蛋白激酶C和Na+/H+交换在EGF促肝癌细胞生长中的作用

目的研究蛋白激酶 C 和 Na~ /H~ 交换在表皮生长因子(EGF)促人肝癌细胞生长中的作用.方法采用无血清 RPM11640培养基培养人肝癌细胞SMMC7721,给以 EGF 10~(-9)mol·L~(-1),以~3H-7hymidine(~3H-TdR)掺入法,检测肝癌细胞 DNA 合成的速率.并分别用蛋白激酶 C 阻滞剂 H-7 50μml·L~(-1)和 Na~ /H~ 交换阻滞剂amiloride 0.1 mmol·L~(-1)阻断 EGF 对肝癌细胞的促生长作用.结果 EGF 10~(-9)mol·L~(-1)可显著促进肝癌细胞的生长,掺入值为(1880±281)·min~(-1)·孔~(-1),与对照组掺入值(1353±175)·min~(-1).孔~(-1)比较,差异有显著性(P<0.05).单纯 H-7或amiloride,掺入值分别为(1179±150)·min~(-1)·孔~(-1)和(1392±152)·min~(-1)·孔~(-1),与对照组差异无显著性(P>0.05),对肝癌细胞的生长无明显影响;而 H-7,amiloride 与 EGF 合用,掺入值分别为(1241±147)·min~(-1)·孔~(-1)和(1380±189)·min~(-1)·孔~(-1),与 EGF 组相比差异有显著性(P<0.01,P<0.05).结论 EGF 能显著促进肝癌细胞的生长,蛋白激酶 C 和 Na~ /H~ 交换在 EGF 的促肝癌细胞生长中起关键作用.     

钙通道和Na+/H+交换在表皮生长因子促肝癌细胞生长中的作用

目的许多生长因子如表皮生长因子(EGF),与肿瘤的发生密切相关.EGF与表皮生长因子受体(EGFR)结合,通过一系列的信息传导,导致肝癌细胞的增生.但受体后的信息传导机制尚不清楚.本实验探讨酪氨酸激酶、蛋白激酶C、Na+/H+交换、钙调蛋白和电压依赖性钙通道在EGF促肝癌细胞生长中的作用.方法本研究于无血清RPMI1640中培养肝癌细胞SMMC7721,采用3H-Thymidine(3H-TdR)掺入的方法,检测肝癌细胞DNA合成速率,研究酪氨酸激酶、蛋白激酶C、Na+/H+交换、钙调蛋白和电压依赖性钙通道在EGF促肝癌细脆生长中的作用.结果EGF 10-9M对肝癌细脆的生长有极显著促进作用,与对照组比较差异有显著意义(P＜0.05),酪氮酸激酶阻滞剂Genistein对EGF的促肝癌细胞生长作用具有极显著抑制作用(P＜0.001).钙调蛋白阻滞剂W-7、蛋白激酶C阻滞剂H-7和Na+/H+交换阻滞剂amiloride对EGF的促肝癌细胞生长作用具有显著抑制作用(P＜0.001,P＜0.01,P＜0.05),而对基础状态细胞的3H-TdR掺入值无显著影响(P＞0.05).电压依赖性钙通道阻滞剂Varapamil对BGF的促肝癌细胞生长作用无显著抑制作用(P＞0.05),对基础状态细胞的3H-TdR掺入值亦无显著影响(P＞0.05).结论结果显示,酪氨酸激酶、蛋白激酶C、Na+/H+交换及依赖钙-钙调蛋白途径在BGF的作用中起关键作用.电压依赖性钙通道与EGF的作用无关.     

葡萄糖转运蛋白对大鼠肾小球系膜细胞己糖胺通路的影响

目的探讨己糖胺通路(HBP)在葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)基因转染系膜细胞功能改变中的作用.方法利用逆转录病毒载体建立GLUT1基因转染的大鼠系膜细胞,以β-半乳糖苷酶转染细胞(MCLacZ)为对照.用2-脱氧-3H-葡萄糖(2-DG)测定细胞葡萄糖摄入,流式细胞仪分析细胞表型和纤维连接蛋白(FN)的合成,采用比色法测定HBP限速酶--谷氨酰胺6-磷酸果糖转氨酶(GFAT)的活性,RT-PCR检测细胞GFAT基因的表达.结果 MCGT1的2-DG摄入率明显高于MCLacZ[(741.0±60.5)dpm/μg蛋白质 vs (92.2±9.0)dpm/μg 蛋白质,P＜0.01],动力学分析发现MCGT1的Vmax是MCLacZ的3.7倍,而两者Km值无明显差别.MCGT1的GFAT活性明显高于MCLacZ[(3.25±0.25)OD365·μg蛋白质-1·30 min-1·10 vs (1.15±0.16)OD365·μg蛋白质-1·30 min-1·     

钙调蛋白和电压依赖性钙通道在EGF促肝癌细胞生长中的作用

目的:许多生长因子如表皮生长因子(EGF)与肿瘤的发生密切相关。EGF与表皮生长因子受体(EGFR)结合,通过一系列的信息传导,导致肝癌细胞的增生。但受体后的信息传导机制尚不清楚。本实验探讨酪氨酸激酶、钙调蛋白和电压依赖性钙通道在EGF促肝癌细胞生长中的作用。方法:本研究于无血清RPMI 1640中培养肝癌细胞SMMC7721。采用3H-Thymidine(3H-TdR)掺入的方法,检测肝癌细胞DNA合成速率,研究酪氨酸激酶、钙调蛋白和电压依赖性钙通道在EGF促肝癌细胞生长中的作用。结果:EGF10-9M对肝癌细胞的生长有极显著促进作用,与对照组比较差异有显著意义(P<0.05)。酪氨酸激酶阻滞剂Genistein对EGF的促肝癌细胞生长极显著抑制作用(P<0.001)。钙调蛋白阻滞剂W-7对EGF的促肝癌细胞生长具有极显著抑制作用(P<0.001),而对基础状态细胞的H-TdR掺入值无显著影响(P>0.05)。电压依赖性钙通道阻滞剂Varapamil对EGF的促肝癌细胞生长无显著抑制作用(P>0.05),对基础状态细胞的3H-TdR掺入值亦无显著影响(P>0.05)。结论:结果显示,酪氨酸激酶及依赖钙-钙调蛋白途径在EGF的作用中起关键作用,电压依赖性钙通道与EGF的作用无关。     

老年心绞痛患者细胞粘附分子测定及调脂治疗观察

目的探讨老年心绞痛患者冠状动脉粥样病变炎症反应及调脂干预对其产生的影响. 方法测定60例老年心绞痛患者和30例健康老人的血清P-选择素、氧化修饰低密度脂蛋白(OX-LDL)、一氧化氮(NO)水平并对病例组给予辛伐他汀调脂治疗. 结果老年心绞痛组血清P-选择素(1.92±0.88)mg·L-1、OX-LDL(1.54±0.56)mg·L-1比对照组(0.90±0.32)mg·L-1、(0.76±0.15)mg·L-1明显增高,NO水平老年心绞痛组为(68.52±13.41)mmol·L-1,对照组(119.88±26.85)mmol·L-1,明显降低(P<0.05～0.01);相关分析发现P-选择素与OX-LDL呈显著正相关(r=0.65,P<0.01),与NO呈显著负相关(r=-0.72,P<0.01).调脂治疗后病例组血清P-选择素、OX-LDL水平明显降低(1.26±0.38)mg·L-1、(0.92±0.33)mg·L-1,P<0.01,NO水平明显回升(113.26±27.75)mmol·     

Ion transport and metabolic effects of amiloride in canine tracheal mucosa

We studied the interaction between Cl transport and the Na entry step at the luminal side of the canine tracheal epithelium by testing the effects of amiloride, an inhibitor of apical membrane Na conductance. The tracheal mucosa was mounted as a flat sheet in Ussing chamber and bathed with Krebs-Henseleit solution. In six experiments²²Na and³⁶Cl transepithelial fluxes were determined. Under basal conditions net Na absorption was 0.45±0.10 μEq/cm²·h ( ±SE) and declined to 0.07±0.08 after 0.1 mM amiloride was added to the mucosal bath. No changes were found in Cl fluxes. Addition of amiloride (0.1 mM) to the luminal bath usually caused a 10–20% decline in short circuit current (SCC). However, these alterations in SCC were often transient when the bathing media contained Cl. In contrast, in the absence of Cl the inhibition of SCC by 0.01 mM mucosal amiloride was predictable, large, and stable (ΔSCC=−21±6 μA/cm²,N=5). Addition of higher concentration of amiloride (2–4 mM) to the submucosal side (N=6) caused significant decline in net Cl secretion from 1.67±0.37 to 0.06±0.25 μEq/cm² · h (P<0.02). These changes were probably caused by inhibition of tissue metabolism since 2 mM amiloride caused a 73% fall in tissue oxygen consumption. Ouabain (0.1 mM), which inhibits Na-K-ATPase and therefore both Na and Cl transport, reduced tissue O₂ consumption by 34%. The Na entry step at the luminal membrane is amiloride sensitive, but does not appear to be crucial for the maintenance of the Cl secretory process. Luminal membrane conductance appears to be primarily a Cl-conductance. About one third of tissue O₂ demands are utilized for transport of Na and Cl. This work was supported by the Medical Research Service of the Veterans Administration and by Eleanor B. Pillsbury Foundation, University of Illinois     

表皮生长因子促细胞增殖的量-效关系及对萎缩性胃炎大鼠胃黏膜的保护作用

目的探讨表皮生长因子(EGF)促细胞增殖的剂量-效应关系及对萎缩性胃炎(CAG)大鼠胃黏膜增生作用的影响。方法用不同浓度EGF对培养的人羊膜细胞进行不同时间段刺激, MTT法和蛋白印迹法(Western blot)检测细胞增殖情况及细胞外信号调节蛋白激酶(Erk1／2)变化结果;建立CAG大鼠模型,对CAG大鼠皮下注射EGF,12周后观察大鼠胃黏膜病理变化。结果剂量-时间-效应关系示EGF浓度10μg／L第3天时促细胞增殖率最高(42．4％,P<0．01),Western blot结果示EGF浓度10～60μg／L时磷酸化Erk1／2活性显著升高;动物实验示EGF治疗组胃黏膜腺体排列整齐规则,炎性细胞极少,明显好于对照组,治疗组(rhEGF和羊EGF)胃黏膜增殖细胞核抗原(PCNA)表达阳性的宽度分别为(77．70±4．16)μm和(75．60±2．92)μm,较对照组(54．40±4．54)μm明显增加(P<0．01)。结论EGF促细胞增殖及激活Erk1／2通路有明显的剂量或时间依赖性作用,EGF对SD大鼠萎缩性胃黏膜有保护性促增生作用。     

替米沙坦对OK细胞Na+-K+ ATP酶活性的影响

目的探讨血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(ARB)替米沙坦和血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)苯那普利对负鼠近端小管上皮细胞(OK细胞)Na+-K+-ATP酶活性的影响.方法培养的OK细胞采用低渗方法制备细胞膜悬液,使用BCA-100蛋白质定量测定试剂盒测定膜蛋白;Na+-K+ ATP酶活性采用孔雀绿比色分析法测定释放的无机磷(Pi)含量,培养液中分别加入血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)、Ang Ⅱ+血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂替米沙坦(Telmisartan)、Ang Ⅱ+血管紧张素转换酶抑制剂苯那普利(Benazepril),观察它们对OK细胞Na+-K+-ATP酶活性的影响.结果 (1)培养液中加入10-10 mol/L Ang Ⅱ组与对照组相比,OK细胞Na+-K+-ATP酶活性明显上升.(0.0972±0.0080 vs 0.0896±0.0065 μmol·L-1·mg pro-1·h-1, P<0.05)(2) 当培养液中同时加入10{10 mol/L Ang Ⅱ和10-9mol/L Telmisartan,与单加入10-10mol/L AngⅡ组相比,OK细胞Na+-K+-ATP酶活性明显降低.(0.0623±0.0053 vs 0.0972±0.0080 μmol·L-1·mg pro-1·h-1,P<0.05)(3)当培养液中同时加入10-10 mol/L AngⅡ和10-9 mol/L Benazepril,与单加入10-10 mol/L AngⅡ组相比,OK细胞Na+-K+-ATP酶活性无明显变化.(0.1027±0.0166 vs 0.0972±0.0080 μmol·L-1·mg pro-1·h-1, P>0.05).结论血管紧张素Ⅱ作为一种生长因子,不仅能刺激细胞增殖,又能调节近端小管的离子转运,增加Na+-K+-ATP酶活性;替米沙坦能抑制血管紧张素Ⅱ引起的OK细胞Na+-K+-ATP酶活性增加,而苯那普利则无此作用.     

内皮素对心脏细胞DNA和蛋白合成的作用

目的观察内皮素-1(ET-1)对心脏心肌细胞和成纤维细胞DNA和蛋白合成作用.方法采用胰酶消化法培养新生Sprague-Dawley(SD)大鼠心脏心肌细胞和成纤维细胞,以3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)、3H-亮氨酸(3H-Leu)掺入法测定两种细胞DNA、蛋白合成,Bradford法测两种细胞总蛋白含量,逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)法测心肌细胞心钠素(ANP)mRNA的表达.结果对于心肌细胞,ET-1(10-9～10-7mol/L)显著促进3H-TdR掺入率、较对照组分别增加0.31±0.079(P＜0.01)、1.193±0.267(P＜0.001)、1.336±0.278(P＜0.001),3H-Leu掺入率增加0.223±0.058(P＜0.01)、1.054±0.202(P＜0.001)、1.074±0.204(P＜0.001),呈剂量依赖性,ANPmRNA表达明显增加;对于成纤维细胞,ET-1(10-8 mol/L)促进3H-TdR掺入率,较对照组增加0.248±0.02(P＜0.05)、3H-Leu掺入率较对照组增加0.434±0.041(P＜0.01).结论 ET-1促进心肌细胞肥大和心脏成纤维细胞增殖,且对心肌细胞的作用强于对成纤维细胞的作用.提示ET-1促心肌肥厚主要使促进心肌细胞肥大,对间质纤维化作用较弱.     

高血压病患者红细胞Mg~(2 )/Na~ 交换速率与血压相关性的研究

目的　探讨高血压病 (EH)患者血浆镁浓度 (PMg)、红细胞镁含量 (EMC)和红细胞Mg2 /Na 交换速率与血压的相关性。方法　用原子吸收光谱火焰法测定 5 3例EH患者PMg、EMC ,以及加镁负荷后红细胞在含钾或钠介质中 5h的时间 镁外流 ,并计算总镁外流最大速率 (VTmax)、非钠依赖性镁外流最大速率 (VNImax)和钠依赖性镁外流最大速率 (VNDmax)。结果　 (1)EH组PMg与对照组比较 ,差异无显著性 [(86 8 2± 5 6 5 )、(86 3 7± 5 0 8) μmol/L],EMC明显低于对照组 [(2 0 7± 0 0 5 )、(2 16± 0 0 4)mmol/L ,P <0 0 5 ],而VTmax和VNDmax明显高于对照组 [分别为 (30 8 3± 19 7)、(2 73 5±16 8) μmol·L-1·h-1,(15 3 5± 17 4)、(96 8± 13 2 ) μmol·L-1·h-1,P <0 0 5 )。VNImax两组间差异无显著性 [(16 9 5± 2 1 4)、(172 3± 15 3) μmol·L-1·h-1,P >0 0 5 ]。 (2 )EH组VNDmax与EMC呈明显正相关(r=- 0 876 4,P <0 0 0 1) ,而对照组无明显相关。 (3)EH组EMC与血压呈显著正相关 (收缩压r =0 5 5 3,P =0 0 46 ;舒张压r=- 0 42 6 ,P =0 0 2 5 ) ,同时VNDmax与舒张压呈显著正相关 (r=0 4986 ,P =0 0 41)。结论　EH患者红细胞VNDmax明显增高 ,导致EMC降低 ,在EH的发生和发展中可能起一定