重组人内皮抑素对小鼠肺腺癌肿瘤血管生成及肺转移的抑制作用

目的观察酵母表达重组人内皮抑素(recombinant human endostatin, rhES)对小鼠肺腺癌LA795原位肿瘤微血管生成及肺转移的抑制作用。方法对含有人内皮抑素基因的重组酵母菌株进行诱导表达及纯化rhES;将接种LA795小鼠肺腺癌细胞的T739小鼠随机分成两组,每组各10只,于接种后第6日起给予rhES和磷酸缓冲盐液(PBS)皮下注射,每日1次,连续14 d;观察两组小鼠原位肿瘤微血管生成情况及肺部肿瘤转移情况。结果经甲醇诱导酵母转化子表达rhES,并用肝素亲和层析的方法获得纯化的rhES;治疗结束后用免疫组化方法观察两组小鼠原位肿瘤微血管密度发现rhES治疗组肿瘤微血管密度明显小于PBS对照组(P<0.01);观察两组小鼠肺部发现rhES治疗组小鼠肺部未见有明显肿瘤转移病灶,而PBS对照组小鼠肺部可见大量散在肿瘤转移病灶;两组小鼠肺湿重比较具有显著性差异(P<0.01)。结论rhES具有良好的生物学活性,显著抑制了小鼠肺腺癌LA795肿瘤血管生成,并能有效抑制肿瘤的肺部转移。     

人内皮抑素在毕赤酵母中的表达、纯化及其对小鼠肺腺癌LA795细胞生长的抑制

目的：通过基因重组技术获得能高效分泌表达人内皮抑素的为酵母菌株；观察纯化的重组人内皮抑素（rhES)对小鼠肺腺癌LA795生长的抑制作用，方法：利用氯化锂转化法将人内皮抑素基因整合入毕赤酵母基因组，获得可分泌表达人内皮抑素（endostatin)的菌株，用肝素亲和层析的方法纯化目的蛋白。观察人内皮抑素对碱性纤维生长因子（bFGF)刺激的人血管内皮细胞系ECV－304细胞增殖的作用。将接种LA795肺腺癌细胞的T739小鼠随机分成2组，分别给予rhES和磷酸缓冲盐液（PBS）皮下注射，每日1次，连续14d，观察2组小鼠肿瘤生长情况，结果：经筛选获得表达量较高的转化菌株，其表达的rhES能明显抑制bFGF刺激的人血管内皮细胞系ECV－304细胞的增殖，与对照组比较具有显著差异（P＜0．001），动物实验表明其有效抑制小鼠肺腺癌LA795的生长（P＜0．001），结论：用毕赤酵母作为宿主分泌表达的rhES具有良好的生长学活性，能有效抑制小鼠肺腺癌LA795的生长。     

人内皮抑素在毕赤酵母中的表达、纯化及其对小鼠肺腺癌LA795细胞生长的抑制

目的通过基因重组技术获得能高效分泌表达人内皮抑素的毕赤酵母菌株;观察纯化的重组人内皮抑素(rhES)对小鼠肺腺癌LA795生长的抑制作用。方法 利用氯化锂转化法将人内皮抑素基因整合入毕赤酵母基因组,获得可分泌表达人内皮抑素(endostatin)的菌株。用肝素亲和层析的方法纯化目的蛋白。观察人内皮抑素对碱性纤维生长因子(bFGF)刺激的人血管内皮细胞系ECV－304细胞增殖的作用。将接种LA795肺腺癌细胞的T739小鼠随机分成2组,分别给予rhES和磷酸缓冲盐液(PBS)皮下注射,每日1次,连续14d。观察2组小鼠肿瘤生长情况。结果经筛选获得表达量较高的转化菌株,其表达的rhES能明显抑制bFGF刺激的人血符内皮细胞系ECV－304细胞的增殖,与对照组比较具有显苫差异(P＜0．001),动物实验表明其有效抑制小鼠肺腺癌LA795的生长(P＜0．001)。结论用毕亦酵母作为宿主分泌表达的rhES具有良好的生物学活性,能有效抑制小鼠肺腺癌LA795的生长。     

重组人内皮抑素对小鼠肺腺癌LA795的抑制作用

目的观察重组人内皮抑素(rhES)对小鼠肺腺癌LA795生长和转移的抑制作用。方法对ThES高效表达克隆pCX的表达产物进行纯化,得到ThES。将LA795肺腺癌细胞接种于T739小鼠背部皮下,随机分成2组,接种后第10天起分别给予rhES20mg/kg·b.w.或等体积PBS缓冲液皮下注射,1次/d,共14d。观察2组肿瘤生长情况、肺湿重、肺表面转移结节数、动物生存时间,分别进行t检验。结果治疗前后rhES组肿瘤体积分别为(650±201)mm3、(1642±211)mm3;而PBS组肿瘤体积由治疗前的(623±248)mm3增至(9194±952)mm3。rhES组肺湿重、肺表面转移结节数明显少于PBS组,动物生存时间明显延长(P<0.01)。结论rhES可明显抑制LA795所致的小鼠实验性肿瘤的生长与转移,延长动物的生存时间。     

苏拉明对肺腺癌小鼠移植瘤的抑制作用及碱性成纤维细胞生长因子表达的影响

目的研究苏拉明联合顺铂对肺腺癌LA795细胞T739小鼠移植瘤的抑制作用和移植瘤内bFGF表达的影响。方法复制小鼠移植瘤模型，将32只接种高转移性LA795肺腺癌细胞的T739小鼠随机分成4组：对照组、顺铂组、苏拉明组和顺铂＋苏拉明组。用药干预16d，用药中观察肿瘤生长情况，于接种后24d处死各组小鼠，取出双肺和剥离皮下肿瘤，计算出肺转移发生率，计数各组小鼠肺表面转移结节数及算出肺表面结节转移抑制率。移植瘤标本行病理观察，免疫组化和图像分析系统定量检测肿瘤组织微血管密度（MVD）及碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）表达。结果各用药组肿瘤的生长受到抑制，瘤重明显低于对照组，其抑瘤率分别为23．03％、34．40％和56．30％。苏拉明组与对照组比肺表面转移结节数、肺转移发生率下降，肺表面结节转移抑制率上升，联合组更为明显。病理观察见各用药组肿瘤细胞出现坏死、苏拉明组及联合组肿瘤间质中血管数减少。苏拉明组，顺铂＋苏拉明组MVD、bFGF的表达都比对照组减少，差异有显著性（P〈0．01）；两者联合有协同下调MVD、bFGF表达的作用，而单用顺铂组与对照组比差异无显著性。结论苏拉明可明显抑制肺腺癌细胞在小鼠体内的生长和转移，与顺铂有协同作用，其机制可能与下调bFGF表达，抑制其微血管形成有关。     

槲皮素联合顺铂对肺腺癌小鼠移植瘤及NF-κB和HIF-1a表达的影响

目的 观察槲皮素联合顺铂对肺腺癌LA795细胞的T739J、鼠移植瘤内核因子-κB（nuclear factor-kappaB NF-κB）和缺氧诱导因子（hypoxia inducible factor 1a HIF-1a）表达的影响,并探讨它们抑制肿瘤生长和转移的作用机制.方法 复制肺腺癌LA795细胞的T739小鼠移植瘤模型,将32只接种LA795肺腺癌细胞T739小鼠随机分成4组：A对照组、B顺铂组（DDP）、C槲皮素组、D槲皮素＋顺铂组.实验3周后,剥离皮下肿瘤和取出双肺,计算各组抑瘤率和肺转移发生率、小鼠肺表面转移结节数及肺表面结节转移抑制率.免疫组化和图像分析系统检测皮下移植瘤中NF-κB和HIF-1a表达并定量分析.结果 顺铂组、槲皮素组、联合组与对照组相比肿瘤抑制率升高,槲皮素组及联合组肺表面转移结节数明显下降,各用药组皮下肿瘤内NF-κB和HIF-1a表达与对照组相比明显下降.联合用药组则显著抑制肿瘤的生长和肺表面转移结节数.结论 槲皮素和顺铂对LA795肺腺癌移植瘤的生长和肺结节转移具有协同抑制作用,其机制与其抑制肿瘤内NF-κB和HIF-1a表达相关.     

TNP-470联合CTX对小鼠LA795肺腺癌皮下移植瘤生长的影响

目的 研究血管生成抑制剂TNP-470联合CTX对小鼠L795肺腺癌生长的抑制作用。方法 将40只接种高转移性的LA795肺腺癌细胞T739小鼠随机分成5组：(1)对照组；(2)溶剂对照组；(3)TNP-470组；(4)环磷酰胺(GⅨ)组；(5)TNP-470 CTX组。接种4d后开始用药，用药期间，每隔1d测量皮下移植瘤体积，20d后处死全部小鼠，剥离皮下移植瘤并称重。采用免疫组化和图像分析系统定量检测皮下移植瘤中微血管密度(MVD)、血管生长因子bFGF及增殖核抗原FCNA的表达，用原位凋亡TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡指数。结果 各用药组肿瘤的生长明显受到抑制，而联合用药组抗瘤作用进一步增强，且具有协同作用。CTX组、TNP-470组和联合用药组与对照组相比都能减少bFGF表达；与GTX组相反，TNP-470组肿瘤组织中抗原PCNA的表达与对照组相比差异无显著性。TNP-470组和联合用药组肿瘤组织中的MVD与对照组相比都明显减小，而凋亡指数，各用药组都比对照组明显增高。结论 TNP-470组、CTX组中LA795肺腺癌生长受到明显抑制，两者联合应用具有协同作用。     

TNP-470联合CTX对小鼠LA795肺腺癌皮下移植瘤生长的影响

目的研究血管生成抑制剂TNP-470联合CTX对小鼠L795肺腺癌生长的抑制作用。方法将40只接种高转移性的LA795肺腺癌细胞1739小鼠随机分成5组：对照组、溶剂对照组、TNP-470组、环磷酰胺（CTX）组和TNP-470＋CTX组。接种4d后开始用药，用药期间，每隔1d测量皮下移植瘤体积，20d后处死全部小鼠，剥离皮下移植瘤并称重。采用免疫组化和图像分析系统定量检测皮下移植瘤中微血管密度（MVD）、血管生长因子bFGF及增殖核抗原PCNA的表达，用原位凋亡TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡指数。结果各用药组肿瘤的生长明显受到抑制，而联合用药组抗瘤作用进一步增强，且具有协同作用。CTX组、TNP-470组和联合用药组与对照组相比都能减少bFGF表达；与CTX组相反，TNP-470组肿瘤组织中抗原PCNA的表达与对照组相比无差异显著性。TNP-470组和联合用药组肿瘤组织中的MVD与对照组相比都明显减小；而各用药组的凋亡指数比对照组都明显增高。结论TNP-470组,CTX组中LA795肺腺癌生长受到明显抑制，两者联合应用具有协同作用。     

重组人白介素-2抑制小鼠LA795肺腺癌高转移株肺转移的研究

目的探讨不同剂量的重组人白介素-2抑制LA795肺腺癌高转移株皮下肿瘤生长及肺转移的作用.方法皮下接种LA795肺腺癌高转移株于T739同系小鼠,腹腔注射不同剂量的重组人白介素-2,观察抑制肿瘤生长及肺转移的作用.结果rhIL-2 1.5×105U/d能明显地抑制肿瘤生长.肿瘤体积,瘤体湿重以及肺转移结节数较对照组小和少,抑制率分别达66.03%、76.03%、97.54%(P＜0.01).小剂量rhIL-2 2.6×103U/d,抑制肿瘤生长的抑制率仅为5.13%(P＞0.05),而对肺转移有68.75%的抑制率(P＜0.01).结论大剂量的rhIL-2仅能有效地抑制LA795肺腺癌的肺转移,且能较好地抑制肿瘤生长.小剂量的rhIL-2仅对LA795肺腺癌转移有一定的抑制作用.因此rhIL-2治疗肿瘤应使用大剂量.     

肺腺癌微淋巴管的分布及其临床意义

目的研究肺腺癌组织中血管内皮生长因子C（VEGF-C）、血管内皮生长因子D（VEGF-D）蛋白表达与微淋巴管密度（MLVD）及淋巴结转移之间的关系，探讨癌周淋巴管生成的机制。方法采用逆转录聚合酶链法（RT-PCR），检测VEGF-C、VEGF-D在48例肺腺癌新鲜组织中的表达；采用免疫组织化学法检测肺腺癌组织周边和内部VEGF-C、VEGF D和MLVD蛋白的表达。结果VEGF-C和VEGF-D mRNA在肺腺癌组织中高表达，在正常肺组织低表达（P＜0.01）;VEGF-C、VEGF-D蛋白阳性率分别为70.8%（34/48）和58.3%（28/48），其中肿瘤周边部位的表达显著高于肿瘤中心部位，差异有统计学意义；在VEGF-C、VEGF-D蛋白阳性组，MLVD 显著高于阴性组（P＜0.01），淋巴结转移发生率增加（P=0.042，P=0.012）。结论VEGF-C和VEGF-D的表达可诱导肺腺癌癌周淋巴管的生成，促进肿瘤的经淋巴道转移。     

N-乙酰半胱氨酸对小鼠肺腺癌生长、转移的抑制作用

目的: 探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)对T739小鼠肺腺癌原发瘤形成及自发性肺转移的影响。方法: T739小鼠51只随机分为3组,其中Ⅰ组为对照组,Ⅱ、Ⅲ组分别在每天饮水中加入0.5g/kg、1.0g/kgNAC,72h后皮下接种小鼠LA795肺腺癌细胞(0.2×106个/只),观察小鼠体重变化、皮下肿瘤形成、生长及肺转移情况;采用二硫代对硝苯甲酸显色法测定血中谷胱甘肽(GSH)含量。结果: 接种第4天,肿瘤出现率Ⅱ、Ⅲ组分别为47.1%和38.9%,均明显低于Ⅰ组81.25%(P<0.05)。第22天处死小鼠后皮下肿瘤重量Ⅱ、Ⅲ组明显低于Ⅰ组(P<0.05和P<0.01),且与NAC剂量呈负相关(P<0.01)。各组之间自发性肺转移灶的数目差异均无显著性(P>0.05)。各组小鼠体重实验后均较实验前明显下降(P<0.01),但实验后3组之间体重差异均无显著性(P>0.05)。血GSH含量Ⅰ组明显低于Ⅱ、Ⅲ组(P<0.01)。结论: NAC可明显延长肿瘤形成的潜伏期,抑制原发瘤的生长;NAC对小鼠无明显副作用,是一种安全可靠的制剂。     

重组人血管内皮抑素对Lewis肺癌抑制作用的实验研究

[目的]研究重组人血管内皮抑素对Lewis肺癌的抑制作用。[方法]采用MTT法检测不同剂量不同时间重组人血管内皮抑素对Lewis肺癌细胞增殖的影响;建立Lewis肺癌自发转移模型,将40只荷瘤小鼠随机分为重组人血管内皮抑素小、中、大剂量组(5、15、30 mg.kg-1.d-1)及对照组各10只,连续给药14 d,停药1周后处死小鼠,绘制肿瘤生长曲线,计算原发瘤抑瘤率;利用光镜和透射电镜技术,观察重组人血管内皮抑素对Lewis肺癌细胞以及对荷瘤小鼠血管内皮细胞和肿瘤细胞的形态学改变。[结果]重组人血管内皮抑素对Lewis肺癌细胞增殖的抑制作用与浓度和作用时间呈正相关,400 ng处理72 h后的抑制率为(68.4±1.5)%,与处理24 h后的抑制率(21.9±2.1)%比较,差异有显著性意义(P<0.05)。各给药组肿瘤生长均较对照组缓慢,小、中、大剂量组的抑瘤率分别为28.2%、49.7%、52.8%。各给药组小鼠瘤组织内均有大面积坏死,血管内皮细胞和肿瘤细胞均发生早期凋亡的改变,且具有剂量依赖性。[结论]重组人血管内皮抑素对Lewis肺癌的抑制作用可能表现为对肿瘤细胞和毛细血管内皮细胞的双重抑制作用。     

果王素通过下调NPM表达对小鼠移植肺腺癌生长和转移的抑制作用

目的 通过检测果王素干预的小鼠肺腺癌移植瘤组织中核仁磷酸蛋白(NPM)和mRNA的表达,探讨果王素抑制肺癌生长与转移可能的机制。方法 将32只接种Lewis肺腺癌细胞的C57BL/6J小鼠随机分为对照组、低剂量(60 mg/kg)果王素组、中剂量(120 mg/kg)果王素组和高剂量(240 mg/kg)果王素组4组,每组8只。接种后第4天起,予以不同剂量果王素干预,第24天处死小鼠,剥离移植瘤,测量移植瘤体积和称移植瘤质量,计算肿瘤抑制率,计数小鼠双肺肿瘤转移结节数量,计算肿瘤肺转移抑制率,用免疫组化法和Western blot法检测小鼠皮下移植瘤组织中NPM蛋白的表达水平,用荧光实时定量PCR法测定移植瘤组织中NPM mRNA水平。结果 果王素组与对照组相比,小鼠皮下移植瘤的质量和体积均明显降低,双肺肿瘤转移结节数量也明显减少,小鼠皮下移植瘤组织中NPM蛋白和mRNA表达水平下降,果王素的剂量越高,上述指标差异越明显,各组间差异有统计学意义(均P<0.05)。结论 果王素可能通过下调NPM蛋白及基因表达,抑制小鼠肺腺癌移植瘤生长和转移。     

重组人内皮抑素在酵母中的表达及对人肺腺癌Astc－a－1细胞生长的抑制

OBJECTIVE: To achieve expression of recombinant human endostatin (rhES) in a highly efficient foreign gene expression system, the yeast strain Pichia pastoris, and to evaluate the inhibitory effect of rhES on the growth of nude mouse pulmonary adenocarcinoma cells. METHODS AND RESULTS: The rhES gene was efficiently expressed in the yeast strain, and heparin affinity chromatography yielded highly purified endostatin identified by Western blotting, which proved to significantly inhibit the growth of the ECV-304 cells in vitro and also the growth of the lung adenocarcinoma Astc-a-1 in nude mice. CONCLUSIONS: The rhES gene can be expressed in Pichia pastoris, and has the ability to restrain the growth of ECV-304 cells and lung adenocarcinoma Astc-a-1 in nude mice, showing important potentials for future clinical applications.     

重组人内皮抑素在酵母中的表达及对人肺腺癌Astc-a-1细胞生长的抑制

目的在一种高效外源基因表达系统———毕赤酵母系统表达重组人内皮抑素,评价纯化的内皮抑素对人肺腺癌Astc-a-1细胞生长抑制的作用,为临床研究做进一步的探讨。方法和结果在酵母系统成功表达了重组人内皮抑素(re-combinant human endostatin),经肝素亲和层析得到了较高纯度的内皮抑素,经过筛选的人内皮抑素能够有效抑制ECV-304细胞的增殖,并与对照组有非常显著性差异(P<0.01);动物实验表明其能够有效抑制裸鼠肺腺癌Astc-a-1细胞的生长,统计学分析有非常显著性差异(P<0.01)。结论酵母系统内能够大量表达具有生物学活性的重组人内皮抑素,能在人体外有效抑制裸鼠肺腺癌Astc-a-1的生长,对其应用于临床具有重要意义。     

苏拉明联合紫杉醇对LA795肺腺癌小鼠移植瘤生长的抑制作用及机制

目的观察苏拉明联合紫杉醇对LA795肺腺癌小鼠移植瘤生长的抑制作用,并探讨其作用机制。方法将32只皮下接种LA795肺腺癌细胞T739小鼠随机分为对照组、紫杉醇组、苏拉明组和联合组,每组8只。观察移植瘤生长情况,饲养24 d后处死小鼠,剥离皮下移植瘤,采用免疫组化检测移植瘤组织中血管生成素-2(Ang-2)和微血管密度(MVD)。结果紫杉醇组、苏拉明组和联合组移植瘤的生长明显受到抑制,以联合组生长最慢。对照组移植瘤质量大于其他3组(P<0.05)。紫杉醇组和苏拉明组移植瘤质量大于联合组(P<0.05);苏拉明组、紫杉醇组及联合组的抑瘤率分别为22.638%、25.629%及54.109%,其Q值为1.274(>1.15)。苏拉明组和联合组移植瘤组织内Ang-2的表达均低于对照组和紫杉醇组(P<0.05)。对照组移植瘤组织内MVD高于其他3组(P<0.05);紫杉醇组或苏拉明组移植瘤组织内MVD高于联合组(P<0.05)。移植瘤组织中Ang-2表达、MVD与移植瘤质量均呈正相关(r=0.468、0.526,P<0.01)。结论苏拉明可下调肿瘤组织Ang-2表达,抑制肿瘤内微血管形成,与紫杉醇联合对LA795肺腺癌小鼠皮下移植瘤生长发挥协同抑制作用。     

肺积方抗小鼠肺癌转移

目的：观察肺积方对小鼠肺癌转移的疗效。方法：采用小鼠转移瘤模型,24只C57BL/6小鼠分为模型组、顺铂组和肺积方组,每组8只。模型组以生理盐水0.3ml灌胃,肺积方组予肺积方煎剂（4g/ml）0.3ml灌胃,1次/d,顺铂组予顺铂（0.5mg/ml）0.52ml腹腔注射,1次/3d。干预20d后,称取小鼠体质量、瘤质量和肺质量,玻片计数法计数肺部转移灶的数目。结果：顺铂组小鼠的体质量低于模型组和肺积方组（P〈0.01）,而肺积方组体质量最大;顺铂组和肺积方组的瘤质量低于模型组（P〈0.01）;顺铂组和肺积方组小鼠肺部转移灶数目比模型组少（P〈0.01）。结论：肺积方可以抑制肿瘤生长,减少肺部转移瘤的个数,并具有保持小鼠体质量的作用。