白血病骨髓瘤单抗对白血病细胞株细胞内环核苷酸的影响

本文应用放射免疫测定法，检测了单克隆抗体作用于相应白血病瘤细胞后细胞内ｃＡＭＰ，ｃＧＭＰ的含量变化。结果发现：抗原、抗体比例在８０：１时经ＭｃＡｂ作用１６－２４ｈ后，瘤细胞内ｃＡＭＰ含量明显高于对照组，ｃＧＭＰ含量明显低于对照组（Ｐ＜０００２－０００１）。从而提示：ＭｃＡｂ可通过对细胞膜作用，调控细胞内ｃＡＭＰ和ｃＧＭＰ的水平。本文还对ＭｃＡｂ作用深度及作用时间进行了探讨。     

应用蛋白质芯片检测白血病细胞株耐药相关蛋白的表达

目的利用低密度蛋白质芯片检测白血病细胞株耐药相关蛋白的表达。方法选择与白血病耐药密切相关的11种蛋白为检测指标,制备低密度蛋白质芯片,对人白血病细胞株HL-60、K562、Jurkat及耐药细胞株HL-60/VCR、K562/ADM、人Burkitt淋巴瘤Raji细胞株细胞裂解物进行检测。结果髓系白血病耐药细胞株P-糖蛋白(P-gp)、肺耐药蛋白/主要穹窿蛋白(LRP/MVP)、谷胱甘肽-硫-转移酶-π(GST-π)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)、黏附分子淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)表达高于非耐药细胞株,而淋巴系白血病细胞株P-糖蛋白及趋化因子受体CXCR4均有高表达。结论检测白血病耐药相关蛋白的蛋白质芯片可发现不同的白血病细胞株的耐药相关蛋白表达的差异,联合检测多种耐药相关蛋白有助于更好的研究白血病的耐药机制。     

人类白血病病毒Ⅰ型致成人T细胞白血病/淋巴瘤的研究进展

现已证实人类白血病病毒Ⅰ型（human T-cell leukemia virus Type-1,HTLV-Ⅰ）为成人T细胞白血病/淋巴瘤（adult T-cell leukemia/lymphoma,ATLL）的致病病原,在过去的几年中,人们对该肿瘤进行了大量的研究工作并且发现了一些分子遗传学改变,包括结构基因gag,pol,pro和env,调节基因tax和rex以及最近在pX区域的负股发现的hbz基因和Fra-2等。随着人们对成人T细胞白血病/淋巴瘤相关基因功能的不断探索,该肿瘤的发病机制会更加明确,其临床治疗也会得到进一步的改善。本文对HTLV-Ⅰ及成人T细胞白血病/淋巴瘤近年来的分子遗传学研究结果、临床特征、分子机制及遗传倾向的关系作一介绍。     

去甲斑蝥素诱导人T淋巴细胞白血病细胞株凋亡

应用TUNEL标记、DNA凝胶电泳以及光镜技术探讨去甲斑蝥素诱导人T淋巴细胞白血病细胞株（6T－CEM）凋亡规律。实验表明：0.625-5mg/L剂量的去甲斑蝥素作用6T－CEM细胞24h及10mg/L剂量的去甲斑蝥素作用6T－CEM细胞18h，台盼兰染色阳性率均在8.5%以下；10－80mg/L去甲斑蝥素作用6T－CEM细胞24h明显抑制6T－CEM细胞生长。TUNEL标记显示：10－40mg/L剂量的去甲斑蝥素作用6T－CEM细胞24h及10mg/L剂量的去甲斑蝥素作用6T－CEM细胞超过18h后即出现典型的细胞凋亡特征。一定剂量范围内的去甲斑蝥素可在直接杀伤作用较小的情况下明显诱导6T－CEM细胞凋亡，不会因细胞坏死而引起炎症反应，这对于去甲斑蝥素应用于临床将有十分重要意义。     

亚硒酸钠诱导的人白血病耐药细胞株MR2的生长抑制及凋亡

本文以人急性髓系白血病M3型耐药细胞株（抗全反式维甲酸ATRA）MR2为研究对象，通过细胞生长增殖分析，细胞凋亡相关指标的检测，细胞内活性氧自由基含量的测定等，探讨亚硒酸钠对MR2细胞的凋亡诱导作用及其作用机制。结果发现：（1）亚硒酸钠浓度大于10μmol/L时对细胞株有明显的生长抑制作用，大于20μmol/L时有明显的凋亡作用，并呈剂量时间依赖性增加。40μmol/L的亚硒酸钠作用细胞60h后，可使凋亡百分率超过80％；（2）亚硒酸钠作用细胞一定时间后可使胞内自由基水平增加，并在24h时出现最大值，以上结果表明亚硒酸钠对MR2细胞的生长抑制及凋亡诱导作用可能是通过氧化应激实现的。     

分泌抗急性非淋巴细胞白血病M2型单克隆抗体细胞株的建立及其特异性

应用细胞杂交瘤技术建立了分泌抗急性非淋巴细胞白血病M2型单克隆抗体1D1、1C2和1D6细臆株，连续传代11个月，稳定地分泌单克隆抗体。用间接免疫荧光方法检测，这三株细胞分泌的单克隆抗体与急性非淋巴细胞白血病M2型病人的白血病细胞呈阳性反应；与急性非淋巴细胞白血病M1．M3、M4、M5型病人白血病细胞呈阴性反压；与慢性粒细胞白血病、慢粒急变，急性淋巴细胞白血病病人白血病细胞呈阴性反应；与正常人白细胞也呈阴性反应．说明建立的细胞株分泌的单克隆抗体具有型的特异性。     

抗肾综合征出血热病毒人杂交瘤细胞株的无血清培养

用于治疗的人单克隆抗体（IllAl，）不仅要有一定的数量，而且要有较高的纯度。体外大规模地培养杂交瘤细胞也许能够保证其数量，但因在培养基中要补充胎牛血清和其它蛋白成分“’，可使后续rll．m－一的纯化相当困难。所以，人们一直在研究人杂交瘤细胞的无血清培养技术，试图建立一种在无血清条件下，能大量培养人杂交瘤细胞的方法。本文中我们将1株抗肾综合征出血热病毒（HFRSV）人杂交瘤细胞2D5，用无血清培养，取得了一定的结果，现报道如下。l材料和方法1．l人杂9们细胞2D5细胞株为本室建立，可分泌抗HngSV人mAnIgG（‘’。互．…     

树突状细胞细胞株的研究进展

树突状细胞是体内抗原提呈功能最强的细胞 ,在肿瘤的免疫治疗中占有重要的地位 ,正成为免疫学领域研究的热点 ,但由于生存期短和难以大量的扩增等原因 ,限制了其抗原提呈功能及表达的表面分子的深入研究。为提供合理的研究材料 ,目前国外已成功的培养出大量增殖的树突状细胞株 ,本文综述了已建立的树突状细胞株并介绍了其主要培养方法和特性。     

EB病毒感染对鼻咽癌细胞生长和凋亡的影响

目的:探讨EB病毒(EBV)感染对鼻咽癌细胞系生长和细胞凋亡的影响。方法:用EBV直接感染人鼻咽癌细胞系CNE1;用免疫组化(LSAB)法检测EBV-LMP1和bcl-2蛋白的表达;用MTT法测定鼻咽癌细胞系的生长能力;用流式细胞术和TUNEL法检测癌细胞凋亡。结果:感染EBV的鼻咽癌细胞系(E-CNE1)的EBV-LMP1表达阳性,生长能力较未感染EBV的CNE1明显增强(P＜0.01),2种鼻咽癌细胞系均无凋亡发生,而均仅有2%~3%的细胞表达bcl-2蛋白。结论:EBV感染和LMP1表达可促进鼻咽癌细胞生长,但对鼻咽癌细胞的bcl-2表达和细胞凋亡无影响。     

P53基因对K562细胞增殖的影响

目的 观察恢复K562细胞的p53蛋白功能后该细胞的生物学行为的改变，探索用野生型p53基因治疗白血病的可能性。方法 以K562细胞为研究对象，电穿孔法转导野生型p53基因，RT-PCR和免疫细胞化学方法检测p53基因的表达，^3H-TdR掺入法检测细胞增殖，用流式细胞仪分别以TUNEL、annexin-V、细胞周期检测细胞的凋亡情况和细胞周期分布情况。结果 转染p53基因的K562细胞，出现明显细胞周期G1期停滞，增殖抑制率为24．17％，但用TUNEL、annexin-V和亚二倍体峰检测未发现与未转染p53基因组有凋亡细胞比例差异。结论 P53基因对K562细胞有一定的治疗效应，但不能诱导其发生凋亡。     

以人B淋巴细胞株Raji、人早幼粒白血病细胞株HL60为底物检测抗细胞膜DNA抗体在系统性红斑狼疮中的诊断价值

目的 比较以人B淋巴细胞株Raji、人早幼粒白血病细胞株HL60为底物检测抗细胞膜DNA抗体(抗cmDNA抗体)在系统性红斑狼疮(SLE)中的诊断价值.方法 分别以人B淋巴细胞株Raji、人早幼粒白血病细胞株HL60为底物,用间接免疫荧光法(IIF)检测306例SLE患者、192例疾病对照组患者、50例健康对照组血清中的抗cmDNA抗体.结果 以人B淋巴细胞株Raji为底物检测抗cmDNA抗体在306例SLE患者中阳性率为72.5%.而在脊柱关节病、类风湿关节炎、原发干燥综合征和其他结缔组织病中的阳性率分别为5.8%、10.0%、13.3%、15.0%.以人早幼粒白血病细胞株HL60为底物检测抗cmDNA抗体在306例SLE患者中阳性率为76.1%.而在脊柱关节病、类风湿关节炎、原发干燥综合征和其他结缔组织病中的阳性率分别为9.6%、11.1%、20.0%、22.5%.两种细胞为底物检测抗cmDNA抗体在健康对照组中阳性率均为0.抗cmDNA抗体阳性率在SLE组明显高于疾病对照组及健康对照组(P<0.01).以Raji及HL60两种细胞株为底物检测SLE患者抗cmDNA抗体,敏感性分别为72.5%和76.1%,特异性分别为91.7%和86.8%,差异均无统计学意义(P>0.05).Raji及HL60细胞培养、冻存及复苏方法相似,但Raji细胞较HL60细胞更易复苏.在荧光显微镜下观察,Raji细胞比HL60细胞表达效果更好.结论 抗cmDNA抗体是一种诊断阳性率较高的SLE血清学标记物之一.选择Raji细胞株为底物检测SLE患者的抗cmDNA抗体较HL60细胞株更有优势.

Abstract：

Objective To compare the significance of DNA-associated autoantibodies to cell membrane(cmDNA)in systemic lupus erythematosus(SLE)detected with indirect immunofluorescence on human B lymphoma cell line Raji and pmmyelocytic line HL60.Methods Indirect immunofluorescence assay both on cell line Raji and HL60 was used to measure anti-cmDNA antibodies in sera of 306 SLE patients.192 patients with other rheumatic diseases and 50 healthy controls.Results Indirect immunofluorescence assay on cell line Raji was used to measure anti-cmDNA antibodies.72.5% SLE and 10.4% other rheumatic diseases were positive for anti-cmDNA,but negative in 50 blood donors(P<0.01).Indirect immunofluorescence assay on cell line HL60 was used to measure anti-cmDNA antibodies,76.1% SLE and 16.7% other rheumatic diseases were positive for anti-cmDNA,but negative in 50 blood donors(P<0.01).The sensitivity of anti-cmDNA were 72.5%and 76.1%,respectively.The specificity of anti-cmDNA was 91.7% and 86.8%,respectively.There was no significant difference in sensitivity and spocificity(P>0.05).The methods of culture,freeze and resuscitation on the two cells were similar.but cell line Raji was easier to resuscitate than cell line HL60.Observing with fluorescence microscope.we find that cmDNA was expressed on the both cells and the staining was stronger on cellline Raji than HL60.Conclusion Anti-cmDNA antibody has high positivity which is one of the most valuable marker in the diagnosis of SLE.We recommend to measure anti-cmDNA antibodies with indirect immunofluorescence assay on cell line Raji rather than HL60.     

mPer2对小鼠B16黑色素瘤细胞增殖作用的影响

目的:研究mPer2对小鼠黑色素瘤细胞B16增殖作用的影响。方法:将构建好的mPer2全长表达质粒(pcDNA3.1-mPer2)转染入小鼠黑色素瘤细胞B16中,并以pcDNA3.1空质粒转染为对照,通过平板克隆形成实验和MTT法检测两组细胞的增殖情况。结果:平板克隆形成实验和MTT法检测结果均显示Period2转染组小鼠黑色素瘤细胞B16较空质粒对照组明显降低。结论:mPer2的高表达能显著性的抑制小鼠黑色素瘤细胞B16的生长。     

EB病毒感染对鼻咽癌细胞生长和凋亡的影响

目的:探讨EB病毒(EBV)感染对鼻咽癌细胞系生长和细胞凋亡的影响。方法:用EBV直接感染人鼻咽癌细胞系CNE1;用免疫组化(LSAB)法检测EBV-LMP1和bcl-2蛋白的表达;用MTT法测定鼻咽癌细胞系的生长能力;用流式细胞术和TUNEL法检测癌细胞凋亡。结果:感染EBV的鼻咽癌细胞系(E-CNE1)的EBV-LMP1表达阳性,生长能力较未感染EBV的CNE1明显增强(P<0.01),2种鼻咽癌细胞系均无凋亡发生,而均仅有2%~3%的细胞表达bcl-2蛋白。结论:EBV感染和LMP1表达可促进鼻咽癌细胞生长,但对鼻咽癌细胞的bcl-2表达和细胞凋亡无影响。     

胞苷环3′,5′一磷酸对T原淋巴细胞株JM的抑制作用

在从S至G_2/M期和从G_1至S期的过程中,3′,5′-cCMP能抑制用胸腺嘧啶同步化的JM-T原淋巴细胞株细胞的增殖。而5-CMP,5-dCMP和2′,3′-cCMP却能在S期促进细胞生长。对于非同步化生长的JM细胞,3′,5′-cCMP也显示出抑制作用。     

人胰腺混合性导管-内分泌癌细胞系的建立

目的 建立胰腺混合性导管－内分泌癌细胞系。方法 从一轩性患者胰头切除的肿瘤组织取材,切割为细小的组织块接种于裸鼠皮下,经过裸鼠的两次过渡后,再取第二裸鼠皮下的肿瘤组织,切割为非常小的组织块,用含有１０％胎牛血清的培养基接种至培养瓶进行体外培养。结果 该细胞系目前已传至５５代。这一细胞系同时具有内、外分泌胰腺癌的形态特征,并得到了免疫组化标记和组织化学染色的证实。电镜下,部分细胞内含有神经分泌颗粒。     

巨噬细胞集落刺激因子受体在白血病细胞系中的表达和作用

目的 探讨巨细胞集落刺激因子受体（M－CSF－R）在人白血病细胞系中的表达及其作用。方法 采用ABC免疫酶标技术,间接免疫荧光染色,流式细胞计和蛋白免疫印迹研究了4株人白血病细胞系（J6-1,J6-2)来源于人粒－单型白血病,HL－60为来源于人急性粒细胞白血病的髓样细胞系,K562为来源于人慢性白血急变期胸水的髓样细胞系）和正常人外周单个核细胞及正常人脐带血单个核细胞M－CSF－R的分布,表达,分子大小及其作用。结果 正常人外周血单个核细胞未见M－CSF－R的表达,经PHA刺激后有低水平的表达;4株人白血病细胞系都高表达M－CSF－R,分布于细胞膜,细胞质和细胞核,J6－1,J6－2,K562和HL－60细胞质和胞核M－CSF－R（M－CSF－cnR)平均阳性率分别为52．3％,44．3％,28．0％,65．3％;胞膜M－CSF－R（M－CSF－mR)阳性率分别为78．9％,72．0％,54．9％,58．0％;高于正常人外周血单个核细胞的表达水平。HL－60细胞质和胞核中有一种相对分子质量为120000的M－CSF－R分子;4种白血病细胞表达的M－CSF－cnR的半衰期分别高于正常人脐带血单个核细胞经PHA诱导表达的M－CSF－cnR的半衰期;J6－1,J6－2,HL－60细胞表达的M－CSF－mR的半衰期亦明显延长。抗M－CSF－R单抗和人重组的M－CSF－R可溶性受体均能使4种白血病细胞的增殖阻断在G0／G1期,并能抑制其在软琼脂上形成集落的能力。结论 M－CSF－R在人白血病细胞系的表达呈异质性;胞内M－CSF－R的蓄积可能是白血病细胞M－CSF－R降解速率下降的结果,也可能是白血病细胞增殖的内源信号;M－CSF－R介导的信号是HL－60细胞增殖的重要和必要信号。     

靶向APRIL基因小干扰RNA对鼠肠癌细胞生长与迁移能力的影响

目的 制备并筛选靶向鼠结直肠癌细胞株CT-26增殖诱导配体(APRIL)基因小干扰RNA(siRNA),通过检测APRIL siRNA抑制肠癌细胞生长及迁移等指标,为体内递送APRIL siRNA靶向治疗小鼠结直肠癌原位模型奠定基础.方法 分别设计、合成4种不同位点的APRIL siRNA,同时以合成无序序列作为阴性对照,再用LipofectAMINE 2000转染高表达APRIL的鼠结直肠癌细胞株CT-26,荧光显微镜下计数评价6-FAM标记的APRIL siRNA转染效率与筛选转染浓度;FQ-RT-PCR检测APRIL mRNA水平,Western印迹分析APRIL蛋白表达,筛选沉默效率最高的APRIL siRNA片段;细胞损伤修复法检测APRIL siRNA抑制肠癌细胞迁移的能力;CCK-8(cell counting kit-8)法检测细胞增殖情况;RT-PCR检测基质金属蛋白酶MMP-2及TIMP-1 mRNA水平.结果 4种不同siRNA瞬时转染CT-26细胞后APRIL mRNA和蛋白表达有明显差别(P＜0.05).APRIL siRNA组与对照组相比,细胞生长与迁移能力明显减弱(P＜0.05),MMP-2及TIMP-1 mRNA水平均有显著性差别(P＜0.05).结论 成功筛选靶向鼠结肠癌细胞株CT-26增殖诱导配体APRIL siRNA,其中APsi737敲低效率可达到90%.靶向APRIL基因小干扰RNA可有效降低肠癌细胞的生长与转移能力,可能与MMP-2及TIMP-1的调节有关.可用于后续的靶向治疗结直肠癌研究.

Abstract：

Objective To construct and screen siRNA targeting a proliferation-inducing ligand (APRIL) gene in a mouse colorectal cancer celline, CT-26. To investigate the effects to the cell growth and migrant capacity of CT-26 after knockdown APRIL gene, lay the foundation for molecular targeted therapy to colorectal cancer. Methods Four pairs of APRIL siRNA were designed and chemically synthesized. And disorder sequences were synthesized as a negative control. These sequences were transfected with LipofectAMINE 2000 into CT-26 cells, which high-expressed APRIL gene. The transfection efficency rate of 6-FAM labelled control siRNA was detected by fluorescence microscope. The inhibition effectiveness of APRIL mRNA and protein was analyzed by FQ-RT-PCR and Western blot, respectively. Cell proliferation activity was analyzed by cell counting kit-8, cell migration capacity was detected by the repair of cell damage, and MMP-2 together with TIMP-1, two important regulatory genes in cell metastasis, were measured by RT-PCR.Results The different kinds of APRIL siRNA effectively suppressed the level of APRIL mRNA and the protein expression in CT-26 (P ＜ 0.05 ). Cell proliferation and metastasis ability were repressed after APRIL siRNA transfection( P ＜ 0.05 ), compared with random siRNA control and nontransfected control. The mRNA levels of MMP-2 and TIMP-1 genes wre significantly altered among APRIL siRNA groups and two control groups ( P ＜ 0.05). Conclusion We have constructed and screened a kind of siRNA (APsi737) targeting APRIL gene in a mouse colorectal cancer cell line, CT-26. APRIL siRNA can effectively inhibit the cell growth and migration capacity, maybe be regulated by MMP-2 and TIMP-1.     

E-cadherin表达缺失在白血病细胞行为中的作用

目的:确定上皮-钙黏蛋白(E-cadherin)表达缺失在白血病细胞行为中的作用,最终阐明E-cadherin介导的骨髓微环境与造血细胞相互作用改变在白血病发生中的作用。 方法:细胞黏附实验测定 HL-60细胞经5-氮杂脱氧胞苷（5-Aza-CdR）诱导E-cadherin表达后细胞黏附能力的改变,MTT法测定细胞增殖能力,细胞迁移实验确定细胞的迁移能力。结果:HL-60细胞经5-Aza-CdR诱导E-cadherin表达后,其对E-cadherin-Fc的黏附能力增加,细胞在E-cadherin-Fc上的增殖能力下降,细胞黏附导致细胞迁移能力下降。结论:白血病细胞中由于E-cadherin表达丧失,引起细胞黏附降低,增殖能力增强,细胞迁移活跃,表明E-cadherin表达缺失与白血病细胞行为的获得有关。