褪黑素受体亚型蛋白的免疫组化检测方法

1　方法介绍1.1　组织标本制备　新鲜待检组织立即用 4%多聚甲醇固定 ,常规脱水、透明、浸蜡 ,石蜡包埋组织 ,4℃冰箱贮存待检测。1.2　主要步骤　将石蜡包埋组织作 4μm的连续切片 ,在 37℃烘箱过夜。石蜡切片用二甲苯脱腊 10 min× 3,梯度乙醇洗 2min× 3,3%过氧化氢溶液处理 10 m in,以阻断内源性过氧化物酶活性。蒸馏水洗 2 min× 3,0 .0 1mol/ L ,p H 6 .0柠檬酸缓冲液微波修复抗原 10 min,冷却后蒸馏水洗 2 m in× 3,PBS洗 2 m in× 3。每张切片加 5 0 ml非免疫性动物血清温室孵育 10 min,每张切片加 5 0 ml鼠抗人 mt1 和 MT2 受体…     

活检小组织石蜡包埋的快速制片及染色方法

1　材料1.1　组织块大小 :直径小于 1cm组织。1.2　组织块脱水剂及医用固体石蜡。1.3　苏木素一伊红染色液及染色架 (半年内配制 )。1.4　医用纱布、固体石蜡、10 %甲醛液。2　方法与步骤2 .1　固体　将小标本用 2 5 cm× 2 5 cm医用纱布包裹 ,浸入10 %甲醛溶液中 2 0 m in。2 .2　脱水方法和时限　将组织块浸入 85 %乙醇 3 min,室温。然后分别放入 95 %乙醇 ,95 %乙醇 ;无水乙醇 ,无水乙醇 ;各 2 0 min,再分别放入二甲苯 ,二甲苯 ,各 5 min。温度控制在 80℃。注意 :更换每步骤前 ,必须控干液体 ;脱水时间及温度要严格控制 ;液体浓度…     

霍乱弧菌及链球菌脱色标本片复染技术探讨

近年来 ,由于医学水平的不断提高 ,某些传染病基本得到控制 ,致使微生物标本取材困难。目前我们使用的标本多是十几年前收集的 ,由于放置时间过久 ,大多已经褪色 ,镜下显示不清。为使这些脱色标本能够再利用 ,我们对霍乱弧菌及链球菌脱色标本进行了复染 ,结果满意 ,报告如下。1　材料和方法1.1　材料霍乱弧菌及链球菌标本片 (均为我室保存 10年以上的脱色标本片 )各 5 0张。主要染料 :石炭酸复红、结晶紫、二甲苯。1.2　方法将两种标本片分别置于二甲苯中浸泡过夜 ,约经过 2 4小时 ,使盖玻片与载玻片脱离 ;然后将载玻片取出待干 ,置于无水乙…     

小鼠睾丸中神经激肽B受体(NK3r)的免疫组织化学

1　材料和方法1.1　材料　雄性成年 BAL B/ c小鼠 6只 ,体质量 2 5～ 2 8g.以颈椎脱臼法处死后立即取材 ,用 9g· L- 1 生理盐水迅速冲洗干净置入 40 g· L- 1 多聚甲醛固定 2 4h,再浸入含 30 0 g·L- 1蔗糖的缓冲液中浸泡 4℃过夜 ,包埋剂包埋后恒冷箱切片 ,分两套收集 ,片厚 4μm,贴于涂明胶载玻片上室温晾干 .1.2　方法　经 30 m L· L- 1 的甲醇双氧水封闭 30 min后 ,第一套切片按照 ABC法进行染色 :1进兔抗神经激肽 B受体 [1 ](1∶ 5 0 )染色 12～ 2 4h;2 Biotin标记的山羊抗兔 Ig G抗体(DAKO 1∶ 40 0 )染色 6～ 8h;3 Avidin…     

冷冻研钵在核酸或蛋白质提取中的应用

分子病理学实验中制备高纯度的核酸或蛋白质是进行研究的首要条件。 1年多来笔者利用简便易行的冷冻研钵提取新鲜组织的核酸和蛋白质取得较好效果 ,现介绍如下。1　方法与结果1.1　材料　超低温冰箱 (- 85℃ ,MDF380型 ,日本三洋株式会社 )。手术切除的新鲜标本 ,30 m in内取材 ,立刻置液氮冷冻 ,- 85℃保存。白瓷研钵若干个。1.2　方法1.2 .1　研钵经硫酸清洁液 [2 ] 按配方 2浸泡 2 4h,流水冲洗 ,180～ 2 0 0℃烘烤或装在器械盒中经 1.0 34× 10 5Pa高压 2 0min,自然冷却 ,取出 ,放入 - 80℃冰箱备用。若用于提取RNA则需经 0 .1%焦碳酸…     

花斑癣搽剂治花斑癣58例疗效观察

我们于 1997年 5月至 1999年 9月在门诊用自拟花斑癣搽剂治疗花斑癣 58例 ,疗效满意 ,现报告如下。1　临床资料1.1　一般资料 :58例中 ,男 4 5例 ,女 13例 ,年龄 2 1～ 4 2岁。其中 2 1～ 30岁 4 5例 ,占 77.58%。病程 1～ 18个月。皮损位于胸背部者 4 3例 ,占 74 .14% ,颈部 8例 ,上肢 5例 ,泛发于躯干、颈及上肢者 2例。1.2　治疗方法1.2 .1　药物制备 :黄精酊 :黄精 10 0 g,浸泡于 95%乙醇50 0 ml内。川芎酊 :川芎 10 0 g,浸泡于 95%乙醇 50 0 ml内。丁香酊 :丁香 10 0 g,浸泡于 95%乙醇 50 0 ml内。以上3种药物浸泡 3周后使用。水杨酸、…     

两种组织切片褪色方法及HE重染法的比较

1　材料陈旧褪色、染色失当需要重染的组织切片。2　方法2 .1　高锰酸钾、草酸氧化漂白法。2 .1.1　将陈旧褪色或染色失当的组织切片置于酒精灯上稍加热 ,当盖玻片内封固树胶出现气泡时 ,即可置入二甲苯内浸泡 ,直至玻片自动脱落。2 .1.2　将组织切片再置入新鲜二甲苯 、 各 5 m in,洗净残留之中性树胶。2 .1.3　依次置入 10 0 %、95 %、85 %、75 %乙醇 ,用自来水冲洗 5 m in。2 .1.4　自来水冲洗 5 min。2 .1.5　用 0 .2 5 %高锰酸钾氧化 5 min。2 .1.6　自来水冲洗 2 min。2 .1.7　用 0 .5 %草酸漂白 2 m in。2 .1.8　自来水冲洗 2 min。…     

水果鲜样中铅含量的检测探析

1　仪器与试剂日立Z— 5 0 0型原子吸收光谱仪 ;铅空心阴极灯 (日立 ) ;玻璃三角烧瓶 ;可调式电热板。铅标准储备液 :5 .0 0mg/l;铅标准应用液 :用浓度为 0 .5 0mg/l的硝酸稀释而成 ;硝酸 ;混合酸 :硝酸 +高氯酸 (4 +1 )分析过程全部用水均用去离子水 ,所使用化学试剂均为优级纯以上 ,实验所用玻璃器皿均以硝酸 (1 +4)浸泡过夜 ,用去离子水冲洗干净。2　仪器工作条件波长 2 83.3nm ;通带宽度 1 .3nm ;灯电流 9.0mA ;干燥温度 80℃～ 1 4 0℃ ,4 0s;灰化温度 4 0 0℃ ,2 0s ;原子化温度2 0 0 0℃ ,5s ;冷却温度 2 2 0 0℃ ,4s ;载气 :氩气。…     

提高皮肤脂肪组织切片质量的体会

制作皮肤脂肪组织切片的关键步骤是脱水和浸蜡。若将皮肤脂肪组织脱水、透明后 ,加倍延长浸蜡时间 ,可提高皮肤脂肪组织切片的质量。现将制片体会介绍如下。1　方法1.1　取材　所取组织块长 2 .5ｃｍ、宽1.5ｃｍ、厚 0 .2ｃｍ。1.2　固定　用 10 %福尔马林液固定 6～ 12ｈ。1.3　脱水、透明和浸蜡　脱水 :70 %乙醇 1ｈ ,80 %乙醇 1ｈ ,95 %乙醇 1道、2道各 1ｈ ,10 0 %乙醇 1道、2道各 1ｈ。透明 :二甲苯 1道、2道各 2 0ｍｉｎ。浸蜡 :苯蜡 1ｈ ,软蜡 1ｈ ,纯蜡 8～ 12ｈ ,浸蜡 :温度为 5 8～ 6 0℃。2　结果本组 4 80例标本中成功 4 72例 ,…     

盖玻片染色方法的介绍

我们用盖片染色抽作了一大批教学切片,保证180张切片标本同时染色,同时分化,染出的颜色深浅一致,红蓝鲜明,现将方法介绍如下:1 材料和方法1.1 将盖玻片分散在新配制的洗涤液内浸泡2～5h。最好不超过24h(以免久泡玻片易碎)。1.2 捞出用自来水充分流水冲洗20h以上,完全无色为止,再浸入蒸馏水中待用。也可整理整齐,像原装合一样放温箱内烘烤干燥,约2～4h。可作为载玻片染色后之封固组织所用。     

非小细胞肺癌组织端粒酶的活性

1　材料和方法1.1　材料　组织标本由西安交通大学第二医院胸外科提供 .每例标本分两份 ,一份进行病理分析 ,一份液氮冷冻进行端粒酶检测 .非小细胞肺癌组织标本 47例 ,不典型增生组织 2 8例以及正常组织标本 2 0例 .并且对癌症患者随访 30 mo.1.2　方法 [1 ,2 ]　冻存组织用冰冻低温切片机将活检组织标本切成 15 μm厚的切片 ,将 10切片于冰裂解液中裂解 30 m in,于 4℃下 12 0 0 0× g离心 30 m in,提取上清液并测定其蛋白浓度 (标准浓度 1～ 5 0 g· L- 1 ) .取 2 μL 提取液与 PCR反应液中作用引物反应 30 m in后 ,进行 PCR扩增 ,扩…     

穿刺法治疗巴氏腺囊肿21例的疗效观察

1　资料和方法2 0 0 1年至 2 0 0 4年近 4 a来我院采用穿刺法治疗巴氏腺囊肿 2 1例 ,其中化脓性脓肿 4例。年龄 2 0岁～ 4 5岁 ,囊肿最小 1cm× 2 cm× 3cm ,最大 1cm× 4 cm× 5 cm ,均在门诊治疗。方法 :常规消毒外阴 ,穿刺点选在囊肿下方阴道黏膜面 ,9号针头抽出囊肿内大部分液体 ,用 1∶ 5比例的庆大霉素和无菌注射用水冲洗至囊内液体转清 ,抽空后注入 95 %乙醇 ,注入量约占抽出液一半。 (注意 :注乙醇前必须确认针头在囊内 ,否则会伤害其他组织 )。注射完毕患者稍有疼痛或无任何反应。待1周后复查 ,如囊肿仍有存在 ,再进行抽液后注入乙…     

日本脑炎病毒血球凝集和凝集抑制试验的条件

1　材料和方法1.1　材料　血凝板为 2 0孔 U型底塑料硬板 .0 .12 mol·L- 1 HCl浸泡过夜 ,自来水 ,单蒸馏水 (DW)冲洗干净 ,晾干备用 .血凝素制备是用出生 3～ 6 d昆明种乳鼠 ,脑内接种 JEVSA14株 0 .0 2 m L,3d后发病处死 ,取脑加入少许 p H9.0硼酸盐水 (BBS:0 .5 mol· L- 1硼酸 10 0 m L,1.5 m ol· L- 1 Na Cl80 m L ,1mol· L- 1 Na OH 2 4 m L ,DW至 10 0 0 m L ) ,研磨后配成 10 0 g· L- 1脑悬液 ,5 0 0 0 r· min- 1离心 2 0 min,吸取上清分装小塑料管 - 2 0℃保存 .其中少量上清经紫外灯照射 2h灭活后 - 2 0℃保存 .…     

硝酸银耳蜗光镜制片改做透射电镜样品的方法

耳蜗标本的电镜制备难度较大 ,很难做出理想的标本。有关显示和制作耳蜗电镜标本方面的文章虽有很多 ,但大部分资料是描述如何修正耳蜗螺旋器方向的定向、定位。本文介绍了对同一份耳蜗标本 ,光镜观察与电镜观察相结合的样品制备方法。1　材料和方法选用耳廓反射正常的健康豚鼠 ,活杀断头 ,取颞骨打开听泡 ,暴露骨性耳蜗 ,在蜗尖钻孔的同时开放蜗窗和前庭窗 ,用 0 .5 %的硝酸银染液缓慢灌入蜗尖小孔 ,反复 1 0次左右 ,而后将标本浸入染液中 ,置 4℃冰箱 1 5～ 2 0min ,再用 2 .5 %的戊二醛固定液灌注标本 ,并将标本浸入固定液中 ,然后用微波…     

治疗室无菌持物钳保管方法探讨

我们于 1998年 12月～ 1999年 5月 ,对 1∶10 0 0新洁尔灭消毒液浸泡持物钳与无菌干燥筒存放持物钳二种保管方法进行了细菌学监测。观察使用效果 ,并进行了比较。现报告如下。1　实验方法与结果1.1　消毒液浸泡持物钳细菌学监测 :对门诊注射室 1∶10 0 0新洁尔灭溶液浸泡无菌持物钳标本分别于使用后第 2天、第 3天、第 4天、第 5天采标本 1次各 30份。每次抽取 1毫升新洁尔灭溶液与 9毫升中和剂中和 ,用 50滴 /ｍｌ的滴管吸取少量混和液分别滴入两个琼脂平板 ,每个平板 10滴分别置于 2 5℃、35℃条件下培养。 4 8～ 72小时后计数菌落数。如…     

硼酸滴耳液制备方法的改进

硼酸滴耳液具有消毒 ,止痒作用 ,是治疗慢性中耳炎的理想药物 ,传统的制备方法为直接将硼酸溶于 70 %乙醇中 ,制备过程长且易析出结晶 ,影响临床使用。为此 ,笔者对其制备方法进行了改进 ,现报告如下。1　改良后硼酸滴耳液的制备处方 :硼酸 (上海云岭化工厂生产 ,批号 :0 2 0 70 9) 30 g ,95 %乙醇 737ml,纯化水 2 6 3ml。制备方法 :取硼酸溶解在 2 6 3ml新鲜煮沸纯化水中 ,待溶解后冷却至 4 0～ 5 0℃ ;另取 95 %乙醇 737ml亦加热至 4 0～ 5 0℃ ,再将硼酸溶液在搅拌下缓缓加入到 95 %乙醇中 ,过滤 ,搅匀即可。2　质量检测按《中国医院制剂…     

一种从凝胶上回收蛋白质的简易方法(摘要)

为寻求一种从凝胶上回收蛋白质的简易方法 ,将猫脊髓后角组织匀浆、离心制成提取液 ,用聚丙酰胺凝胶电泳对其分离 .用光密度扫描测算各蛋白带的相对含量 .将相对迁移率 (Ｒｆ) 0 4 5～ 0 4 8带切下 ,匀浆、Ｔｒｉｓ-ＨＣｌ浸泡过夜 ,用 5层纱布包被后离心 (4℃ ,4 0 0 0ｒ/ｍｉｎ) ,取离心液再电泳 ,同上用光密度扫描测算Ｒｆ 0 4 5～ 0 4 8带血清蛋白的相对含量 .结果 :第 2次的蛋白回收率约为第 1次的6 0 %～ 70 %左右 .结论 :凝胶上的大部分蛋白质被回收 .该法简便易行 ,可考虑用于从凝胶上回收蛋白质 .一种从凝胶上回收蛋白质的简易…     

一种快速鉴别白色念珠菌培养基的配制及应用

作者配制应用一种快速鉴别白色念珠菌的培养基 ,报告如下。1　材料和方法甲液 :葡萄糖 5 .0ｇ ,蛋白胨 1.2 ｇ,氯化钠 1.0 ｇ ,吐温 - 800 .4ｍｌ,氯霉素 5 0ｍｇ ,加蒸馏水至 2 0 0ｍｌ,加热溶解 ,ｐＨ用0 .1ｍｍｏｌ/Ｌ盐酸 ,调至 (6 .0± 0 .5 )。乙液 :氯化三苯四氮唑 0 .1ｇ ,琥珀酸钠 0 .2 ｇ ,氯化钠90ｍｇ ,加蒸馏水至 10ｍｌ,加热溶解分装成 1ｍｌ/支备用 ,将甲液 2 0 0ｍｌ,乙液 1.2ｍｌ,115℃高压灭菌 15ｍｉｎ后 ,加入无菌健康人混合血清 12ｍｌ,混匀分装于无菌试管内 ,4℃冰箱保存备用。2　结果标本接种于鉴别培养基中 ,35℃ 8…     

显示小鼠肠肌间神经丛铺片的方法

1　材料和方法1.1　材料　健康成年雄性昆明小鼠 5只 ,体质量 2 0～ 30 g,ip肌松药后以颈椎脱臼法通过腹部正中切口暴露腹腔 ,暴露的消化道器官不断用温和的 0 .0 1mol· L- 1 PBS(p H7.0 )清洗保持湿度 .食管、十二指肠、空肠、回肠、盲肠和结肠取材后用含尼莫地平 (10 - 6mol· L- 1 )的 0 .0 1m ol· L- 1 PBS冲洗 ,以 40 g· L- 1 的多聚甲醛充盈到最大程度后将各肠段两端扎紧 ,立即用 40 g· L- 1多聚甲醛液灌注固定 ,再放置其中固定6～ 8h(4℃ ) ,再移入 30 0 g·L- 1蔗糖液中 4℃过夜 .1.2　方法　各肠段沿肠系膜纵行剪开以 0 …     

泸州市蔬菜携带土源性线虫情况的调查

1　材料和方法1.1　标本采样蔬菜采自泸州市 4个蔬菜市场本地菜农所卖蔬菜 ,每份约 5 0 0克 ;“净菜”采自上述菜市场中的 5家“净菜”行 ,每份约 2 5 0克。1.2　检查方法标本的清洗和浓缩　用毛刷蘸取自来水刷洗蔬菜标本 ,“净菜”用自来水直接浸洗 ,将洗过的水倒入锥形杯中 ,待其自然沉淀。 1小时后倾去其上层液 ,再放入清水 ,搅拌后静置。如此反复水洗沉淀 ,直至上液清晰为止。倾去上液 ,每份留样 10 0ｍｌ的沉淀液 ,作如下检查。线虫幼虫检查　采用直接涂片法。上述沉淀液经充分搅拌后 ,抽取 10ｍｌ至离心管中 ,静置 2小时 ,吸去上液 ,…