单侧输尿管部分梗阻后输尿管平滑肌细胞中M3受体改变的实验研究

目的测定大鼠单侧输尿管部分梗阻（PUUO）后输尿管平滑肌细胞中M3受体mRNA的转录水平和蛋白表达水平改变的规律,以探讨PUUO后输尿管平滑肌细胞中M3受体的作用。方法 Wistar雄性大鼠80只,随机分为4组：8周PUUO组、16周PUUO组、8周对照组及16周对照组,每组各20只。两PUUO组（n=40）采用把大鼠输尿管左侧上1/2段埋入腰大肌做成PUUO的大鼠模型,两对照组（n=40）只游离左侧输尿管。模型制作成功后于8周和16周时取出输尿管,分别用RT-PCR检测输尿管平滑肌M3受体mRNA的含量,Western-blotting检测输尿管平滑肌M3受体蛋白的含量。结果 RT-PCR结果示：M3受体mRNA的表达8周PUUO组高于8周对照组（55.16±3.94）vs（36.48±3.87）,16周PUUO组低于16周对照组（19.37±3.70）vs（37.39±3.65）,8周PUUO组高于16周PUUO组,差异均有统计学意义（均P〈0.05）。Western-blotting结果示：M3受体蛋白的表达8周PUUO组高于8周对照组（27.13±1.77）vs（21.36±2.69）,16周PUUO组低于16周对照组（19.41±1.37）vs（23.43±1.58）,差异均有统计学意义（均P〈0.05）,8周对照组与16周对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论梗阻8周时大鼠输尿管平滑肌中M3受体的生物合成上调,梗阻至16周时输尿管平滑肌中M3受体生物合成下调,为后续与临床相结合的研究做了更进一步的铺垫。     

单侧输尿管部分梗阻对大鼠肾盂平滑肌功能的影响

目的测定大鼠单侧输尿管部分梗阻后肾盂平滑肌功能的改变。方法 80只雄性Wistar大鼠,其中40只作为对照组,另外40只大鼠建立单侧输尿管部分梗阻的动物模型作为实验组。模型建立成功后,分别于8周和16周分离取出肾盂进行离体肌条实验,测定肌条的收缩频率和收缩力。结果与对照组比较,实验组在8周时肾盂平滑肌收缩频率和收缩力均高于同期对照组（P〈0.05）,16周时均低于同期对照组（P〈0.05）。对照组8周和16周比较差异无统计学意义（P〉0.05）。实验组8周高于16周（P〈0.05）。结论单侧输尿管部分梗阻早期可能由于代偿作用,肾盂平滑肌自主收缩频率和收缩力均增加,但在晚期可能失去了代偿作用,肾盂平滑肌自主收缩频率和收缩力均降低。     

单侧输尿管梗阻再通模型的研究进展

间质纤维化是肾脏疾病进展的主要因素之一。一些动物模型可作为研究肾纤维化的对象。单侧输尿管梗阻(UUO)的出现成为一个研究肾纤维化机制的重要模型,对肾纤维化进展的分子和细胞水平机制提供有价值的观点。然而,无论是对肾脏功能的测定,还是对干细胞在肾脏的影响和药物的治疗评价均存在不足。UUO再通(RUUO)模型是建立在UUO模型的基础之上,弥补了上述的不足。     

大鼠输尿管梗阻后肾间质病变及：α—平滑肌肌动蛋白的表达

目的：探讨肌纤维母细胞（ＭＦＢ）在肾间质纤维化形成中的作用。方法：制作大鼠单侧尿路梗阻模型，观察α－平滑肌肌动蛋白（α－ＳＭＡ）阳性细胞在肾间质病变中形成和发展的过程。结果：在单侧输尿管梗阻后４８ｈ肾间质区域即出现α－ＳＭＡ表达，ｄ３后阳性细胞数明显增加，ｄ７达高峰。结论：α－ＳＭＡ在肾间质纤维化时表达明显增加，应用α－ＳＭＡ染色能较好的标记ＭＦＢ，通过在原位肾间质观察α－ＳＭＡ的表达情况，是临床     

输尿管部分梗阻家兔上尿路尿动力学研究

目的：探讨家兔经输尿管灌注测压方法的可行性,并对输尿管部分梗阻后输尿管的功能进行评价。方法：32只家兔随机分为对照组和实验组,对照组8只,为假手术组;实验组按术后时间分为3组,每组8只,建立输尿管部分梗阻模型。在梗阻不同时间点,用经输尿管灌注测压的方法对输尿管功能进行研究,并观察输尿管及肾脏的形态变化。结果：在5ml／min灌注时,梗阻组输尿管静息压力均高于对照组（P〈0．05）。梗阻2周时,不灌注、不同流速灌注时的静息压力均高于对照组（P〈0．05）。梗阻4周时,在不灌注、5ml／min灌注时静息压力高于对照组（P〈0．05）,而在1ml／min灌注时的静息压力与对照组比较,无显著性差异（P〉．05）。梗阻4周时,肾脏明显出现肾间质纤维化等病理变化。结论：该实验方法能评价输尿管功能的变化。在梗阻4周时,输尿管功能出现不协调,这可能是4周时肾脏病变进展的原因。     

不同年龄自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞Ca^2＋转运功…

应用不同年龄自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）血管平滑肌原代与传代细胞（ＶＳＭＣ），观察Ｃａ＾２＋转运功能障碍及某些相关因素的变化，结果表明：（１）在血压未升高的ＶＳＭＣＣａ＾２＋内流已较同龄对照组ＷＫＹ大鼠明显增加，而Ｃａ＾２＋外流量较ＷＫＹ大鼠显著降低。表明ＳＨＲＶＳＭＣ膜Ｃａ＾２＋转运功能障碍在血压升高前就已发生，并随年龄及血压增高有加重趋势；（２）ＶＳＭＣｃＡＭＰ及钙调素含量变化与细胞膜Ｃａ＾２＋     

输尿管部分梗阻与肾小管间质纤维化

目的：研究单侧输尿管部分梗阻（PUUO）后肾间质纤维化的发生机制及梗阻解除后肾间质纤维化的恢复情况。方法：144只雄性SD大鼠，24只作为对照组，另外120只大鼠建立单侧PUUO动物模型，其中梗阻组24只，在术后1、2、4和8周各随机选取6只，行肾组织病理学检查，免疫组化测定肾间质内Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白（Col Ⅰ、ColⅢ）；梗阻解除组96只，于梗阻后1、2、4和8周各为24只大鼠解除梗阻，分别于解除后1、2、4和8周各随机选取6只，行病理学观察及免疫组化分析。结果：输尿管部分梗阻后1周，肾间质ColⅠ、ColⅢ表达明显增加（与对照组比较，P〈0．01），并随时间延长而逐渐加重（与前一时间段比较，P〈0．01）。1、2和4周时解除梗阻，ColⅠ、colⅢ逐渐恢复，与梗阻解除前比较差异有显著性意义（P〈0.01），8周时解除梗阻，胶原蛋白无显著变化。结论：PUUO后肾间质纤维化进行性发展，早期解除梗阻，肾间质纤维化可有不同程度的恢复；若梗阻超过8周，则成为不可逆性改变。     

α-平滑肌肌动蛋白在单侧输尿管梗阻大鼠肾组织中的表达

目的观察α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）在单侧输尿管梗阻大鼠中的表达情况,探讨其与肾间质纤维化的关系。方法采用单侧输尿管结扎术制备肾间质纤维化模型,将60只SD大鼠随机分为假手术组,模型组,每组分别于术后7、14、21d各处死10只大鼠,取梗阻侧肾组织行HE、Masson染色观察肾间质纤维化程度,行免疫组化方法检测两组大鼠不同时间段α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达水平。结果假手术组中,肾小球、肾小管和间质细胞均无α-SMA,与假手术相比,模型组手术后7d,肾间质中α-SMA阳性细胞数增多,呈进行性升高趋势,其与肾间质纤维化程度呈正相关。结论α-平滑肌肌动蛋白在肾间质纤维化的进展过程中发挥重要作用。     

细胞内Ca^2＋浓度的调节

目前，Ca^2 作为细胞信号转导的第二信使已被公认。细胞内Ca^2 在信号转导中的作用日益受到重视，Ca^2 除在兴奋收缩耦联中起重要作用外，还参与物质代谢、突触传递、细胞周期调控与细胞问通讯、基因表达等活动，钙信号失常会导致一系列病理生理过程。     

自发性高血压大鼠主动脉平滑肌细胞内胞浆游离钙浓度及氯沙坦治疗后的变化

目的　观察自发性高血压大鼠 (SHR)和正常血压对照鼠 (WKY)主动脉平滑肌细胞 (SMC)内胞浆游离钙浓度 ([Ca2 + ] i)与氯沙坦治疗后的变化 ,探讨 [Ca2 + ] i 在氯沙坦降压中的作用。方法　治疗前组 :SHR ,10只 ;氯沙坦治疗组 :SHR ,7只 ;正常对照组 :WKY ,7只。其中氯沙坦治疗组饲氯沙坦 2 0mg/(kg·d) ,连续 6个月。上述 3组大鼠均检测鼠尾动脉收缩压 ,进行SMC培养 ,检测SMC培养细胞内 [Ca2 + ] i。结果　治疗前组SHR鼠尾动脉收缩压及SMC内[Ca2 + ] i显著高于WKY(P <0 0 0 1) ,经氯沙坦 6个月治疗后 ,SHR鼠尾动脉收缩压及SMC内 [Ca2 + ] i 显著下降 (P <0 0 1)。鼠尾动脉收缩压的下降幅度和SMC内 [Ca2 + ] i 的下降幅度呈正相关 (r =0 65 3 ,P <0 0 5 )。结论　SHR的SMC内存在钙代谢紊乱 ,氯沙坦通过纠正细胞内钙代谢异常而达到降压的目的。     

普罗托品对大鼠血管平滑肌收缩反应及细胞内游离钙浓度的影响

目的探讨普罗托品(protopine, Pro)对大鼠血管平滑肌细胞内游离钙浓度的影响.方法采用无Ca2 -复Ca2 的实验法,间接观察Pro对大鼠血管平滑肌细胞内游离钙浓度([Ca2 ]i)的可能影响,再利用钙荧光指示剂Fura-2/AM负载的培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞,直接观察在Pro存在下,对去甲肾上腺素(NA)和高钾所致的 [Ca2 ]i的升高的影响.结果在无钙Krebs液中,Pro 10、30、100 μmol/L对NA所致血管条的短暂收缩均有明显的浓度依赖性抑制作用,对复Ca2 后NA所诱发的持续收缩也呈剂量依赖性抑制作用.在Fura-2/AM负载血管平滑肌细胞的实验表明,Pro (50 μmol/L, 100 μmol/L) 对静息时的 [Ca2 ]i无明显影响;在有外钙存在条件下,Pro 50 μmol/L能明显降低NA所致[Ca2 ]i的升高,对KCl引起的 [Ca2 ]i 升高有降低趋势;当Pro的浓度增加到100 μmol/L时,对NA和KCl引起的 [Ca2 ]i升高均有明显的抑制作用.结论 Pro可能通过抑制Ca2 释放和(或)Ca2 内流来降低NA和高钾所致血管平滑肌[Ca2 ]i的升高,从而抑制血管平滑肌的收缩反应.     

钙超载大肠系膜血管平滑肌细胞钙离子稳态调节的改变

目的 探讨钙超载模型大鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）胞内是否存在钙离子（Ｃａ＾２＋）稳态调节异常。方法 以Ｆｌｕｏ－３／ＡＭ作为Ｃａ＾２＋批示剂,应用激光扫描共聚焦显微镜技术,比较钙超载模型大鼠肠系膜ＶＳＭＣ（ＣａＯＭＶ）与正常Ｗｉｓｔａｒ大鼠肠系膜ＶＳＭＣ（ＷＭＶ）静息态的胞浆与核内游离Ｃａ＾２＋水平（〖Ｃａ＾２＋〗ｉ,〖Ｃａ＾２＋〗ｎ）,以及在多各药物刺激下Ｃａ＾２＋稳态调节的差异。结果 两种Ｖ     

Effects of lptakalim on intracellular free calcium concentration of cultured rabbit pulmonary arterial smooth muscle cells

Objective：To explore the effects of Iptakalim on intracellular free calcium concentration and on the proliferation of cultured rabbit pulmonary arterial smooth muscle cells induced by endothelin-1 （ET-1） in vitro. Methods：A cell culture model, [^3H]-thymidine（[^3H]-TdR） incorporation test and confocal microscope were used to observe proliferation and intracellular free calcium concentration（[Ca^2±]） of rabbit PASMC induced by ET-1 in vitro. Results：The value of [^3H]-TdR incorporation in ET-1 group was increased 1.468 times higher than that in control group. Iptakalim at the concentration of 10^-7mol/L, 10^-6mol/L ,10^-5 mol/L lowered [^3H]-TdR incorporation by （19.8 ± 4.6）%, （41.2 ± 9.5）%, （54.7 ± 10.1）%, respectively, compared with the value of the cells treated with ET-1（P〈 0.01）; The intracellular fluorescence intensity of PASMC in ET-1 group was increased from 73.70 ± 10.12 to 143.84 ± 28.23, significantly higher than that in control group（P 〈 0.01）; whereas with Iptakalim,the fluorescence intensity（FI） was only increased from 74.30 ± 10.20 to 86.03 ± 9.82, significantly lower than that in ET-1 group（P 〈 0.01）. Conclusion：Iptakalim inhibited proliferation of PASMC and decreased intracellular free calcium concentration of cultured rabbit PASMC induced by ET-1.     

硫化氢联合阿托伐他汀钙对血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的 观察硫化氢联合阿托伐他汀钙对血管平滑肌细胞凋亡的影响.方法 培养兔血管平滑肌细胞（VSMCs）3～8代,分为对照组、硫化氢组、阿托伐他汀钙组以及硫化氢联合阿托伐他汀钙组（简称联合干预组）,共4组,分别给予相应干预,TUNEL法检测VSMCs的凋亡情况.结果 VSMCs凋亡率：与对照组相比,硫化氢组、阿托伐他汀钙组以及联合干预组VSMCs的凋亡率均增加（P＜0.01）;与硫化氢组相比,联合干预组VSMCs凋亡率增加（P＜0.01）,阿托伐他汀钙组VSMCs凋亡率减少（P＜0.01）.结论 硫化氢、阿托伐他汀钙以及两者联合均可促进VSMCs的凋亡,其中以两者联合效果最为明显,硫化氢的作用强于阿托伐他汀钙.     

痛泻要方抑制大鼠离体结肠平滑肌收缩的钙动员机制

目的：从影响钙动员角度,探讨痛泻要方抑制大鼠结肠平滑肌收缩的作用机制。 方法：应用离体平滑肌张力测定方法,观察痛泻要方对乙酰胆碱（acetylcholine, ACh）、氯化钾（KCl）和细胞内钙库耗竭后细胞外Ca^2＋内流引起的大鼠结肠平滑肌收缩的影响。 结果：痛泻要方能够抑制KCl和细胞内钙库耗竭后细胞外Ca^2＋内流引起的大鼠结肠平滑肌收缩,并呈浓度依赖性。3 000 μg/mL 痛泻要方还能抑制ACh引起的第二收缩时相张力,与不加药的对照组（Krebs液）比较,差异有统计学意义（P〈0.01）;痛泻要方对ACh引起的第一收缩时相张力无明显影响。 结论：痛泻要方主要通过抑制胞外Ca^2＋内流来抑制大鼠结肠平滑肌的收缩,可能涉及到阻断电压门控钙通道、钙库调控性钙通道和受体操纵性钙通道,但不影响ACh引起的胞内Ca^2＋释放。     

慢性非细菌性前列腺炎SD大鼠前列腺平滑肌细胞内Ca2+浓度变化及意义

目的 建立自身免疫性慢性非细菌性前列腺炎大鼠模型,研究其前列腺平滑肌细胞内游离Ca2+浓度的变化及意义.方法 将SD大鼠分为正常对照组和炎症组,采用正常SD大鼠前列腺蛋白提纯液及弗氏完全佐剂(FCA)诱导大鼠自身免疫性炎症,两组分别进行体外培养前列腺平滑肌细胞(PSMCs)并纯化,用Fluo 3-AM Ca2+探针结合...     

Batroxobin reduces intracellular calcium concentration and inhibits proliferation of vascular smooth muscle cells

Background Batroxobin (BX), a serine protease used in defibrinogenation and thrombolysis, also has an effect on c-fos gene and growth factor. This study attempted to determine the effects of BX on the proliferation of vascular smooth muscle cells (VSMCs) and calcium metabolism. Methods VSMCs were treated with BX at concentrations of 0.1, 0.3, or 1.0 mmol/L and cell numbers were determined at 0, 24, 48, and 72 hours. Intracellular calcium concentration (［Ca2+］i) was measured using direct fluorescence methods. Results BX was found to suppress proliferation of VSMCs in a dose-dependent fashion with inhibition rates of 18% and 31% by 48 and 72 hours, respectively. In addition, BX decreases basal ［Ca2+］i significantly. The basal level in untreated cells was 162.7±33.8 nmol/L, and decreased to 131.5±27.7 nmol/L, 128.3±28.5 nmol/L, and 125.6±34.3 nmol/L with the three concentrations of BX, respectively. Noradrenaline (NE)-induced ［Ca2+］i stimulation was also attenuated by BX (0.1 mmol/L BX, 20%±8% inhibition; 0.3 mmol/L BX, 54%±11% inhibition; 1.0 mmol/L BX, 62%±15% inhibition). The ability of NE to stimulate ［Ca2+］i was attenuated in cultures in Ca2+-free medium, as was the ability of BX to blunt NE-induced stimulation.Conclusion These findings demonstrate that BX can effectively inhibit proliferation of VSMCs, probably by blocking the release and uptake of Ca2+, thus influencing ［Ca2+］i.