胚胎大鼠嗅神经干细胞的培养及分化特性

目的建立胚胎大鼠嗅神经干细胞(NSCs)体外培养方法,研究其增殖和分化特性.方法采用添加丝裂原的无血清培养基分离、培养胚胎14 d(E14)大鼠嗅球NSCs,应用免疫细胞化学方法鉴定培养的NSCs及自然分化为特异性神经细胞的类型,测定NSCs的生长曲线.结果从E14大鼠嗅球分离、培养出表达nestin,并能分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的NSCs.嗅NSCs的增殖依赖表皮生长因子(EGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF),其中EGF的促分裂增殖作用明显优于bFGF.结论从E14大鼠嗅球培养出具有自我增殖和多向分化潜能的NSCs.     

悬浮培养与贴壁培养方式神经干细胞分化表型特点

目的观察神经干细胞在悬浮培养与贴壁培养方式下的形态学特点及分化表型。方法新生6 h内的大鼠皮质应用无血清悬浮培养与贴壁培养神经干细胞(NSCs)技术培养,观察神经干细胞的形态学特点。体外胎牛血清(FBS)诱导NSCs分化,通过巢蛋白(Nestin)和GFAP免疫荧光染色鉴定分化表型。台盼蓝活细胞计数法比较细胞增殖能力。结果新生大鼠皮质应用无血清悬浮培养可获得稳定的NSCs细胞球,应用贴壁培养形成长梭状NSCs,NSCs巢蛋白免疫荧光染色结果呈阳性。体外FBS诱导分化后,神经球内开始出现放射状的神经纤维丝,免疫荧光染色可见GFAP阳性细胞向外伸展以及Nestin阳性细胞边集。贴壁的NSCs分化成星形胶质细胞,免疫荧光染色可见Nestin和GFAP染色阳性细胞。在相同条件下,应用悬浮培养在第2~3 d时增殖速度最大,而以贴壁培养方式培养出的神经干细胞在第4~5 d时增殖速度最大。结论应用无血清培养物B27与b FGF、EGF组合的NSCs完全培养基通过悬浮培养法与贴壁培养法,都可以成功在体外培养出NSCs;悬浮培养法培养NSCs在早期增殖速率上优于贴壁培养法。     

新生大鼠海马区及室管膜下区神经干细胞分离、培养和分化特性

目的建立大鼠神经干细胞（NSCs）分离、培养方法，观察其生长、增殖和分化特点。方法利用无血清培养技术，从新生大鼠海马、室管膜下区分离NSCs，进行体外扩增培养、传代观察。采用荧光免疫细胞化学检测技术，观察鉴定NSCs及其分化结果。结果分离获取的细胞具有自我更新和增殖能力，原代及传代培养均可形成细胞克隆，克隆中的细胞巢蛋白（nestin）表达阳性，显微镜下观察见典型的干细胞特征，诱导后可分化神经元和星形胶质细胞。结论上法分离培养的细胞为具有自我更新和增殖能力的NSCs，可诱导分化为终末神经细胞。     

大鼠胎脑皮质神经干细胞体外培养及诱导分化的实验研究

目的 从孕龄15d SD胚胎鼠脑皮质中分离并培养神经干细胞（neural stem cells。NSCs），观察其生长、增殖及分化。方法 采用包含碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）和表皮细胞生长因子（EGF）的无血清培养及单细胞克隆技术，对胚胎鼠脑皮质神经干细胞进行原代、传代培养及诱导其分化。用Nestin染色鉴定神经干细胞特性，用免疫组化方法（β-Ⅲ-tubulin、GFAP染色）检测神经干细胞分化为神经元及神经胶质细胞状况。结果 从孕龄15dSD胚胎鼠脑皮质中分离的组织，经原代及传代培养均可形成细胞克隆．切具有增殖能力。原代及传代培养细胞呈Nestin（神经上皮干细胞蛋白）表达阳性．诱导分化后的细胞表达神经元细胞、星形胶质细胞的特异性抗原。结论 本实验分离、培养的孕龄15dSD胚胎鼠脑皮质细胞Nestin表达阳性．分化后表达神经元和星形胶质细胞的标记物，是大鼠的神经干细胞，并具有多向分化潜能。     

成年C57小鼠脊髓神经干细胞的培养与鉴定

目的　 从成年小鼠脊髓中培养神经干细胞 ,并对其进行鉴定和诱导分化。方法　 成年C5 7小鼠 ,悬浮培养神经干细胞技术。结果　培养 1～ 2周时 ,培养液中即可出现神经干细胞克隆球。该克隆球具有很强的自我增殖能力 ,可多次传代。免疫细胞化学技术证明该克隆球表达大量的神经干细胞特征性的中间丝———巢蛋白(Nestin) ;经 1%胎牛血清诱导后可表达神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞特征性标志物β tubulinIII、胶质纤维酸性蛋白 (Gliafibrillaryacidicprotein ,GFAP)和RIP ,提示它们可朝神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞方向分化。 结论　 本研究结果提示正常成年C5 7小鼠脊髓中含有神经干细胞 ,在体外条件下可以大量增殖 ,经诱导后可朝神经元和胶质细胞的方向分化     

成人脑神经干细胞体内外增殖、分化和迁移研究

目的探索从成人脑组织获取的神经干细胞（成人-hNSCs）在体外的增殖能力、分化特性、以及在裸鼠颅内的存活、迁移及分化情况。方法分别留取癫痫患者手术切除的颞叶脑组织和10W左右人类自然流产胎儿纹状体组织,体外分离成单细胞悬液,无血清培养基培养、传代并诱导分化。软琼脂糖集落形成实验检测NSCs的增殖能力。免疫荧光法检测NSCs标志物神经上皮巢蛋白（Nestin）和诱导分化后神经元标志物13．tubllin以及神经胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达;利用动物立体定向仪将体外悬浮培养2W的人NSCs移植入裸鼠颅内,检测NSCs在裸鼠脑组织局部的存活、迁移和分化状况。结果成人-hNSCs集落形成能力较胚胎脑组织来源的NSCs（胎儿-hNSCs）明显减弱,免疫荧光染色显示分离的NSCs呈Nestin阳性,诱导分化后可见（β-tubllin和GFAP阳性的神经细胞,其中80％的细胞为GFAP阳性的星形胶质细胞,20％左右为β-tubllin阳性细胞。分别将成人-hNSCs和胎儿．hNSCs移植入裸鼠纹状体,1个月后,冰冻切片,荧光显微镜观察到来源于成人脑组织来源的NSCs仅见沿针道的近距离迁移,免疫荧光染色在成人-hNSCs移植裸鼠颅内只检测到GFAP阳性的星形胶质细胞。而胎儿-hNSCs可穿过针道,沿大脑廉向脑实质广泛迁移,免疫荧光染色能检测到GFAP和少量（β-tubllin阳性细胞。结论成人脑组织和胚胎纹状体组织中均能成功分离到神经前体细胞,而与胎儿．hNSCs相比,成人-hNSCs体外增殖能力、多向分化潜能和体内迁移能力都明显减弱。     

人胚海马神经干细胞体外培养及分化研究

目的 研究人胚胎海马神经干细胞体外长期培养的条件和其在自主分化条件下的分化能力和分化特点。方法 从人胚胎海马分离神经干细胞。采用无血清培养法，进行体外培养、扩增，形成神经球。使神经球贴壁分化，分化培养基不含有任何细胞有丝分裂促进剂。使用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记分裂增生的细胞，观察细胞的分裂增殖情况。使用免疫细胞化学法鉴定神经干细胞及其在不加诱导剂下的自主分化能力。结果 从人胚胎海马分离的神经干细胞具有增殖能力，细胞倍增时间为3．2d。BrdU检测有正在分裂、增殖的细胞。细胞贴壁分化后可以出现Nestin、GFAP、Tuj-1表达阳性的细胞。神经干细胞共培养6个月，传代14代。结论 分离培养的海马神经干细胞具有自我更新和增殖能力，可以长期培养。在不加任何诱导剂的自主分化条件下可以向神经元、胶质细胞分化。少突胶质细胞的培养需要不同的培养条件。分离培养的干细胞具有神经干细胞的特征。可用于基础和临床的相关研究。     

肝细胞生长因子对神经干细胞分化的影响

目的体外培养获得神经干细胞并初步研究重组人肝细胞生长因子(human recombinant hepatocyte growth factor,HGF)对神经干细胞(neutal steal cells,NSCs)分化能力的影响。方法从胚胎大鼠脑组织中分离得到神经干细胞,并行免疫荧光鉴定。检测不同浓度的HGF(5ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、40ng/ml)对神经干细胞分化的影响。结果体外培养的神经干细胞球巢蛋白(nestin)表达阳性,由神经干细胞球分化的细胞神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE)和胶质纤维酸性蛋白(galial fibrillary acidic protein,GFAP)表达阳性。并且不同浓度HGF作用下的神经元细胞分化率不同。结论HGF对NSCs分化及较长时间存活具有重要作用,20ng/ml的HGF可以促进较好的分化效果。     

胎鼠海马神经干细胞生物学特性的研究

目的研究胎鼠脑组织中海马神经干细胞的自我繁殖特性及多向分化潜能.方法在碱性成纤维生长因子(FGF-2)作用下从胎鼠脑组织中分离、培养神经干细胞并诱导其分化,然后采用间接免疫荧光和免疫组化技术研究神经干细胞的特性.结果由胎鼠海马中分离出的神经干细胞在体外分裂增殖形成干细胞团,分化产生神经元和胶质细胞,它们分别对神经上皮干细胞蛋白、神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白等抗原标记呈现阳性.结论胎鼠脑海马中存在神经干细胞,其具有自我增殖特性和多向分化潜能,在FGF-2的作用下分裂增殖,并分化成神经元、胶质细胞.     

液压性脑损伤后室下区神经干细胞的分离培养与鉴定

目的分离液压性脑损伤室下区巢蛋白（nestin）和胶质酸性纤维蛋白（GFAP）阳性（nestin^＋／GFAP^＋）共存细胞进行培养和诱导分化，观察其分裂、增殖和分化能力，以阐明损伤反应性星形胶质细胞增生过程中nestin^＋／GFAP^＋共存细胞是否具有神经干细胞特性。方法用液压冲击法建立动物模型，分离损伤成年SD大鼠室下区nestin^＋／GFAP^＋共存细胞，制成单细胞悬液，培养和诱导分化，以免疫荧光化学方法对原代和传代培养形成的神经球以及原代和传代培养诱导分化的细胞进行鉴定。结果结果显示培养及传代的细胞不断分裂增殖，可以形成悬浮生长nestin阳性的神经球；神经球诱导分化后可以分化为少突胶质细胞、神经元和星形胶质细胞。结论成年大鼠液压性脑损伤后分离的室下区细胞具有自我更新能力和多向分化潜能，是中枢神经系统神经干细胞。     

外源性Ang Ⅱ诱导神经干细胞向多巴胺能神经元分化的研究

目的在体外成功分离培养并扩增神经干细胞（NSCs）的基础上,研究外源性血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）对NSCs向多巴胺（DA）能神经元分化的影响。方法（1）分离培养新生1d SD大鼠脑组织NSCs,免疫细胞学方法测定NSCs特异性标志物神经上皮干细胞蛋白（Nestin）表达及其分化为神经元、神经胶质细胞的能力;（2）按培养液中Ang Ⅱ的浓度不同,分5个浓度（100、200、400、600、800nmol/L）对第二代NSCs进行诱导分化。10d后采用免疫细胞学方法检测DA能神经元标志物酪氨酸羟化酶（TH）和神经胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达,半定量RT-PCR（SQ-PCR）测定分化细胞中TH mRNA的相对表达量。结果外源性Ang Ⅱ诱导提高NSCs向TH阳性细胞分化的比率,TH mRNA相对表达量亦增加,以Ang Ⅱ浓度为400nmol/L及600nmol/L的诱导效果最明显,TH阳性细胞率分别为10.77%和11.34%,TH mRNA相对表达量分别为（0.4023±0.0515）和（0.3971±0.0319）,两组间比较无统计学意义（P〉0.05）;其中400nmol/L Ang Ⅱ组分化细胞中GFAP阳性细胞率高于对照组,有统计学意义（P〈0.05）。结论外源性AngⅡ促进NSCs向DA能神经元分化,在400～600nmol/L浓度范围内AngⅡ的诱导效能更显著;AngⅡ促进NSCs向DA能神经元分化的机制可能与同时促进星型胶质细胞（AS）分化有关。     

神经干细胞原代培养方法的优化

目的 探讨低浓度胰酶不同消化分离时间对体外培养新生大鼠海马NSCs增殖与凋亡的影响.方法 取出生24 h内SD大鼠海马组织,以1.25 g/L胰酶37℃分别消化5、10、15、20和25min(依次为A～E组),获得单细胞悬液后进行培养.通过台盼蓝染色计数、细胞形态观察和神经球数目比较不同消化时间对NSCs活力和生长的影响;用5-溴-2脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记法检测NSCs的增殖能力;用免疫荧光细胞化学法检测BrdU、nestin的表达:用Annexin V-FITC/PI染色和流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 原代和传代培养的NSCs都能快速增殖并形成神经球;免疫荧光染色结果显示神经球细胞均表达NSCs特异性标志物nestin;所获得的细胞能将BrdU结合到细胞核中;各组培养3、5、7 d后,C组(消化15 min)NSCs成球数最多,BrdU标记克隆率最高,细胞凋亡率最低,与其他组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 体外分离培养的新生大鼠海马NSCs具有增殖能力,1.25 g/L胰酶在不同消化时间对NSCs增殖能力和凋亡率的影响有所不同,消化时间过长或过短都会抑制NSCs增殖,诱导NSCs凋亡,且消化时间越长NSCs的凋亡率越高.

Abstract：

Objective To study the influence of digestion times of low concentration trypsin on the proliferation and apoptosis of neural stem cells (NSCs) in the hippocampus of neonate rats.Methods Hippocampus of neonatal rats (within 24 h) were taken out, and treated with trypsin at 1.25g/L concentration and 37 ℃ for 5, 10, 15, 20 and 25 minutes; unicellular suspension was then successfully got and primary culture and subculture were performed. Effects of trypsinization on cell viability and growth of NSCs were compared by observing the cell morphology and Trypan blue staining.The 5-bromodeoxyuridine labeling was performed to assess the self-renewing and proliferative activities of NSCs. Fluorescence immunocytochemistry was carried out to examine the expressions of BrdU and nestin. Apoptosis was measured by Annexin V-FITC/PI assay and flow cytometry. Results Primary and passage culture of NSCs enjoyed rapid proliferation and formation of neurospheres. The neurosphere cells expressed NSCs specific marker nestin by immunofluorescence; all the neurosphere cells could incorporate BrdU into the nucleus; of the neurospheres obtained from the 3rd, 5th and 7th d, those digested for 15 rain enjoyed the highest level of NSCs neurospheres, the highest BrdU labeled clone and the lowest cell apoptosis as compared with those digested for 5, 10, 20 and 25 min (P<0.05). Conclusion The NSCs isolated from the hippocampus of neonatal rats have the ability of proliferation in vitro. And 1.25 g/L concentration of trypsin with digestion times could positively change the proliferative and apoptosis capacity of NSCs: too short or long digestion times can inhibit the proliferation of NSCs and induce the apoptosis of NSCs; the longer the digestion time, the higher the apoptosis of NSCs.     

无血清条件下体外分离培养鼠胚胎脑组织神经干细胞

背景：神经干细胞的体外培养成功为治疗中枢神经系统疾病提供了新的思路,但神经干细胞的分化和功能修复机制尚不甚清楚,移植后的细胞能否与体内细胞结合以及建立起正常的神经系统突触联系急需解决。 目的：在无血清条件下体外分离培养胚鼠神经干细胞,观察其生长及分化情况。 设计、时间及地点：细胞学体外观察,于2007-03/2008-01在天津市环湖医院神经干细胞室完成。 材料：孕14~16 d的SD大鼠,由北京维通利华实验动物中心提供。 方法：取孕鼠胚胎的脑海马组织,通过机械分离和胰蛋白酶消化结合法体外分离培养神经干细胞,在含有碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子及B27的无血清DMEM/F12培养基中传代扩增。取原代培养7 d的神经干细胞,制备单细胞悬液,接种后加入含体积分数为10%胎牛血清的DMEM培养液诱导3 d。 主要观察指标：倒置显微镜下观察神经干细胞的增殖分化过程,并行免疫荧光染色鉴定。通过细胞免疫化学染色检测诱导分化后的细胞类型。 结果：分离培养的神经干细胞在无血清培养基中不断分裂增殖,8 d左右即可形成胞体透亮、折光性好的干细胞球,悬浮生长,免疫荧光染色巢蛋白呈阳性表达。神经干细胞球诱导5 d,免疫细胞化学染色后可见胶质纤维酸性蛋白及神经元特异性烯醇酶呈阳性表达的细胞。 结论：体外无血清条件下,分离培养的神经干细胞生长状态良好,且具有自我更新和增殖能力,诱导后能够向神经元及星形胶质细胞方向分化。     

Nestin‐expressing cells in the gut give rise to enteric neurons and glial cells

Background Neuronal stem cells (NSCs) are promising for neurointestinal disease therapy. Although NSCs have been isolated from intestinal musclularis, their presence in mucosa has not been well described. Mucosa‐derived NSCs are accessible endoscopically and could be used autologously. Brain‐derived Nestin‐positive NSCs are important in endogenous repair and plasticity. The aim was to isolate and characterize mucosa‐derived NSCs, determine their relationship to Nestin‐expressing cells and to demonstrate their capacity to produce neuroglial networks in vitro and in vivo. Methods Neurospheres were generated from periventricular brain, colonic muscularis (Musc), and mucosa–submucosa (MSM) of mice expressing green fluorescent protein (GFP) controlled by the Nestin promoter (Nestin‐GFP). Neuronal stem cells were also grown as adherent colonies from intestinal mucosal organoids. Their differentiation potential was assessed using immunohistochemistry using glial and neuronal markers. Brain and gut‐derived neurospheres were transplanted into explants of chick embryonic aneural hindgut to determine their fate. Key Results Musc‐ and MSM‐derived neurospheres expressed Nestin and gave rise to cells of neuronal, glial, and mesenchymal lineage. Although Nestin expression in tissue was mostly limited to glia co‐labelled with glial fibrillary acid protein (GFAP), neurosphere‐derived neurons and glia both expressed Nestin in vitro, suggesting that Nestin+/GFAP+ glial cells may give rise to new neurons. Moreover, following transplantation into aneural colon, brain‐ and gut‐derived NSCs were able to differentiate into neurons. Conclusions & Inferences Nestin‐expressing intestinal NSCs cells give rise to neurospheres, differentiate into neuronal, glial, and mesenchymal lineages in vitro, generate neurons in vivo and can be isolated from mucosa. Further studies are needed for exploring their potential for treating neuropathies.     

N-甲基-D-天冬氨酸受体亚单位2B特异性拮抗剂对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑室下区神经干细胞增殖的影响

目的:研究N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)亚单位2B(NR2B)特异性拮抗剂(Ro 25-6981)对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠脑室下区(SVZ)神经干细胞(NSCs)增殖的影响。方法:7 d龄新生SD大鼠随机分为Ro 25-6981组(HIBD前2 h,腹腔注射Ro 25-6981 10 mg.kg-1)、HIBD组(HIBD前2 h,腹腔注射等剂量生理盐水)和假手术组(仅游离右侧颈总动脉,不结扎)。采用免疫组化学染色检测SVZ Nestin表达量及BrdU阳性细胞数的变化。结果:HIBD组12h后Nestin表达量开始增多,48 h达峰值,之后缓慢下降;与其相比,Ro 25-6981组在12 h和24 h时下降明显(P<0.05)。HIBD组BrdU阳性细胞数在缺氧缺血3 h后缓慢上升,72 h达高峰;与其相比,Ro 25-6981组在各时间点BrdU阳性细胞表达均有所下降,以24、48和72 h减少明显,尤以72 h为著(P<0.05)。结论:Ro 25-6981能够降低HIBD新生大鼠SVZ Nestin的表达及Brdu阳性细胞数,对SVZ NSCs增殖起抑制作用,提示NR2B参与并促进HIBD引起的SVZ NSCs的增殖。     

成年小鼠嗅球神经干细胞的培养和鉴定

目的 建立完善的成年小鼠嗅球神经千细胞分离培养和鉴定方法,探索新的成年神经干细胞种子来源. 方法 用无血清方法 分离培养成年小鼠嗅球来源的神经干细胞;用克隆培养、5-溴2-脱氧尿嘧啶核昔(BrdU)整合的方法 检验培养细胞的干细胞特性;用免疫荧光细胞化学的方法 检测BrdU、神经干细胞标记物巢蛋白(nestin)和SOX2、分化的细胞标记物Tuj1、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、04的表达. 结果 从成年小鼠嗅球能够分离、培养出具有自我更新、增殖能力的神经球.构成神经球的细胞呈nestin和SOX2阳性,它们分化后产生TuJ1阳性的神经元、GFAP阳性的星形胶质细胞、04阳性的少突胶质细胞. 结论 成年小鼠嗅球存在神经干细胞,其能够在体外进行培养、增殖、分化.是神经干细胞的新的种子来源.     

活体取材山羊皮层组织神经干细胞的培养与鉴定

目的通过手术从活体山羊中获取小块皮层脑组织,进行体外神经干细胞（NSC）的培养与鉴定。方法选用健康成年山羊,全麻后通过手术开颅取大小约2cm×2cm×1cm皮层脑组织块,在体外用无血清培养基自然筛选法进行分离、培养得到NSC,并采用免疫荧光细胞染色法进行NSC特异性抗原巢蛋白（nestin）及多向分化潜能的鉴定。结果皮层脑组织块在体外通过无血清培养基自然筛选法培养2w后可以成功地培养得到大量细胞球,经nestin鉴定为NSC球;所得到的NSC球在体外分化后经微管相关蛋白-2（MAP2）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）及少突胶质细胞蛋白标志物1（O1）免疫荧光组化染色后确定可分化为神经元、星形胶质细胞及少突胶质细胞。结论对活体山羊通过手术获取其少量皮层脑组织,在体外培养后可得到相当数量的NSC,有望用于自体NSC的移植治疗。     

慢病毒介导CD-TK融合基因转染对神经干细胞体外增殖的影响

目的探讨慢病毒介导胞嘧啶脱氨酶（cytosine deaminase,CD）及胸腺嘧啶激酶（thymidine kinase,TK）融合基因转染对神经干细胞体外增殖的影响。方法原代培养新生Wistar大鼠室下区神经干细胞并鉴定,经传代纯化后,用CD-TK基因包装的慢病毒处理3～5 d。MTT实验检测神经干细胞增殖活性,免疫荧光技术检测转染后神经干细胞GFAP、NSE表达。结果 MTT结果显示CD-TK融合基因转染对神经干细胞增殖无影响（P〉0.05）。免疫荧光结果显示：神经干细胞Nestin标记阳性;CD-TK融合基因转染后,神经干细胞NSE及GFAP均表达阳性。结论 CD-TK融合基因转染对神经干细胞增殖无影响。     

人小龄胚胎神经干细胞的分离培养、扩增及鉴定

目的 探索人胚胎神经干细胞的体外分离培养条件，从而在体外大量扩增神经干细胞；并观察神经干细胞增殖、分化的特点。方法 从人胚胎脑分离神经干细胞，部分细胞冻存，另一部分细胞进行体外培养。采用无血清培养液，加入表皮生长因子(EGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)刺激细胞增殖，进行体外扩增、传代培养。采用免疫荧光法鉴定神经干细胞和分化的神经元及胶质细胞。结果 从人胚胎脑分离的细胞在含有EGF和bFGF的无血清培养液中能形成大量的神经干细胞球，这些神经干细胞球可在体外扩增及传代培养。免疫荧光法鉴定神经干细胞球中大部分为神经上皮干细胞蛋白(nestin)表达阳性细胞。贴壁后可以分化出神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达阳性的细胞。经冻存后的胎脑细胞也能培养出具有同样特征的神经干细胞。结论 在含有EGF和bFGF的无血清培养液中，从人胚胎脑能分离培养出神经干细胞，并能在体外大量扩增。这为人类神经干细胞的进一步研究和应用提供了材料。