氨甲喋呤对映体药物对A549人肺腺癌细胞株增殖抑制作用及诱导凋亡作用

目的探讨氨甲喋呤对映体[（＋）MTX,（-）MTX]对A549细胞的增殖抑制作用及诱导凋亡作用。方法采用培养的A549细胞,应用MTT比色法分析其活性;用光学显微镜和荧光显微镜观察细胞的形态学变化;碘化丙啶（PI）单染流式细胞术检测细胞周期;DNA梯度电泳检测凋亡。结果在0.1～150μmol·L-1范围内,（＋）MTX和（-）MTX作用于A549细胞24,48,72h,均抑制细胞A549增值,但抑制强度为（＋）MTX〉（-）MTX,倒置显微镜和荧光显微镜观察不同浓度（＋）MTX和（-）MTX作用A549细胞不同时间后,出现细胞不同程度的形态学改变;用10μmol·L-1的（＋）MTX和（-）MTX作用A549细胞48h后,PI单染流式细胞术检测A549细胞周期的影响,表明氨甲喋呤对映体干扰A549细胞DNA合成;DNA梯度电泳检测结果发现MTX作用组有凋亡条带出现,其中（＋）MTX最为明显。结论 （＋）MTX和（-）MTX对A549细胞的抗增殖作用具有化学结构的立体选择性,（＋）MTX的抗A549细胞增殖作用明显强于（-）MTX。     

氨甲喋呤对映体对ECV304细胞抑制作用及其机制

目的探讨氨甲喋呤[(±)MTX]及其对映体[(+)MTX、(-)MTX]对ECV304细胞的生长抑制作用并探讨其机制。方法采用培养的ECV304细胞,应用MTT比色法分析其活性;用光学显微镜观察细胞的形态学变化;碘化丙啶(PI)单染流式细胞术检测细胞周期。结果在0.1～150μmol·L-1范围内,(+)MTX、(-)MTX和(±)MTX作用于ECV304细胞24、48、72h,均抑制细胞ECV304增殖,但抑制强度依次为(+)MTX>(±)MTX>(-)MTX,倒置显微镜观察不同浓度(±)MTX、(+)MTX和(-)MTX作用ECV304细胞不同时间后,出现细胞体积变小、核固缩等形态学改变。用10μmol·L-1的(+)MTX、(-)MTX和(±)MTX作用ECV304细胞48h后,PI单染流式细胞术检测ECV304细胞周期的影响,表明MTX消旋体及单一体干扰ECV304细胞DNA合成。结论(+)MTX和(-)MTX对ECV304细胞的抗增殖作用具有化学结构的立体选择性,(+)MTX的抗ECV304细胞增殖作用明显强于(-)MTX。     

用SiRNA沉默SSAT基因表达降低人A549肺癌细胞对抗癌多胺类似物CPENSpm的敏感性

目的 探讨精脒/精胺乙酰转移酶(Spermidine/Spermine N1-Acetyltransferase,SSAT)基因表达沉默对多胺类似物CPENSpm抗瘤活性的影响。方法 用SiRNA技术获得SSAT基因表达沉默的人A549肺癌细胞株,QT-RT-PCR 法用于分析SSAT基因的表达水平,MTT法检测细胞的存活率,DNA片段化分析和流式细胞/亚凋亡峰分析检测细胞凋亡状况。结果 成功获得SSAT基因表达沉默的人A549肺癌细胞株。用10 μmol·L^-1 CPENSpm处理对照细胞24 h可使SSAT mRNA 水平升高23倍,但在SSAT表达沉默的细胞中CPENSpm无此影响。细胞增殖实验发现,SSAT表达沉默的细胞对CPENSpm (0~20 μmol·L^-1 )的药物敏感性显著性低于对照细胞。细胞凋亡分析发现,10 μmol·L^-1 CPENSpm处理细胞48 h导致对照细胞出现凋亡细胞典型的DNA片段化现象和亚凋亡峰,但在SSAT表达沉默的细胞株中,CPENSpm诱导细胞凋亡的能力明显减弱。结论 CPENSpm诱导肿瘤细胞内SSAT高表达可能是其抗癌药理活性的分子基础之一。     

小檗碱诱导人急性T淋巴细胞白血病细胞凋亡的研究

目的探讨小檗碱诱导人急性T淋巴细胞白血病细胞(MOLT-4)凋亡的作用。 方法将处于对数生长期的MOLT-4细胞分为3组，A组加入小檗碱(10，100 mg·L^–1)，B组加入柔红霉素1 mg·L^-1，C组加入小檗碱＋柔红霉素，作用6 和24 h后，用MTT法检测细胞存活率；用流式细胞术、DNA电泳及光学显微镜观察小檗碱对MOLT-4细胞凋亡的影响。结果作用6，24 h后，A组(10 mg·L-¹)细胞存活率分别为81.80%，64.67%； B组为98.38%，38.46%，C组为68.35%，20.51%；C组与A、B组比较，在两个时间段差异均有显著性(P＜0.05)。小檗碱诱导MOLT-4细胞发生典型的细胞凋亡形态学变化，出现DNA规律性断裂，电泳呈典型的梯状条带变化。细胞周期分析提示小檗碱浓度在10，100 mg·L-1时作用24 h细胞凋亡率分别为5.83%，19.93%。结论小檗碱具有诱导白血病细胞凋亡的作用，且小檗碱可增强柔红霉素的抗肿瘤作用，为其临床应用提供了依据。     

4-［4″-(2″, 2″, 6″, 6″-四甲基-1″-哌啶氮氧自由基)氨基］-4′-去甲表鬼臼毒素对K562/ADM细胞的抑制作用

目的 比较4-［4″-(2″, 2″, 6″, 6″-四甲基-1″-哌啶氮氧自由基)氨基］-4′-去甲表鬼臼毒素（GP-7）对多药耐药人慢性粒细胞白血病K562的多柔比星耐药株细胞（K562/ADM细胞）的抑制作用是否优于依托泊苷。方法 以依托泊苷和K562细胞为对照，用不同浓度GP-7处理K562/ADM细胞不同时间，MTT比色法测定细胞增殖，流式细胞仪测定细胞周期和细胞凋亡率，普通光学显微镜观察细胞凋亡形态，琼脂糖凝胶电泳观察细胞DNA凋亡性降解。结果 8～128 mol·L^-1 GP-7处理48 h或64 μmol·L^-1 GP-7处理24～72 h，GP-7对K562/ADM细胞的增殖抑制呈剂量依赖性（r=0.947，P＜0.05)和时间依赖性(r=0.999，P＜0.01)。GP-7及依托泊苷对K562/ADM的IC₅₀分别为(45.9±1.8)及(68.7±4.6)μmol·L^-1；64 μmol·L^-1 GP-7作用48 h可使G₂/M期细胞明显增多，相同情况下依托泊苷则使S期细胞明显增多；GP-7可引起K562/ADM和K562细胞凋亡，但其引起的K562/ADM和K562细胞凋亡率与依托泊苷无明显差异；GP-7可引起K562/ADM和K562细胞典型的凋亡形态学变化和DNA凋亡性降解，但GP-7引起的K562/ADM细胞DNA凋亡性降解弱于K562细胞；128及256 μmol·L^-1 GP-7或依托泊苷处理K562/ADM和K562细胞48 h，GP-7诱导DNA凋亡性降解的作用强于依托泊苷，但32和64 μmol·L^-1时作用则相反。结论 GP-7可抑制多药耐药白血病细胞株K562/ADM的增殖,诱导细胞凋亡。GP-7抑制多药耐药白血病细胞株K562/ADM的作用优于依托泊苷。     

海南粗榧新碱衍生物HH07A对肿瘤细胞内DNA拓扑异构酶Ⅱ和蛋白激酶C活性的影响

HH07A 5.5 μmol·L^-1作用L1210细胞24 h后, 可使细胞的DNA拓扑异构酶Ⅱ活性下降; 在无细胞系统, HH07A 0.55 mmol·L^-1也能直接促进DNA拓扑异构酶Ⅱ引起的DNA链断裂. 经HH07A (L1210细胞5.5 μmol·L^-1, HL-60细胞8.25 μmol·L^-1)作用24 h后, L1210及HL-60细胞的胞浆蛋白激酶C(PKC)活性升高, 胞膜PKC活性下降, 而全细胞PKC活性变化不大. 在无细胞系统中, HH07A 1.1 mmol·L^-1能明显抑制PKC的活性.     

铁树提取物对人肺腺癌细胞凋亡的诱导及相关机制的初步研究

目的探讨中药铁树提取物(Cvcas revolute Thunb extracts,CTE)对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响及其相关机制.方法应用四氮唑盐(MTT)法观察CTE对A549细胞增殖的影响,采用Gimsa染色和吖啶橙(AO)/澳化乙锭(EB)荧光染色观察细胞凋亡形态学变化;流式细胞术和琼脂糖凝胶电泳方法检测A549细胞凋亡、细胞周期变化;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测凋亡基因Bcl-2,Bax和Caspase-3 mRNA水平表达的变化.结果CTE可以抑制A549细胞增殖.经CTE作用后,A549细胞出现明显的细胞凋亡形态学变化;细胞DNA琼脂糖凝胶电泳呈现特征性的DNA降解梯形条带;A549细胞被阻滞在G2-M期,细胞凋亡率可达34.37％.CTE可抑制A549细胞Bcl-2和Caspase-3mRNA的表达,促进Bax mRNA的表达.结论CTE能明显诱导A549细胞凋亡,其机制之一可能是改变与凋亡相关基因的表达.     

四硫化四砷对急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4的凋亡作用

目的 研究四硫化四砷对NB4细胞的促凋亡作用及这一过程中早幼粒细胞白血病-维甲酸受体α(PML-RARα) 融合基因及其表达产物的变化。方法 通过细胞形态学观察, 流式细胞仪检测及DNA电泳等方法观察四硫化四砷对NB4细胞的诱导凋亡作用，用荧光染色体原位杂交技术, 反转录PCR及Western印迹技术测定这一过程中PML-RARα融合基因及其表达产物的改变。结果 四硫化四砷在0.5～3 μmol·L^-1之间能诱导NB4细胞凋亡，在此过程中，PML-RARα融合基因无明显变化，但PML-RARα融合蛋白和野生型RARα蛋白的表达明显减少。结论 四硫化四砷能诱导NB4细胞凋亡，其作用靶点可能在PML RARα融合蛋白和野生型RARα蛋白。     

PD98059对乳腺癌细胞的抗癌效应

目的 研究PD98059对乳腺癌细胞株的抗肿瘤效应。方法用50 μmol·L^-1PD98059处理乳腺癌细胞系MCF-7(ER＋/PR＋)和MDA-MB-435s(ER－/PR－)1 h后，采用逆转录酶 聚合酶链反应(RT-PCR)检测AP-1、cyclin D1的mRNA水平，采用Annexin V/PI法检测细胞凋亡，PI染色流式细胞仪检测细胞周期。结果PD98059明显抑制两种乳腺癌细胞的AP-1和cyclin D1的mRNA水平，促进两种细胞的凋亡，并阻滞两种细胞的G1/S期转换。结论PD98059对乳腺癌细胞具有明显的抗肿瘤效应，可能成为乳腺癌靶向性化疗新药。     

丹参酮ⅡA诱导人肺腺癌A549细胞凋亡

目的探讨丹参酮ⅡA(TanshinoneⅡA,TanⅡA)抗人肺腺癌A549作用及其可能作用机制。方法通过细胞形态学和MTT法观察TanⅡA对A549细胞增殖的影响;应用Hoechest33258和PI双染法观察细胞凋亡;采用荧光分光光度计检测细胞内钙及线粒体膜电位;RT-PCR检测Bad和MT-1A mRNA的表达。结果 TanⅡA能抑制A549细胞增殖,且随TanⅡA剂量的增加和作用时间的延长而增强,TanⅡA作用A549细胞24、48和72h的IC50分别为117.85、14.87和6.89μmol·L-1。TanⅡA作用A549细胞24h后,A549细胞出现染色质聚集等典型的凋亡形态学改变,且随TanⅡA剂量的增加,A549细胞凋亡百分率逐渐增大。TanⅡA作用后,A549细胞的细胞内钙升高、线粒体膜电位降低、Bad mRNA表达增加、MT-1A mRNA表达下调。结论 TanⅡA具有抗A549作用,其诱导细胞凋亡可能与钙依赖性通路和MT-1A表达下调有关。     

AZIN-1小分子抑制剂抗非小细胞肺癌活性研究

目的研究鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制因子-1(AZIN-1)小分子抑制剂对非小细胞肺癌的抑制作用及机制。方法通过CCK-8法检测A549细胞增殖;流式细胞术(Annexin V-FITC/PI双染)分析A549细胞凋亡;蛋白质免疫印迹实验检测A549细胞内鸟氨酸脱羧酶(ODC)、鸟氨酸脱羧酶抗酶-1(AZ-1)和AZIN-1的表达;流式细胞术(PI单染)分析A549细胞周期;高效液相色谱法检测A549细胞内总多胺含量。结果AZIN-1小分子抑制剂能够显著抑制A549细胞的增殖,使细胞发生G0/G1周期阻滞,并诱导A549细胞发生凋亡,显著抑制AZIN-1和ODC的表达,干扰细胞内多胺代谢,降低细胞内总多胺含量。结论AZIN-1小分子抑制剂对A549细胞具有显著的生长抑制作用,其作用机制可能与诱导细胞凋亡和干扰多胺代谢有关。     

去甲基脱氧鬼臼毒素衍生物DPPC诱导A549细胞凋亡的研究

目的 探讨鬼臼毒素衍生物L-N-甲酰-4′-去甲基脱氧鬼臼-甲硫-4-N-哌嗪酰胺(DPPC)抑制人非小细胞肺癌A549细胞的增殖作用,阐述DPPC诱导A549细胞凋亡的相关分子机制.方法 体外培养A549细胞,Ho-chest33258检测DPPC处理A549细胞后细胞凋亡现象;Annexin V-FITC/PI双染定量检测DPPC处理后细胞凋亡数量;蛋白免疫印迹实验检测凋亡基因p53、caspase-3、Bax的表达.并与依托泊苷(阳性对照组)和未给予任何药物处理的A549细胞做对照.结果 DPPC组A549细胞中γ-H2AX的表达量较阴性对照组和阳性对照组都有明显的增加.荧光显微镜下见DPPC处理后的A549细胞核呈现萎缩,并出现细胞凋亡小体.与阴性对照组比较,不同浓度DPPC处理A549细胞后,抑制肿瘤发生发展的p53基因表达增加,并呈剂量依赖性,其下游的凋亡相关蛋白caspase-3以及Bax表达增加(P<0.05,P<0.01).相同浓度的DPPC和依托泊苷抑制凋亡相关蛋白有明显的差异(P<0.05).结论 DPPC能够引起A549细胞DNA损伤,并诱导细胞凋亡,DPPC能够使细胞内凋亡相关蛋白表达异常,抑制A549细胞增殖;此外,DPPC体外表现出优越的抗肿瘤细胞增殖作用.     

灵芝乙醇提取物对A549肺癌细胞的作用及其机制

目的探讨灵芝乙醇提取物(GLEE)抗肺癌的作用及其机制。方法采用CCK-8法测定GLEE对肺癌A549细胞生长的抑制率;用荧光显微镜观察GLEE对细胞形态的影响;用流式细胞术观察其对细胞周期的影响;用AnnexinV-FITC/PI双染检测细胞的凋亡情况。结果当GLEE浓度为5～320μg·mL^-1时,A549细胞生长的抑制率逐步上升,半数抑制浓度(IC₅₀)为10.8μg·mL^-1。荧光显微镜下观察到不同浓度GLEE作用后的A549细胞出现了细胞皱缩,染色质边缘凝集等凋亡细胞特有的形态学特征。当GLEE的浓度为80、100、200μg·mL^-1时,主要将细胞周期阻滞在G₀/G₁期,当GLEE浓度为300、350μg·mL^-1时,主要将细胞周期阻滞在S期。当GLEE浓度为200、300、350μg·mL^-1时,早期凋亡率分别为21.66%±5.19%、27.34%±2.89%、28.28%±7.25%,凋亡率显著...     

血竭素高氯酸盐诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的机制

目的研究血竭素高氯酸盐诱导HeLa细胞凋亡机制。方法MTT法测定血竭素高氯酸盐对HeLa细胞的细胞毒作用。通过显微镜，荧光染色观察细胞形态学变化，用琼脂糖凝胶电泳检测DNA片断化。用Western印迹法分析药物对蛋白质表达的影响。结果血竭素高氯酸盐明显抑制HeLa等细胞的增殖，诱导HeLa细胞调亡。Caspase-1，-3，-8，-9及家族抑制剂可明显抑制血竭素高氯酸盐诱导的凋亡。Western印迹结果显示血竭素高氯酸盐作用12 h后Bax及Bcl-X_L的表达明显改变，caspase-3，-8前体及caspase-3底物ICAD和PARP发生降解。结论血竭素高氯酸盐(60 μmol·L^-1)通过改变Bax/Bcl-X_L的表达激活caspase途径诱导HeLa细胞凋亡。     

菲啰啉对不同氧化剂和多柔比星所致CHL细胞DNA链断裂的影响

目的 为了研究菲啰啉对2种氧化剂和抗癌药多柔比星诱发细胞DNA损伤的影响, 并初步探讨其损伤机制。方法 用不同浓度菲啰啉预处理CHL细胞30 min, 再分别加入3种不同染毒受试物,共同培养一定时间(0.3 mmol·L^-1重铬酸钾：105 min； 0.5 μmol·L^-1多柔比星：5 min； 0.4 mmol·L^-1过氧化氢(H₂O₂)：25 min)后, 用碱性单细胞凝胶电泳方法(ASCGE)测定DNA链断裂情况, 并同时以菲啰啉与二甲亚砜(DMSO，0.33 mol·L^-1)比较对H₂O₂致DNA损伤中·OH的产生和清除。结果 3种染毒受试物均可明显引起CHL细胞DNA链断裂；而当3 μmol·L^-1菲啰啉预处理后, 可使重铬酸钾、H₂O₂所致DNA迁移长度和细胞拖尾率明显降低, 并超过DMSO降低H₂O₂的损伤作用, 当菲啰林浓度升至12 μmol·L^-1时, 可完全消除这两种因素所致的DNA链断裂损伤；10 μmol·L^-1菲啰啉可抑制多柔比星所致DNA损伤, 但浓度直至60 μmol·L^-1仍不能完全消除多柔比星的损伤作用。结论 菲啰啉对2种氧化剂和多柔比星所致DNA损伤均有不同程度的防护作用,同时提示重铬酸钾和H₂O₂所致的DNA损伤主要与需过渡金属离子参与的·OH产生有关, 而多柔比星所致损伤仅部分与此有关。     

去甲斑蝥素降低人胃癌细胞程序性细胞死亡因子4的表达

目的 研究去甲斑蝥素(NCTD)降低程序性细胞死亡因子4(PDCD4)表达的机制。方法MTT法测定NCTD 5~640 μmol·L^-1与人胃癌BGC-823细胞作用24,48和72 h细胞存活率;Western蛋白质印迹法测定NCTD 0, 6, 30和60 μmol·L^-1作用BGC-823细胞24 h PDCD4蛋白表达水平;NCTD 60 μmol·L^-1作用20 h后加入MG132 10 μmol·L^-1作用4 h对PDCD4蛋白表达的影响;逆转录PCR法测定NCTD 60 μmol·L^-1作用BGC-823细胞24 h后PDCD4 mRNA表达的变化;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测定NCTD 60 μmol·L^-1作用BGC-823细胞6, 12和24 h后microRNA-21(miR-21)的表达。Western蛋白质印迹法测定细胞转染miR-21抑制剂对PDCD4蛋白表达的影响。结果 NCTD作用后BGC-823细胞存活率明显下降,NCTD作用BGC-823细胞24, 48和72 h IC₅₀分别为74.5, 35.0和10.3 μmol·L^-1。NCTD 6, 30和60 μmol·L^-1作用于BGC-823细胞24 h,PDCD4蛋白分别降低9%, 47%和62%。NCTD对PDCD4 mRNA表达无影响。与NCTD处理组相比,MG132和NCTD共处理对PDCD4蛋白表达无明显影响。NCTD 60 μmol·L^-1作用BGC-823细胞12和24 h后,细胞中miR-21的表达显著升高(P<0.01)。细胞转染miR-21抑制剂后,可抑制NCTD降低PDCD4蛋白表达的作用。结论 NCTD通过调控miR-21降低PDCD4蛋白的表达。     

铭铂诱导人卵巢癌细胞A2780凋亡

目的：观察铭铂诱导的人卵巢癌细胞A2780凋亡,探讨其抗肿瘤作用机理。方法：用MTT法测定了铭铂对A2780的细胞毒作用;荧光显微镜从形态学上观察凋亡发生,琼脂糖DNA电泳检测程序性细胞死亡特征的DNA降解。结果：铭铂对A2780细胞有细胞毒作用,半数抑制浓度具有药物接触细胞时间依赖性;铭铂处理的A2780细胞形态学上显示出凋亡细胞特性,琼脂糖凝胶电泳显示出特征性程序性细胞死亡DNA梯形图谱。结论：铭铂能够诱导A2780细胞凋亡,诱导肿瘤细胞凋亡是其一个抗肿瘤作用机理。     

丹参酮ⅡA抑制去血清培养诱导的PC12细胞凋亡(英文)

目的:研究丹参酮ⅡA对无血清培养诱致PC12细胞凋亡的抑制作用。方法:以噻唑兰(MIT)法测定PC12细胞存活率;用流式细胞术检测DNA含量及凋亡细胞百分率;DNA琼脂糖电泳法观察DNA断裂。结果:去血清培养(12h)可诱导PC12细胞凋亡(细胞凋亡率96.07％)。丹参酮Ⅱ A(0.1,1μmol·L~(-1))显著降低凋亡细胞百分率(细胞凋亡率分别为25.71％和4.89％),并减少DNA断裂。丹参酮ⅡA(0.01-10μmol·L~(-1))抑制氰化钠(20mmol·L~(-1))、谷氨酸钠(0.5mmol·L~(-1))和硝普钠(0.5mmol·L~(-1))所致的细胞毒性。结论:丹参酮Ⅱ A可抑制去血清培养引起的PC12细胞凋亡。     

冬凌草甲素通过诱导人宫颈癌HeLa细胞自噬下调凋亡的机制

研究冬凌草甲素通过诱导人宫颈癌HeLa细胞自噬拮抗凋亡的机制。MTT法测定冬凌草甲素对HeLa细胞的细胞毒作用。通过相差显微镜观察细胞形态学变化，用琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段化，用流式细胞仪检测细胞自噬和凋亡水平，用Western blotting检测分析药物对蛋白质表达的影响。冬凌草甲素明显抑制HeLa细胞的增殖，诱导HeLa细胞凋亡，同时诱导HeLa细胞发生自噬。Western blotting检测结果表明，冬凌草甲素作用24 h后，促凋亡蛋白Bax、细胞色素c和控制Bax活力的去乙酰化酶SIRT-1的表达明显改变。冬凌草甲素(64 μmol·L^-1)诱导的自噬通过影响SIRT-1和线粒体途径蛋白的表达下调凋亡。     

呫吨酮并吡啶衍生物XP-16诱导人肺癌A549细胞凋亡

目的探讨呫吨酮并吡啶衍生物5,9-二(2-吡咯烷基乙酰氨基)-7H-吡啶并[4,3-c]呫吨-7-酮(XP-16)对人肺癌A549细胞的抗肿瘤作用及其可能作用机制。方法通过MTT法、细胞形态学和克隆实验观察XP-16对A549细胞增殖的影响;应用Hoechst 33258和PI双染法观察细胞凋亡;荧光分光光度计检测细胞内钙([Ca2+]i)及线粒体膜电位;qRT-PCR检测Bad和金属硫蛋白1A(metallothionein 1A,MT-1A)mRNA表达。结果 XP-16能抑制A549细胞增殖,呈剂量和时间依赖性。XP-16作用A549细胞24 h后,A549细胞出现染色质聚集、核碎裂等典型的凋亡形态学改变;随XP-16剂量的增加,A549细胞凋亡百分率逐渐增大。XP-16作用后,A549细胞的[Ca2+]i和线粒体膜电位降低、Bad和MT-1A mRNA的表达增加。结论 XP-16具有诱导A549细胞凋亡的作用,可能与其降低[Ca2+]i和线粒体膜电位有关。MT-1A表达的上调可能是[Ca2+]i降低的结果。