Rho激酶在高血压中的作用及其与容积调节性氯通道的关系

高血压血管平滑肌重构伴随Rho/Rho激酶通路的激活,抑制Rho激酶可逆转血管平滑肌增生以及血压升高。同时,在高血压中有容积调节性氯通道开放,这与Rho激酶通路激活有关。该文就高血压过程中Rho激酶与容积调节性氯通道的关系做一综述。     

蛋白酪氨酸激酶与糖尿病大鼠主动脉平滑肌高反应性的关系

目的　探讨蛋白酪氨酸激酶在糖尿病大鼠主动脉平滑肌高反应性中的作用。方法　离体主动脉环张力实验。结果　在 8～ 10wk的糖尿病大鼠 :①主动脉平滑肌对苯肾上腺素的浓度依赖性收缩反应显著增加 ,最大收缩反应为( 167± 2 3 ) g·g-1组织净重 ,较对照组 ( 10 0± 17) g·g-1组织净重增加了约 67% ,②蛋白酪氨酸磷酸酶抑制剂sodiumor thovanadate的浓度依赖性收缩反应也明显增强 ,1mmol·L-1sodiumorthovanadate的收缩反应为 ( 2 0 8± 2 5 )g·g-1组织净重 ,较对照组 ( 113± 18) g·g-1组织净重增加了约 85 % ,③蛋白酪氨酸激酶抑制剂 genistein均浓度依赖性地抑制糖尿病组和对照组主动脉平滑肌对苯肾上腺素的收缩反应 ,但在对照组的抑制率显著大于糖尿病组。结论　糖尿病大鼠主动脉平滑肌的高反应性可能与糖尿病时蛋白酪氨酸激酶的活性增加有关。     

冰片对鼻咽癌细胞容积敏感性氯通道的激活作用

目的探讨冰片对低分化鼻咽癌(CNE-2Z)细胞氯通道的激活作用及对细胞容积的影响。方法采用全细胞膜片钳技术记录冰片激活CNE-2Z细胞膜电流,分析其电流特性;用活细胞图像法观察并测量冰片对细胞体积的影响。结果细胞外灌流冰片(20μmol·L-1)诱导CNE-2Z细胞膜氯通道开放,产生氯电流,该电流有明显外向优势,无电压及时间依赖性失活,其翻转电位接近氯离子平衡电位,该电流可被氯通道阻断剂tamoxifen抑制,细胞外灌流47%高渗溶液完全抑制该电流。细胞外灌流冰片30 min,细胞体积缩小约9.4%,该作用可被tamoxifen完全抑制。结论冰片可以激活低分化鼻咽癌细胞容积敏感性氯通道,导致细胞体积缩小,氯通道在冰片引起细胞体积缩小中起着重要作用。     

左旋龙脑对人脐静脉内皮细胞氯通道和细胞容积的影响

目的研究左旋龙脑对人脐静脉内皮细胞株(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)氯通道和细胞容积的作用。方法膜片钳技术记录全细胞氯电流;siRNA干扰技术下调ClC-3表达;动态图像分析测量细胞容积。结果 20 nmol·L~(-1)左旋龙脑能明显激活HUVECs氯电流,电流密度达(79.59±4.90)pA/pF,左旋龙脑激活的电流能被氯通道阻断剂NPPB、DIDS抑制,外向电流抑制率分别为(95.57±2.57)%、(97.28±6.36)%;下调ClC-3氯通道表达后,左旋龙脑激活的氯电流明显减小至(27.03±3.89)pA/pF;左旋龙脑能明显诱导细胞容积缩小(14.38±1.58)%,氯通道阻断剂NPPB阻断左旋龙脑诱导的细胞容积改变。结论左旋龙脑能激活HUVECs的ClC-3氯通道,使Cl-外流诱发细胞容积减小。     

高血压大鼠主动脉平滑肌细胞Cl~-通道的改变

目的　探讨在高血压状态下 ,大鼠主动脉平滑肌细胞Cl-通道的改变。方法　采用两肾两夹 (2kidney 2clip ,2K2C)肾血管性高血压大鼠 (renovascularhypertensiverats,RVHR)模型 ,在术后 1wk～ 12wk ,取大鼠胸主动脉平滑肌 ,做主动脉环张力实验 ,观察Cl-通道阻断剂DIDS(4,4 di isothiocyanato stilbene 2 ,2’disulphonate)和NPPB[5 nitro 2 (3 phenylpropy lamino)benzonicacid]对苯肾上腺素引起的主动脉平滑肌 (aorticvascularsmoothmuscle,AVSM )收缩反应的影响。结果　在术后 1wk和 4wk ,30 0 μmol·L-1DIDS和 10 0 μmol·L-1NPPB对苯肾上腺素引起的高血压手术组大鼠主动脉平滑肌收缩反应的抑制作用与假手术组相比差异无显著性 ;在术后 8wk和 12wk ,30 0 μmol·L-1DIDS和10 0 μmol·L-1NPPB对苯肾上腺素引起的高血压手术组大鼠主动脉平滑肌收缩反应的抑制作用低于假手术组 ;随术后时间的延长 ,血压的升高 ,DIDS和NPPB对主动脉平滑肌收缩反应的抑制作用逐渐降低。结论　在高血压状态下 ,大鼠主动脉平滑肌细胞DIDS和NPPB敏感的Cl-通道的活性发生了改变 ,DIDS和NPPB敏感的Cl-通道与高血压病的发生和发展密切相关。     

蛋白质酪氨酸磷酸化和氯通道参与瞬时受体电位蛋白介导钙池耗竭引起的钙内流

目的　探讨蛋白质酪氨酸磷酸化与Cl-通道对瞬时受体电位 (TRP)蛋白参与的Ca2 + 池耗竭引起的Ca2 + 内流(SOC)的调控作用。方法　采用脂质体转染和Fura 2 /AM荧光光度法 ,测定胞浆游离Ca2 +浓度 ( [Ca2 + ]i) ,比较转染人源性TRP1 (hTRP1 )和人源性TRP3 (hTRP3 )cDNA对毒胡罗卜素 (TG)引起的Ca2 + 内流的作用 ,并观察酪氨酸激酶抑制剂染料木黄酮、Cl-通道阻断剂呋塞米和 4,4 二异硫氰基芪 2 ,2 二磺酸 (DIDS)对其的影响。结果　HEK2 93细胞转染hTRP1cDNA后 ,TG引起的Ca2 + 内流显著增加 ;转染hTRP3cDNA则无明显影响。 5～ 3 0 μmol·L-1染料木黄酮、1～ 8μmol·L-1呋塞米、0 .5～ 1μmol·L-1DIDS对转染hTRP1cDNA细胞的TG诱发的Ca2 + 内流均有抑制作用。结论　hTRP1蛋白可能是HEK2 93细胞SOC的物质基础 ;酪氨酸激酶和Cl-通道均参与HEK2 93细胞SOC的调控 ,而且酪氨酸激酶可能直接作用于TRP1蛋白     

蛋白酪氨酸激酶抑制剂对脑血管平滑肌细胞Ca~(2+)池操纵性Ca~(2+)内流的影响

目的　研究蛋白酪氨酸激酶和蛋白酪氨酸磷酸酶抑制剂对牛脑血管平滑肌细胞 (CSMC)Ca2 + 池操纵性Ca2 + 内流的影响。方法　采用培养的CSMC ,在生物荧光双波长影像分析系统用Fura 2 /Am荧光探针测定单个细胞内游离Ca2 + 浓度。结果　 (1)蛋白酪氨酸激酶抑制剂 (genistein ,2 5 ,5 ,10 μmol·L-1)能浓度依赖性降低内皮素 1(ET 1,10 -7mol·L-1)刺激引起的CSMCCa2 + 内流 ,抑制率分别为5 6%± 2 .9%、2 5 6%± 3 9%、48 9%± 3 7% ;蛋白酪氨酸磷酸酶抑制剂 (vanadate ,2 ,4,8μmol·L-1)能浓度依赖性升高CPA刺激引起的CSMCCa2 + 内流 ,增加比率分别为8 2 %± 3 9%、18 8%± 4 9%、46 6%± 6 9% ;(2 ) genistein(2 5 ,5 ,10 μmol·L-1)能浓度依赖性降低ATP(10 μmol·L-1)刺激引起的CSMCCa2 + 内流 ,抑制率分别为 6 7%±2 6%、2 4 6%± 6 5 %、5 1 3 %± 6 9% ;vanadate (2 ,4,8μmol·L-1)能浓度依赖性升高ATP刺激引起的CSMCCa2 +内流 ,增加比率分别为 4 8%± 2 0 %、2 8 5 %± 4 6%、49 6%± 3 3 % ;(3 ) genistein (2 5 ,5 ,10 μmol·L-1)能浓度依赖性降低环匹阿尼酸 (Cyclopiazonicacid ,CPA ,10 μmol·L-1)刺激引起的CSMCCa2 + 内流 ,抑制率分别为 6 5 %± 3 0 %、2 2 5 %± 5 2 %、     

大鼠肺内动脉平滑肌细胞钾通道的研究

目的　研究大鼠肺内动脉平滑肌细胞钾电流。方法　用急性酶解分离法得到单个大鼠肺内动脉平滑肌细胞,采用膜片钳全细胞记录方式研究钾通道特性。结果　将平滑肌细胞钳制在-70 mV,给予-70～50 mV的斜坡刺激,时间为600 ms。可引出一随电压逐渐增大的电流,在+50 mV时其值为359±31 pA。细胞内用CsCl取代KCl后,该电流几乎完全消失;细胞外用无钙台氏液灌流,电极内液用高浓度的EGTA时,电流可被抑制50%±1%;细胞外给予特异性钙激活钾通道阻断剂TEA和延迟整流钾通道阻断剂4-AP均可使该电流明显下降。结论　大鼠肺内动脉平滑肌细胞的钾电流主要由钙激活钾电流和延迟整流钾电流组成。     

大黄素增强结肠近端平滑肌细胞钙离子依赖氯离子通道的表达

目的:研究大黄素对结肠近端平滑肌细胞钙离子依赖氯离子通道(ClCa channel)的作用。方法:采用RM6200四道仪记录黄体酮对平滑肌的等长收缩活动作用,相对定量的单细胞RT-PCR法检测平滑肌细胞ClCa通道mRNA的表达。结果:大黄素显著增强离体结肠平滑肌肌条和单个平滑肌细胞的收缩,并可使ClCa电流显著增强,作用与剂量呈正相关。DIDS和NFA可阻滞大黄素的作用。豚鼠近端结肠平滑肌细胞有ClCa1和ClCa2基因的mRNA表达,ClCa1基因的mRNA表达强度是ClCa2基因的mR-NA的5.3±0.71(n=5,P<0.01)倍。50μM大黄素孵育可以使ClCa1基因的mRNA表达增强(n=5,P<0.01)。结论:大黄素可通过兴奋氯离子通道电流引起结肠平滑肌收缩,大黄素对氯离子通道兴奋作用可能与增强结肠平滑肌细胞ClCa1基因表达有关。     

吡那地尔对人肺动脉平滑肌细胞KATP通道蛋白及ERK1/2磷酸化的影响

目的 探讨ATP敏感性钾(KA口)通道开放剂吡那地尔(Pin)对内皮素1(ET-1)诱导的人肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)KATe通道蛋白表达及细胞外信号调节激酶1和2(ERK1/2)磷酸化的影响.方法 体外培养人PASMCs,用ET-1诱导其增殖,应用Westem blot方法评价Pin对ET-1诱导的人PASMCs KArP通道蛋白磺酰脲受体亚单位(SUR2B)和内向整流性孔区亚单位(Kir6.1)表达的影响以及ERK1/2的磷酸化作用.结果 ET-1显著下调SUR2B的表达,Pin呈浓度依赖性上调SUR2B表达;KATP通道拮抗剂格列本脲阻断Pin的作用,而Kir6.1的表达不受影响.ET-1呈时间依赖性促进人PASMCs ERK1/2磷酸化,10min时最明显,Pin(10μmol/L)拮抗ET-1对ERK1/2磷酸化的影响,格列本脲逆转Pin的作用.结论 KATP通道开放剂Pin通过上调KATP通道蛋白的表达,抑制ET-1诱导的人PASMCs ERK1/2的磷酸化.     

Effects of Tween 80 on volume-regulated chloride channel and cell proliferation in rat basilar artery smooth muscle cell

Objectives We have previously found that volume‐regulated chloride current (VRCC) is involved in cell cycle progression and cell proliferation. This study was to examine the effect of Tween 80, a nonionic surfactant, on VRCC and cell proliferation in rat basilar artery smooth muscle cells (BASMCs). Methods VRCC was recorded using a whole‐cell patch clamp. Cell proliferation and cell cycle were determined by CCK‐8, cell count and flow cytometry. Key findings The results showed that endothelin‐1 promotes cell cycle transition from the G0/G1 phase to the S phase and significantly increases VRCC in BASMCs. The effect of Tween 80 on VRCC is reversible and concentration dependent. However, this chemical has no effect on the calcium‐activated chloride channel. Tween 80 also concentration‐dependently inhibits BASMCs proliferation and arrests cells in the G1/S checkpoint. The antiproliferative effect is paralleled with the inhibitory effect on VRCC. Conclutision Our study demonstrates that the inhibitory effect of Tween 80 on VRCC contributes importantly to arrest of the cell cycle and prevention of cell proliferation.     

平滑肌细胞膜的钙激活Cl~-通道

在多种平滑肌上都已发现Ｃａ２＋激活Ｃｌ－通道。胞内游离钙升高是钙激活氯通道的必要条件。多种刺激剂诱导胞内钙库释放钙而同时激活钾通道［ＩＫ（Ｃａ）］和氯通道［ＩＣｌ（Ｃａ）］。平滑肌细胞上激活ＩＣｌ（Ｃａ）的［Ｃａ２＋］ｉ阈值因动物种属和组织差异而不同。用荧光指示剂直接测定大鼠门静脉平滑肌细胞上的［Ｃａ２＋］ｉ得出激活ＩＫ（Ｃａ）的最小［Ｃａ２＋］ｉ应大于７０～８０μｍｏｌ·Ｌ－１,比激活ＩＣｌ（Ｃａ）的最低浓度１８０μｍｏｌ·Ｌ－１要小,因此认为ＩＫ（Ｃａ）要比ＩＣｌ（Ｃａ）对［Ｃａ２＋］ｉ更敏感。胞外钙通过电压依赖性钙通道进入胞内,［Ｃａ２＋］ｉ升高也能激活氯通道。Ｇ蛋白与某些受体偶联激活胞内第二信使ＩＰ３而激活氯通道。钙激活氯通道的电导很小,从全细胞电流分析应小于１０ｐＳ。平滑肌细胞上的氯平衡电位（ＥＣｌ）正于静息膜电位,因此Ｃｌ－通道开放Ｃｌ－外流驱动膜电位向ＥＣｌ方向靠近,形成膜的去极化。Ｃａ２＋激活Ｃｌ－通道开放使细胞膜去极化并引起细胞的兴奋,这种通道在由激素或神经递质引起平滑肌细胞的兴奋过程中起重要作用。     

碘化N-正丁基氟哌啶醇对大鼠胸主动脉平滑肌钾通道作用的研究

目的　研究碘化N 正丁基氟哌啶醇 (F2 )对大鼠胸主动脉平滑肌细胞膜钾通道的作用。方法　①采用全细胞膜片钳技术 ,测定不同浓度F2 作用时单个酶消化分离平滑肌细胞的钾电流 ;②采用大鼠胸主动脉环生物鉴定法 ,测定F2对KCl诱导动脉环收缩的作用以及格列苯脲对F2 扩血管作用的影响。结果　当钳制电压为 - 4 0mV ,去极化电位从 -3 0mV到 + 10 0mV ,步阶脉冲为 10mV ,刺激脉宽为 4 0 0ms的方波钳制方案进行刺激时 ,可记录到外向电流 ,此电流具有电压依赖性。在去极化电位为 + 70mV时 ,3种浓度( 0 1、1和 5 μmol·L-1)F2 使外向电流分别从给药前 ( 2 2 9±2 8)pA、( 2 2 6± 5 7) pA和 ( 2 2 8± 4 2 ) pA升到给药后 ( 3 5 4± 2 9)2 0 0 0 12 2 1收稿 ,2 0 0 1 0 6 10再修回 国家新药研究基金 (No 96 90 1 0 5 2 31)和国家自然科学基金 (No30 0 70 30 4)资助1 汕头大学医学院药理学教研室 ,汕头　 5 15 0 31作者简介 :韦日生 ,男 ,31岁 ,硕士研究生。Tel:0 10 62 0 9114 5 ,E mail:rswei@yahoo .com ;石刚刚 ,男 ,44岁 ,教授 ,硕士生导师pA (n =6,P <0 0 1) ,( 5 0 3± 86) pA (n =5 ,P <0 0 1)和( 986± 4 5 )pA (n =5 ,P <0 0 1)。 10 μmol·L-1格列苯脲对F2 增加的外向电流没有影响 ,10mmol·     

大鼠腹主动脉平滑肌细胞培养及鉴定

目的 培养、鉴定大鼠腹主动脉平滑肌细胞.方法 采用组织贴块法分离培养大鼠腹主动脉平滑肌细胞,胰蛋白酶消化传代,相差显微镜及即用型SABC免疫组化染色试剂盒进行细胞鉴定.结果 平滑肌细胞呈梭形或长梭形生长,透射电镜可见细胞的胞浆内有很多与细胞纵轴平行的肌丝和与之相连的致密体.高倍镜下可见胞质内大量棕色、与细胞长轴平行的纤...     

超氧阴离子对牛主动脉平滑肌细胞收缩性的影响

目的观察超氧阴离子对培养的牛动脉平滑肌细胞内钙及收缩性的影响。方法原代培养牛动脉平滑肌,使用数字荧光显微镜技术测定细胞内钙,采用胶原凝胶收缩方法分析收缩性。结果超氧阴离子对高钾溶液及A-23187诱导的钙内流无明显影响(P>0.05),但可使凝胶收缩面积减小。超氧阴离子可使高钾诱导的胶原凝胶收缩面积从18.32%±2.11%减小至5.13%±0.45%(P<0.01),使A-23187诱导的胶原凝胶收缩面积从17.16%±1.10%减小至4.31%±0.04%(P<0.01)。结论超氧阴离子可明显抑制牛主动脉平滑肌细胞收缩性,但对电压依赖性钙通道引起的钙内流及A-23187诱导的细胞内钙变化无影响。     

内皮素-1对牛脑血管平滑肌细胞ClC-3通道表达的影响

目的　研究内皮素 1(ET 1)对牛脑血管平滑肌细胞(CSMC)内源性ClC 3表达的影响。方法　采用培养的CSMC ,用免疫印迹 (westernblot)方法分析CSMCClC 3通道表达。结果　①牛脑基底动脉、大脑中动脉、微动脉均有ClC 3蛋白表达 ,分子量约 10 5ku ,以微动脉表达最丰富 ,基底动脉表达最少 ;②培养的CSMC有内源性ClC 3蛋白表达 ,分子量约 95ku ;③ET 1能增加CSMCClC 3蛋白表达 ;④nifedipine、SK&F96 36 5能减少ET 1作用 ,环匹阿尼酸(cyclopiazonicacid ,CPA)浓度依赖性促进ClC 3蛋白表达 ,并能增强ET 1作用。结论　脑血管平滑肌细胞存在内源性ClC 3,ET 1可增强ClC 3表达 ,减少或增加胞浆内Ca2 + 浓度均可影响ET 1的作用     

染料木黄酮对豚鼠结肠平滑肌细胞L型钙通道的影响(英文)

目的研究酪氨酸激酶抑制剂染料木黄酮(GST)对豚鼠结肠平滑肌细胞L型钙通道电流的作用。方法木瓜蛋白酶法分离单个豚鼠结肠平滑肌细胞,应用全细胞式膜片钳技术记录L型钙通道电流。结果 GST(10 ~100μmo·lL-1)浓度依赖性地阻断L型钙通道电流,其作用可被洗脱,半数有效抑制浓度为(39.9±3.6)μmol·L-1。GST可使L型钙通道的稳态失活曲线向超极化方向左移约10 mV(P<0.01),对其斜率没有影响。GST的无活性拟似物大豆异黄酮对L型钙通道电流的作用明显小于GST。酪氨酸磷酸酶抑制剂原钒酸钠可阻断GST对钙通道电流的抑制作用。结论 GST可通过酪氨酸激酶途径抑制豚鼠结肠平滑肌L型钙通道。     

Endothelin-1 induces contraction via a Syk-mediated p38 mitogen-activated protein kinase pathway in rat aortic smooth muscle

Although spleen tyrosine kinase (Syk) has crucial roles in various cells, its function on vascular smooth muscle contraction has not been determined. In the present study, we performed experiments to determine if Syk contributes to the endothelin-1 (ET-1)-mediated contraction in rat aortic smooth muscle. ET-1-induced contraction of aortic strips was inhibited by piceatannol, PD98059, and SB203580, inhibitors of Syk, extracellular signal-regulated kinase 1/2 (ERK1/2), and p38 mitogen-activated protein kinase (MAPK), respectively. Piceatannol also attenuated high K(+)-induced contraction. ET-1 dose-dependently enhanced the activity of Syk and this was inhibited by piceatannol in both rat aortic strip and rat aortic smooth muscle cells. The phosphorylation of p38 MAPK and heat shock protein 27 (HSP27), but not that of ERK1/2, in response to ET-1 was inhibited by both piceatannol and SB203580. These results suggest that Syk may play an important role in the regulation of aortic smooth muscle contraction induced by ET-1, which may be mediated by the p38 MAPK/HSP27 signaling pathway.