老年胃癌患者外周血树突细胞功能

目的探讨树突细胞(DCs)在胃癌疾病的发病机制。方法健康对照者与老年胃癌患者各50例,收集外周血,体外给予10 ng/ml巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)及白细胞介素(IL)-4的血清培养液培养,第7天DCs收集细胞及上清,运用流式细胞技术检测DCs表型表达,酶联免疫吸附(ELISA)方法检测细胞上清肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-12含量变化,同种混合淋巴细胞反应检测DCs刺激淋巴细胞增殖和分化的能力。结果与对照组相比,胃癌组外周血DCs表面表达的CD80、CD86、CD40及主要组织相容性(MHC)Ⅱ数量明显低(P0.05);DCs分泌的TNF-α、IL-12明显低(P0.05);DCs吞噬能力明显增加(P0.05);DCs刺激淋巴细胞增殖及分化能力明显低(P0.05)。结论老年胃癌患者外周血DCs呈现未成熟状态,提示DCs与胃癌疾病具有很大的相关性。     

慢性乙型肝炎患者干扰素疗效与CD28阳性外周血单个核细胞的关系

探讨干扰素疗效与慢性乙肝患者CD2 8阳性外周血单个核细胞 (PBMCs)的关系。分离 32例慢性乙肝患者及 8例正常对照PBMCs,以间接免疫荧光流式细胞技术检测CD2 8+ PBMCs,结果显示慢性乙肝患者在干扰素治疗前和结束时CD2 8+ PBMCs均较正常对照组显著降低 (分别为P <0 0 1及P <0 0 5 ) ;干扰素治疗结束时患者CD2 8+ PBMCs水平显著升高 ,与治疗前相比差异具有极显著意义 (P <0 0 1) ;抗病毒治疗 3个月后有 2 1例患者达到完全或部分应答标准 ,11例无应答 ;产生完全或部分应答组 ,在治疗前、后CD2 8+ PBMCs均相应高于无应答组 ;进一步分析表明 ,治疗前完全应答组显著高于无应答组 ,差异具有显著性意义 (P <0 0 5 ) ,而部分应答组虽高于无应答组 ,但差异无显著性意义 (P >0 0 5 )。研究结果提示慢性乙肝患者CD2 8+ PBMCs水平可能与患者对干扰素的应答有关 ,似可作为干扰素疗效预测的指标。     

慢性乙型肝炎患者树突状细胞功能与单个核细胞乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA的关系

目的 探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血单个核细胞(PBMC)及树突状细胞(DC)内HBV共价闭合环状DNA(HBV cccDNA)的存在状况,DC成熟度及功能状态与DC或PBMC中HBV cccDNA载量的关系.方法 分离29例CHB患者和10例健康对照者的PBMC,用重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CS...     

慢性乙型肝炎患者树突状细胞功能与单个核细胞乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA的关系

Objective To investigate the relationship between the maturity and function of dendritic cells (DC) and hepatitis B virus covalently closed circular DNA (HBV cccDNA) load in the peripheral blood mononuclear cells (PBMC)/monocyte-derived DC in patients with chronic hepatitis B (CHB). Methods The peripheral blood samples were collected from 29 patients with CHB and 10healthy controls. PBMC were isolated freshly and induced with granulocyte/macrophage colony stimulating factor (GM-CSF) and interleukin-4 (IL-4). A large amount of DC were harvested after seven days of culture. The expressions of CD209, CD80, CD86, human leucocyte antigen (HLA)-DR and CD1a of DC were analyzed by flow cytometry. The HBV cccDNA load in PBMC and DC were measured by real-time polymerase chain reaction (PCR). The interleukin-12 (IL-12) level in the culture supernatant of DC was determined by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA). The effects on T lymphocyte proliferation induced by DC were tested by mixed lymphocyte reaction (MLR). The data was compared by t test and analysis of variance. Results HBV cccDNA could be detected in PBMC from 16 patients, but not in DC from all 29 patients. HBV cccDNA load was all negatively correlated with the expressions of CD209 (r= -0. 793, P＜0.01), CD80 (r= -0. 581,P＜0.05), CD86 (r=-0. 698, P＜0.01), HLA-DR (r=-0. 817, P＜0.01), CD1a (r=-0. 734, P＜0.01), IL-12 level (r=-0. 632, P＜0.05) and allogenic T lymphocyte proliferation induced by DC (r=-0. 617, P＜0.05). The expressions of CD209, CD80, CD86, CD1a and HLA-DR on DC,IL-12 level in culture supernatant of DC and the allogenic T lymphocyte proliferation induced by DC in patients with positive PBMC HBV cccDNA were all significantly lower compared to those in healthy controls, and the changes of the parameters mentioned above were greater in PBMC HBV cccDNA positive patients than those in PBMC HBV cccDNA negative patients (P ＜ 0. 05 or P ＜ 0. 01).Conclusions The function and maturity of DC are impaired in CHB patients. HBV cccDNA can be detected in PBMC from CHB patients. Moreover, the higher PBMC HBV cccDNA is, the worse DC function and maturity are, which could be one of the important mechanisms of HBV persistent infection.     

慢性乙型肝炎患者树突状细胞功能与单个核细胞乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA的关系

Objective To investigate the relationship between the maturity and function of dendritic cells (DC) and hepatitis B virus covalently closed circular DNA (HBV cccDNA) load in the peripheral blood mononuclear cells (PBMC)/monocyte-derived DC in patients with chronic hepatitis B (CHB). Methods The peripheral blood samples were collected from 29 patients with CHB and 10healthy controls. PBMC were isolated freshly and induced with granulocyte/macrophage colony stimulating factor (GM-CSF) and interleukin-4 (IL-4). A large amount of DC were harvested after seven days of culture. The expressions of CD209, CD80, CD86, human leucocyte antigen (HLA)-DR and CD1a of DC were analyzed by flow cytometry. The HBV cccDNA load in PBMC and DC were measured by real-time polymerase chain reaction (PCR). The interleukin-12 (IL-12) level in the culture supernatant of DC was determined by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA). The effects on T lymphocyte proliferation induced by DC were tested by mixed lymphocyte reaction (MLR). The data was compared by t test and analysis of variance. Results HBV cccDNA could be detected in PBMC from 16 patients, but not in DC from all 29 patients. HBV cccDNA load was all negatively correlated with the expressions of CD209 (r= -0. 793, P＜0.01), CD80 (r= -0. 581,P＜0.05), CD86 (r=-0. 698, P＜0.01), HLA-DR (r=-0. 817, P＜0.01), CD1a (r=-0. 734, P＜0.01), IL-12 level (r=-0. 632, P＜0.05) and allogenic T lymphocyte proliferation induced by DC (r=-0. 617, P＜0.05). The expressions of CD209, CD80, CD86, CD1a and HLA-DR on DC,IL-12 level in culture supernatant of DC and the allogenic T lymphocyte proliferation induced by DC in patients with positive PBMC HBV cccDNA were all significantly lower compared to those in healthy controls, and the changes of the parameters mentioned above were greater in PBMC HBV cccDNA positive patients than those in PBMC HBV cccDNA negative patients (P ＜ 0. 05 or P ＜ 0. 01).Conclusions The function and maturity of DC are impaired in CHB patients. HBV cccDNA can be detected in PBMC from CHB patients. Moreover, the higher PBMC HBV cccDNA is, the worse DC function and maturity are, which could be one of the important mechanisms of HBV persistent infection.     

树突细胞及其调节细胞免疫功能的作用

<正>早在19世纪70年代,Steinman等~〔1〕分离出一类细胞,与粒细胞、巨噬细胞和淋巴细胞的形态和功能都不同,由于这类细胞在成熟时会有许多树突样或伪足样突起伸出,故被命名为树突细胞(DCs)。DCs是目前已知的机体抗原提呈功能最强的专职抗原提呈细胞,在体内捕获抗原并将其提呈给辅助性T淋巴细胞(Th)从而发挥免疫防御的功能~〔2〕。DCs分布比较广泛,肝、脾、淋巴组织、血液、皮肤黏膜等组织均有,能够活化介导适     

糖尿病患者外周血树突细胞功能活性检查及抑制NF-κB活性的意义

目的 检测糖尿病(DM)患者外周血单个核细胞(PBMNCs)培养树突细胞(DC)的功能表达及其临床意义, 探讨DC成熟过程中核因子 (NF)-κB基因的作用.方法 DM患者及健康成人PBMC体外经GM-CSF和IL-4诱导培养DC,在DC培养中加入NF-κB特异性低脱氧核苷酸(ODN)阻断NF-κB活性,检测细胞表面分子表达以及混合淋巴细胞反应(MLR)检测其功能变化.结果 DM患者外周血培养获成熟DC数量较多,DC表面标志较正常对照表达升高,具有较强的激发MLR的能力,DC成熟高于正常人.但NF-κB ODN可以抑制DC表面标志的表达,阻碍DC发育成熟,降低激发MLR的能力,并不可被脂多糖(LPS) 所逆转.结论 DM患者DC免疫功能高于正常对照DC功能状态,NF-κB是DC发育成熟过程中关键性调控基因.应用NF-κB ODN可抑制DC成熟,诱导生成耐受原性未成熟DC.     

直肠癌患者外周血单核细胞诱导为树突细胞

目的 用直肠癌患者外周血单核细胞通过体外培养的方法诱导为成熟树突细胞.方法 CS-3000血细胞分离机采集直肠癌患者外周血单核细胞悬液,Ficoll分离单个核细胞,用含10%FBS的RPMI-1640培养基培养,第0天加入GM-CSF 1 000 U/ml、IL-4 500 U/ml,第4天2/3量换液,补足GM-CSF、白介素(IL)-4,并加入肿瘤坏死因子(TNF)-α 500 U/ml诱导其成熟,以后每隔3天2/3量换液.结果 培养至第11天,收集培养的1×105～2×105个树突细胞经流式细胞仪检测表达CD83+(52.9±5.8)%,CD86+(79.2±8.1)%,HLA-DR(65.8±5.7)%,CD1a(51.3±6.4)%,及CD+14(4.72±2.16)%.结论 直肠癌患者外周血单核细胞经GM-CSF、IL-4及TNF-α联合培养能诱导出成熟树突细胞.为直肠癌的免疫治疗提供了临床应用基础.     

慢性乙型肝炎患者外周血树突细胞的体外扩增及鉴定

目的尝试从慢性乙型肝炎患者外周血扩增培养出大量树突细胞,为进一步临床应用树突细胞治疗慢性乙型肝炎提供物质基础.方法分别取健康人和患者外周血分离培养单核细胞,加入rhGM-CSF、rhIL-4,经7天培养后收获即为不完全成熟树突细胞(DC).以倒置显微镜观察摄影、透射电镜摄影、流式细胞仪测定表面特异性分子的表达、混合淋巴细胞反应测定功能,对DC进行鉴定.结果第七天记数有明显树突状突起的大个细胞或细胞团,产率为0.2～4.5×105/6ml血;透射电镜可见细胞表面伸展的突起;70%以上细胞有DC特异性标志CD1a高表达,而单核细胞特异性标志CD14表达小于4%;能刺激同种异体淋巴细胞强烈增殖,随刺激细胞数目的增加,其促增殖作用增强,P<0.01.结论在本实验条件下,从慢性乙型肝炎患者外周血单核细胞可诱导扩增出大量DC.     

流式细胞术检测皮肤组织在母细胞性浆细胞样树突细胞肿瘤诊断中的应用

摘要 目的:探讨流式细胞术(FCM)检测皮肤组织样本在诊断母细胞性浆细胞样树突细胞肿瘤（BPDCN）中的作用。方法：利用多色流式检测皮肤组织与骨髓,并结合组织病理学、骨髓细胞形态学、遗传学、二代测序（NGS）等检测结果对3例已确诊的BPDCN进行回顾性分析。结果：3例患者均以皮肤损害为首发症状,FCM检测骨髓仅发现1例患者标本存在BPDCN细胞,而3例患者皮肤组织标本中均发现BPDCN细胞;与皮肤组织病理免疫组化结果诊断一致;病例2患者骨髓细胞学和遗传学检查均未发现BPDCN细胞,病例1患者骨髓细胞学中发现BPDCN细胞,病例3患者NGS检测到BPDCN相关基因突变。结论：流式细胞免疫分型是BPDCN诊断的实用辅助手段,可以在早期皮肤组织标本中快速精准地诊断BPDCN,同时进行鉴别诊断。     

Graves病患者碘营养状况与外周血细胞因子和单个核细胞抗原表达的关系

本研究探讨Graves病（GD）患者尿碘水平与外周血细胞因子和单个核细胞（PBMC）表面抗原的关系。结果表明高碘摄入可能加重GD突眼、甲状腺肿大等症状，IL-1β等细胞因子和PBMC表达的HLA-DR、CD80异常与高碘导致的免疫紊乱可能有一定关系。     

应激大鼠肠道树突细胞的免疫功能

目的研究应激大鼠肠道树突细胞(DC)表型及功能状态的改变。方法选用20只雄性SD大鼠随机分为对照组、实验组,各10只。给予实验组大鼠结直肠扩张联合束缚刺激,对照组大鼠不处理,采用大鼠腹部收缩反射(AWR)对两组大鼠进行直肠气囊扩张,测量肠道容量感觉阈值。成功建立模型后,磁珠分选技术分离肠系膜淋巴结DC,检测其表面CD80、CD86、MHCⅠ、MHCⅡ、Toll样受体(TLR)4的表达,将MLNDC与脾脏单个核细胞体外混合培养,流式标记CD4+/CD8+T淋巴细胞,检测MLNDC促CD4+/CD8+T淋巴细胞增殖的能力。结果实验组大鼠的疼痛阈值明显低于对照组(P<0.05);实验组大鼠MLNDC表达MHCⅡ水平高于对照组(P<0.05),而表达CD80、CD86、MHCI与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);实验组大鼠MLNDC表达TLR4高于对照组(P<0.05);与对照组相比,实验组大鼠MLNDC促CD4+/CD8+T淋巴细胞增殖能力增强(P>0.05)。结论大鼠应激刺激后肠道DC上调表达TLR4,刺激其本身分化成熟,进一步表达MHCⅡ,后者通过介导T淋巴细胞活化,引起肠道低度炎症,从而引起肠道内脏高敏感的产生。     

阿维A对正常人外周血树突细胞的影响

目的研究阿维A对正常人外周血树突细胞(DCs)功能的影响。方法抽取健康人外周血,分离单个核细胞,体外诱导培养DCs。不同浓度阿维A(1 nmol/L和10 nmol/L)作用DCs 12 h,对照组只加培养基,流式细胞术(FCM)检测DCs中CD83及CD86表达水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清液中白介素(IL)-12表达水平。结果体外成功培养出DCs,FCM检测到1、10 nmol/L阿维A作用DCs 12 h后,CD83表达率分别为(56.65±7.09)%、(63.82±5.81)%,显著高于阴性对照组〔(43.55±4.32)%〕(P<0.05);CD86表达率分别为(65.43±1.79)%、(73.73±2.10)%,显著高于阴性对照组〔(52.96±1.10)%〕(P<0.05)。ELISA检测到1、10 nmol/L阿维A作用DCs 12 h后,DCs分泌到细胞培养液中的IL-12表达水平分别为(51.377±4.527)、(60.659±4.973)pg/ml,显著高于对照组〔(39.927±2.809)pg/ml〕(P<0.05)。结论阿维A可提高正常人外周血DCs表面标志CD83、CD86的表达率及细胞因子IL-12的分泌量,增强正常人外周血DCs的抗原提呈能力并可促进DCs向成熟方向分化,从而起到调控机体免疫功能的作用。     

贴壁生长与悬浮生长树突细胞的免疫学功能比较

目的 探索树突细胞(DCs)的可能生长状态,比较分析不同生长状态DCs的免疫学功能.方法 从正常人外周血分离获得单个核细胞,用不同培养介质常规培养2 h,取贴壁细胞,用含细胞因子的培养液进行培养,在培养过程中光镜下对其进行形态鉴别,然后检测两种DCs促淋巴细胞增殖和诱导免疫反应的功能.结果 7 d后,培养瓶中DCs基本处于悬浮状态,而培养板中DCs基本处于贴壁状态;培养瓶中DCs与培养板中DCs形态与理论相符,但培养板中DCs分化形态优于培养瓶中DCs.而在体外促进淋巴细胞增殖及体外诱导免疫反应方面,培养瓶中DCs的能力优于培养板中DCs.结论 在DCs体外培养至发育成熟的过程中,DCs先贴壁后悬浮的生长性质可能对其免疫学功能有着重要意义.     

树突细胞、白介素-23与溃疡性结肠炎的关系

目的:探讨树突细胞(dendritic cell,DC)和白介素(interleukin,IL)-23对提高溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)诊治水平的价值和意义.方法:以UC、肠易激综合征(irritable bowe syndrome,IBS)患者的肠黏膜蜡块标本为研究对象,应用免疫组织化学SP法检测两种病变肠黏膜中S100+DC、CD83+DC及IL-23P19的表达情况,并分析UC组中急性发作期与慢性迁延期,轻型组与重型组,美沙拉嗪治疗前后IL-23P19的浸润密度.结果:UC与IBS患者肠黏膜中S100+D C、CD83+DC、IL-23P19的浸润密度(个/mm2)比较,分别为27.48±9.23 vs 9.20±3.91,6.62±2.59 vs 3.20±1.59,105.97±25.30 vs 32.48±11.61,差异有统计学意义(P0.05);UC组中,急性发作期与慢性迁延期、轻型组与重型组、美沙拉嗪治疗前后IL-23P19浸润密度(个/mm2)比较,分别为113.83±28.83 vs49.35±8.11,75.03±21.39 vs 117.38±28.32109.89±25.73 vs 47.25±8.67,差异有统计学意义(P0.05).结论:UC患者肠黏膜中,随着DC表达的增多及分化能力增强,IL-23分泌增多;IL-23可作为UC判断疾病发作、病情轻重及疗效的监测指标.     

桥本甲状腺炎患者甲状腺与外周血中单个核细胞免疫功能比较

目的 研究桥本甲状腺炎（ＨＴ）患者甲瘃腺内单个核细胞（ＴＭＧ）和外周血中单个核细胞（ＰＢＭＣ）产生自身抗体和白细胞介素－１（ＩＬ－１）、ＴＮＦα的能力。方法 甲瘃腺球蛋白抗体（ＴｇＡｂ）和抗甲状腺过氧化物酶抗体（ＴＰＯＡｂ）采用放射免疫测定法,ＩＬ－１和ＴＮＦα采用生物学测定法。结果 （１）ＨＴ鹗２ＴＭＣ和ＰＢＭＣ均能产生ＴｇＡｂ,但ＴＭＣ能力强于ＰＭＢＣ（Ｐ〈０．０１）,ＴＭＣ能产生Ｔ：ＰＯＡｂ     

白细胞介素-15对脐血和成人外周血单个核细胞抗肿瘤活性的影响

目的：探讨白细胞介素—15(1L—15)对脐血单个核细胞(CBMNC)和成人外周血单个核细胞(PBMNC)抗肿瘤活性的影响。方法：采用MTT法分别检测静止的CBMNC和PBMNC对K562和HL—60细胞株的杀伤活性、经不同浓度的IL—15及不同效靶比条件下激活的CBMNC和PBMNC抗瘤活性，采用ELISA法测定培养上清中IFN—r及TNF—a水平，采用APAAP检测CD56、CD16表面抗原。结果：①静止CBMNC抗肿瘤活性显著低于PBMNC，经IL—15活化后，脐血NK活性显著增强，可达成人水平，脐血LAK活性显著高于成人血LAK活性。②活化后培养上清中的IFN—r及TNF—a水平均显著增强，但脐血培养上清中两种细胞因子的水平仍低于成人血。③活化前后脐血NK细胞CD56表达显著增强。结论：IL—15能显著提高CBMNC的抗肿瘤活性，为今后优选IL—15活化脐血进行肿瘤过继免疫治疗提供了理论依据。     

慢性乙肝合并肺结核患者外周血单个核细胞HBV pgRNA的表达与免疫功能的相关性

目的 研究慢性乙肝(CHB)合并肺结核患者外周血单个核细胞(PBMCs)HBV前基因组RNA(pgRNA)的表达及其与免疫功能的相关性.方法 将2018年3月-2019年3月我院结核门诊新确诊的40例CHB合并肺结核患者随机分为两组,对照组(n=20)采用2HRZE/4HR方案进行常规抗结核治疗,治疗组(n=20)在此...     

Graves病甲状腺内树突细胞与体液免疫紊乱的关系

目的　探讨Graves病(GD)甲状腺内树突细胞 (DC)与其体液免疫紊乱的关系。方法用抗S 100蛋白抗体SP免疫组化法对 34例GD和 5例正常对照甲状腺内的DC进行定位和半定量研究。用表达重组促甲状腺激素 (TSH)受体的人胚肾细胞检测术前血清中的甲状腺刺激性抗体(TSAb)。对甲状腺内DC的浸润密度与血清TSAb值进行相关分析。结果　正常甲状腺内未见DC,在所有被检GD患者的甲状腺内均可见到DC异常增多,且大多数DC与其周围甲状腺上皮细胞或间质浸润淋巴细胞密切接触。GD患者甲状腺内DC的浸润密度与血清TSAb值密切正相关 (r=0 4461,P<0 01)。结论　GD患者甲状腺内异常增多的DC与其体液免疫紊乱有密切关系,在其自身免疫反应的发生发展中起着重要作用。