毛细管气相色谱法测定辛夷挥发油软胶囊中的α-蒎烯、β-蒎烯、柠檬烯和1, 8-桉叶素

目的 建立测定辛夷挥发油软胶囊中α-蒎烯、β-蒎烯、柠檬烯和1,8-桉叶素的测定方法。方法 采用毛细管气相色谱法测定。BP-5毛细管柱(30 m×0.25 mm，0.22 μm )；进样器温度180 ℃；FID检测器温度200 ℃；柱温采用程序升温；分流比1∶30；苯乙酮为内标。结果 α-蒎烯在0.054～2.505 μg线性关系良好，平均加样回收率为98.6%，RSD为0.72%( n.=9)；β-蒎烯在0.070～3.204 μg线性关系良好，平均加样回收率为99.0%，RSD为0.65%( n.=9)；柠檬烯在0.068～3.190 μg线性关系良好，平均加样回收率为101.1%，RSD为0.56% (n=9)；1, 8-桉叶素在0.301～10.205 μg线性关系良好，平均加样回收率为99.6%，RSD为1.24% ( n = 9)。结论 该方法简便、准确、重现性好，可作为辛夷挥发油软胶囊的质量控制方法。     

气相色谱法测定脑宁糖浆中α-蒎烯的含量

目的探讨测定脑宁糖浆中α-蒎烯含量的方法。方法采用气相色谱法进行测定。结果该法具有良好的精密度与准确度，对照品α-蒎烯在0．317～1．585μg间具有良好的线性关系，r=0．9993。平均回收率为98．78％，RSD=1．56％(n=5)。结论本法可以作为脑宁糖浆中α-蒎烯的含量测定方法。     

α—蒎烯抗真菌机制的研究

应用电镜及同位素掺入试验，研究α－蒎烯的抗真菌作用及其机制，结果表明：α蒎烯对白念珠菌有明显的抑菌和杀菌作用，电镜下，α－蒎烯作用后的白念珠菌，其形态和微超结构发生明显的变化，菌细胞壁及细胞膜破裂，菌体内容物漏出，菌细胞裂解后成块状物；ＤＮＡ，ＲＮＡ及胞壁中多糖和胞膜的麦角固醇合成受到明显的抑制，提示α－蒎烯抗真菌的作用机制是通过抑制真菌的ＤＮＡ，ＲＮＡ，多糖及麦角固醇的生物合成所致。     

β-榄香烯与核酸的结合作用

本文中用DNA热变性实验及荧光分析法研究了β-榄香烯与小牛胸腺DNA的结合作用．热变性实验表明β-榄香烯可使小牛胸腺DNA的热变性温度Tm值下降2℃，小牛胸腺DNA(30μg／ml)与β-榄香烯(20μg／ml)温育后．激发波长为3．4nm,发射波长为358nm,其荧光强度为0．315，此时小牛胸腺DNA(30μg／ml)的荧光强度仅为0．020,用酵母的t-RNA与-β-榄香烯实验也取得类似的结果。对β-榄香烯的抑癌机理用量子化学CNDO／2方法计算的结果进行了探讨。β-榄香烯的前沿轨道能级ELUMO=0．0168 au EHOMO=03239au鸟嘌呤的ELUMO=0．1629au其EHOMO=-0．25960au胸腺嘧啶的ELUMO=0．1324au．其EHUMO=0.3550au脲嘧啶的ELUMO-=0．0888au其EHOMO=-03940au。上述计算结果提示β-榄香烯与核酸碱基的前沿轨道之间的相互作用；因β-榄香烯上的一个甲基带有较正的静电荷，该甲基可能与核酸碱基上的氮原子存在分子间选择性疏水作用。     

油松节药材中α-蒎烯的测定方法研究

目的 研究油松节药材中α-蒎烯的测定方法,分析不同产地样品的量。 方法 采用溶剂超声提取样品、气相色谱法［HP-5弹性毛细管柱(0.32 mm×30.0 m×0.25 μm)］测定油松节药材中α-蒎烯的量。 结果 α-蒎烯在0.01～10.0 mg/mL呈良好线性关系, r=0.999 9,平均回收率为99.7%;20批样品中α-蒎烯的平均质量分数为0.46%。 结论 本方法简便、准确,可用于油松节的质量控制。     

两种提取青翘挥发油工艺的比较研究

目的: 以青翘收油率和β-蒎烯含量的综合评分为考察指标,比较超临界CO2萃取(SFE-CO2)与水蒸气蒸馏(SD)两种工艺. 方法: SFE-CO2, SD分别以正交设计提取青翘挥发油,采用气相色谱法(GC)测定挥发油中β-蒎烯的含量. 结果: SFE-CO2法正交设计的平均收油率为3.40%(0.94%～7.85%),β-蒎烯平均含量6.72%(1.49%～20.59%);SD法正交设计的平均收油率为2.14%(1.01%～3.58%),β-蒎烯平均含量为47.37%(30.99%～65.75%). 结论: ① SFE-CO2收油率相对较高,且具有绿色环保概念;②青翘SD的挥发油中β-蒎烯含量高,其制备方法投资少且适宜实验研究.     

培美曲塞联合β-榄香烯对宫颈癌 HeLa 细胞增殖和凋亡的影响

目的：培美曲塞和β-榄香烯均可抑制肿瘤细胞的生长。文中探讨培美曲塞联合β-榄香烯对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响。方法体外培养宫颈癌HeLa细胞,将培美曲塞（浓度为38、76、152、228、304μg／mL）单独作用于HeLa细胞后24、48 h用MTT比色法检测细胞的增殖情况,实验分β-榄香烯组（125μg／mL ）、培美曲塞组（76μg／mL ）、联合用药组（培美曲塞76μg／mL,β-榄香烯125μg／mL）及空白对照组（0μg／mL）,24 h后用MTT法检测细胞的增殖情况,用流式细胞术检测24 h细胞的凋亡率。结果 MTT法显示,培美曲塞浓度在38、76、152、228、304μg／mL梯度范围内对HeLa细胞有抑制作用,随浓度增加,抑制率增强。38、76、152、228、304μg／mL的培美曲塞作用24后,增殖抑制率分别为（7．24±3．78）％、（7．94±4．37）％、（11．10±2．86）％、（15．88±3．38）％、（16．52±2．54）％;其中38、76、152、228μg／mL培美曲塞抑制率两两比较的差异有统计学意义（P＜0．05）。联合用药组24 h抑制率[（49．95±5．76）％]高于β-榄香烯组[（24．36±5．59）％]和培美曲塞组[（10．69±1．37）％],差异有统计学意义（P＜0．01）。结论培美曲塞与β-榄香烯联合应用可抑制HeLa细胞的增殖,协同促进HeLa细胞的凋亡。     

红冠姜种子挥发油的化学成分及其对大鼠十二指肠的解痉活性

将红冠姜Zingiber roseum Rose．新鲜种子进行了8h的水蒸气蒸馏，用乙醚萃取蒸馏液，用无水Na2SO4干燥萃取液，除去乙醚得挥发油，收率为1%（v／w）。GC-MS分析结果表明，该挥发油含60多种成分，已鉴定47种，占挥发油的96．2％；碳氢化合物为主要组分，占82．2％；18种倍半萜碳氢化合物仅占6．3%，75．9％是单萜碳氢化合物。主要的萜类成分是α-蒎烯13．9%、β-蒎烯53．5％、     

α—蒎烯阳离子聚合的二聚体研究

研究了α－蒎烯阳离子聚合反应中二聚体的形成及其结构。结果表明，活性中心为Ｈ＾＋的ＡｌＣｌ３，ＣＦ３ＳＯ３Ｈ催化体系引发α－蒎烯聚合，产物中二聚体含量较高（２７￣６３％）；而在引发活性中心为金属正离子的ＡｌＣｌ３／ＳｂＣｌ３复合体系的产物中，二聚体含量很低（￣５％）。用制备ＧＰＣ对二聚不同进行分离，进而用＾１３Ｃ－ＮＭＲ、＾１Ｈ－ＮＭＲ进行结构分析，提出了５种主要二聚体的分子结构。不同催化体系导致相     

调料九里香叶的挥发油化学成分研究

运用ＦｉｎｎｉｇａｎＭＡＴ１７Ｄ８００石英毛细管气相色谱－质谱－计算机联用技术，结合标准图谱，对云南元江县城所产调料九里香叶的挥发油成分进行了研究，共分离鉴定出１６个化合物。主要成分是：α－蒎烯（３６．４９９％）、３－蒈烯（１７．０１５％）、十氢－１，１，７－三甲基－４－甲烯基－１Ｈ－环丙［ｅ］（１３．４１２％）、十氢－４α－甲基－１－甲烯基－７－（１－甲乙烯基）萘（７．５９７％）和β－松油烯（４．１２０％）等     

马兜铃酸对体外培养大鼠近端肾小管上皮细胞的损伤作用

目的:观察马兜铃酸(aristolochic acid,AA)对体外培养的大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK-52E)的损伤作用。方法:体外培养NRK-52E,分别以不同浓度的AA-Na刺激细胞,每组设6个复孔,孵育24 h。透射电镜观察NRK-52E细胞的超微结构,MTT法检测不同浓度AA对NRK-52E细胞增殖的影响,流式细胞仪检测NRK-52E细胞的凋亡,免疫细胞化学法检测AA对NRK-52E细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响;检测不同时间段(12、24、48 h)马兜铃酸对NRK-52E细胞转化生长因子-β1(TGF-β1)及内皮素-1(ET-1)mRNA和Ⅰ型胶原(ColⅠ)表达的影响。结果:①AA浓度低于10μg/ml时对NRK-52E的增殖无明显影响,20~40μg/ml浓度的AA可明显抑制NRK-52E细胞的增殖;②较高浓度的AA(40μg/ml)可明显刺激细胞凋亡;③AA5、10、20、40μg/ml均可刺激NRK-52E表达α-SMA,其中AA10μg/ml对α-SMA表达较强;④AA刺激NRK-52E细胞24 h后TGF-β1mRNA、ET-1 mRNA表达最多,48 h时表达水平下降,而COL-I的表达水平随时间的延长而上调,呈时间依赖性。结论:AA可直接损伤肾小管上皮细胞,促进其表达肌成纤维细胞标志蛋白α-SMA,即有促转分化作用,且其对NRK-52E细胞的损伤作用呈剂量及时间依赖性。     

奈达铂联合β-榄香烯对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨奈达铂（nedaplatin,NDP）联合β-榄香烯（β-elemene）对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响. 方法 体外培养宫颈癌HeLa细胞,分别将奈达铂（浓度为7.5,15,30,45,60 μg/ml）,β-榄香烯（浓度为25,50,100,150,200 μg/ml）,单独作用于HeLa细胞后24h、48h用MTT比色法检测细胞的增殖情况,并选取合适的药物浓度（奈达铂15μg/ml,β-榄香烯150 μg/ml）,进行联合用药,加药24 h、48 h后用MTT法检测细胞的增殖情况,用流式细胞术检测24 h细胞的凋亡率.结果 ①MTT法显示不同浓度β-榄香烯作用HeLa细胞24 h、48 h后,其增殖抑制率均明显高于正常对照组（P＜0.05）.奈达铂组除24h时7.5 μg/ml和15 μg/ml无显著差异外,其余各组增殖抑制率均明显高于相应正常对照组（P＜0.05）.②联合用药（奈达铂15 μg/ml,β-榄香烯150 μg/ml）时,对HeLa细胞的抑制作用显著高于单独用药（P＜0.01）. 结论 奈达铂、β-榄香烯单独或二者联合作用均能抑制HeLa细胞的增殖,且联合应用的作用显著高于单独用药,可协同促进HeLa细胞的凋亡.     

国内外云计算研究的现状与发展——基于INSPEC数据库的分析

运用文献计量方法,通过科学文摘数据库检索1969年至今所有云计算的文献,并从文献量、著者、期刊和关键词等方面对云计算领域研究论文进行分析,从而探讨世界范围内的云计算研究的现状与发展趋势。     

TUNEL检测心肌细胞凋亡的影响因素探讨

目的：探讨避免TUNEL法检测心肌细胞凋亡出现的假阳性和消除非特异性反应的方法以及选择合适的蛋白酶K浓度。方法：4%多聚甲醛固定心肌组织,制作石蜡切片。①将试剂盒说明常规步骤加以改良,将0.3%H2O2放在反应液标记DNA片段之后,先后用小牛血清或羊血清两次封闭非特异性反应;②按蛋白酶K不同剂量分为10、20μg/mL蛋白酶K和不加蛋白酶K组（均n=5）,再按照改良的TUNEL法检测心肌细胞凋亡。结果：①改良TUNEL法,避免了假阳性,背景清晰;②未加蛋白酶K组较10或20μg/mL蛋白酶K组心肌细胞凋亡率显著减少（均P〈0.05）,两组蛋白酶K组心肌细胞凋亡率差异未见有统计学意义（P〉0.05）。结论：①改良后的TUNEL方法适用于心肌细胞凋亡的检测;②TUNEL法检测心肌细胞凋亡选择10、20μg/mL蛋白酶K是适当的。     

COX-2和整合素α_5β_1在乳腺癌中的表达及临床意义

目的研究COX-2和整合素α5β1在乳腺癌中的表达及临床意义,以及两者之间的相关性。方法采用免疫组织化学S-P法,检测68例乳腺癌和癌旁正常乳腺组织的COX-2和整合素α5β1的表达情况。结果①乳腺癌中COX-2的阳性表达率与淋巴结转移阳性、组织分化低密切相关;②乳腺癌中整合素α5β1的阳性表达率与淋巴结转移阳性、组织分化低密切相关;③乳腺癌中COX-2的表达水平与整合素α5β1的表达水平呈正相关。结论COX-2和整合素α5β1的表达可作为早期识别具有高浸润和转移潜能的乳腺癌并判断其预后的有用指标。     

汉防己甲素对兔视网膜色素上皮细胞Bax、Bcl-2表达的影响

目的：评价汉防己甲素（Tet）对兔视网膜色素上皮（RPE）细胞增殖的抑制作用及对凋亡蛋白Bax、Bcl-2表达的影响。方法：MTT法检测Tet对体外培养兔RPE细胞增生的影响,流式细胞仪检测Tet对兔RPE细胞增殖周期、凋亡率及Bax、Bcl-2蛋白表达的影响。结果：Tet对兔RPE细胞的抑制率均随作用时间的延长而增高,各时间点之间差异均有统计学意义（P〈0.05）;抑制率均随药物质量浓度的增高而增高,除Tet10μg/ml、15μg/ml外,各质量浓度之间差异有统计学意义（P〈0.05）;Tet10μg/ml作用72 h后,出现G0/G1期细胞明显增多,S期与G2/M期细胞降低,Bax蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达下降,Bcl-2/Bax比值下降,以上与对照组相比均有显著性差异（P〈0.05）。结论：Tet可能通过干预RPE细胞Bax与Bcl-2蛋白的表达而对其增殖产生抑制作用。     

外源性Ⅰ型胶原对人胚骨膜成骨细胞生物学特性的影响

目的　研究 型胶原对人胚骨膜来源成骨细胞生物学特性的影响 ,为 型胶原在组织工程人工骨中的应用提供依据。方法　在不同浓度 型胶原涂层上培养成骨细胞 ,用细胞计数法研究成骨细胞粘附情况 ,3 H- Td R掺入实验观察成骨细胞增殖能力 ,通过检测成骨细胞胶原、骨钙素和碱性磷酸酶的合成情况 ,以不涂层 型胶原为对照组 ,比较骨膜来源成骨细胞成骨能力的改变。结果　 型胶原对成骨细胞发挥以下作用 :1增加粘附细胞数量 ,且在 2 5 μg/ m l浓度达最大效应 ;2减弱成骨细胞增殖能力 ,且以 12 .5 μg/ ml以上浓度作用显著 ( P<0 .0 5 ) ;3轻度减弱成骨细胞 型胶原合成能力 ,以 2 5 μg/ ml以上浓度作用显著 ( P<0 .0 5 ) ;4增加骨钙素合成 ,以6 .2 5 μg/ m l以上浓度作用显著 ( P<0 .0 5 ) ,2 5 μg/ m l浓度达最大效应 ;5增加成骨细胞碱性磷酸酶活性 ,以 12 .5 μg/ml以上浓度作用显著 ( P<0 .0 5 )。结论　 型胶原能促进成骨细胞的粘附与分化 ;支架材料上复合 型胶原涂层可增强成骨细胞的成骨能力 ; 型胶原最佳复合浓度为 2 5 μg/ ml     

连翘对LPS作用的巨噬细胞TLR4蛋白表达的影响

目的观察连翘对LPS诱导巨噬细胞（RAW264．7）16h后TLR4蛋白表达的影响,探讨连翘对抗内毒素作用及其可能机制。方法体外实验共分6组,分别为control组,LPS组,连翘高、中、低剂量组及多黏菌素B组;连翘高、中、低剂量组及多黏菌素B组分别加入连翘水煎液50mg／ml、25mg／ml、12．5mg／ml及多黏菌素B10ug／ml培养0．5h后,再加入10ng／ml LPS,培养16h;Western blot法测各组细胞TLR4蛋白表达变化。结果control组RAW264．7细胞只表达少量TLR4,给予LPS刺激16h,TLR4表达明显升高（P〈0．01）,连翘高、中、低剂量组预处理均可明显降低TLR4的表达（P〈0．01）,并呈剂量依赖关系;连翘高剂量组与多黏菌素B组比较无显著性差异（P〉0．05）。结论连翘预处理能抑制LPS诱导的巨噬细胞TLR4的表达可能是其抗内毒素作用的重要机制。     

α-硫辛酸对糖尿病肾病大鼠肾纤维化的影响研究

目的通过α-硫辛酸对糖尿病肾病模型大鼠肾组织转化生长因子（TGF-β1）、结缔组织生长因子（CTGF）表达的影响,研究其延缓肾脏纤维化的作用及机制,为临床防治糖尿病肾病提供实验依据。方法将健康SD大鼠50只,体重250～300 g,随机分为6组：①正常对照组;②糖尿病对照组;③α-硫辛酸15、30、60mg/（kg.d）。50只采用STZ 45 mg/kg造成糖尿病模型,10只用等量柠檬酸缓冲液腹腔注射,造成模型组,用α-硫辛酸给糖尿病模型组给予剂量。检测各组的大鼠血糖,血清肌酐,肾重指数,制备肾脏石蜡切片,测定肾小球体积（MGA）和计算肾小球平均体积（MGV）。比较MGA和MGV;用SureStep Plus型血糖仪于实验结束前检测空腹血糖;用Western-Blot法检测肾组织TGF-β1、CTGF的表达。结果 DM组大鼠血糖明显升高,血清肌酐无明显变化;与DM组相比,治疗组大鼠血糖,血清肌酐均无统计学意义;DM组大鼠肾重指数明显增加,光镜先显示：DM组的大鼠肾小球体积明显增大,肾小球HE染色区扩大,系膜区增宽,毛细血管管腔受压,肾小球基底膜增厚,α-硫辛酸治疗后上述异常均有不同程度的改善,但未恢复到正常状态图像显示;DM组肾小球平均面积（MGA）和肾小球平均体积（MGV）明显扩大,与其相比,治疗组有不同程度的缩小。结论α-硫辛酸通过抑制肾组织TGF-β1、CTGF的表达而发挥其抗纤维化的作用,从而延缓STZ糖尿病大鼠肾脏纤维化的发展。     

Oct-4在精原干细胞定向诱导分化中的表达

目的：检测Oct-4在小鼠精原干细胞（mouse spermatogonial stem cells,mSSCs）体外诱导分化中的表达。方法：①体外培养mSSCs;②用干细胞因子（SCF,stem cell factor）对mSSCs进行精母细胞方向诱导分化;③通过形态学观察和c-kit,GCNF间接免疫荧光染色鉴定mSSCs是否发生分化;④通过间接免疫荧光染色和RT-PCR分别从蛋白水平和mRNA水平检测Oct-4在mSSCs诱导分化前后的表达情况。结果：①形态学观察mSSCs细胞核较大,细胞质少,SCF诱导培养后,随着培养时间的延长,细胞克隆逐渐增长缓慢,并出现衰退、凋亡的细胞;②c-kit,GCNF间接免疫荧光染色结果显示,mSSCs经SCF诱导后发生分化;③Oct-4间接免疫荧光染色和RT-PCR结果显示,Oct-4在mSSCs诱导前表达水平最高,诱导2天后下降,5天后几乎不表达。结论：Oct-4是mSSCs未发生分化的标志。