冬凌草甲素通过激活ATM蛋白诱导人肝癌HepG2细胞G_2/M细胞周期阻滞

目的研究冬凌草甲素诱导肝癌HepG2细胞G2/M细胞周期阻滞的机制。方法不同浓度的冬凌草甲素(16、32、64μmol/L)处理HepG2细胞48 h后,流式细胞仪检测冬凌草甲素诱导肝癌HepG2细胞的细胞周期。Western印迹检测不同浓度冬凌草甲素作用肝癌HepG2细胞后H2AX蛋白的磷酸化。免疫荧光实验检测Phos-S1981ATM和γ-H2AX焦点。结果彗星实验结果表明不同浓度的冬凌草甲素(16、32、64μmol/L)处理HepG2细胞48 h后,可发生G2/M细胞周期阻滞,并且随浓度增加细胞周期阻滞增加。Western印迹检测不同浓度冬凌草甲素作用肝癌HepG2细胞后,H2AX蛋白发生磷酸化,γ-H2AX随着浓度增加表达增大。免疫荧光实验发现Phos-S1981ATM和γ-H2AX焦点随着浓度增加表达量增加。结论冬凌草甲素可以诱导肝癌HepG2细胞G2/M细胞周期阻滞,H2AX蛋白发生磷酸化,诱导DNA损伤的发生。     

调控靶向Xklp2表达对肺鳞癌细胞放射线照射后γ-H2AX蛋白表达的影响

目的探讨调控靶向Xklp2(TPX2)表达对肺鳞癌细胞放射线照射后γ-H2AX蛋白表达及细胞核内γ-H2AX和MDC1斑点形成的影响。方法利用前期构建的稳定转染TPX2 shRNA质粒的SK-MES-1细胞和稳定转染TPX2过表达质粒的NCI-H226细胞,采用Western印迹检测4 Gy照射后0～24 hγ-H2AX蛋白表达,免疫荧光技术观察4 Gy照射后4 h细胞核内γ-H2AX和MDC1斑点形成情况。结果 4 Gy照射后0～24 h,TPX2干扰的SK-MES-1细胞和TPX2过表达的NCI-H226细胞中γ-H2AX蛋白表达水平均出现显著增加后逐渐下降的趋势,但在TPX2干扰的细胞中,各时间点γ-H2AX蛋白表达水平均显著高于单纯照射组(P<0. 05),而在TPX2过表达细胞中,各时间点γ-H2AX蛋白表达水平均显著低于单纯照射组。②照射后4 h,下调TPX2表达则γ-H2AX和MDC1核内斑点形成增加,而过表达TPX2则γ-H2AX和MDC1核内斑点增加幅度降低(P<0. 05)。结论照射后H2AX磷酸化及γ-H2AX和MDC1核内斑点形成变化,提示TPX2参与DNA损伤修复。     

木犀草素对人胃癌细胞DNA双链断裂及同源重组修复的影响

目的 探讨木犀草素对人胃癌细胞DNA双链断裂(DNA double-strand breaks, DSBs)及同源重组(homologous recombination, HR)修复的影响。方法 采用流式细胞仪检测作用木犀草素后各组细胞内ROS水平变化及GFP阳性率；彗星实验检测木犀草素对DSBs的影响；Western blotting检测DNA损伤标志性蛋白γH2AX和HR修复蛋白Rad51的表达；免疫荧光检测DNA损伤修复相关蛋白表达的募集情况。结果 木犀草素以剂量依赖性方式增加胃癌细胞内ROS含量；用I-Scel质粒转染DR-GFP后木犀草素处理组GFP阳性细胞比例明显少于未加木犀草素组；但彗星实验表明，木犀草素处理后人胃癌AGS细胞后增加彗星尾炬；经木犀草素处理后，胃癌细胞中DNA的γH2AX上调，修复关键蛋白Rad51的表达下调；免疫荧光结果表明，在木犀草素处理人胃癌AGS细胞后HR修复蛋白Rad51在DNA损伤位点的募集减少。结论 木犀草素能够促进人胃癌细胞DSBs,并抑制其HR修复。     

苦楝素诱导小鼠肝细胞DNA损伤

目的:观察苦楝素对DNA损伤及损伤修复的影响。方法:体外采用苦楝素与小鼠胚胎肝细胞BNL CL2细胞株共培养,CCK-8检测肝细胞活力,吸光度检测肝细胞内ROS含量,Western blot检测γ-H2AX、Parp-1、poly ADP-ribose蛋白表达,观察不同浓度苦楝素以及苦楝素不同作用时间对DNA损伤及损伤修复的影响。结果:随着苦楝素浓度升高,肝细胞BNL.CL2细胞活力逐渐下降(P0.0001),ROS含量升高(P0.05),同时γ-H2AX蛋白质含量随着苦楝素作用时间的延长而升高(P0.0001)。苦楝素作用0.5～1.0 h Parp-1自身PAR化量达最高(P0.05);而苦楝素作用时间自1～24 h Parp-1的PAR逐渐减少(P0.05)。结论:苦楝素可通过增加细胞内ROS诱导DNA损伤,同时抑制Parp-1的活性从而抑制DNA损伤的修复。     

Ⅰ-Sce I系统的建立及其在诱导肝癌细胞DNA双链断裂中的应用

目的 建立Ⅰ-Sce I系统并应用该系统制备DNA双链断裂(DSB)的HepG2细胞模型,为进一步研究DSB与HBV DNA整合奠定基础.方法 通过分子克隆技术构建携带Ⅰ-Sce I内切酶识别序列的pEGFP2真核表达载体,并将其转染入肝癌细胞株HepG2,经G418筛选出稳定转染株,随后瞬时转染表达归位内切酶Ⅰ-Sce I的质粒pCMV-3NSL-Ⅰ-Sce I.24 h后采用免疫荧光法和Western blot检测DNA双链损伤效应分子γ-H2AX的表达,了解DSB情况.结果 酶切鉴定和测序证实pEGFP2构建成功;Ⅰ-Sce I系统引入后HepG2细胞中的γ-H2AX表达明显上调,提示DSB细胞模型构建成功.结论 Ⅰ-Sce I系统能够成功地诱导HepG2细胞株基因组发生DSB,该系统有望为进一步探讨DSB是否为HBV整合的潜在靶位提供有效的研究工具.     

人胰腺癌吉西他滨耐药细胞株APE1/Ref-1表达升高

背景:吉西他滨是中晚期胰腺癌的主要化疗药物,但由于胰腺癌对吉西他滨存在高度先天性和获得性耐药,吉西他滨不能明显改善胰腺癌患者的预后。目的:探讨DNA损伤修复及其碱基切除修复途径中的关键酶人脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1/氧化还原因子-1(APE1/Ref-1)表达与胰腺癌吉西他滨耐药之间的关系。方法:应用前期研究建立的人胰腺癌吉西他滨耐药细胞株SW1990-0.5(耐药指数9.32)及其亲本细胞株SW1990,以彗星实验评估两者经吉西他滨作用后的DNA损伤程度,real-time PCR和蛋白质印迹法检测APE1/Ref-1 mRNA和蛋白表达。结果:经吉西他滨作用24 h,SW1990-0.5和SW1990细胞的彗星实验OTM值分别为0.32±0.13和26.96±6.83,相对于SW1990细胞,SW1990-0.5细胞的APE1/Ref-1 mRNA表达量为2.48±0.49,两者APE1/Ref-1蛋白相对表达量分别为1.57±0.08和0.84±0.06,组间差异均有统计学意义(P均0.05)。结论:DNA损伤修复可能与胰腺癌吉西他滨耐药相关,APE1/Ref-1表达上调可能是通过修复DNA损伤参与胰腺癌对吉西他滨耐药。     

γ-氨基丁酸对胰腺癌SW1990细胞生长及VEGF表达的影响

目的观察γ-氨基丁酸（GABA）对胰腺癌SW1990细胞生长及血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法采用MTT法和流式细胞术（FCM）检测GABA对胰腺癌SW1990细胞增殖、细胞凋亡和细胞周期的影响，放射免疫分析法检测cAMP含量，RT—PCR检测VEGF mRNA表达，Western blot检测VEGF蛋白含量。结果GABA促进胰腺癌SW1990细胞生长，抑制细胞凋亡，同时促进细胞内cAMP增加。随着GABA浓度增加（80～320μmol／L），VEGF mRNA及蛋白表达明显增加。结论GABA影响胰腺癌细胞增殖、凋亡和血管形成，可能参与调节肿瘤的生长与转移。     

腺病毒介导XAFl基因诱导胰腺癌细胞株SW1990凋亡的实验研究

X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)相关因子1(XAF1)是一种潜在的肿瘤抑制基因,能拮抗XIAP的抗凋亡作用.目的:探讨Ad5/F35腺病毒介导XAF1基因诱导胰腺癌细胞株SW1990凋亡的作用及其可能机制.方法:构建重组腺病毒Ad5/F35-XAF1和对照病毒Ad5/F35-Null,感染胰腺癌细胞株SW1990.分别以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质印迹法检测XAF1 mRNA和蛋白表达,以Annexin V-FITC/PI双染法和原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡率,以蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白Caspase-3、PARP、Caspase-8、Caspase-9和细胞色素C的表达.结果:Ad5/F35-XAF1感染SW1990细胞后,XAFI mRNA和蛋白表达均显著增高,并能诱导细胞凋亡,同时伴有Caspase-3、PARP、Caspase-8和Caspase-9活化增强以及细胞色素C蛋白表达增加.结论:重组腺病毒Ad5/F35-XAF1感染胰腺癌细胞株SW1990后,能明显诱导细胞凋亡,其机制可能与XAF1激活了死亡受体途径和线粒体凋亡途径有关.     

紫草素对肺腺癌H1975细胞作用的实验研究

目的 观察紫草素对肺腺癌细胞H1975增殖的影响,并初步探讨其可能的抗癌机制.方法 不同浓度紫草素作用于肺腺癌H1975细胞,MTT实验观察紫草素作用24、48、72 h对肺腺癌细胞增殖的影响,相差显微镜下观察细胞形态,流式细胞术检测细胞凋亡和周期,Western blot检测细胞中EGFR信号通路下游关键分子EGFR、AKT、ERK表达及磷酸化水平以及凋亡相关蛋白Bcl-2表达和DNA修复酶PARP的变化.结果 紫草素能够抑制非小细胞肺癌细胞增殖并呈浓度和时间依赖性;流式细胞术显示紫草素诱导H1975细胞发生凋亡,阻滞细胞于S期;EGFR、AKT和ERK蛋白表达下降,p-EGFR、p-AKT和p-ERK磷酸化水平降低,凋亡相关蛋白Bcl-2表达减少,PARP发生剪切.结论 紫草素能够抑制非小细胞肺癌细胞株H1975增殖、诱导凋亡,其机制可能与其下调EGFR、AKT和ERK的表达及其磷酸化水平和降低凋亡相关蛋白Bcl-2表达和促使PARP发生剪切有关.     

~(60)Coγ射线照射对血管内皮细胞生物学作用的影响

目的观察~(60)Coγ射线照射对血管内皮细胞生物学作用的影响。方法用不同剂量~(60)Coγ射线照射人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC),通过细胞生长曲线和克隆形成实验观察细胞增殖存活情况;流式细胞术检测照射后细胞周期的变化;中性单细胞凝胶电泳及蛋白印迹法(Western blot)观察细胞照射后DNA分子损伤及修复情况。结果 ~(60)Coγ射线照射后,HUVEC细胞生长速度及增殖率降低,降低程度与照射剂量呈正相关;HUVEC细胞周期出现G_2/M期阻滞;HUVEC细胞出现明显的DNA双链断裂,γH2AX和DNA-PKcs表达增加。结论 ~(60)Coγ射线照射抑制血管内皮细胞增殖,导致G_2/M期阻滞,促进DNA断裂,相关修复蛋白表达增加。     

氧化亚氮-氧气混合吸入口腔镇静效果及对老年口腔细胞DNA损伤和糖酵解的影响

目的探讨氧化亚氮-氧气混合吸入对老年口腔镇静效果及其对口腔黏膜上皮细胞DNA损伤和糖酵解影响。方法拟行口腔颌面诊治的老年患者792例,随机分为氧化亚氮组392例和单纯局麻组400例。术前和术中记录患者心率和血氧饱和度;使用视觉模拟疼痛评分(VAS)和Ramsay法评估患者的疼痛和镇静情况。术中取牙龈黏膜,体外常规培养口腔黏膜上皮细胞,Western印迹法和细胞免疫荧光检测氧化亚氮-氧气处理不同时间细胞中γH2AX蛋白表达情况;RT-PCR检测细胞糖酵解酶基因(GLUT1、GLUT3、HK2、PK-M2)表达情况。结果单纯局麻组心率动幅较大,112例心率波动超出正常范围;氧化亚氮组术前和术中心率均在正常范围内;术中氧化亚氮组血氧饱和度高于术前和单纯局麻组(P<0.05)。氧化亚氮组术中VAS低于单纯局麻组,镇静评分高于单纯局麻组(P<0.05)。氧化亚氮-氧气处理口腔黏膜上皮细胞0.5 h后γH2AX蛋白表达明显上调,1 h达到高峰,之后逐渐降低;细胞免疫荧光检测γH2AX蛋白表达情况显示,处理2 h时荧光强度高于处理前,说明氧化亚氮-氧气诱导γH2AX表达上调,诱导细胞DNA损伤。口腔黏膜上皮细胞糖酵解基因经氧化亚氮-氧气处理后表达均上调,其中GLUT1和GLUT3基因明显上调,2 h后达到高峰,之后下降。结论氧化亚氮-氧气混合吸入配合局麻对老年口腔颌面手术患者具有较好的镇静镇痛效果;但氧化亚氮会诱导口腔黏膜上皮细胞DNA损伤,促进糖酵解,易引发术后口腔疾病,应加以预防。     

硼替佐米对胰腺癌细胞BxPC3、SW1990生长抑制作用的体外研究

目的 观察硼替佐米对胰腺癌细胞BxPC3、SW1990增殖、凋亡的影响,探讨硼替佐米杀伤癌细胞的可能机制.方法 应用1、10、50、100、500 nmol/L及1、10 μmol/L的硼替佐米干预BxPC3、SW1990细胞,以硼替佐米未干预的细胞作为对照组.采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞的增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;RT-PCR法检测Bak、Bax、Bcl-2、Bcl-xl、survivin mRNA表达;蛋白质印迹法检测pro-caspase-3、cleaved-caspase-3、Bax、Bcl-2、surviving蛋白表达.结果 大于50 nmol/L的硼替佐米干预胰腺癌BxPC3、SW1990细胞时,呈浓度及时间依赖性抑制细胞的增殖,其中硼替佐米对BxPC3细胞的生长抑制作用显著大于对SW1990细胞的作用,两者差异有统计学意义（P值均＜0.05）.100 nmol/L硼替佐米干预组BxPC3和SW1990细胞凋亡率分别为（22.56±4.23）％和（（12.71±2.23）％,显著高于对照组的（2.15±0.47）％和（2.32±0.54）％（P值均＜0.05）,且BxPC3细胞的凋亡率显著高于SW1990细胞（P＜0.05）.100 nmol/L硼替佐米干预48 h后BxPC3和SW1990细胞的Bak mRNA表达无显著变化,Bax mRNA及蛋白表达显著增加（P值均＜0.05）,Bcl-2 mRNA和蛋白表达及Bcl-xl mRNA表达均减少（P值均＜0.05）.survivin mRNA和蛋白表达在BxPC3细胞中均减少,而在SW1990细胞中均增加（P值均＜0.05）.2株细胞的pro-caspase-3蛋白表达减少,而cleaved-caspase-3蛋白表达增加（P值均＜0.05）.结论 硼替佐米可抑制胰腺癌细胞BxPC3、SW1990的增殖、诱导凋亡,对BxPC3细胞的作用高于对SW1990细胞,其机制可能与激活线粒体内源性凋亡途径及survivin参与的肿瘤耐药相关.     

结直肠癌细胞中RAD18与FANCD2蛋白相互作用的实验研究

背景:范可尼贫血(FA)通路作为DNA交联损伤修复的主要通路在维持染色体稳定性方面起重要作用。近年来,有关FA通路在DNA损伤以及肿瘤发病机制等方面的研究越来越多。目的:研究人结直肠癌细胞株SW480中RAD18蛋白与FANCD2蛋白是否存在相互作用。方法:应用免疫共沉淀法沉淀抗原抗体复合物;应用蛋白质印迹法检测复合物中兔抗人FANCD2和RAD18蛋白的表达。将GST-RAD18和GST质粒分别转化到BL21细菌中诱导目的蛋白表达,提取细菌总蛋白,以GST琼脂糖珠结合GST-RAD18蛋白,与SW480细胞裂解液孵育后,加入兔抗人FANCD2抗体,进行蛋白质印迹检测。结果:在利用FANCD2抗体沉淀下来的复合物中可检测到RAD18蛋白,且在利用RAD18抗体沉淀下来的复合物中可检测到FANCD2蛋白;GST-RAD18蛋白作诱饵蛋白时可以捕获SW480细胞中的FANCD2蛋白。结论:RAD18蛋白与FANCD2蛋白在SW480细胞内存在相互作用;GST-RAD18蛋白与FANCD2蛋白也存在相互作用。     

肿瘤坏死因子受体相关因子5对缺氧诱导心肌细胞损伤的影响及作用机制研究

目的:分析肿瘤坏死因子受体相关因子5(TRAF5)对缺氧诱导心肌细胞损伤的影响及相关分子机制。方法:体外培养H9c2细胞,以800μmol/L浓度的二氯化钴(CoCl₂)处理细胞建立缺氧诱导心肌细胞损伤模型,采用脂质体转染法将TRAF5过表达质粒(pcDNA-TRAF5)和空载质粒(pcDNA-NC)转染至缺氧诱导的H9c2细胞。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测细胞TRAF5基因表达水平,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,试剂盒法检测乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量,蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测细胞中TRAF5、细胞外信号调节激酶(ERK)、磷酸化ERK(p-ERK)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)、氨基末端激酶(JNK)、磷酸化JNK(p-JNK)蛋白表达水平。结果:与Control组比较,Hypoxic组H9c2细胞中TRAF5 mRNA和蛋白表达水...     

Tbx2蛋白在胰腺癌组织和细胞中的表达及其意义

目的 检测Tbx2蛋白在胰腺癌组织及细胞中的表达,并探讨Tbx2表达与胰腺癌临床和病理的关系.方法 运用免疫组化SP法,检测13例正常胰腺组织和49例胰腺癌组织中Tbx2蛋白的表达,并分析其表达水平与胰腺癌临床病理因素间的关系;采用RT-PCR和Western印迹检测Tbx2在胰腺癌细胞株SW1990中的表达.结果 癌组织中Tbx2表达率(34/49,69.4%)高于正常胰腺组织(1/13,7.7%),P＜0.01;Tbx2的表达水平与肿瘤细胞分化程度、TNM分期有关,与患者性别、年龄以及肿瘤发生部位无关;胰腺癌细胞株SW1990中亦有Tbx2表达.结论 Tbx2蛋白在胰腺癌组织和细胞中表达水平特异性升高,并与肿瘤细胞分化程度、TNM分期有关.Tbx2参与了胰腺癌的发生发展.     

沙利度胺对人胰腺癌细胞株SW1990体外增殖及凋亡的影响

目的 观察沙利度胺(THD)体外抑制人胰腺癌细胞株SW1990增殖及诱导其凋亡的作用.方法 应用不同浓度的THD(3.125、6.25、12.5、25、50、100、200、400μg/ml)处理胰腺癌SW1990细胞24、48、72 h,用MTT法测定细胞的生长抑制率,流式细胞仪分析细胞周期,Annexin V/PI检测细胞凋亡率,蛋白质印迹法检测细胞Bcl-2、Bax蛋白的表达.结果 THD呈浓度和时间依赖性抑制胰腺癌细胞SW1990的生长.200μg/ml的THD干预使SW1990细胞G0/G1期比例从(41.15±2.23)％上升到(58.83 ±2.33)％;细胞凋亡率从2.6％增加到28.0％;细胞Bax蛋白表达量从0.17±0.03上调到0.33±0.04,Bcl-2蛋白表达量从0.35±0.02下调到0.17±0.01,Bcl-2/Bax比值从2.17±0.44下降到0.52±0.07.结论 THD可以抑制SW1990细胞增殖,其机制可能与上调Bax蛋白表达、下调Bcl-2蛋白表达,促进细胞凋亡,将细胞周期阻滞于G0/G1期有关.     

LIMK1/Cofilin在瘦素诱导的结肠癌SW620细胞迁移中的作用

目的 观察瘦素对结肠癌迁移的影响,以及LIMK1/Cofilin信号通路的作用.方法 贴壁培养SW620细胞,分别转染YFP-LIMK1及pSUPER-LIMK1.以浓度为1 μmol/L的瘦素孵育细胞为实验组,通过Western印迹实验检测Cofilin磷酸化水平的变化;通过细胞迁移实验观察LIMK1在瘦素诱导的细胞迁移中的作用.结果 经瘦素诱导可使SW620细胞中Cofilin磷酸化水平增加,被LIMK1调控;细胞迁移实验显示LIMK1参与瘦素诱导的细胞迁移.结论 瘦素/LIMK1/Cofilin信号通路对结肠癌细胞的迁移具有明显的促进作用,可能与结肠癌的发生、发展相关.     

p-STAT3与E-cadherin在胰腺癌中的表达及其临床意义

目的:观察信号传导和转录激活因子3(STAT3)活化形式-磷酸化STAT3(p-STAT3)和上皮型-钙黏附素(E-cadherin)在胰腺癌组织及细胞中的表达及其临床意义,探讨STAT3信号通路在胰腺癌侵袭转移中的作用.方法:免疫组化检测34例胰腺癌和10例正常胰腺组织中p-STAT3和E-cad的表达,并分析其与胰腺癌临床病理特征的关系.细胞侵袭测定试剂盒检测胰腺癌细胞株SW1990和CaPan-2侵袭能力;分别采用Western blot和电泳迁移率变迁实验(EMSA)检测2种细胞中p-STAT3蛋白表达及STAT3-DNA结合活性.结果:免疫组化发现p-STAT3在胰腺癌组织中存在高表达(64.7%),与临床分期及淋巴结转移有关(P=0.017,P=0.013);E-cad在胰腺癌组织中表达明显降低,与组织学分级(P=0.002)、临床分期(P=0.034)及淋巴结转移(P=0.019)有关.在胰腺癌组织中,p-STAT3与E-cad的表达呈负相关(r=-0.537,P=0.001).体外侵袭实验发现SW1990细胞比CaPan-2细胞具有更高的侵袭能力(P＜0.05).Western blot发现在胰腺癌高侵袭力细胞株SW1990中p-STAT3蛋白呈高表达,而在低侵袭力细胞株CaPan-2中呈低表达;EMSA实验亦证实SW1990细胞较CaPan-2细胞具有更高的STAT3-DNA结合活性(P＜0.05).结论:p-STAT3与胰腺癌侵袭转移及E-cad异常表达密切相关;联合检测两种蛋白对于胰腺癌恶性潜能的判断具有一定的参考价值.     

γ-氨基丁酸对胰腺癌细胞增殖及转移作用的实验研究

目的 观察γ-氨基丁酸(GABA)对胰腺癌SW1990细胞增殖、细胞周期及基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9表达的影响.方法 应用不同浓度(0～320 μmol/L)GABA干预SW1990细胞,采用MTT法和流式细胞仪检测细胞增殖和细胞周期.RT-PCR检测细胞MMP-2 mRNA和MMP-9 mRNA的表达,Western blot检测MMP-2和MMP-9蛋白表达.结果 GABA促进胰腺癌SW1990细胞的生长,使G0/G1细胞减少,S期和G2/M细胞增多.320μmol/L的GABA干预细胞后的A570值为1.11±0.03,较无GABA干预组的0.56±0.01显著增加(P<0.01);G0/G1细胞为(46.18±1.12)%,较无GABA干预组的(87.29±1.34)%显著减少(P<0.01);MMP-2 mRNA、MMP-9 mRNA及蛋白表达分别为8.6、6.8、10.5、8.4,较0～40μmol/L组显著增加(P<0.05).结论 GABA能促进SW1990细胞增殖和MMPs的表达.     

敲低Spectrinβ Ⅱ加重棕榈酸诱导的心肌细胞损伤

目的 研究血影蛋白β Ⅱ（Spectrin βⅡ）在棕榈酸诱导的小鼠原代心肌细胞DNA损伤和细胞凋亡中的作用。 方法 ①Western blot检测棕榈酸处理后小鼠原代心肌细胞Spectrin β Ⅱ表达量变化。②分别用Ad-sh-scramble（对照组）和Ad-sh-Spectrin β Ⅱ（Spectrin β Ⅱ干涉组）的腺病毒感染小鼠原代心肌细胞,荧光显微镜下观察病毒的感染效率。利用Western blot和qPCR检测Spectrin β Ⅱ的干涉效率。③Western blot检测棕榈酸处理后Ad-sh-scramble组和Spectrin β Ⅱ干涉组小鼠原代心肌细胞DNA损伤指标γ-H2AX及凋亡蛋白剪切型半胱天冬酶3(cleaved-caspase 3)的表达,采用流式细胞术检测各组细胞凋亡水平。 结果 ①给予棕榈酸处理的小鼠原代心肌细胞Spectrin β Ⅱ蛋白水平显著降低（P<0.05）。②与Ad-sh-scramble组相比,Ad-sh-Spectrin β Ⅱ组Spectrin β Ⅱ的蛋白和mRNA水平均显著降低（P<0.05）③给予棕榈酸处理后,与Ad-sh-scramble组相比,Ad-sh-Spectrin β Ⅱ组的γ-H2AX2和cleaved-caspase 3蛋白表达显著升高（P<0.05）,并且细胞凋亡率显著升高（P<0.05）。 结论 敲低Spectrin β Ⅱ加重棕榈酸诱导的小鼠原代心肌细胞DNA损伤和细胞凋亡。