GM—CSF及IL—4增强骨肉瘤患者树突状细胞免疫功能

目的 探讨粒/巨噬细胞集落刺激因子(GM—CSF)及白介素—4(IL—4)能否增强正常成人及骨肉瘤患者树突状细胞(DC)表面免疫分子人白细胞抗原—DR(HLA—DR)及B_7的表达并进一步增强DC免疫功能。方法 以GM—CSF及IL—4联合刺激正常成人(n=10)及骨肉瘤患者(n=10)DC;检测DC表面HLA—DR及B_7表达水平及DC免疫功能变化。结果 GM—CSF及IL—4联合刺激能选择性地促进DC增殖;经GM—CSF及IL—4联合刺激后DC表面HLA—DR及B_7表达水平在肿瘤患者(8.6±0.9、7.9±1.1增至14.1±1.2、15.2±1.5VOF,P<0.01)及正常成人(10.7±1.4、9.6±1.2增至16± 1.7、15±1.3VOF,P<0.01)均显著增高;DC免疫诱导能力亦相应增强(骨肉瘤患者:由3582±76增至6489±±98cpm,P<0.01;正常:由6269±91增至7095±87cpm,P>0.05)。结论 GM—CSF及IL—4联合刺激能增强正常成人及骨肉瘤患者DC表面HLA—DR及B_7表达水平,并进一步增强DC免疫功能。提示联合应用GM—CSF及IL—4可能成为提高宿主抗肿瘤免疫力的有效途径。     

树突状细胞与髓性白血病的免疫治疗 *

目的：我们应用逆转录病毒构建了ＩＬ－１２,Ｂ－７和ＧＭ－ＣＳＦ表达载体,以研究基因修的肿瘤细胞的癌疫苗作用。方法：将３种表达载体分别转染ＥＬ－４胞腺瘤细胞并研究了该基因导入细胞的抗肿瘤免疫效果。结果：当接种子ＥＬ４／ＩＬ－１２细胞后,在Ｃ５７ＰＬ／６同系鼠中其基因导入细胞的肿瘤原性比较ＥＬ４／Ｗｔ和ＥＬ－４／Ｎｅｏ组明显减少（Ｐ〈０．０１）。在ＥＬ４／ＩＬ－１２被排斥后,体内试验中诱发了实验动物抗     

树突状细胞提呈凋亡癌细胞抗原的实验研究

目的：建立从人外周血诱导扩增树突状细胞（ＤＣ）及吞噬凋亡小体负载抗原。方法：从正常人外周血分离获得单核细胞,加入５０ｍｇ／ｍｌ ｒｈＧＭ－ＣＳＦ,１０００ｎｇ／ｍｌ ｒｈＩＬ－４,隔天一次,共４次,培养第三天,加入γ射线照射过的胆管癌细胞,再继续体外培养一周后,用树突细胞富集柱收集ＤＣ。结果：见ＤＣ高表达共刺激分子Ｂ７和ＣＤ１ａ,表面具有典型不规划突起,ＤＣ还可捕捉凋亡小体、吞噬凋亡小体。负载抗原     

IL—1β，IL—8在非小细胞肺癌中的病理学和临床意义

目的：研究白细胞介素1β（IL－1β）,白细胞介素8（IL－8）在非小细胞肺癌中的阳性率及其与肺癌组织类类型,分化程度和病理TNM分期等的关系。方法：以术后大体肺石腊包埋组织为材料,用免疫组化方法测定了IL－1β,IL－8在肺癌细胞中的染色情况。结果：共选择88例肺癌患者,IL－1β,IL－8的阳性率分别是52例（59％）,49例（56％）,IL－1β,IL－8与肺癌组织类类型,分化程度无明显的关系（P＞0．05）,I期肺癌细胞IL－1β,IL-8染色的阳性率高于II期和III期肺癌（P＜0．05）,结论：IL－8β,IL-8在I期肺癌的阳性高于II期和III期肺癌,说明早期肺癌患者的细胞因子反应状态和免疫功能较好。     

白细胞介素18基因修饰的树突状细胞的表型分析及其免？…

目的：研究ＩＬ－１８基因修饰后的树突状细胞（ＤＣ）的表型和功能的变化。方法;以含ＩＬ－１８基因的重组腺病毒体外转染小鼠骨髓来源的ＤＣ,ＥＬＩＳＡ检测ＩＬ－１８分泌水平,以ＲＴ－ＰＣＲ检测ＩＬ－１８ｍＲＮＡ表达,以ＦＡＣＳ法分析其ＤＣ表型变化,采用（＾３Ｈ）－ＴｄＲ检测其ＭＬＲ的变化。     

人骨肉瘤细胞系HOS—8603上清液抑制树突状细胞免疫功能

为研究肿瘤细胞与树突状细胞（ＤＣ）免疫功能相关性，检测正常成人外周血ＤＣ与人骨肉瘤细胞系ＨＯＳ－８６０３上清液培养前后ＤＣ表面人白细胞抗原（ＨＬＡ－ＤＡ）及辅助免疫分子Ｂ７表达水平以及ＤＣ免疫功能变化。结果显示正常人ＤＣ经人骨肉瘤细胞系ＨＯＳ－８６０３上清液（５０％）培养后其表面ＨＬＡ－ＤＡ及Ｂ７表达水平明显下降，其免疫诱导能力亦相应下降；ＤＣ表面ＨＬＡ－ＤＡ及Ｂ７的表达水平与ＨＯＳ－８６０３上清液浓度呈负相关。提示ＤＣ表面ＨＬＡ－ＤＡ及Ｂ７表达水平及ＤＣ免疫功能与肿瘤细胞密切相关，肿瘤细胞可能通过分泌某些肿瘤细胞因子抑制ＤＣ表面ＨＬＡ－ＤＡ及Ｂ７表达，并进一步抑制ＤＣ免疫功能，从而逃避宿主免疫监视     

急性白血病细胞体外自主生长与自分泌GM—CSF水平测定及其临床意义

目的：探讨急性粒细胞性白血病（ＡＭＬ）细胞体外自发生长的原因及其临床意义。方法：应用甲基纤维素半固体集落培养和＾１２５Ｉ放射免疫测定法对１６例ＡＭＬ细胞进行白血病克隆形成单位计数和粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）生成水平测定。结果：１１例（６８．７５％）ＡＭＬ细胞在无外源ＧＭ－ＣＳＦ时自主生长；自主细胞生长民政部与ＧＭ－ＣＳＦ水平呈正相关，细胞生长组与无细胞生长组的ＧＭ－ＣＳＦ水平差异有     

大肠腺瘤S—100^＋树突状细胞的免疫组织化学研究

用Ｓ－１００蛋白抗体对５４例大肠腺瘤、３１例正常大肠粘膜和１４４例大肠癌组织进行免疫组化染色。定量分析显示大肠腺瘤和大肠癌组织中Ｓ－１００＾＋树突状细胞较正常组明显增多（Ｐ〈０．０１）。腺瘤组织ＤＣ和组织学类型及不典型增生程度有关。提示ＤＣ在腺瘤恶变过程中可能识别潜在恶性细胞产生的肿瘤抗原，在局部抗肿瘤免疫中发挥重要作用。     

Mncl2增强树突状细胞HLA—DR表达的研究

目的探索Mncl2对树突状细胞(Dendriticcells.DC)HLA-DR表达的影响.方法采用流式细胞仪分析Mncl2刺激组及阴性对照组DC表面HLA-DR表达水平及HLA-DR阳性细胞率.结果Mncl2刺激组DC平均荧光强度为165.97,阴性对照组为105.72(P＜0.01).刺激组DC的HLA-DR阳性细胞率为89.96%,阴性对照组为78.73%(P＜0.01).结论Mncl2在体外能显著增强DC表面HLA-DR表达水平及总细胞HLA-DR阳性细胞率.     

树突状细胞功能缺陷与肿瘤免疫逃逸

树突状细胞（DC）是功能强大的专职抗原提呈细胞，是机体免疫的始动者。近年来发现肿瘤及其微环境通过多种途径减少肿瘤患者体内DC的数量并可抑制DC的成熟，从而下调或抑制其抗原提呈及免疫起始功能，且可以诱导调节性DC的产生，介导免疫耐受，最终实现逃避机体免疫监视及免疫清除的目的。     

粒-巨噬细胞集落刺激因子剂量对小鼠骨髓源性树突状细胞成熟状态的影响

 目的　观察不同剂量粒-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）对小鼠树突状细胞（DC）形态、纯度、成熟程度的影响,为不同用途的DC疫苗制备选择合适的GM-CSF质量浓度提供理论依据。方法　用低剂量（5 ng／ml）、常规剂量（20 ng／ml）、高剂量（50 ng／ml）GM-CSF联合重组小鼠白细胞介素-4（mIL-4）诱导小鼠骨髓细胞体外分化为DC,流式细胞术测定CD11c、CD80和CD86表达率。结果　低剂量GM-CSF组诱导的DC不具有典型的DC形态,低表达CD11c、CD80和CD86。常规剂量GM-CSF组诱导的DC高表达CD11c、CD80和CD86,具有更强的刺激同种异体淋巴细胞增殖能力。高剂量GM-CSF组CD11c、CD80和CD86表达率最高,并具有最强的刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力。结论　GM-CSF剂量影响诱导分化的DC成熟程度。低剂量的GM-CSF诱导的DC为不成熟的DC,常规剂量和高剂量GM-CSF诱导分化的DC为细胞表型和功能成熟的DC。高剂量GM-CSF诱导的DC细胞表型和功能最成熟。     

树突状细胞分化成熟障碍在肺癌免疫逃逸中的研究

肺癌患者体内存在广泛的免疫逃逸现象,这一事实已在鼠肿瘤模型及癌症患者得到确认.目前所知肺癌免疫逃逸的机制很多,其中树突状细胞(DC)的分化成熟异常导致的功能障碍是肿瘤免疫逃逸的主要机制之一,肺癌微环境已成为造成DC功能不足的重要因素.     

肺癌细胞和蛙皮素抑制树突状细胞的产生和功能

目的：了解肺癌细胞株及蛙皮素对树突状细胞（DC）产生及功能的影响。方法：树突状细胞由健康人外周血单个核细胞CD14^ ，在完全细胞培养液中加入1000U／ml GM-CSF和1000U／ml IL-4,培养7天获得，肺癌细胞株CRL－5815，CRL－5826，Bombesin和Bombesin受体拮抗剂加入培养液中，Annxin V检测DC凋亡；流式细胞仪检测CD40，CD86，CD83，CD80，HLA－DR阳性表达。结果：培养7－10天后的DC前体细胞表达高水平的HLA－DR CD80 CD86 CD83 CD40。肺癌及蛙皮素可导致DC前体细胞凋亡，而蛙皮素受体拮抗剂可部分保护蛙皮素致DC凋亡的作用。加入肺癌细胞株或蛙皮素与DC共培养时明显抑制上述细胞表型的表达和DC刺激同种异体T细胞的增殖能力，当加入蛙皮素受体拮抗剂时，DC细胞表达HLA－DR CD80 CD86 CD83 CD40明显增加，接近DC正常对照组。结论：肺癌细胞株及蛙皮素可导致DC的凋亡，抑制树突状细胞的产生和功能。     

骨髓瘤独特型抗原致敏树突细胞诱导的主动免疫反应

背景与目的:大多数多发性骨髓瘤(multiplemyeloma,MM)无法通过大剂量化疗和造血干细胞移植治愈,应用树突细胞(DCs)瘤苗清除MM患者化疗后残留的骨髓瘤细胞,是近年来骨髓瘤免疫疗法的新策略。本研究旨在探讨负载Id的DC独特型瘤苗对自体MM细胞的体外杀伤作用。方法:从MM患者外周血中分离获取DCs前体细胞,用GM鄄CSF与IL鄄4诱导分化,培养第5天加入从患者血清中提取的IgG的F(ab’)2片段(Id),第7天加TNF鄄α促成熟,将Id冲击致敏的DCs与自体T淋巴细胞共培养3天,获得肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)。MTT法检测致敏DCs促自体T淋巴细胞增殖能力,以及患者CTLs对自体MM细胞的特异性细胞毒杀伤作用。结果:GM鄄CSF、IL鄄4和TNF鄄α联合可以有效地从MM患者外周血单核细胞中诱导出大量成熟的功能性DCs。MM患者自体血清Id冲击致敏的成熟DCs能够显著提高T细胞增殖能力,且与DC∶T的比值呈正相关;同时在1∶10时刺激细胞为负载了Id的成熟DC组刺激指数(SI)值(39.1±6.0)%,明显高于未经Id刺激的成熟DC组、经Id刺激的未成熟DC组以及未经Id刺激的未成熟DC组[(19.3±7.7)%、(15.9±6.1)%和(11.4±4.9)%]。负载了Id的成熟DC能够使幼稚T细胞活化成为肿瘤独特型CTLs,各个剂量的CTLs均能诱导出针对自体MM细胞的抑制性杀伤反应,并且     

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子基因修饰的树突状细胞疫苗增强体外抗肿瘤免疫效应

目的 研究粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因修饰树突状细胞(DC)后形态、表型及功能的变化,以及增强DC疫苗对肿瘤细胞的体外杀伤作用.方法 小鼠尾静脉注射趋化因子配体3(CCL3),分选得到B220- CDllc+细胞,经细胞因子培养诱导分化DC.在体外用含GM-CSF基因的重组腺病毒(AdGM-CSF)转染DC,酶联免疫吸附试验(ELJSA)检测转染后GM-CSF的水平.通过细胞形态学观察、表型分析及混合淋巴细胞反应(MLR),检测GM-CSF基因修饰前后DC的变化.反复冻融法制备胃癌可溶性抗原,将其与GM-CSF基因修饰的DC共同培养,制备DC疫苗,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测活化的T淋巴细胞在体外对小鼠前胃癌细胞(MFC)的杀伤作用,ELISA法检测干扰素γ(INF-γ)的分泌情况.结果 CCL3注射后,外周血中B220- CD11c+细胞明显增加,48 h达到高峰[占外周血单个核细胞的(13.88±1.10)%].AdGM-CSF转染后,培养液上清中GM-CSF浓度升高,当感染复数(MOI)为1:100时达到高峰[(130.00±12.61)pg/m1].经GM-CSF.基因修饰的DC在形态上更趋成熟,MHCⅡ类分子、CD80、CD86等细胞表型明显上调,具有更强的刺激T细胞增殖的能力.荷载胃癌抗原的DC激活的T淋巴细胞对MFC细胞具有特异性杀伤作用,并产生高水平的INF-γ[(1245.00±13.75)pg/ml].结论 GM-CSF转染DC后,能大量表达GM-CSF,DC形态及细胞表型更趋成熟,刺激T细胞增殖能力明显增强.GM-CSF基因修饰的DC在体外可诱导出针对靶肿瘤细胞的特异性杀伤作用.     

CPP-Id-DC疫苗对淋巴瘤荷瘤鼠的免疫治疗作用和对淋巴瘤细胞攻击的免疫保护效应

目的了解树突状细胞(DC)疫苗对淋巴瘤荷瘤鼠的免疫治疗作用及疫苗免疫对淋巴瘤细胞攻击的免疫保护效应。方法将小鼠淋巴瘤A20细胞接种BAL B/c小鼠,建立荷瘤鼠模型,分别接种Id-DC和CPP-Id-DC疫苗,观察荷瘤鼠肿瘤大小变化及生存时间。小鼠预先分别接种Id-DC和PP-Id-DC疫苗,然后以A20细胞攻击,观察其成瘤率及生存时间。均注射PBS作为对照。结果接种PBS的荷瘤鼠肿瘤生长快,中位生存时间为33.4 d;接种Id-DC的荷瘤鼠,个别小鼠肿瘤生长减慢,中位生存时间为40.4 d,与PBS对照组相比,差异无统计学意义;而接种CPP-Id-DC的荷瘤鼠肿瘤生长明显减慢,5只小鼠中,1只肿瘤停止生长,1只肿瘤逐渐缩小、消退,90 d内的中位生存时间为70.8 d,明显长于PBS对照组和Id-DC接种组(P<0.01)。以Id-DC预防接种的小鼠予A20细胞攻击后大部分成瘤(4/5),成瘤时间为7～12 d,较PBS对照组略延长,中位生存时间为44.8 d;CPP-Id-DC接种组小鼠60 d内均无肿瘤生长。结论CPP-Id负载的DC疫苗治疗B细胞淋巴瘤优于单纯Id负载的DC疫苗,可以提高抑瘤率和延长荷瘤鼠的生存时间,可在小鼠体内产生对A20淋巴瘤细胞攻击的免疫保护。     

Modulation of the immune response by heterogeneous monocytes and dendritic cells in lung cancer

Different subpopulations of monocytes and dendritic cells (DCs) may have a key impact on the modulation of the immune response in malignancy. In this review, we summarize the monocyte and DCs heterogeneity and their function in the context of modulating the immune response in cancer. Subgroups of monocytes may play opposing roles in cancer, depending on the tumour growth and progression as well as the type of cancer. Monocytes can have pro-tumour and anti-tumour functions and can also differentiate into monocyte-derived DCs (moDCs). MoDCs have a similar antigen presentation ability as classical DCs, including cross-priming, a process by which DCs activate CD8 T-cells by cross-presenting exogenous antigens. DCs play a critical role in generating anti-tumour CD8 T-cell immunity. DCs have plastic characteristics and show distinct phenotypes depending on their mature state and depending on the influence of the tumour microenvironment. MoDCs and other DC subsets have been attracting increased interest owing to their possible beneficial effects in cancer immunotherapy. This review also highlights key strategies deploying specific DC subpopulations in combination with other therapies to enhance the anti-tumour response and summarizes the latest ongoing and completed clinical trials using DCs in lung cancer.     

树突状细胞与乳腺癌的关系

树突状细胞(DC)已被证实与乳腺肿瘤的发生、发展、转移、预后的关系密切.以DC为基础的肿瘤免疫治疗备受关注,并在临床试验中有效地抑制乳腺癌的增长,展示临床应用前景十分广阔.