白茶、玫瑰花及玳玳花提取物对体外培养黑素细胞功能的影响

[目的]观察白茶、玫瑰花及玳玳花提取物（祛斑因子A、B）对体外培养的正常人表皮黑素细胞功能及角质形成细胞和黑素细胞共培养体系中黑素小体转运的影响。[方法]制备含药血清,建立正常人表皮黑素细胞体外培养体系,采用4-甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定黑素细胞增殖,酪氨酸酶多巴速率氧化法测定酪氨酸酶活性,NaOH裂解法测定黑素生成量,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测黑素细胞酪氨酸酶mRNA的表达,Pull-down法检测黑素细胞GTP-RhoA和GTP-Rac1蛋白的表达;建立正常人角质形成细胞和黑素细胞的体外共培养体系,流式细胞术检测共培养细胞体系中黑素转运的情况。[结果]与空白血清对照组相比,祛斑因子A、B可显著抑制酪氨酸酶活性;祛斑因子A可显著降低酪氨酸酶mRNA的表达。祛斑因子A中、低剂量可抑制树突结构蛋白的表达。祛斑因子A高、中、低剂量及祛斑因子B均可抑制黑素小体的转运。[结论]为祛斑因子用于色素性疾病的保健防治提供一定的实验依据。     

α和β-熊果苷对共培养小鼠黑素细胞黑素生成的影响研究

目的 比较观察熊果苷分子苯环侧链上的糖苷基团α和β-构象对共培养小鼠黑素细胞酪氨酸酶活性和黑素含量的影响.方法 体外melan-a小鼠黑素细胞(MC)与SP-1小鼠角质形成细胞(KC)共培养体系,两种细胞的初始接种比例为1:5.共培养细胞分别用含有0.04、0.2、1 mg/ml的α-熊果苷、β-熊果苷、烟酰胺及10、50、100 μmol/L的甲氧沙林(8-MOP)新鲜培养基换液,药物处理共4 d.用相差倒置显微镜观察细胞表型的改变;用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法测定细胞增殖率;用放射性核素L-[14C]-酪氨酸底物标记法测定酪氨酸羟化酶与多巴氧化酶活性;用分光光度计法测定细胞总黑素含量.结果 除8-MOP能明显促进共培养细胞(主要是MC)发生增殖外,其他3种化合物对细胞增殖率均无影响.两种熊果苷均能剂量依赖地抑制酪氨酸酶活性和黑素含量.1 ms/mlα-熊果苷对酪氨酸酶活性的抑制作用比同等浓度的β-熊果苷强(酪氨酸酶活性:37%±4%vs54%±9%,P=0.034).经两种熊果苷(1 mg/ml)处理的MC树状突延长纤细,黑素产生较对照组明显减少,以α-熊果苷更为明显.相反,100 μmol/L 8-MOP处理组的MC数目较对照组显著增加,树状突增加,胞质与树状突内有大量黑褐色黑素堆积.结论 α-熊果苷能明显抑制共培养小鼠黑素细胞的黑素生成,其临床应用价值有待体内实验进一步确认.     

氧化应激增强体外培养人黑素细胞异位表达免疫活性分子

目的:比较观察氧化应激状态下正常人表皮黑素细胞(MCs)与白癜风非皮损区MCs细胞膜表达CD40,CD80,HIA-DR和ICAM免疫分子水平的变化.方法:自5例健康成年包皮和5例稳定期白癜风下腹部非皮损区分别建立正常人表皮MCs和白癜风MCs的原代培养;将培养第2-3代细胞分别用100 mmol/L过氧化氢(H2O2)作用1h或1.5 J/cm2长波紫外线(UVA)照射进行氧化应激处理;用二氯荧光素标记法测定两种MCs在H2O2处理和UVA照射前后胞内活性氧基(ROS)水平变化;用流式细胞仪分析CD40,CD80,HLA-DR和ICAM 4种免疫分子表达水平变化;用分光光度计法测定两种MCs过氧化氢酶活性.结果:过氧化氢酶活性测定结果显示白癜风MCs过氧化氢酶活性较正常人表皮MC明显减低(P＜0.01).细胞内ROS水平测定发现H2O2处理和UVA照射均导致白癜风非皮损区MCs细胞内ROS水平急剧增高,与正常人MCs比较ROS的荧光强度有显著统计学差异(P＜0.01).流式细胞仪检测结果表明除HLA-DR外,UVA照射可诱导白癜风非皮损区MCs高表达CD40,CD80和ICAM1,与未照射组白癜风MCs和UVA照射组正常人MCs比较均有显著统计学差异(P＜0.01).结论:白癜风非皮损区MCs的抗氧化能力明显减低.UVA照射能上调白癜风MCs胞膜异位表达CD40,CD80和ICAM1免疫分子,提示在氧化应激状态下白癜风MCs可兼有增强的抗原呈递细胞样功能.     

α-黑素细胞刺激素对皮肤黑素合成的调控作用

皮肤色素异常是整形美容外科常见的问题，目前还无较好的解决方法，主要是对皮肤色素沉着的机制还不完全清楚。近年来，逐步认识到α-黑素细胞刺激素(α-melanocyte-stimulating hormone，α-MSH)与黑素的合成有密切关系。α-MSH通其黑素细胞表面受体-黑皮素-1受体(melanocortin-1 receptor，MC-1R)结合，使黑素细胞内酪氨酸酶的表达增加、活性增强，黑素合成增加并优先刺激优黑素细胞的合成；α-MSH还可促进黑素细胞的增生和树突形成及黑素小体的转运，同时α-MSH对黑素细胞的免疫保护作用及与其他外源性刺激因素协同作用而调控皮肤的色素沉着过程。α-MSH的内源性拮抗剂刺鼠信号蛋白(ASIP)可明显减弱其黑素合成作用，降低皮肤的着色能力。随着对α-MSH调控黑素合成作用的更进一步了解，必将为解决临床上获得性色素沉着或色素脱失性疾病提供一种新的治疗方法。     

11例黄褐斑面部皮损组织病理及超微病理

目的:比较黄褐斑患者面部皮损及临近非皮损的组织病理及超微病理学特点。方法:选择11例门诊确诊的黄褐斑患者,对皮损和临近非皮损取活检,分别进行苏木素-伊红、Fontana-M asson染色、HMB45、NK I/beteb免疫组化染色和电镜观察。计算机图像分析技术量化分析。结果:同邻近正常皮损相比,黄褐斑皮损表皮全层色素明显增加,基底层黑素细胞数量无改变。真皮载色素细胞增加。超微结构显示黄褐斑皮损黑素细胞内线粒体、高尔基体、粗质内质网、核糖体及成熟黑素小体数量增加,角质形成细胞内有大量吞噬的Ⅲ期、Ⅳ期黑素小体。结论:黄褐斑皮损的色素增加,可能与多种因素引起的黑素细胞功能活跃和黑素颗粒在表皮内转运增加有关。     

Effects of Qingban Capsules on Melanin Synthesis of Murine B16 Cells

目的 测定大豆异黄酮清斑软胶囊对小鼠B16细胞黑色素合成的影响,研究其对黄褐斑的治疗作用. 方法 小鼠B16黑素细胞作为受试细胞,选择氢醌作为阳性对照物,用MTT比色法测定药物对细胞增殖的影响,采用酶学方法检测对酪氨酸酶活性的影响,NaOH溶解法测定黑素含量. 结果 不同浓度大豆异黄酮清斑软胶囊对黑素细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑色素含量均有抑制作用,呈现剂量依赖性关系. 结论 大豆异黄酮清斑软胶囊能有效抑制黑素细胞增殖和降低酪氨酸酶活性,从而减少黑素合成.     

基于tyrp1a转基因斑马鱼构建色素障碍性疾病药物筛选模型

为了能够有效地筛选治疗色素障碍性疾病药物,建立一种转基因斑马鱼药物筛选模型。采用斑马鱼酪氨酸酶相关蛋白1(tyrosinase-related protein 1a,tyrp1a)基因启动子驱动绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP),构建出tyrp1a转基因斑马鱼,使绿色荧光能够特异性表达在斑马鱼黑素细胞部位。分别给予斑马鱼促进黑素合成的药物N-苯基硫脲(N-phenylthiourea,PTU)和抑制黑素合成的药物黑素细胞刺激素(alpha-melnaocyte stimulating hormone,α-MSH),检测药物对斑马鱼黑素合成和绿色荧光蛋白表达影响。结果显示,PTU可以抑制斑马鱼黑素细胞黑素合成作用,并且降低转基因斑马鱼绿色荧光蛋白表达。α-MSH可以促进斑马鱼黑素细胞黑素合成作用,并促进转基因斑马鱼绿色荧光蛋白表达。本研究成功地建立了一种新的可以用于色素性障碍疾病药物筛选的转基因斑马鱼模型。     

NB-UVB对角质形成细胞和黑素细胞SCF、Kit、MITF表达的调控作用

目的探讨NB-UVB对黑素细胞和角质形成细胞干细胞因子(SCF)、Kit、MITF表达的调控作用。方法建立黑素细胞和角质形成细胞共培养体系,用NB-UVB照射共培养细胞3d,RT-PCR法检测对照组和照射组酪氨酸酶、SCF、c-Kit、MITFmRNA的表达。NB-UVB照射角质形成细胞3d后免疫组织化学法检测对照组和照射组SCF蛋白的表达。黑素细胞爬片培养,加入经UVB照射3d后的角质形成细胞上清液,免疫组织化学法检测对照组和照射组MITF蛋白的表达。结果对照组和照射组提取细胞总RNA经RT-PCR检测,结果发现照射组SCF、c-Kit、MITF、酪氨酸酶mRNA表达较对照组明显增高。NB-UVB照射后的角质形成细胞SCF免疫组织化学结果与对照组比较差异有统计学意义(P=0.000),加入经NB-UVB照射后的角质形成细胞培养上清液后的黑素细胞MITF免疫组织化学结果与正常培养黑素细胞比较差异有统计学意义(P=0.024)。结论 NB-UVB照射能促进角质形成细胞分泌SCF,进而上调MITF的表达,促进酪氨酸酶表达增加。     

InnVit/FBXO11在白癜风中的表达及其对酪氨酸酶输出内质网的影响

目的 通过检测InnVit(即FBX011)在白癜风患者中的表达及其对内质网形态和酪氨酸酶输出内质网的影响,探讨INNVit基因对黑素细胞功能的影响.方法 收集10例表皮片移植白癜风患者皮损区与正常供皮区组织,免疫组化检测InnVit蛋白的表达情况.化学合成InnVit基因特异性siRNA片段及构建过表达质粒载体P3XF-P120,Lipofectamine TM 2000脂质体方法转染BIOBr细胞,电镜观察不同处理组细胞的内质网形态变化;激光共聚焦显微镜观察酪氨酸酶蛋白及钙网蛋白在内质网中的共定位情况;Western印迹检测转染细胞中InnVit蛋白、酪氨酸酶及钙网蛋白的表达水平.结果 10例白癜风患者皮损区InnVit蛋白表达明显低于正常供皮区.未处理组与质粒转染组的黑素细胞内质网形态正常,而siRNA转染组的细胞内质网有明显膨胀,且其相对膨胀率(1.97±0.48)与未处理组(1.28±0.09,P=0.001)和质粒转染组间(1.24±0.13,P=0.001)比较,差异均有统计学意义.未处理组与质粒转染组细胞中酪氨酸酶的表达范围部分地超出了钙网蛋白的标记范围,而siRNA转染组细胞中酪氨酸酶几乎与钙网蛋白共定位于内质网中.siRNA转染组InnVit蛋白的相对表达量(0.030±0.004)低于未处理组(0.320±0.020)和质粒转染组(0.710±0.040),质粒转染组高于未处理组(均P＜0.01);钙网蛋白3组间差异无统计学意义(P＞0.05);siRNA转染组酪氨酸酶(1.040±0.060)高于质粒转染组(0.720±0.030)和未处理组(0.350±0.030),质粒转染组高于未处理组(均P＜0.01).结论 白癜风患者皮损区InnVit蛋白表达下降;InnVit基因的表达影响了黑素细胞内质网的形态,并可以调控酪氨酸酶在内质网中的输出,进而影响黑素细胞的功能.     

姜黄素对H_2O_2诱导人黑素细胞氧化应激损伤的预保护作用

目的:探讨姜黄素激活Nrf2对人黑素细胞免受H_2O_2诱导氧化应激损伤的预保护作用。方法:利用不同浓度的H_2O_2(50、100、200μmol/L)处理人黑素细胞24h,MTT检测细胞活性,筛选H_2O_2体外诱导人黑素细胞氧化应激的最适浓度;进一步使用10μmol/L的姜黄素预处理细胞2h后,使用最适浓度H_2O_2刺激24h。MTT检测细胞活性,DCFH-DA流式检测细胞内活性氧(ROS)含量,Real-time PCR测定Nrf2、Ho-1、Sod1、Cat的mRNA表达水平,Western blot检测Nrf2蛋白表达。结果:100μmol/L的H_2O_2处理人黑素细胞24h后细胞活性显著降低,10μmol/L的姜黄素预处理2h后,人黑素细胞活性显著增强,流式检测结果显示细胞内ROS含量显著降低,Western blot检测结果显示Nrf2蛋白表达增加,Real-time PCR结果提示Nrf2、Ho-1、Sod1、Cat的mRNA表达水平显著增强。结论:姜黄素保护人黑素细胞免受H_2O_2诱导氧化应激损伤的过程中激活了Nrf2信号通路,提示Nrf2是白癜风氧化应激致病机制中的关键分子,为临床治疗白癜风提供了一种思路。     

强脉冲光及5-氨基酮戊酸对小鼠B16黑素瘤细胞的作用

目的 研究强脉冲光(IPL)及5-氨基酮戊酸(5-ALA)对小鼠B16黑素瘤细胞的影响.方法 以小鼠B16黑素瘤细胞为实验对象,分为阴性对照组(不加5-ALA,未辐射)、UVA阳性对照组(3、4、5 J/cm~2 UVA辐射)、5-ALA组(含5 mmol/L 5-ALA的细胞培养液孵育)、IPL组(20、30、40 J/cm~2 IPL辐射)及5-ALA+IPL组(含5 mmol/L 5-ALA的细胞培养液孵育细胞4 h后予20、30、40 J/cm~2 IPL辐射).辐射后1 d、2 d、3 d、4 d、5 d以噻唑蓝比色法(MTT)测定细胞增殖情况、NaOH溶解法测定黑素含量、氧化多巴反应法测定酪氨酸酶活性的变化.结果 5 mmol/L 5-ALA不影响B16黑素瘤细胞增殖、细胞黑素含量及酪氨酸酶活性.3～4 J/cm~2 UVA可促进B16黑素瘤细胞增殖,5 J/cm2时细胞增殖受到抑制.3～5 J/cm~2 UVA可提高酪氨酸酶活性、促进黑素合成,其作用呈剂量依赖性.IPL及5-ALA+IPL可降低黑素含量,5-ALA+IPL的作用较IPL更明显.IPL及5-ALA+IPL对细胞增殖及酪氨酸酶活性无明显影响.结论 UVA可提高酪氨酸酶活性,促进B16黑素瘤细胞的黑素合成.IPL及5-ALA+IPL可使B16黑素瘤细胞黑素合成减少,对细胞增殖、酪氨酸酶活性无影响.     

人鼻咽部的APUD细胞

从12例婴幼儿、少年儿童及成人尸体鼻咽部连续切片标本中,证实这些标本均存在APUD细胞。本资料通过改良嗜银法检验发现嗜银细胞;采用Fontana—Masson亲银反应发现黑素细胞;在铅苏木精染色的切片标本中亦见APUD细胞的阳性反应。对不同年龄期的人鼻咽部APUD细胞作了计数和分布描述,并讨论了其分布与鼻咽部肿瘤可能存在的关系。     

长波紫外线致人皮肤成纤维细胞凋亡和活性氧生成的作用

目的 :分析长波紫外线照射诱发人皮肤成纤维细胞凋亡及活性氧生成的作用。方法 :用长波紫外线照射培养的人皮肤成纤维细胞 ,经流式细胞仪和荧光显微镜检测细胞凋亡情况 ,荧光分光光度计检测活性氧 ,电子自旋共振波谱仪检测自由基。结果 :110～ 12 0kJ·m-2 的UVA照射能够诱导明显的细胞凋亡 ,甘露醇能够拮抗这种作用 ,照射样品中发现活性氧生成增加 ,并检测到了羟自由基信号。结论 :低辐照度UVA(0 .6mW·cm-2 )照射能够诱发人皮肤成纤维细胞凋亡 ,氧化损伤可能在其中发挥着一定作用。     

四红祛斑汤预防肝郁脾虚型黄褐斑的实验研究与机制探讨

目的：考察四红祛斑汤对肝郁脾虚型黄褐斑的预防作用及其机制,为临床治疗提供指导和依据。方法：在以黄体酮注射＋慢性束缚＋紫外光照射建立肝郁脾虚型黄褐斑小鼠模型的同时,给予四红祛斑汤灌胃预防。通过比较正常组、模型组和预防组HMB45标记的小鼠皮肤黑色素细胞内黑色素颗粒的变化,评价该复方的预防作用。并通过观察小鼠皮肤一氧化氮合酶（NOS）和酪氨酸酶mRNA的表达变化,探讨该方预防黄褐斑生成的机制。结果：四红祛斑汤预防组的小鼠皮肤黑色素细胞内黑色素颗粒较模型组明显减少,对NOS和酪氨酸酶mRNA的表达也有显著抑制。结论：四红祛斑汤对于肝郁脾虚型黄褐斑小鼠模型具有较好的预防作用,其作用机制可能是该方可以预防皮肤黑色素细胞的NOS和酪氨酸酶mRNA的表达,以减少皮肤黑色素的生成。     

熊果苷对体外培养的人黑素细胞的作用

目的 研究熊果苷对体外培养的正常人表皮黑素细胞的作用效应。方法 利用碱性成纤维细胞生长因子为主要有丝分裂原建立正常人表皮黑素细胞培养系,MTT法测定熊果苷对黑素细胞活力的影响,以左旋多巴为底物测定酪氨酸酶活性,比色法测定黑素含量,并与曲酸及维生素C磷酸酯的结果比较。结果 熊果苷对体外培养的正常人黑素细胞酪氨酸酶活性呈浓度依赖性抑制,可显减少黑素生成量,对黑素细胞活力影响很小。结论 熊果苷对体外培养的人黑素细胞的酪氨酸酶活性及黑素生成有显抑制作用,且细胞毒性很低。     

木犀草素在细胞共培养体系中对酪氨酸酶及黑素的影响

目的研究木犀草素对人表皮共培养体系（黑素细胞与角质形成细胞）酪氨酸酶活性及黑素生成的影响。方法培养人表皮黑素细胞和人表皮黑素细胞与角质形成细胞共培养体系,利用四甲基偶氮唑蓝（MTT）还原法测定细胞活力,490nm比色法测定酪氨酸酶活性,475nm比色法测定黑素含量。结果 0.5μmol/L、0.75μmol/L和1μmol/L木犀草素对于黑素细胞及共培养细胞酪氨酸酶活性及黑素生成均有较强的剂量相关性增强作用,0.75μmol/L及1μmol/L木犀草素与对照组相比差异有统计学意义（P〈0.01）。结论木犀草素对于共培养体系酪氨酸酶活性及黑素生成有较强的剂量相关性增强作用。     

Hominis placenta promotes melanocyte proliferation melanin synthesis and tyrosinase activity in vitro]

OBJECTIVE: To investigate the effects of Hominis placenta on melanocytes and tyrosinase activity in vitro. METHODS: MTT assay was used to assess the proliferation of melanocytes treated with Hominis placenta. Hunt method was employed to determine melanin synthesis and the oxidation rate of DL-dopa to evaluate the tyrosinase activity. RESULTS: Hominis placenta promoted melanocyte proliferation (P<0.01) and significantly increased the cell number (P<0.01), melanin synthesis (P<0.01), with the optimal concentration of 0.1g/L (P<0.01), and also enhanced tyrosinase activity (P<0.01) at the optimal concentration of 1 g/L (P<0.01). CONCLUSION: Hominis placenta promotes proliferation, melanin synthesis and tyrosinase activity of the melanocytes.