酸浆种子蛋白提取方法的比较研究

目的:建立适用于酸浆种子的SDS-PAGE和2-D PAGE蛋白样品提取方法。方法:比较直接提取法、TCA-丙酮法、Tris-丙酮法、饱和酚法、改良饱和酚法等7种提取方法所获酸浆种子总蛋白含量以及SDS-PAGE电泳的谱带数目、强度和电泳分辨率等方面的差异。结果:HEPES buffer直接提取法提取蛋白效率较高,杂质少,电泳谱带清晰,分辨率高;PVP buffer和Lysis buffer A直接提取法次之,但杂质较多;TCA-丙酮法、Tris-丙酮法、饱和酚法和改良的饱和酚法差别不大,蛋白纯度较高,但提取效率低,谱带数目少;此外,Lysis buffer A法、丙酮法和酚法易产生高丰度蛋白的干扰。结论:直接提取法中的HEPES buffer法最好,优于丙酮法、酚法和其它直接提取法。     

黄芪蛋白提取方法的比较

目的:应用蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)技术筛选建立黄芪蛋白质指纹图谱及蛋白提取方法。方法:采用8种提取方法(稀释4倍的浓缩胶缓冲液,双蒸水,Tris-HCl法,柠檬酸盐法,PVP buffer,改良饱和酚法,TCA-丙酮法,植物蛋白提取试剂盒)提取黄芪药材的水溶性蛋白质,根据PAGE谱带的多少和清晰度优选建立黄芪药材蛋白质指纹图谱的蛋白提取条件。结果:植物蛋白质提取液、稀释4倍的浓缩胶缓冲液和Tris-HCl缓冲液提取的蛋白含量较高,但杂质较多,条带拖尾,部分特征峰不能得到有效分离。TCA-丙酮法、改良饱和酚法、柠檬酸盐缓冲液和PVP buffer提取的蛋白含量较低,谱带数目较少,辨识度低。以双蒸水为提取溶剂时可辨识谱带数目最多,清晰度较好,电泳指纹图谱中各峰的分离度较高。结论:双蒸水直接提取法更适用于建立黄芪药材的蛋白质指纹图谱。     

不同来源黄芪药材蛋白质电泳鉴别研究

目的 :探讨利用蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)技术鉴别黄芪药材的可行性。方法 :超声提取黄芪药材的水溶性蛋白质,对其进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,并采用凝胶成像系统分析电泳图谱。结果:黄芪药材的蛋白电泳图谱信息量丰富,不同来源黄芪药材的电泳图谱相似,存在11条明显的共有特征带,同时在条带数目、迁移率和蛋白质相对含量方面存在一定的差异性。结论:PAGE电泳具有分辨率高、谱带稳定、重现性好等优点,可用于黄芪药材的鉴别。     

人参水溶性蛋白的提取及SOD活性测定

目的提取人参水溶性蛋白,测定其蛋白含量及超氧化物歧化酶(SOD)活力。方法采用缓冲溶液抽提及硫酸铵分级沉淀法制备人参水溶性总蛋白,采用Bradford蛋白含量试剂盒测定蛋白质含量、SDS-PAGE法进行蛋白鉴定、邻苯三酚自氧化法进行SOD活力测定,并采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法进行活力显示。结果通过Bradford蛋白含量试剂盒测定蛋白质含量达80%,蛋白收率达1%,SDS-PAGE电泳检测显示人参中主要含有8种蛋白亚基。邻苯三酚自氧化法测得SOD活力达16.048 U/mg蛋白,非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳显示一条活性谱带。结论人参中具有较丰富的水溶性蛋白,且这些水溶性蛋白具有较高的SOD活性。     

铁棒锤种子蛋白质提取及聚丙烯酰胺凝胶电泳研究

目的构建适合铁棒锤种子蛋白质研究的聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)体系,为铁棒锤种子纯度检测及鉴别研究提供技术支撑。方法采用6种蛋白质提取法提取伏毛铁棒锤种子蛋白质,并筛选出最佳提取方法,在此基础上研究不同分离胶浓度、料液比、上样量对伏毛铁棒锤种子蛋白电泳分离效果的影响,并采用筛选出的蛋白质最佳提取分离方法对铁棒锤和伏毛铁棒锤种子进行鉴定。结果巯基乙醇法提取的伏毛铁棒锤种子蛋白质电泳图谱效果较佳,电泳谱带数最多(14条)、最清晰,适合于其种子纯度检测;分离胶浓度为15%、料液比为1∶10(M/V)、蛋白上样量稀释5倍时,其种子蛋白质电泳分离效果较好;铁棒锤和伏毛铁棒锤种子蛋白质电泳图谱在蛋白质谱带位置和强弱上有一定差异。结论本研究建立的铁棒锤种子蛋白样品制备方法及SDS-PAGE技术可用于铁棒锤种子纯度检测,其蛋白质图谱可作为铁棒锤与伏毛铁棒锤种子的鉴别依据。     

山东同一种植基地不同形态瓜蒌的种子蛋白研究

目的：研究山东同一种植基地不同形态瓜蒌种子中的蛋白质。方法：采用紫外分析法测定蛋白质的含量,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术进行蛋白电泳分析,采用Biosens Gel Imaging System软件绘制指纹图谱。利用NTSYS-pc软件进行聚类分析,计算遗传相似系数。结果：不同样品的蛋白质含量具有明显差异,蛋白电泳图谱具有多条共有带。结论：种子蛋白质的含量不是评价瓜蒌质量优劣的主要指标,蛋白电泳图谱的共有条带可作为鉴定瓜蒌真伪的重要依据。     

金钱白花蛇可溶性蛋白凝胶电泳图谱的研究

对金钱白花蛇进行几种凝胶电泳研究,根据聚丙烯酰胺胶电泳（ＰＡＧＥ）谱带的位置和数目进行品种鉴别;用改进的十二烷酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）测定其主要蛋白质成分分子量;用等电聚焦电泳（ＩＦＥ）测定其主要蛋白质成分的等电点（ＰＩ）。清晰的电泳谱带及相应数据为商品蛇真伪鉴别提供了科学依据。     

刺五加与短梗五加种子的蛋白质电泳分析

目的:建立适用于刺五加和短梗五加种子的十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴别方法,为二者种子的鉴别及质量评价提供参考。方法:采用15%分离胶的SDS-PAGE电泳对15个产地的刺五加种子和2个产地的短梗五加种子中可溶性蛋白进行电泳分析,利用Band Scan 5.0软件对蛋白谱带蛋数目、谱带强度和相对分子质量等方面的差异进行比较。结果:17个种子样品共分离出31条清晰的蛋白谱带,其中2种种子的10条共有特征谱带和各自的1条标准特征谱带可作为刺五加和短梗五加种子的标准蛋白图谱。不同产地的刺五加种子蛋白电泳图谱具有一定的种内差异性。结论:该电泳方法和标准蛋白图谱可作为刺五加及短梗五加种子的鉴别依据。     

山慈菇及其伪品的蛋白质电泳鉴别

目的:建立山慈菇与其伪品的蛋白质电泳鉴别方法.方法:采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对山慈菇正品和伪品丽江山慈菇、金果榄、白芨、山兰进行鉴别分析.结果: 山慈菇蛋白谱图有3条特征性谱带,与其伪品蛋白谱图具有明显的差异.结论:蛋白质凝胶电泳是鉴别山慈菇与其伪品的一种科学、简便、快捷的方法.     

圆盘凝胶电泳法鉴别熊胆皮的研究

以聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳法，对熊，猪，牛，羊胆皮的水溶性蛋白进行凝胶电泳，采用凝胶电泳扫描对其电泳谱带进行分析，结果各胆皮均显示不同的谱带，可鉴别熊胆皮的真伪。     

地黄块根总蛋白质提取及双向电泳条件优化

目的:建立一种有效的地黄块根总蛋白质提取、分离方法.方法:分析不同提取方法提取地黄块根总蛋白质的得率,同时对地黄块根总蛋白质双向电泳条件进行了优化比较.结果:三氯乙酸(TCA)-苯酚提取法的总蛋白质得率最高,所获蛋白质在SDS-PAGE一维图谱获得的蛋白质条带丰富,在2-DE图谱获得的蛋白质点数较多、清晰,且蛋白质点分离较完全,图谱背景清晰.自制管胶中两性电解质pH 3-10与pH 5-8比例为1∶5,上样量为170μg所获得的2-DE图谱效果最佳.结论:TCA/苯酚提取法适合于地黄块根总蛋白质的提取,本研究优化确定的双向电泳条件分离蛋白效果及重复性好.     

杏仁组织中蛋白质实验室提取方法优化

目的:优选杏仁组织中蛋白质的实验室提取方法.方法:采用盐析法、分离蛋白法、反胶束法、碱溶酸沉法、盐碱法提取杏仁组织蛋白,通过凯氏定氮法测定杏仁组织蛋白含量,对比分析蛋白含量和蛋白提取率,应用一维SDS-PAGE电泳对提取蛋白的种类进行测定.结果:盐析法、分离蛋白法、反胶束法、碱溶酸沉法、盐碱法提取的组织蛋白提取率分别为39.41％,25.63％,0.326％,40.02％,41.85％,蛋白质量分数分别为75.667％,44.986％,5.372％,60.056％,51.379％,蛋白粉质量分别为8.6,9.1,0.823,9.8,6.259 g,盐析法提取杏仁组织中蛋白质含量和提取率最高.SDS-PAGE电泳图谱显示碱溶酸沉法、分离蛋白法、反胶束法的电泳条带均为4条,盐析法有5条,盐碱法只有3条,说明盐析法提取的蛋白质种类最多.结论:在实验室条件下采用盐析法从杏仁组织中提取蛋白质效果最佳.     

不同产地和不同部位的壁虎药材蛋白质比较研究

目的:为中药壁虎质量标准的制订与资源开发提供科学的实验依据及可靠的实验方法.方法:提取不同产地的无蹼壁虎药材不同部位(壁虎体与壁虎尾)的水溶性蛋白质,并对其进行含量测定和聚丙烯酰胺凝胶电泳,比较壁虎药材蛋白质含量和组成的产地差异和部位差异.结果:不同产地壁虎药材的蛋白质含量不同,同一产地壁虎药材的不同部位蛋白质含量也存在差异.蛋白质电泳图谱显示,除共有条带外,同一提取部位的蛋白条带的分布位置和数量随产地存在一定差异.结论:考马斯亮蓝染色法简便、快速,标准曲线线性关系良好,可以用来进行蛋白质含量的测定.聚丙烯酰胺凝胶电泳实验快速、准确、重复性好,得到的蛋白质电泳指纹图谱可作为壁虎药材质量评价和资源开发的重要依据之一.     

中麻黄基因组DNA不同提取方法的比较

目的:比较不同DNA提取方法,选择最适于中麻黄基因组的方法.方法:采用改良CTAB,SDS法、试剂盒法提取中麻黄基因组DNA;用琼脂糖凝胶电泳法和紫外分光光度法检测所得总DNA的得率和纯度,并进行ISSR-PCR扩增检测.结果:3种方法均可从新鲜中麻黄中提取出产量较高的基因组DNA,但其中改良CTAB法提取的总DNA纯度高,质量好,扩增产物的电泳条带也较明显;SDS法和试剂盒法提取的总DNA质量差,不适用于下游分子生物学实验.结论:改良十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法为中麻黄基因组DNA提取的最佳方法,该方法提取的基因组DNA适用于中麻黄基因组PCR扩增和其他分子生物学研究.     

低温减压沸腾提取橄榄苦苷的工艺研究

目的:对油橄榄叶进行低温减压沸腾提取橄榄苦苷以期获得提取的优化工艺。方法:根据单因素实验设计,考察了溶剂种类、温度、时间、料液比、乙醇浓度、真空度、提取次数7个因素对橄榄苦苷提取得率的影响;并在单因素实验基础上,选取了影响橄榄苦苷得率更重要的4个因素,分别为温度、时间、料液比及乙醇浓度,进行L9(34)正交试验,再与传统提取方法进行了对比。结果:通过直观分析及方差分析,4个因素都极显著,减压沸腾提取效果更佳。结论:橄榄苦苷低温减压沸腾提取优化条件为温度60℃,时间20 min,料液比1∶30,乙醇浓度85%,并在此优化条件下橄榄苦苷提取得率为5.90%。与传统提取方法及超声辅助提取相比,减压沸腾提取工艺具有时间短,效率高,并具有良好的应用前景。     

党参种子真实性鉴定研究

目的：研究党参种子真实性鉴别方法,为党参种子品种鉴定以及党参种子质量标准的制定提供依据。方法：对不同来源党参分别进行了种子蛋白的SDS—PAGE电泳,子叶蛋白的SDS—PAGE电泳,子叶蛋白的非变性凝胶电泳。结果：三种电泳结果显示,种子蛋白的SDS—PAGE电泳,谱带清晰,分离到的差异谱带多;子叶蛋白的SDS—PAGE电泳,谱带模糊;子叶蛋白的PAGE电泳,谱带虽然清晰但是没有分离到有差异的谱带。结论：党参种子真实性鉴定应选择种子蛋白的SDS-PAGE电泳,通过电泳分析得到陕西凤县,甘肃文县,四川野生的亲缘关系比较近,比其他地方的党参种子多出一条R,值大约为0．060的谱带,根据Marker蛋白谱带可以初步推断这个差异蛋白的分子量为170KDa。     

河南不同产地与年限桔梗的聚丙烯酰胺凝胶电泳分析

目的鉴定河南省内不同产地与年限的桔梗药材。方法利用垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,作蛋白质、过氧化物酶同工酶、酯酶同工酶分析。结果各样品的蛋白质电泳图谱基本一致,同工酶酶谱有共有带,但酶带数量与活性强度却有差异。结论PAGE分析快速、灵敏、技术简单,可用于桔梗药材的鉴定与质量评价。     

雪莲组织中蛋白质提取方法比较

目的:比较雪莲组织中蛋白质的提取方法.方法:采用酚法、TCA/丙酮法、尿素法提取雪莲组织中蛋白质,所得蛋白质进行一维SDS-PAGE和双向电泳检测,通过比较电泳图谱确定雪莲组织中蛋白质的最佳提取方法.结果:酚法提取的雪莲组织蛋白质杂质量最少、纯度最高,一维SDS-PAGE和双向电泳图谱显示其具有较多的蛋白质点,且蛋白质种类较多.结论:3种提取方法均有一定的蛋白质损失,建议采用酚法从雪莲组织中提取蛋白质,为雪莲蛋白质组学研究提供参考.