄酮对K562细胞的增殖抑制作用,PI单染法检测药物对K562细胞周期的作用,Annexin V/PI双染法检测药物对K562胞诱导凋亡的影响,并且应用RT-PCR技术检测药物作用下K562细胞中Cyclin D1 mRNA水平表达的变化.结果:与阴性对照组相比,TFA及毛蕊异黄酮处理24h后,TFA和毛蕊异黄酮对K562细胞有明显的抑制作用,其IC5o分别为98.63,130.32 mg·L-1;TFA在100 mg·L-1的剂量下,对K562细胞的抑制率仅为7.8％,毛蕊异黄酮在130 mg·L-1的剂量下,对K562细胞的抑制率仅为5.8％;药物对K562细胞持续作用24h后,可以使G0/G1期细胞明显增多,S期细胞明显减少;经IC50剂量的药物处理后,K562细胞内的Cyclin D1 mRNA水平明显降低.结论:TFA和毛蕊异黄酮具有抑制K562细胞增殖作用;将细胞生长周期阻滞在G0/G1期以及降低细胞内Cyclin D1 mRNA水平可能是它们抑制K562细胞生长的主要作用机制.     

硒化壳聚糖通过促进PML-RARα融合蛋白与分子伴侣Hsp90解离下调融合蛋白水平

目的 研究硒化壳聚糖(Sc)下调NB4细胞PML-RARα融合蛋白的作用与分子伴侣Hsp90的关系.方法 流式细胞术和免疫印迹法检测Sc处理后NB4细胞内PML-RARα融合蛋白、Hsp90含量的变化; RT-PCR法分析Sc处理后细胞内PML-RARα mRNA水平的改变.结果 Sc可下调NB4细胞内PML-RARα融合蛋白含量,呈量效关系,50,100,200 mg/L Sc处理24 h后细胞内PML-RARα融合蛋白阳性率分别为62.8%, 33.14% , 17.07%, Sc对细胞内PML-RARα mRNA水平没有影响;50,100,200 mg/L Sc处理NB4细胞24 h可使细胞内Hsp90含量减少.结论 Sc下调PML-RARα融合蛋白的含量,主要通过抑制Hsp90分子伴侣的功能,使PML-RARα融合蛋白与Hsp90蛋白解离,PML-RARα融合蛋白失去正常的稳定性,进而被降解.     

硒化壳聚糖诱导人早幼粒白血病细胞凋亡的研究

目的 探讨硒化壳聚糖对人早幼粒白血病细胞增殖及凋亡的影响.方法 应用SRB法和集落形成法检测硒化壳聚糖对人早幼粒白血病细胞增殖的抑制作用;应用流式细胞法检测药物对细胞的促凋亡作用;应用Western blot法检测WTI蛋白表达的情况.结果 25,50,100 mg/L硒化壳聚糖作用HL60细胞48h对细胞有增殖抑制作用(P<0.01);50,100 mg/L硒化壳聚糖作用细胞48 h后,G0/G1期细胞数较对照组增加了14.9%和22.0%(P<0.05),S期细胞减少了14.3%和20.1%(P<0.05),凋亡率分别是(6.7±1.6)和(11.8±2.1);50,100 mg/L硒化壳聚糖作用HL60细胞48 h后WTI蛋白表达分别下调38.2%(P<0.05)和64.3%(P<0.01).结论 硒化壳聚糖具有对人早幼粒白血病细胞增殖抑制及促凋亡作用,WTI在此过程中可能发挥着重要的作用.     

硒化壳聚糖通过下调PML-RARα融合蛋白来对NB4细胞产生抑制增殖和诱导凋亡作用

目的 研究硒化壳聚糖对急性早幼粒白血病细胞株NB4增殖和凋亡的影响,探讨这种影响与PML-RARα融合蛋白表达的关系.方法 应用MTT法检测硒化壳聚糖对细胞增殖的影响,应用AO/EB荧光染色法共聚焦显微镜下观察诱导凋亡作用,应用Western blot的方法检测细胞PML-RARα融合蛋白含量的变化.结果 硒化壳聚糖可对体外培养的NB4细胞产生剂量和时间依赖性的抑制作用,50 mg/L 至 100 mg/L硒化壳聚糖作用NB4细胞24 h可诱导细胞出现明显的凋亡现象,经硒化壳聚糖处理24 h后,NB4细胞内PML-RARα融合蛋白含量明显减少.结论 硒化壳聚糖可通过下调PML-RARα融合蛋白含量对NB4细胞产生抑制增殖和诱导凋亡作用.     

姜黄素水解物对K562/A02细胞多药耐药的逆转作用研究

目的:研究姜黄素水解物对K562/A02细胞多药耐药的逆转作用,初步探讨其逆转机制。方法:MTT法检测姜黄素水解物处理后K562/A02细胞对常用化疗药物敏感性的变化;免疫组织化学法检测姜黄素水解物处理后K562/A02细胞与其亲本K562细胞膜P-gp的表达;流式细胞术检测K562和K562/A02细胞内柔红霉素(DNR)的平均荧光强度(mean fluo-rescene intendity,MFI);RT-PCR法检测K562/A02细胞mdr1 mRNA。结果:用2.5 mg.L-1姜黄素水解物处理后K562/A02细胞对常用化疗药物敏感性提高;姜黄素水解物能降低K562/A02细胞膜P-gp的表达(P0.05)。K562/A02细胞内DNR的MFI低于K562细胞(P0.01),姜黄素水解物能增加K562/A02细胞内DNR的MFI(P0.05);姜黄素水解物处理后K562/A02细胞内mdr1 mRNA下降。结论:姜黄素水解物具有体外逆转K562/A02细胞多药耐药的作用,且降低K562/A02细胞膜P-gp的表达降低化疗药物外排增强化疗药物在细胞内的潴留可能是其逆转作用的机制之一。     

氧化苦参碱对结肠癌LoVo细胞c-myc,PSMD9,CDK4mRNA表达的影响

目的:探讨氧化苦参碱( oxymatrine,OM)抑制人结肠癌LoVo细胞增殖和诱导凋亡的分子作用机制.方法:采用流式细胞仪检测LoVo细胞凋亡率以及细胞周期分布;采用荧光定量PCR法检测0.25,0.5 g·L-1 OM对LoVo细胞增殖相关基因c -myc,蛋白酶调解因子9(PSMD9),CDK4的基因表达的影响.结果:0.5 g·L-1以下浓度的OM作用结肠癌LoVo细胞48 h,对细胞凋亡无明显影响.0.25 g·L-1 OM作用48 h时可明显抑制人结肠癌LoVo细胞c-myc基因表达(P＜0.05).0.5g·L-1 OM作用48 h时可明显抑制LoVo细胞c-myc,CDK4的基因表达(P ＜0.01,P＜0.01,).药物作用时间为96 h时,0.5g·L-1 OM可明显抑制c-myc,PSM D9,CDK4基因表达(P＜0.05,或P＜0.01).结论:较低剂量OM显著抑制人结肠癌LoVo细胞增殖的作用机制,可能与下调LoVo细胞c-myc,PSM D9,CDK4表达有关.     

琥珀酸对原代心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用

本研究采用SD大鼠乳鼠心肌细胞原代培养,复制心肌细胞缺氧复氧损伤模型,考察琥珀酸对心肌细胞缺氧复氧损伤的LDH漏出率的影响,并进一步采用流式细胞术及Western blot考察琥珀酸对心肌细胞凋亡,cleaved caspase-3及p-Akt的影响,探讨琥珀酸对新生大鼠原代心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用。研究结果发现:①琥珀酸31.25~500 mg·L^-1对原代心肌细胞活力无明显影响,琥珀酸400,200,100,50 mg·L^-1均可显著降低心肌细胞缺氧复氧损伤LDH漏出率(P<0.01或P<0.05);②琥珀酸400,200 mg·L^-1可显著降低缺氧复氧损伤所致的心肌细胞凋亡百分数(P<0.05),抑制心肌细胞缺氧复氧所致的cleaved caspase-3 蛋白表达增加(P<0.05);③琥珀酸400 mg·L^-1可显著增加心肌细胞的p-Akt蛋白表达(P<0.05),而琥珀酸200 mg·L^-1对p-Akt蛋白表达无明显影响。因此,本研究认为琥珀酸可通过激活Akt的磷酸化而抑制心肌细胞缺氧复氧所致的坏死和凋亡。     

硒化壳聚糖对NB4细胞的生长抑制作用与Ras信号通路的关系(英文)

目的研究硒化壳聚糖(Sc)对急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞株NB4增殖的影响,探讨这种影响与PML-RARα融合蛋白及其激活的Ras信号途径的关系。方法 NB4为表达PML-RARα融合蛋白阳性的细胞株,K562为表达PML-RARα融合蛋白阴性的细胞株,应用MTT法检测Sc对两种细胞株增殖的影响,应用流式细胞术和Western blot的方法检测两种细胞株相关蛋白含量的变化。结果 Sc对两种细胞株均可产生剂量和时间依赖性的抑制作用,相比之下,对K562细胞的抑制作用明显较弱(P<0.05)。Sc处理后,NB4细胞内PML-RARα融合蛋白和c-Jun信号蛋白含量明显减少,而K562细胞内c-Jun信号蛋白含量则轻微减少。结论 Sc可特异性地减少PML-RARα融合蛋白的含量从而下调其激活的Ras信号途径,最终抑制NB4细胞增殖。     

三氧化二砷对MRL/lpr小鼠CD4+T细胞增殖和IFN-γ、IL-4分泌的调节作用

 目的探讨三氧化二砷(ATO)对MRL/lpr狼疮小鼠脾脏CD4^+T细胞增殖以及IFN-γ和IL-4转录和翻译水平的影响。方法免疫磁珠分别分选15只MRL/lpr狼疮小鼠和15只C57BL正常对照小鼠脾脏CD4⁺T细胞,进而将CD4⁺T细胞随机分为空白组(RPMI1640),对照组(PHA20mg·L^-1+IL-21000u·mL^-1),ATO组[PHA20mg·L^-1+IL-21000u·mL^-1(48h)后+ATO1.0μmol·L^-1],体外共培养至72h。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测3组CD4⁺T细胞的增殖和抑制水平;酶联免疫吸附反应(ELISA)检测上清液中IFN-γ和IL-4水平;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测上述细胞因子基因的转录水平。结果①分选后获得的CD4⁺T细胞纯度为(94.12±1.08)%,细胞存活率为(95.82±3.41)%;②MRL/lpr小鼠对照组CD4⁺T细胞的增殖水平(A值)(0.343±0.019)较空白组(0.054±0.008)高(P<0.001);却低于C57BL小鼠对照组的水平(0.375±0.018)(P<0.05);③MRL/lpr和C57BL小鼠ATO组CD4⁺T细胞增殖水平(A值)分别为(0.324±0.013)和(0.362±0.013),均低于对照组(P<0.05,P<0.05);④MRL/lpr小鼠对照组IFN-γ的表达水平[(562.287±60.345)ng·L^-1]明显高于C57BL小鼠对照组[(253.208±59.434)ng·L^-1](P<0.05);ATO对MRL/lpr小鼠IFN-γ的抑制程度大于C57BL小鼠(P<0.05);MRL/lpr小鼠对照组的IL-4表达水平[(41.332±8.039)ng·L^-1]与ATO组[(23.046±3.253)ng·L^-1]和C57BL小鼠对照组[(29.303±8.038)ng·L^-1]比较,也具有明显的统计学差异(P<0.05和P<0.05);ATO对MRL/lpr小鼠IL-4的抑制程度高于C57BL小鼠(P<0.05);⑤在转录水平上,与C57BL小鼠相比,ATO对MRL/lpr小鼠IFN-γmRNA和IL-4mRNA的抑制程度更加明显(P<0.05和P<0.05);ATO对IFN-γ和IL-4表达水平的抑制和转录水平的抑制正相关,r=0.720(P<0.001)和r=0.557(P<0.01)。结论MRL/lpr小鼠存在CD4⁺T细胞的异常增殖,ATO能在不影响细胞存活率的浓度下抑制MRL/lpr小鼠CD4⁺T细胞的异常增殖活化,通过抑制其细胞因子IFN-γ和IL-4的mRNA分泌影响两者的表达,且对MRL/lpr小鼠抑制程度大于C57BL小鼠,表明ATO能抑制狼疮鼠的异常免疫功能,可进一步用于SLE的治疗。     

大黄素对兔主动脉平滑肌细胞CatK,CatDmRNA表达的影响

目的:探讨大黄素对兔主动脉平滑肌细胞(CCC-SMC-1)组织中蛋白酶K(Cat K),组织蛋白酶D(Cat D)mRNA表达的影响。方法:以2×104/m L密度接种细胞,实验分5个实验组,大黄素0.01,0.05,0.1,0.15,0.2,0.25 mmol·L-1组,对照组为培养基空白组,培养24 h,每组设5个复孔。MTT法观察大黄素对兔主动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用,PCR法检测大黄素对兔主动脉平滑肌细胞Cat K,Cat D mRNA的表达。结果:MTT法显示大黄素在0.05~0.25 mmol·L-1浓度对CCCSMC-1细胞增殖有抑制作用,作用24 h后的半数抑制浓度(IC50)为0.10 mmol·L-1,且IC50随作用时间的延长显著前移。PCR法显示,不同浓度的大黄素作用于兔主动脉平滑肌细胞24 h后,与正常组细胞相比,Cat K,Cat D mRNA表达上调(P0.05)。结论:大黄素能抑制CCC-SMC-1细胞的增殖,其机制可能与上调Cat K,Cat D mRNA表达有关。     

黄连解毒汤中黄酮成分逆转 K562/ADM多药耐药的实验观察

目的:观察黄连解毒汤中黄酮成分逆转肿瘤多药耐药的作用,探讨本方逆转肿瘤多药耐药的物质基础。方法:以人慢性粒细胞白血病红白血病细胞株K562的耐阿霉素(adriamycin,ADM)细胞株(K562/ADM)为细胞系,通过MTT实验观察黄芩苷、京尼平苷对K562/ADM细胞ADM的敏感性的影响,计算细胞增殖抑制率、半数抑制浓度(IC50)及耐药逆转倍数,并对细胞内ADM浓度变化进行测定。结果:黄芩苷、京尼平苷均能部分逆转K562/ADM细胞。黄芩苷、京尼平苷的IC50值分别为5.06,6.74 mg.L-1。黄芩苷、京尼平苷的耐药逆转倍数分别为1.95,1.46倍。与相应的对照组相比,K562/ADM细胞经黄芩苷(50 mg.L-1)、京尼平苷(100 mg.L-1)作用后,细胞内ADM的荧光强度高于对照组,其中黄芩苷组提高到3.6%,京尼平苷组提高到1.7%。结论:黄连解毒汤逆转肿瘤多药耐药的物质基础可能与其含有的黄芩苷、京尼平苷有关。