姜黄素和环氧合酶-2抑制剂NS-398对肝星状细胞时效的双向调节体外实验研究

【目的】观察抗氧化剂姜黄素（Cur）与选择性环氧合酶-2（COX-2）抑制剂NS-398两种药物同时联用或分时联用对大鼠肝星状细胞（HSC）生长的影响。【方法】体外培养大鼠肝星状细胞株HSC-T6，接种96孔板，分为5组。I：单独姜黄素系列浓度组（0、20、30、40μmol／L）；单独NS-398系列浓度组（0，20,40，80μmol／L）；Ⅱ：单独NS-398系列浓度组（ABS1）和NS-398系列浓度组＋姜黄素20μmol／L（,4BS2）对大鼠HSC增殖的影响。Ⅲ：两种药物同时加药组；Ⅳ：两种药物先后6h加药组：先加姜黄素20μmol／L作用HSC6h后加NS-398系列浓度组（0、20、40、80wmol／L）；先加NS-398系碉浓度（0、20、40、80Vunol／L）作用HSC6h后加姜黄素20μmol／L组，V：析因分析组。各组设不加药物的细胞对照组，与HSC共同培养，以MTT法检测姜黄素、NS-398单用或同时、分时联用对HSC生长的影响。LDH法检测各组对HSC的细胞毒性舴用。[结果]单独NS-398系列浓度组和单独姜黄素系列浓度组有抑制HSC的作用，但姜黄素的作用比NS-398强；同时加两药组比分时加药组有明显不同，先加NS-398作用HSC6h组比先加姜黄素作用HSC6h组的抑制率明显降低。【结论】时间因素导致两药联用是双向调节，同时加药或先加姜黄素作用HSC6h组后加NS一-98时呈正调节作用，抑制率升高，而先加黼98作用ItSC6h后加姜黄素呈负调节作用，抑制率降低。NS-398对HSC作用一定时间后有抑制姜黄素对HSC起生物效应的作用。     

姜黄素和环氧合酶-2抑制剂NS-398对肝星状细胞时效的双向调节体外实验研究

[目的]观察抗氧化剂姜黄素(Cur)与选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂NS-398两种药物同时联用或分时联用对大鼠肝星状细胞(HSC)生长的影响。[方法]体外培养大鼠肝星状细胞株HSC-T6,接种96孔板,分为5组。Ⅰ:单独姜黄素系列浓度组(0、20、30、40μmol/L);单独NS-398系列浓度组(0,20,40,80μmol/L);Ⅱ:单独NS-398系列浓度组(ABSI)和NS- 398系列浓度组 姜黄素20μmol/L(ABS2)对大鼠HSC增殖的影响,Ⅲ:两种药物同时加药组;Ⅳ:两种药物先后6 h加药组:先加姜黄素20μmol/L作用HSC6h后加NS-398系列浓度组(0、20、40、80μmol/L);先加NS-398系列浓度(0、20、40、80μmol/L)作用HSC6h后加姜黄素20μmol/L组,Ⅴ:析因分析组。各组设不加药物的细胞对照组,与HSC共同培养,以MTT法检测姜黄素、NS-398单用或同时、分时联用对HSC生长的影响。LDH法检测各组对HSC的细胞毒性作用。[结果]单独NS-398系列浓度组和单独姜黄素系列浓度组有抑制HSC的作用,但姜黄素的作用比NS-398强:同时加两药组比分时加药组有明显不同,先加NS-398作用HSC6h组比先加姜黄素作用HSC6h组的抑制率明显降低。[结论]时间因素导致两药联用是双向调节,同时加药或先加姜黄素作用HSC6h组后加NS-398时呈正调节作用,抑制率升高,而先加NS-398作用HSC6h后加姜黄素呈负调节作用,抑制率降低。NS-398对HSC作用一定时间后有抑制姜黄素对HSC起生物效应的作用。     

姜黄素、阿米洛利联用对大鼠肝星状细胞增殖的影响

目的　探讨姜黄素 (curcumin)、阿米洛利 (Amiloride)联用对大鼠肝星状细胞增殖的影响。方法　HSC T6细胞与不同浓度的姜黄素、阿米洛利共同培养 2 4h。LDH法观察姜黄素、阿米洛利对HSC T6的毒性作用 ,以MTT法观察姜黄素、阿米洛利单用及联用对HSC T6增殖的效应。结果　各治疗组HSC的增殖与对照组相比明显为低 ,均有显著性差异 (P <0 0 0 1) ;联用组对HSC增殖的抑制率最高 ;联用组HSC的增殖更低于姜黄素组 (P <0 0 5 )。各治疗组培养上清液中LDH活力与对照组相比未见显著性差异 (P >0 0 5 )。结论　姜黄素、阿米洛利均可抑制HSC的增殖 ,且联用组优于姜黄素单用组 ;它们的作用不是非特异性细胞毒作用所致。     

姜黄素含药血清对大鼠肝星状细胞HSC—T6增殖的影响

目的观察姜黄素药物血清对瘦素刺激肝星状细胞增殖的影响,探讨其抗肝纤维化的机制。方法用姜黄素煎荆给大鼠灌胃（连续7d）,制备含药血清,并用培养基将药物血清配制成四个稀释倍数,分别是5％、10％、20％、加％四个稀释倍数浓度;培养肝星状细胞,取对数生长期细胞,运用噻唑蓝（MTr）比色法检测药物血清对HSC—T6增殖的影响。结景姜黄素药物血清对增殖的肝星状细胞有抑制作用（P〈0．05或P〈0．01）,在5％～40％的血清稀释倍数范围内,随剂量增大而抑制作用增强;在20％～40％的血清稀释倍数范围内姜黄素组对HSC—T6抑制率增高（P〈0．05）。结论姜黄素具有抑制HSC—T6增殖的作用。     

大黄蛰虫丸对大鼠肝星状细胞活化增殖的影响

【目的】观察大黄蛰虫丸对经旁分泌和自分泌途径激活大鼠肝星状细胞活化增殖情况的影响。【方法】采用Nycodenz分离液非连续密度梯度离心法同步分离急性CCl4损伤模型大鼠和正常大鼠肝的枯否细胞（KC）和星状细胞（HSC）。在制备正常鼠血清和DHZCW药物血清的基础上,将它们分别加入KC和HSC培养板内作用后制备成正常鼠KC条件培养液（NKCCM）、损伤鼠KC条件培养液（KCCM）以及正常鼠HSC条件培养液（HSCCM）。将上述条件培养液分别干预HSC24h、48h和72h,然后采用MTT法和3H—TdR掺入法分别检测比较各组HSC细胞活化增殖情况。【结果】损伤鼠不含药组和正常KC对照组比较,HSC活化增殖情况显著性增高（P〈0．01）,损伤鼠含药组HSC活化增殖则显著降低（P〈0．01,P〈0．05）,且其抑制效应随着含药血清浓度的升高逐渐增强;而正常鼠HSC不含药组和正常鼠HSC含药组各组间比较均无显著性差异（均P〉0．05）。【结论】DHZCW对经旁分泌途径激活大鼠HSC活化增殖有明显的抑制作用,且作用效应与血清药物浓度间存在剂量依赖关系,但对经自分泌途径激活大鼠HSC活化增殖未见明显抑制作用。     

磷脂酰肌醇3(PI3K)激酶信号途径对血小板源生长因子促肝星状细胞增殖与Ⅰ型胶原表达的影响

目的 观察磷脂酰肌醇3激酶特异性抑制剂（LY294002），对血小板源生长因子（PDGF-BB）促大鼠肝星状细胞（HSC）增殖与Ⅰ型胶原表达的影响，并探讨其作用机制。方法用不同浓度的PDGF-BB和LY294002对大鼠肝星状细胞株（HSC-T6）进行处理，MTT法检测细胞的增殖，逆转录聚合酶链反应方法（RT-PCR）检测HSC-T6内Ⅰ型胶原mRNA的表达。结果PDGF-BB在浓度1～10ng／ml时呈剂量依赖性地促进HSC细胞增殖（P〈0．05），当浓度大于10ng／ml时处理组间无显著差异（P〉0．05），其促增殖作用达到饱和。5μmol／L、10μmol／L、25μmol／L的LY294002均能显著且剂量依赖性地抑制PDGF-BB刺激的HSC-T6增殖（P〈0．001）。PDGF-BB能促进HSCI型胶原mRNA表达，24h、48h时相对于对照组的表达量为112．2％。182．5％。LY294002能显著抑制PDGF-BB促Ⅰ型胶原表达，24h、48h时相对表达量为76．4％，52．6％。结论磷脂酰肌醇3激酶信号途径是调节血小板源生长因子促肝星状细胞增殖与分泌胶原的重要通道，抑制该通路可以抑制肝星状细胞增殖和胶原表达，具有抗肝纤维化的作用，对防治肝纤维化有一定的意义。     

丹酚酸B对PDGF及MDA诱导的人鼠原代肝星状细胞增殖的影响

目的：探讨丹酚酸B（SAB）对血小板生长因子（PDGF）和丙二醛（MDA）刺激的大鼠原代肝星状细胞（HSC）增殖的影响。方法：采用原位灌注法消化大鼠肝脏，108g／L Nycodenz密度梯度离心，分离HSC，以MTT法观察细胞的增殖能力。免疫组化法检测血小板生长因子受体（PDGFR）含量。结果：MDA组与正常组相比可明显增加MTT吸光度（P〈0．05），PDGF组亦较正常组明显增加MTT吸光度（P〈0．01）；1μmol／LSAB和10μmol／L SAB不仅可显著抑制MDA刺激的HSC吸光度增加（P均〈0．01），也可抑制PDGF—BB刺激的HSC吸光度增加（P均〈0．01）。PDGF及MDA作用后细胞PDGFR的表达均明显增加，而10μmol／L SAB则可抑制PDGFR的表达。结论：SAB可通过抑制PDGFR的表达而抑制体外培养HSC的增殖．这种抑制作用与SAB的抗氧化作用有一定的关系。     

乙醛对大鼠肝星状细胞株HSC—T6激活、增殖及转分化的影响

目的：观察乙醛对大鼠肝星状细胞株（HSC-T6）激活、增殖并转分化为肌成纤维细胞的影响。方法：HSC—T6细胞常规培养及乙醛处理;VG染色法形态学及MTT法检测细胞增殖;ELISA法检测I型胶原蛋白（TIMPI）、纤维粘连素（FN）的表达;Westernblottin譬检测细咆内效应蛋白0L—SMA的表达。结果：VG染色乙醛束Ij激明显促进HSC贴壁及重叠、明显促进HSC增殖和显著增加胶原纤维蛋白的表达;MTT检测结果发现乙醛刺激明显增强HSC活性（P〈0．05）;ELISA结果表明乙醛刺激组较对照组TIMPI和FN的表达明显上调（P〈0．05）;Western blotting检测结果显示,乙醛刺激明显促进仅一SMA表达（P〈0．05）。结论：乙醛刺激可明显激活HSC～T6细胞株,并促进其增殖及转分化为肌成纤维细胞。     

姜黄素对胃癌细胞系AGS环氧合酶-2转录和活性的影响

目的探讨姜黄素对胃癌细胞系AGS COX-2转录和活性的影响。方法以选择性COX-2抑制剂NS-398作为阳性对照,应用不同浓度的3种姜黄素（1μmol/L、5μmol/L、20μmol/L）分别对AGS细胞进行干预,作用16 h和24 h后,以逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测COX-2 mRNA的表达,以COX活性检测试剂盒检测COX-2活性。结果与空白对照组相比,姜黄素对AGS细胞COX-2 mRNA的表达具有明显抑制作用（P〈0.05）,而且这种作用呈剂量和时间依赖性（P〈0.05）;与空白对照组相比,姜黄素对AGS细胞COX-2活性具有明显抑制作用（P〈0.05）,而且这种作用呈剂量和时间依赖性（P〈0.05）;姜黄素与NS-398联合应用对COX-2 mRNA表达和COX-2活性的抑制作用具有协同性（P〈0.05）。结论姜黄素对胃癌细胞的COX-2转录和活性具有抑制作用,与选择性COX-2抑制剂NS-398联用时两者的抑制作用具有协同性,为姜黄素或姜黄素联合选择性COX-2抑制剂在胃癌化学预防中的应用提供了新的理论依据。     

联合应用粉防已碱与甘草酸抑制HSC增殖及细胞外基质合成

目的：探讨联合应用粉防已碱（tetrandrine,Tet）与甘草酸（glycyrrhizinic acid,Glz）对肝星状细胞增殖与细胞外基质合成的影响。方法：采用胶原酶二步原位灌注法分离、培养大鼠HSC，并分别给予2．5mg/L及5mg/L Tet、0．5mg/L Glz、2．5mg/L Tet 0.5mg/L Glz、5mg/L Tet 0.5mg Glz干预，分别检测各处理组HSC增殖及细胞外基质合成水平。结果：5mg/L Tet、0.5mg/L Glz和各浓度Tet联合Glz均能不同程度地抑制HSC 3H－TdR掺入和增殖（P＜0．05）；能够显著抑制体外培养HSC 3H－脯氨酸掺入（P＜0．05），降低上清液HA、Ln和CIV水平。5mg/L Tet联合Glz作用最为显著（P＜0．05）。结论：联合应用Tet与Glz能够更加有效地抑制HSC DNA合成、细胞增殖及ECM合成与分泌。     

姜黄素逆转P—gp介导卵巢癌多药耐药机制的研究

目的探讨姜黄素对P糖蛋白（P—gP）介导的卵巢癌多药耐药的逆转作用及其可能机制。方法采用二苯基溴化四氮唑蓝（MTT）法检测人卵巢癌癌细胞株加药后的增殖,碘化丙啶（PI）染色法检测细胞凋亡率,western blot法检测P—Akt和P-gP的表达量。结果姜黄素合用顺铂处理细胞（OVCAR-3／DDP细胞株）48h,顺铂的浓度在0．05—5μg／ml时,加入姜黄素25μmol／L,耐药细胞生存率下降明显（P〈0．05）,尤以顺铂0．25μg／ml和姜黄素25μmol／L作用时耐药细胞生存率下降最明显。单用顺铂组细胞的凋亡率为（13．2±2．5）％,采用在顺铂基础上联合使用姜黄素后细胞凋亡率为（21．8±3．5）％,与单独使用顺铂相比,顺铂与姜黄素联合使用诱导细胞凋亡的作用显著增强（P〈0．05）。与单用顺铂0．25μg/ml相比,联合使用姜黄素后p-Akt和P-gP的表达量明显降低（P〈0．05）,2组间Akt的表达量差异无统计学意义（P〉0．05）。结论姜黄素不增加顺铂对OVCAR-3细胞毒性作用;对于OVCAR-3／DDP细胞株,姜黄素明显增加顺铂细胞毒性;姜黄素明显抑制了p-Akt和P—gP蛋白的表达。姜黄素可能通过抑制Akt信号通路降低P—gP的表达进而逆转多药耐药。     

低分子量肝素与奥扎格雷钠联合治疗进展性脑梗死疗效观察

目的：评价低分子量肝素与奥扎格雷纳联合用药，对进展性脑梗死的疗效观察。方法：应用上述两种药物治疗进展性脑梗死，与葛根素治疗对照，观察两组患者治疗前后的临床疗效及血液流变学变化。结果：低分子量肝素、奥扎格雷钠联用组用药前后神经功能缺损评分比对照组明显降低（P〈0．05），治疗后14d，联用组总有效率、明显有效率（分别为88．3％和69．7％）明显高于对照组（分别为47．3％和38．1％），两组比较差异有显著意义（P〈0．05）。血液流变学各项指标也有显著性意义（P〈0．05）。结论：低分子量肝素与奥扎格雷钠联用是治疗进展性脑梗死的有效药物。     

LPS诱导HSC增殖与提高其胶原表达水平的细胞模型研究

目的建立较为全面反映肝星状细胞活化效应的细胞模型。方法应用脂多糖刺激体外培养的大鼠HSC。MTT法测定HSC增殖率。免疫组化法显示HSC表达Ⅰ、Ⅲ型胶原水平，并进行图像分析。结果LPS明显刺激HSC的增殖和提高其Ⅰ、Ⅲ型胶原表达水平，与对照组比较有非常显著性差异（P〈0．01）。结论LPS诱导HSC活化模型能够相对全面反映HSC活化效应。     

恩替卡韦联合胸腺五肽治疗慢性乙型肝炎疗效评价

目的观察核苷类似物（恩替卡韦）与胸腺五肽联合治疗抗乙肝病毒的效果。方法选取慢性乙型病毒性肝炎67例,恩替卡韦联合胸腺五肽组32例,单用恩替卡韦组35例,用药前、用药1个月、3个月后、6个月后复查HBVDNA。结果用药1个月后两组HBVDNA水平皆有明显下降,但均数无显著性差异,用药3个月后2组HBVDNA水平皆有明显下降,均数有显著性差异。恩替卡韦＋胸腺五肽组低于单用恩替卡韦组（P〈0．05）。用药6个月后2组HBVDNA水平皆有明显下降,但均数无显著性差异（P〉0．05）。用药1个月后,恩替卡韦＋胸腺五肽组HBVDNA转阴率21％,单用恩替卡韦组HBVDNA转阴率为7％,有统计学意义。用药3个月后恩替卡韦＋胸腺五肽组HBV—DNA转阴率明显高于单用恩替卡韦组（89％vs57％,P〈0．05）。用药6个月后恩替卡韦＋胸腺五肽组HBV—DNA转阴率高于单用恩替卡韦组（91％vs90％）,但统计学上无差异。结论恩替卡韦是一种很好的抗HBV药物。无论单用或与胸腺五肽合用均可使HBVDNA明显下降,但在与胸腺五肽联用后使HBVDNA水平下降更加显著,特别是提高了HBVDNA转阴率,说明核苷类似物恩替卡韦与胸腺五肽联用能使HBVDNA尽早转阴,提高了抗病毒的旱期应答率。     

青蒿琥酯对人源肝星状细胞LX-2增殖、胶原产生以及KLF6表达的影响

目的：探讨青蒿琥酯（Art）对人源肝星状细胞（HSCs）LX-2增殖的影响以及其抗肝纤维化的作用机制。方法：将肝星状细胞LX-2分为对照组和实验组,对照组为细胞培养液,实验组为不同浓度的青蒿琥酯。应用MTT法检测青蒿琥酯对细胞增殖的影响,比色法检测细胞培养上清中乳酸脱氢酶（LDH）活性,酶消化法测定羟脯氨酸（Hyp）含量,Westeinblotting法测定青蒿琥酯对HSCs内KLF-6蛋白表达的影响。结果：与对照组相比,青蒿琥酯能抑制肝星状细胞LX-2的增殖（P〈0．01）,且呈剂量-效应和时间-效应关系;青蒿琥酯各浓度组LDH活性与对照组比较,无显著性差异（P〉0．05）;青蒿琥酯能降低肝星状细胞LX-2中Hyp含量（P〈0．01）,且呈剂量-效应关系,并能降低KLF6蛋白的表达（P〈0．01）。结论：青蒿琥酯对人源肝星状细胞LX-2有明显的抑制作用,其作用机制是降低胶原的生成以及KLF6蛋白的表达减少,进而抑制肝纤维化的发生。     

玉郎伞多糖对肝星状细胞增殖和I型胶原合成的影响

目的研究玉郎伞多糖（YLS）对肝星状细胞（HSC）增殖和I型胶原合成的影响。方法选择肝星状细胞系作为体外研究对象，MTT法测定肝星状细胞的增殖，LDH法检测YLS对肝星状细胞的毒性作用，ELISA法测定I型胶原含量。结果YLS（12．5-100μg／mL）可明显降低培养上清液中I型胶原水平，抑制肝星状细胞的增殖，并呈剂量依赖性。结论YLS可能通过抑制HSC的增殖及I型胶原的合成等机制从而抑制肝纤维化的形成。     

盐酸阿扎司琼联合地塞米松预防肝动脉化疗栓塞所致的恶心、呕吐的疗效评价

目的 观察盐酸阿扎司琼与地塞米松联用预防肝动脉化疗栓塞治疗所致的恶心、呕吐及其它不良反应的疗效，并与单用盐酸阿扎司琼进行比较。方法 将60例行肝动脉化疗栓塞治疗患者随机分成盐酸阿扎司琼与地塞米松联用组（联合组）及单用盐酸阿扎司琼（单用组）。结果 对恶心、呕吐的完全控制率及有效控制率联合组均高于单用组，差异均有显著意义（P〈0．05）。两组不良反应相似。结论 盐酸阿扎司琼联合地塞米松对肝动脉化疗栓塞所致的恶心、呕吐有明显的抑制，可作为预防和控制肝动脉化疗栓塞所致恶心、呕吐的理想用药，值得临床广泛推广应用。     

靶向leptin基因的siRNA对大鼠肝星状细胞生物学特性的影响

目的 构建具有特异性瘦素（leptin）基因小于扰RNA（small interfering RNA，siRNA）功能的表达质粒，研究靶向leptin基因的siRNA对大鼠肝星状细胞（hepatic stellate cell，HSC）中leptin表达及HSC生物学特性的影响。方法 以leptin为目的基因，以产生siRNA质粒载体psiRNA-hHlneo为表达模板，细胞内转录合成4对特异的siRNA和1对对照siRNA。构建能在真核细胞中表达的重组质粒leptinsi RNA，用酶切方法和测序法对重组体进行鉴定。应用脂质体介导重组质粒转染HSC。RT-PCR、Western blot和免疫细胞化学法检测HSC的leptin表达情况，用MTT法检测细胞增殖，用流式细胞仪分析细胞凋亡。结果 酶切和序列测定表明，成功构建了leptinsiRNA表达质粒；外源重组质粒siRNA3和siRNA4能够抑制leptinm RNA和蛋白表达（均P〈0．01）；HSC增殖活性显著降低（P〈0．05），凋亡增加（P〈0．01）。与未转染组相比，consiRNA、siRNA1和siRNA2转染组没有显著改变（均P〉0．05）。结论 构建的leptinsi RNA表达载体可减少leptin的表达，抑制HSC增殖并诱导其凋亡。为肝纤维化基因治疗提供了新的靶点。     

卡托普利并硝苯地平缓释片治疗高血压病疗效观察

目的 观察、比较卡托普利和硝苯地平联用与卡托普利单用治疗高血压病的疗效。方法 106例高血压病患者，随机分为治疗组（54例）和对照组（52例），治疗组卡托普利和硝苯地平联用，对照组卡托普利单用，用药4周后进行疗效分析。结果 治疗组血压明显下降，总有效率达98．1％，对照组总有效率88．5％，P〈0．05。结论 卡托普利和硝苯地平联用治疗高血压病疗效显著。     

稳心颗粒与乙胺碘肤酮联用治疗慢性房颤的临床研究

目的 探讨稳心颗粒与乙胺碘肤酮联用治疗慢性房颤的临床疗效。方法 将168例慢性房颤病人随机分为稳心颗粒加乙胺碘肤酮组（A组）57例、乙胺碘肤酮组（B组）55例、稳心颗粒组（C组）56例,观察治疗前后临床症状和心律失常改善情况及不良反应。结果 治疗前后动态心电图观察对比：A组总有效率为91．22％（52例）,B组总有效率为69．09％（38例）,C组总有效率为69．64％（39例）。A组与B组比较P〈0．05差异有显著性,与C组比较P〈0．05,差异有显著性,B组与C组比较P〉0．05,差异无显著性;治疗后临床症状改善情况：A组与B组比较P〈0．05,差异有显著性,与C组比较P〈0．05,差异有显著性,B级与C组比较P〉0．05,差异无显著性。结论 稳心颗粒与乙胺碘肤酮联用治疗慢性房颤明显优于各自单用疗效,且不良反应少。