视网膜母细胞瘤动物模型建立方法的研究进展

抑癌基因RB1的两个等位基因突变导致视网膜母细胞瘤（retinoblastoma,RB）发生,其在细胞生长、发育和衰老中均发挥了重要作用。正是RB动物模型推动了RB的研究不断深入,其已成为研究RB病理生理学与分子遗传学的重要工具,并为RB的治疗提供了临床前的指导。本综述中,我们对视网膜母细胞瘤动物模型的建立方法以及相关表型变化情况进行了总结,期望为视网膜母细胞瘤动物模型建立与质控提供参考。     

VEGF、VEGF-R2在糖尿病动物视网膜中的表达研究

目的:研究VEGF、VEGF-R2在糖尿病动物模型视网膜中的表达。方法:选择叙利亚金黄地鼠作为实验动物,腹腔内注射2%链脲佐菌素建立糖尿病动物模型,采用免疫组化染色法检测其视网膜中VEGF、VEGF-R2表达情况。结果:模型组视网膜中VEGF、VEGF-R2阳性表达均高于正常对照组(P0.01)。结论:2%链脲佐菌素致高血糖动物模型视网膜中VEGF、VEGF-R2阳性表达与人类糖尿病及糖尿病性视网膜病变的表现十分相似,该模型可用于研究糖尿病性视网膜病变的发生、发展机制。     

移植视网膜组织视蛋白的测定

目的:建立玻璃体内视网膜移植的动物模型,检测玻璃体内视网膜移植片视蛋白的表达,确定移植后视网膜的功能.方法:取1～5 d新生兔12只,取出神经视网膜组织,作为供体.取成年兔12只,经角巩膜缘切口,囊内去除晶状体,切除前段玻璃体后,将供体兔右眼视网膜移植到成年兔右眼的玻璃体腔,分别于手术后7,14,21 d取出供体视网膜组织,抽提视网膜的总蛋白,用SDS-PAGE分离蛋白质,Western Blot进行视蛋白的鉴定.结果:(1)移植到玻璃体腔后,受体眼早期有一定反应,经过用药后消失;(2)移植后的视网膜可以成活;(3)在移植后7,14,21 d的视网膜移植片中检测到视蛋白存在.结论:(1)我们建立的玻璃体腔内视网膜移植的动物模型具有可行性;(2)移植到玻璃体腔内的视网膜组织可见到视蛋白的继续表达;(3)通过对玻璃体内视网膜移植的实验研究,为进行原位视网膜移植打下了一定基础.     

正常猕猴与人的视网膜电图比较

目的比较正常猕猴与人视网膜电图异同,为进一步利用猕猴建立动物模型研究视网膜疾病打下基础。方法健康成年猕猴7只(14只眼)与8例(16只眼)正常人进行视网膜电图检测,对两者Rod-ERG中的b波,Max-ERG的a、b波,Cone-ERG的b波峰时值及波幅和OPs的O2值,Flicker-ERG的P值进行统计学检验。结果猕猴与人的视网膜电图波形结果较为相似,各指标与人的结果相比,潜伏期短,幅值低,但Cone-ERG和Flicker-ERG两者幅值差异不具有统计学意义。结论视网膜电图检测从功能上证明猕猴较其他常用实验动物更接近人,尤其表现在视锥细胞及黄斑区功能,可用作人类视网膜疾病尤其是黄斑区病变的良好动物模型。     

氧诱导视网膜新生血管小鼠模型的建立与特点

目的 建立可靠稳定的视网膜新生血管动物模型,为探究视网膜新生血管疾病的发生机制和治疗方法奠定模型基础。方法 通过建立氧诱导视网膜新生血管小鼠模型,采用ADP酶染色和视网膜连续切片法,定量评估视网膜新生血管生成情况。结果 模型组小鼠左眼球ADP酶染色结果显示,视乳头周围可见大片无灌注区,并见血管迂曲、扩张、变形,视网膜周边部可见大量新生血管生成;右眼球连续切片发现模型组小鼠有许多明显的血管内皮细胞核突破内界膜,并且内界膜下的细胞增殖,排列紊乱,并见视网膜表面或视网膜前有新生血管芽。结论 成功建立氧诱导视网膜新生血管小鼠模型,并且可作为探究视网膜新生血管疾病发生机制和治疗方法的可靠动物模型。     

外伤性视网膜脱离动物模型的建立及超微结构观察

目的 通过建立非外源性诱导物引发的实验性外伤性视网膜脱离动物模型,探讨外伤性视网膜脱离后视网膜的组织学改变。方法 兔眼后上方角膜缘后2mm平行切开巩膜,挤压出玻璃体,并向神经上皮层下注入眼用BSS,造成视网膜180°脱离,8-0可吸收线缝合伤口。以此制造外伤性视网膜脱离的动物模型。组织病理学光镜及电镜观察视网膜脱离模型视网膜的病理学变化。结果 视网膜脱离后视网膜各层出现不同程度的退行性改变,以光感受器受损最为显著,神经元细胞成分减少、结构破坏,Müller细胞出现增生、肥大及胶质化等改变。结论 此模型视网膜脱离发生率高,后期有PVR的发生,可用于视网膜脱离及引发增殖性玻璃体视网膜病变的研究。     

脉络膜新生血管动物模型的研究进展

脉络膜新生血管(choroidal neovascularization,CNV)是许多脉络膜视网膜疾病,如渗出性年龄相关性黄斑变性、高度近视性黄斑变性等发生发展中的重要病理机制。CNV动物模型的建立是研究这些疾病确切发病机理的重要前提。作者主要通过激光光凝术和视网膜下注射诱导两种方法对近年来CNV动物模型制作进展作一综述。     

光化学法诱导家兔视网膜中央动脉阻塞

目的 建立家兔视网膜中央动脉（ＣＲＡ）主干阻塞的动物模型。方法 手术暴露出０视网膜中央动脉后,采用光化学法造模,随后对模型进行荧光眼底照相及电镜检查。结果 视网膜中央动脉内血栓形成,阻塞血管腔。视网膜的节细胞层及神经纤维层在缺血６ｈ后均出现变性、坏死的改变。结论 采用光化学方法,可以成功复制出视网膜中央动脉主干阻塞模型,且缺血达６ｈ后视网膜节细胞层及神经纤维层可发生不可逆性损伤。     

2000年度上海市医学科技成果简介

由上海市卫生局组织近百名专家进行的2000年度上海市医学科技成果鉴定工作,共受理60项申请鉴定的科研成果,结果有57项通过专家鉴定,其中22项达到国际先进水平,29项达到国内领先水平。现选摘部分项目简介如下。 视网膜脱离后视网膜视功能损害的机理研究(上海市第一人民医院,国际先进水平)采用在兔眼视网膜下注射透明质酸钠的方法,建立了RD动物模型。通过对复位后的视网膜     

一步离子交换层析法提纯牛视网膜可溶性抗原

目的：探讨一步离子交换层析法提纯牛视网膜可溶性抗原（S-Ag)。方法：利用DEAESepharoseFF凝胶及自动层析系统一步层析分离提纯牛视网膜S-Ag，聚丙烯酰胺凝胶电泳确定分子量，等电聚焦电泳确定等电点。结果：分析证实，S-Ag分子量52000，等电点6.20，利用提纯S-Ag成功地诱发出实验性自身免疫性葡萄膜视网膜类（EAU）动物模型。结论：经一步层析法提纯的S-Ag，可用于EAU动物模型的建立。     

干扰素联合氟尿嘧啶抑制增殖性玻璃体视网膜病变的观察

目的观察干扰素-r联合氟尿嘧啶对兔增生性玻璃体视网膜病变（Proliferative Vitreoretinopathy,PVR）的抑制作用。方法将有色家兔24只随机分为4组。左眼为实验眼,建立PVR动物模型,各组分别于建模第2d在玻璃体腔内注射等体积药物,并在7、14、30d行裂隙灯、眼底、F-ERG、眼B超及视网膜组织病理学检查。结果与用等体积的干扰素-r或氟尿嘧啶组比较,联合用药组的PVR级别低于其余各组（P〈0.05）;视网膜略增厚但未见明显视网膜脱离;视网膜组织病理学检查：表面少量纤维增殖;而F-ERG b波波幅则与单独用药无统计学意义。结论 0.5mg氟尿嘧啶联合104干扰素-r对兔增生性玻璃体视网膜病变可起到抑制作用,其疗效优于单独用等体积的氟尿嘧啶或干扰素-r,且未见明显毒副作用。     

前列腺素E1治疗犬油酸型急性肺损伤的实验观察

目的 观察前列腺素El联合呼气末正压(PEEP)对犬油酸型急性肺损伤(ALI)的治疗作用。方法 15只成年健康家犬随机分成3组，静脉注射油酸复制性肺损伤模型后分别给予PGEl雾化吸入或静脉滴注或雾化吸入生理盐水，同时联合PEEP治疗。结果PGEl治疗组犬动脉血氧分压(PaO2)、氧合指数(PaO2/FiO2)均明显改善，肺循环阻力(FVR)和平均肺动脉压(MRAP)均显著降低；且雾化吸入组动物体循环平稳，静脉治疗组体循环指标变化显著。结论 雾化吸入PGE1可选择性扩张肺血管．降低油酸型ALI犬MPAP和PVR．迅速提高PaO2／FiO2．且不影响体循环．     

同种异体血小板诱导PVR动物模型研究

用同种异体富含血小板血浆诱导增殖性玻璃体视网病变动物模型,探讨其制模机理及与人ＰＶＲ病理相似性。方法取同种异体富含血小板血浆注射入免眼肉,直接检眼镜动态检查,病理切片观察。     

阿霉素治疗实验性外伤性增生性玻璃体视网膜病变

目的：观察玻璃体腔注射阿霉素治疗外伤性增生性玻璃体视网膜病变（proliferativevitreoreti-nopathy，PVR）的效果；同时观察玻璃体腔细胞因子含量的变化。方法：建立外伤性PVR动物模型。随机分为生理盐水组、阿霉素组。直接眼底镜观察PVR程度；酶联免疫吸附法（enzyme-likedimmu-nosorbentassay，ELIsA）测定玻璃体腔白介素-lβ（Interleukin-lβ，IL-lβ）、转化生长因子β1（transfor-minggrowthfactor-beta1，TGF-β1）浓度。结果：阿霉素组PVR程度、玻璃体腔IL-lβ浓度、转化生长因子β1浓度低于生理盐水组。结论：玻璃体腔注射阿霉素可以降低外伤性PVR程度，同时下调玻璃体腔IL-lβ、TGF-βl浓度。     

人增生性视网膜前膜中单核细胞趋化蛋白-1的表达

应用间接免疫荧光法,观察孔源性视网膜脱离合并增生性玻璃体视网膜病变（ＰＶＲ）、外伤性网脱合并ＰＶＲ和增生型糖尿病视网膜病变（ＰＤＲ）各４例病例的视网膜前膜中单核细胞趋化蛋白－１（ＭＣＰ－１）的表达。结果表明：３组病例视网膜前膜中均见有ＭＣＰ－１阳性细胞,其细胞大小、形态无明显差别。提示：ＭＣＰ－１存在于ＰＶＲ和ＰＤＲ的视网膜前膜中,并参与这两种病变的形成,表明ＰＶＲ和ＰＤＲ的发病机制与趋化细胞因子及局部免疫反应有一定的关系。     

Genistin防治增生性玻璃体视网膜病变的研究

目的：研究Genistin对外伤性增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy, PVR)的防治作用。方法：用自体富含血小板血浆玻璃体腔内注射制备兔外伤性PVR模型,并同时将二甲基亚砜、2 μg或40 μg genistin、1mg氟尿嘧啶各0.1 mL注入兔眼玻璃体内,在不同时间点用眼底镜检查眼底情况,进行PVR分级。第28天行40 μg genistin组模型眼及正常眼ERG检查;同天将4组模型眼球取出制作病理标本,行光镜检查。结果：A组第10天出现视网膜脱离,PVR随着时间延长发展至更严重等级。40 μg genistin和氟尿嘧啶组也发生PVR,但其严重程度低于对照组(P＜0.05)。组织学检查40 μg genistin组未发现明显视网膜形态改变,视网膜电图检查也未观察到显著功能变化。结论：Genistin玻璃体腔内注射是安全的,并能有效抑制兔外伤性PVR的发生发展。     

增生性玻璃体视网膜病变组织中的T淋巴细胞与HLA-DR抗原

目的：研究免疫介导过程在增生性玻璃体视网膜病变（PVP）发生中的作用，方法：应用特异性单克隆抗体和免疫组织化学染色的方法对视网膜玻璃体手术取材标本，包括PVRB级玻璃体手术集取物以及PVR，C，D级增生膜进行观察，检测其中，CD3，CD4，CD8和HLA－DR的表达情况，结果：7例PVRB级的标本中，6例（85．7％）有CD8阳性细胞，2例（28．5％）同时有CD4阳性细胞，未发现CD8阳性细胞，2例（28．5％）有HLA－DR阳性表达细胞存在，10例（71．4％）有CD4阳性表达细胞，5例（35．7％）有CD8阳性表在,9例（64．3％）有HLA－DR阳性表达，结论，PVR病变组织臁增生膜有T淋巴细胞的存在，提示有T与PVR的病变过程，及自身免疫反应的可能。     

增生性玻璃体视网膜病变增生膜中α-平滑肌肌动蛋白的表达

目的：观察PVR增生膜中α－平滑肌肌动蛋白（α-SMA)的表达,方法：用免疫组化染色法和免疫荧光法对14例视网部离伴PVR行玻切术时切除地增生膜（PRM）进行检查,结果：免疫组化染色法显示α－SMA在14例PRM中均有表达,位于胞质中,其分布与PRM的收缩方向一致,在200倍视野下,PRMC级膜中α－SMA阳性细胞比例为35／80,D级膜中αSMA阳性细胞比例为50／60,免疫荧光法结果与染色法相符,荧光定量分析,PRMC级膜中α－SMA阳性荧光总量12．31,D级膜中α－SMA阳性荧光总量20．09,约为C级膜的1．88倍（P＜0．01）,结论：α－SMA 在于PVR增生膜中,与病变程度和膜的收缩过程有关。     

Platelet-derived growth factor and basic fibroblast growth factor im munolocalized in proliferative retinal diseases

Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅｖｉｔｒｅｏｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ (ＰＶＲ)ｉｓｏｎｅｏｆｔｈｅｍａｉｎｒｅａｓｏｎｓｆｏｒｔｈｅｆａｉｌｕｒｅｏｆｒｅｔｉｎａｌｄｅｔａｃｈｍｅｎｔｓｕｒｇｅｒｙ Ｐｌａｔｅｌｅｔ ｄｅｒｉｖｅｄｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ (ＰＤＧＦ)ａｎｄｂａｓｉｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ (ｂＦＧＦ)ａｒｅｓｔｒｏｎｇｌｙｃｈｅｍｏｔａｃｔｉｃａｎｄｍｉｔｏｇｅｎｉｃｔｏＰＶＲｃｅｌｌｓｉｎｖｉｔｒｏ 1 　Ｉｎｏｒｄｅｒｔｏｒｅｖｅａｌｔｈｅｒｏｌｅｔｈｅｓｅｔｗｏｇｒｏ…     

二期Fontan术术前HGB、HCT和SpO2与肺血管阻力的相关性

目的分析二期Fontan术术前肺血管阻力(PVR)与血红蛋白浓度(HGB)、红细胞比容(HCT)及经皮氧饱和度(SpO2)的关系,建立无创评价PVR的方法。方法选择35例准备施行二期Fontan手术的患儿,测定静脉血HGB、HCT和安静时不吸氧状态下的SpO2,同时行心导管检查,测定和计算PVR。分别将HGB、HCT和SpO2作为自变量,PVR作为因变量,进行直线相关分析,并分别计算HGB、HCT和SpO2与PVR的直线回归方程。结果35例患儿术前HGB和HCT与SpO2均呈显著的负相关(r=-0.685,P<0.01;r=-0.634,P<0.01);HGB、HCT和SpO2与PVR也存在显著的相关性(r=0.562,P<0.01;r=0.579,P<0.01;r=-0.392,P<0.05)。HGB、HCT和SpO2与PVR的直线回归方程分别为y=0.268x-2.093,y=0.108x-2.976和y=11.951-0.117x。结论二期Fontan术术前HGB、HCT和SpO2与PVR均高度相关,可根据计算的直线回归方程,由术前测得的HGB、HCT和SpO2值计算PVR估计值,用以评价肺血管阻力。