选择性COX-2抑制剂尼美舒利诱导胆管癌细胞凋亡的研究

[目的]探讨选择性环氧合酶-2（cyclooxygenase-2，COX-2）抑制剂尼美舒利诱导人胆管癌QBC939细胞凋亡的机制。[方法]通过体外细胞培养，用流式细胞术观察尼美舒利作用后QBC939细胞周期及凋亡率变化；荧光显微镜、透射电镜观察细胞的凋亡形态变化；并用免疫组化法检测细胞bcl-2、bax蛋白的表达。[结果]通过荧光显微镜和电镜技术观察到凋亡的QBC939细胞，流式细胞仪也检测到尼美舒利诱导QBC939细胞凋亡，并随着尼美舒利浓度的增加，细胞凋亡率显著增加，蛋白水平检测表明尼美舒利促进QBC939细胞bax表达升高，bcl-2表达下调。[结论]尼美舒利可能通过调节bcl-2和bax蛋白表达诱导QBC939细胞凋亡。     

细胞周期蛋白激酶抑制剂诱导尤文肉瘤细胞凋亡作用的机制

目的探讨小分子细胞周期蛋白激酶抑制剂flavopiridol（FP）尤文肉瘤细胞株RD-ES凋亡诱导作用及其调控机制。方法FP作用RD-ES细胞后，光学显微镜观察其形态变化，MTT法测定FP对细胞增殖的抑制率；流式细胞仪检测细胞凋亡；Western blot检测bcl-2，bax，mcl-l和caspase-8的蛋白表达变化。结果MTT实验显示FP对尤文肉瘤RD-ES细胞增殖有抑制作用，其抑制效应具有时间及浓度依赖的特点，流式细胞计数分析表明FP可诱导细胞凋亡，免疫印迹检测显示FP对bcl-2及bax的表达无影响，但细胞凋亡抑制基因mcl-1活性型caspase-8的表达被上调。结论FP可诱导尤文肉瘤细胞株凋亡，其作用不依赖于bcl-2基因的变化，mcl-1基因表达的抑制及caspase-8路径的激活可能为其机制之一。     

家蝇幼虫血淋巴蛋白MAC-1诱导人宫颈癌细胞凋亡的实验

目的探讨家蝇幼虫血淋巴蛋白(anticancer protein from Musca domestica larva hemolymph,MAC-1)诱导人宫颈癌细胞系（Cervical cancer cell lines,HeLa）的凋亡过程中fas、caspase 8、bcl-2凋亡调节基因的相互关系及可能的作用机制。方法苏木素-伊红（HE）染色法、流式细胞术（FCM）观察MAC-1蛋白作用细胞凋亡及增殖变化,应用免疫细胞化学技术检测MAC-1蛋白作用前后凋亡相关基因fas、caspase 8和bcl-2表达的变化。结果MAC-1蛋白诱导后HeLa 细胞形态发生改变;流式细胞仪分析结果发现细胞凋亡率随蛋白作用时间的延长和蛋白浓度的增加而降低的趋势。免疫细胞化学法提示MAC-1蛋白作用HeLa细胞后fas 和caspase 8的染色增强（P<0.05）,bcl-2的染色减弱（P<005）。结论家蝇幼虫血淋巴蛋白MAC-1能够抑制HeLa 细胞增殖并诱导凋亡,此作用随着蛋白的浓度增加和作用时间延长反而降低,其机制可能与fas、caspase 8和bcl-2表达有关。     

孕激素对人宫颈癌细胞株Hela细胞体外增殖、凋亡的影响

[目的]探讨孕激素对人宫颈癌细胞株Hela细胞体外增殖及凋亡的影响.[方法]体外培养Hela细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察不同浓度孕酮对细胞增殖的作用,流式细胞仪及流式细胞仪间接免疫荧光技术检测其细胞周期、细胞凋亡率及细胞内bcl-2蛋白的表达,光、电镜观察其形态学和超微结构变化.[结果]当孕酮浓度为0.10μmol/L～10.00umol/L时,对细胞生长有明显的抑制作用(P＜0.01),并具有剂量依赖性.流式细胞仪分析,实验组G0/G1期上升,S期下降,凋亡率上升,细胞内bcl-2蛋白表达率明显降低(P＜0.01),并呈现剂量依赖性.倒置显微镜、光学显微镜和透射电子显微镜可观察到细胞增殖情况及凋亡的形态学改变.[结论]孕酮抑制宫颈癌Hela细胞增殖,并诱导其凋亡,同时可使抗凋亡基因bcl-2蛋白的表达下降.     

宫颈癌放疗前后肿瘤细胞凋亡及其相关基因的变化

目的:探讨宫颈癌组织放疗前后肿瘤细胞凋亡及凋亡调节基因p53、bcl-2和bax蛋白表达的变化及意义.方法:选择未经治疗的宫颈癌患者20例为试验对象,采集放疗前和放疗10Gy后宫颈癌组织标本,用原位DNA切口末端标记(TUNEL)法检测凋亡细胞;单克隆抗体免疫组化SABC法检测细胞凋亡相关基因p53、bcl-2和bax的蛋白表达水平.结果:1)在宫颈癌放疗前后,肿瘤细胞凋亡阳性率和平均凋亡指数分别为25.00%和0.11%、75.00%和3.40%,放疗前后有显著性差异(P＜0.01);2)放疗前肿瘤细胞凋亡相关基因p53、bax和bcl-2蛋白表达阳性率分别为55%、10%和20%,而放疗后分别为25%、60%和25%,放疗后p53蛋白表达减少,bax蛋白明显增加,bcl-2蛋白无明显变化.结论:放射治疗诱导宫颈癌肿瘤细胞凋亡,可能与凋亡调节基因bax基因表达的诱导密切相关.     

重组人白细胞介素24抑制淋巴瘤raji细胞生长及其分子机制

目的:研究重组人白细胞介素24体外对淋巴瘤raji细胞的生长抑制作用及其分子机制.方法:用rhIL-24蛋白作用于淋巴瘤raji细胞,MTT法检测rhIL-24蛋白对raji细胞的生长抑制作用,激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察rhIL-24蛋白诱导raji细胞凋亡的形态学改变,流式细胞仪(FACS)检测rhIL-24蛋白诱导raji细胞的凋亡率及细胞周期改变,免疫细胞化学分析凋亡相关因子Bcl-2 和 Bax的改变.结果:rhIL-24蛋白作用于淋巴瘤raji细胞后,可以显著抑制raji细胞的生长,诱导G2/M期阻滞和凋亡,rhIL-24蛋白能使raji细胞中bcl-2的表达下调和bax的表达上调.结论:rhIL-24蛋白对淋巴瘤raji细胞具有显著的生长抑制及凋亡诱导作用,其作用机制可能与下调bcl-2和上调bax的表达有关.     

重组人白细胞介素24抑制淋巴瘤raji细胞生长及其分子机制

目的：研究重组人白细胞介素24体外对淋巴瘤raji细胞的生长抑制作用及其分子机制。方法：用rhIL-24蛋白作用于淋巴瘤raji细胞,MTT法检测rhIL-24蛋白对raji细胞的生长抑制作用,激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）观察rhIL-24蛋白诱导raji细胞凋亡的形态学改变,流式细胞仪（VACS）检测rhIL-24蛋白诱导raji细胞的凋亡率及细胞周期改变,免疫细胞化学分析凋亡相关因子Bcl-2和Bax的改变。结果：rhIL-24蛋白作用于淋巴瘤raji细胞后,可以显著抑制raji细胞的生长,诱导G2／M期阻滞和凋亡,rhIL-24蛋白能使raji细胞中bcl-2的表达下调和bax的表达上调。结论：rhIL-24蛋白对淋巴瘤raji细胞具有显著的生长抑制及凋亡诱导作用,其作用机制可能与下调bcl-2和上调bax的表达有关。     

p16基因甲基化与HeLa细胞凋亡相关性的研究

目的:研究天花粉蛋白诱导HeLa细胞凋亡过程中p16基因甲基化的变化情况,探讨细胞凋亡和抑癌基因甲基化的相关性,寻找新的去甲基化药物.方法:应用MTT法检测天花粉蛋白对HeLa细胞增殖抑制的影响,流式细胞仪检测天花粉蛋白对HeLa细胞的诱导凋亡作用,甲基化特异PCR(Methylation-specific PCR,MSP)检测HeLa细胞凋亡过程中p16基因启动子区CpG岛的甲基化状况.结果:在HeLa细胞中p16基因启动子区CpG岛异常甲基化,经天花粉蛋白处理后,HeLa细胞生长明显受抑,流式细胞仪直方图出现明显的亚二倍体峰,p16基因启动子区CpG岛无异常甲基化表现.结论:天花粉蛋白在诱导HeLa细胞凋亡过程中对p16基因有明显的去甲基化作用,可能是新型的去甲基化药物,抑癌基因甲基化失活与肿瘤细胞凋亡之间可能有某些密切的相关性.     

bcl-2反义核酸提高γ线对恶性淋巴瘤细胞凋亡的作用

目的研究bcl-2反义核酸能否增加^60Coγ线对恶性淋巴瘤细胞凋亡的作用。方法采用细胞染色方法观察细胞凋亡的形态，原位末端标记法检测凋亡细胞，流式细胞仪检测细胞的DNA含量和bcl-2蛋白的表达。结果1～8Gyγ线和10～40μmol/L bcl-2基因反义核酸均能抑制B淋巴瘤细胞株Raji细胞生长，诱导细胞凋亡。流式细胞仪检测亚G1期细胞增多，bcl-2蛋白表达降低，呈现时间剂量依赖效应，联合应用比单独应用抑制作用显著。结论bcl-2反义核酸能够增加^60Coγ线对恶性淋巴瘤细胞凋亡的作用。     

姜黄素对子宫颈癌HeLa细胞增殖抑制作用及其机制的研究

目的:探讨姜黄素(Curcum in)对体外培养人子宫颈癌HeLa细胞抗癌作用及分子机制。方法:MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测凋亡和细胞周期,PI/Hoechst33258荧光双染法检测细胞凋亡,W estern b lot法检测细胞凋亡相关蛋白Bc l-2和Bax蛋白的表达。结果:姜黄素对HeLa细胞生长有抑制作用,并呈剂量依赖性;流式细胞仪分析证实姜黄素能使HeLa细胞阻滞在S期,并出现亚二倍体凋亡峰;荧光双染法可见凋亡细胞;W estern b lot结果显示Bax蛋白表达均上调,而Bc l-2的表达无明显影响。结论:姜黄素对人子宫颈癌HeLa细胞的增殖具有显著的抑制作用并可诱导细胞凋亡;Bax蛋白的表达上调可能参与了诱导细胞凋亡。     

Inotodiol Inhabits Proliferation and Induces Apoptosis through Modulating Expression of cyclinE,p27, bcl-2, and bax in Human Cervical Cancer HeLa Cells

Inonotus obliquus is a medicinal mushroom that has been used as an effective agent to treat various diseasessuch as diabetes, tuberculosis and cancer. Inotodiol, an included triterpenoid shows significant anti-tumor effect.However, the mechanisms have not been well documented. In this study, we aimed to explore the effect of inotodiolon proliferation and apoptosis in human cervical cancer HeLa cells and investigated the underlying molecularmechanisms. HeLa cells were treated with different concentrations of inotodiol. The MTT assay was used toevaluate cell proliferating ability, flow cytometry (FCM) was employed for cell cycle analysis and cell apoptosis,while expression of cyclinE, p27, bcl-2 and bax was detected by immunocytochemistry. Proliferation of HeLacells was inhibited by inotodiolin a dose-dependent manner at 24h (r=0.9999, p<0.01). A sub-G1 peak (apoptoticcells) of HeLa cells was detected after treatment and the apoptosis rate with the concentration and longerincubation time (r=1.0, p<0.01), while the percentage of cells in S phase and G2/M phase decreased significantly.Immunocytochemistry assay showed that the expression of cyclin E and bcl-2 in the treated cells significantlydecreased, while the expression of p27 and bax obviously increased, compared with the control group (p<0.05).The results of our research indicate that inotodiol isolated from Inonotus obliquus inhibited the proliferationof HeLa cells and induced apoptosis in vitro. The mechanisms may be related to promoting apoptosis throughincreasing the expression of bax and cutting bcl-2 and affecting the cell cycle by down-regulation the expressionof cyclin E and up-regulation of p27. The results further indicate the potential value of inotodiol for treatmentof human cervical cancer.     

紫杉醇脂质体对乳腺癌MCF-7细胞生长抑制作用的机制

目的 分析紫杉醇脂质体对乳腺癌MCF-7细胞的生长抑制作用,观察药物作用的时间浓度关系并探究其作用机制.方法 应用不同剂量紫杉醇脂质体对MCF-7细胞进行处理,通过MTT法检测细胞存活率,倒置显微镜观察细胞形态,流式细胞分析技术检测细胞凋亡情况及其对细胞周期的影响,Western blot法检测bcl-2蛋白表达情况.结果 紫杉醇脂质体对MCF-7细胞有明显的剂量时间依赖效应.紫杉醇与紫杉醇脂质体均可将MCF-7细胞阻滞在G2/M期,且随药物浓度增加,凋亡细胞所占比例逐渐增加.通过Western blot法检测发现,紫杉醇脂质体作用后MCF-7细胞bcl-2蛋白表达明显下降,bax蛋白表达明显上调,bax/bcl-2比例明显上调.结论 与紫杉醇相比,紫杉醇以脂质体对人乳腺癌MCF 7细胞具有同样的抑制作用,其促凋亡机制之一为调控bcl-2及bax蛋白表达.     

大豆异黄酮诱导人食管癌裸鼠移植瘤细胞凋亡

[目的]研究大豆异黄酮诱导裸鼠EC-7906移植瘤凋亡的机制.[方法]建立人食管癌EC-7906裸鼠移植瘤模型,采用不同剂量的大豆异黄酮进行瘤旁注射,并设生理盐水和二甲亚砜(DMSO)两个对照组,用透射电镜和TUNEL法检测肿瘤组织细胞凋亡情况,免疫组织化学法和RT-PCR法检测肿瘤组织的凋亡相关基因bcl-2和bax的表达情况.[结果]透射电镜和TUNEL法发现大豆异黄酮导致移植瘤内大量细胞发生凋亡;免疫组织化学法发现大豆异黄酮注射组瘤组织的bcl-2蛋白表达阳性率降低,bax蛋白表达阳性率明显提高;RT-PCR法发现大豆异黄酮注射组的bcl-2 mRNA条带密度随剂量的增大而递减,bax mRNA条带密度递增,[结论]大豆异黄酮对人食管癌EC-7906裸鼠移植瘤具有抑制作用,通过下调bcl2的表达和上调bax的表达而诱导食管癌移植瘤细胞发生凋亡.     

结肠良、恶性病变中细胞凋亡及其与bcl-2、bax、PCNA蛋白表达的关系

目的　了解结肠良、恶性病变中细胞凋亡与增殖 ,及其与相关基因蛋白表达的关系及其生物学意义。方法　应用免疫组织化学S P法检测 14 8例结肠良、恶性病变标本中bcl 2、bax和PCNA蛋白的表达 ;并对其中 75例标本进行凋亡指数 (AI)和有丝分裂指数 (MI)测定。结果　PCNA与AI和MI密切相关 (P <0 .0 1) ;而bcl 2和bax仅与AI有关 (P <0 .0 1) ;bcl 2和PCNA蛋白在结肠腺癌和腺瘤中表达率显著高于正常组织 (P <0 .0 1) ;而bax蛋白则相反 ,在正常及良性病变中表达率较癌组织为高 (P<0 .0 1)。其次发现 ,以结肠腺瘤为分界点 ,前半阶段凋亡指数逐渐上升 ,后半阶段则下降 ,而细胞增殖指数在整个演进过程中呈上升趋势。结论　凋亡与增殖间平衡的破坏与结肠粘膜的恶变密切相关 ,在这一过程中有多种基因参与调控 ,其中bcl 2和bax即参与了此调控过程 ,且其蛋白产物的异常表达是结肠腺癌发生过程中的早期事件。     

棕榈酸在体外通过促进凋亡作用抑制宫颈癌Hela细胞增殖的研究

目的 探讨体外棕榈酸(Palmitic acid,PA)抑制人宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移、侵袭和诱导凋亡作用及其部分机制。方法 体外培养的宫颈癌HeLa细胞分为对照组(不加药)、PA处理组(分别加入PA 25、50、100μg/mL处理),CCK-8法检测各组HeLa细胞增殖情况,Transwell试验检测细胞的迁移和侵袭能力,qRT-PCR检测不同浓度PA处理后细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax及Cleaved-caspase-3的表达,PA处理后的HaLa细胞用膜联蛋白V/碘化丙啶双标,随后用流式细胞仪检测其凋亡情况。结果 与对照组比较,PA处理HeLa细胞后增殖抑制率逐渐增高(P＜0.05);PA处理后,HaLa细胞的迁移与侵袭能力显著下降(P＜0.05);同时,PA处理HeLa细胞后,随着PA浓度增高,Bcl-2基因表达逐渐降低,而Bax和Cleaved-caspase-3基因表达逐渐增强与流式细胞仪检测结果相符合,HeLa细胞的凋亡率随着PA浓度增高逐渐增高(P＜0.05)。结论 PA体外可抑制HeLa细胞增殖,减少其迁移与侵袭水平,并诱导其凋亡,其机制可能与调节HeLa细胞Bcl-2家族有关。     

三氧化二砷诱导雌激素受体阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-435s凋亡和bcl-2、bax表达关系的研究

目的 观察不同浓度三氧化二砷(As2O3)诱导人乳腺癌细胞系MDA-MB-435s凋亡的情况及对bcl-2和bax表达的影响,初步探讨了其诱导凋亡的途径.方法 不同浓度As2O3体外作用于MDA-MB-435s细胞24h后,采用TUNEL染色法和DNA梯状电泳法检测细胞凋亡情况,应用免疫组化法检测细胞中bcl-2和bax蛋白表达情况.结果 As2O3作用后,DNA琼脂糖凝胶电泳法呈现凋亡DNA梯状条带;As2O3作用组的凋亡指数明显高于阴性对照组(P＜0.05);bcl-2表达下调,bax表达上调.结论 As2O3能诱导MDA-MB-435s细胞凋亡,上调bcl-2蛋白表达、下调bax蛋白表达是其诱导凋亡的途径之一.     

内皮抑素抑制SKOV3细胞生长及其在裸鼠皮下移植瘤中的作用机制

目的:探讨内皮抑素对卵巢癌SKOV3细胞及其荷瘤鼠卵巢癌组织的生长作用及机制。方法:MTT法观测内皮抑素对体外SKOV3细胞的抑制作用,透射电镜观察细胞凋亡、免疫细胞化学检测SKOV3;细胞中bcl-2和bax蛋白表达;将SKOV3细胞移植至裸鼠皮下,观察内皮抑素对皮下移植瘤生长的影响;TUNEL和电镜法观察肿瘤细胞的凋亡,免疫组织化学和RT-PCR法检测瘤组织中bcl-2和bax的表达。结果:内皮抑素具有体外抑制SKOV3细胞增殖的作用(P<0．01);能诱导SKOV3细胞凋亡,但对bcl-2和bax的表达无明显影响。内皮以抑素能抑制裸鼠皮下移植瘤的生长(P<0．05);其中bcl-2的表达低于对照组,而bax表达无明显改变。结论:内皮抑素具有抑制SKOV3细胞及皮下移植瘤生长的作用,其机制可能与诱发细胞凋亡和调节bcl-2／bax表达相关。     

DAPK诱导PGCl3细胞凋亡时Bcl-2磷酸化的研究

目的:探讨DAPK诱导PGCl3细胞凋亡的可能机制。方法:真核表达载体pcDNA3.1-DAPK导入PGCl3细胞中。RT-PCR检测bcl-2和baxm-RNA丰度变化,Bcl-2含量变化和Bcl-2磷酸化水平变化。结果:DAPK诱导PGCl3细胞凋亡时,bcl-2表达是下调的,bax基因表达量无明显变化,pcDNA3.1-DAPK转染组的Bcl-2磷酸化水平相对pcDNA3.1组要高,同时Bcl-2蛋白含量是减少的。结论:过表达的DAPK诱导PGCl3细胞凋亡与bcl-2转录下调和Bcl-2磷酸化有关     

紫杉醇对人骨肉瘤细胞凋亡及对bcl-2 、bax基因表达的影响

 目的 了解紫杉醇诱导人骨肉瘤细胞的凋亡效果,以及凋亡与bcl-2和bax表达之间的关系。方法 用不同浓度的紫杉醇作用于骨肉瘤细胞MG63。采用胎盼蓝染色法,于细胞记数板进行活细胞率检测计算。采用光镜和电子显微镜对细胞形态改变进行观测,采用原位缺口末端标记凋亡检测法（TUNEL）和流式细胞术（Annexin-V-FITC＆PI）对细胞凋亡进行检测。采用免疫组织化学法对凋亡调节基因bcl-2和bax表达进行检测。结果 骨肉瘤活细胞率随着紫杉醇作用时间延长和浓度增高而降低。紫杉醇诱导骨肉瘤细胞MG63凋亡表现为典型的凋亡特征,包括：细胞形态学改变,细胞染色质浓聚,染色质新月形变,胞核碎裂等。TUNEL法检测到了细胞DNA片段的断裂。随着细胞凋亡的发生,开始出现G2/M期阻滞。紫杉醇可以降低凋亡相关基因bcl-2的表达和增加bax基因的表达。结论 紫杉醇可以通过时间依赖性和剂量依赖性方式,促使细胞G2/M期阻滞和抑制细胞有丝分裂,从而诱导人骨肉瘤细胞凋亡。这种凋亡可能受到凋亡相关基因bcl-2低表达和bax高表达的调控。