招远市5例异常血红蛋白的解链及纯化

（１）目的：对发现招远市的异常血红蛋白（Ｈｂ）进行分子结构的研究。（２）取异常Ｈｂ血样，以生理盐水洗去血浆蛋白质，再以蒸馏水处理压积红细胞以溶血，溶血液以－２０℃的酸性丙酮处理提取珠蛋白，用尿素将珠蛋白解链，再经柱层析分离及纯化异常链。（３）结果：经羧甲基纤维素及交联葡聚糖层析分离及纯化得到了异常α或β链用十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）检查纯度，这些异常α或β链均为一条电永     

6例异常血红蛋白K(Hb K)的基因型分析

目的分析6例异常血红蛋白K患者的基因型特征.方法对9 897例常规产检的孕妇行全自动毛细管电泳检测,检出的6例异常血红蛋白K患者进行23种常见地中海贫血基因检测及α、β-珠蛋白基因测序检测.结果 (1)1例杂合突变发生在α2链上,首次报道基因突变型为CD51 (GGC->TGC);(2)3例杂合突变发生在α1链上,基因突变型为Hb Hekinan II(GAG->GAT);(3)2例杂合突变发生在β链上,基因突变型分别为Hb Hope(GGT->GAT)和Hb New York(GTG->GAG).结论同一种异常血红蛋白病存在不同的基因型,且不同基因型临床表现不尽相同.     

1例Hb G Taipei及其一级结构分析

在江苏省的Hb普查中,检出一异常血红蛋白,电泳行为与HbG相同,珠蛋白解链电泳提示为β链异常。异常肽链的化学分析表明为β链22位谷氨酸残基被甘氨酸残基取代,证明此种Hb为Hb G Taipei,用β~(22(B4))Glu→Gly表示。     

一Hb Queens家系及其化学结构分析

本文报道在安徽蚌埠发现的一个Hb Queens家系。先证者的溶血液在pH8.6电泳中出现泳速相当于Hb G组的慢速血红蛋白区带。肽链分析证实此异常血红蛋白为α链异常。将异常α链经柱层析分离纯化后作指纹图,把指纹图的异常肽斑洗脱,用微量双偶合法作氨基酸顺序测定,发现异常肽斑为α34亮氨酸被精氨酸取代,由此证实此异常血红蛋白为Hb Queens(α_2~(34Leu→Arg)β_2)。     

安徽省异常血红蛋白流行病学调查研究

本文对安徽省十四个地区(市)三十四个县级以上城镇45,335例健康人群进行了血红蛋白电泳普查,发现 Hb 电泳异常者85例,阳性检出率0.187%。异常 Hb 有 H、J(含 K)、G(含 D)、A’_2、E 五种组型,包括了国内已发现的所有组型。曾对30例异常 Hb 肽链分析,发现-链异常者仅占10%,β-链异常者占90%。又对15例异常 Hb 作一级结构分析,发现有 HbG Coushatta(β~(22)谷→丙)、Hb Taipei(β~22)谷→甘)、Hb Bangkok(β~(56)甘→天冬)、Hb Qucen(~(34)亮→精)、Hb New York(B~(113)缬→谷)、HbE(β~(26)谷→赖)。另对54例异常 Hb 首证者进行了家系分析,均出现有上下代遗传关系。     

β地中海贫血红细胞膜的变化

<正> 重型地贫患者红细胞内的主要异常系由于一种不稳定Hb链的沉着过多,而另一补充链则形成量少或完全不合成。沉着过多的珠蛋白链显示为包涵体或H小体,它们与亨氏小体相似,多存在于α—地贫及β—地贫纯合子的幼孩红细胞中。β—地贫中过多的α—珠蛋白链迅速裂解为不稳定单体。随后发现α—链合成相对增加时,~(51)Cr标记的红细胞寿命反而缩短。另一方面α—地贫时β链过多可形成相对稳定的四聚体(β_4)即HbH。     

湘潭地区异常血红蛋白病的分子特征与表型分析

目的 分析湘潭地区异常血红蛋白病的分布特征，探讨异常血红蛋白病的分子生物学特征和临床表型，为该地区人群血红蛋白病的筛查和遗传咨询提供理论依据。方法 回顾性分析25 516例研究对象的血常规参数和血红蛋白电泳分析、地中海贫血基因检测及珠蛋白基因测序结果。结果 25 516例研究对象共检出13种基因型的异常血红蛋白病共76例，包括α链异常血红蛋白病30例，β链异常血红蛋白病45例，α复合β链异常血红蛋白病1例。其中以Hb CS、Hb E、Hb New York、Hb G-Coushatta、Hb J-Bangkok、Hb G-Taipei等基因型较为常见。Hb CS、Hb E、Hb Port Phillip表型呈小细胞低色素性贫血，其他类型的异常血红蛋白病血液学参数均正常。结论 湘潭地区异常血红蛋白基因有其地区特异性，杂合子状态下多数异常血红蛋白病并没有明显的临床症状，少数异常血红蛋白可以引起地中海贫血的表型。     

一例HbE/β~ 地中海贫血的生化研究

对一例严重贫血患儿进行Hb检测,醋纤薄膜碱性(PH8.5(电泳显示含有一种与HbA_2泳动速度相同的异常Hb;酸性(PH 6.5)琼脂电泳排除HbC及O;用标准HbE及脐血(HbF)为对照作酸及碱性珠蛋白解链试验出现异常βE及r链,证明它是HbE/β~ 地中海贫血双重杂合子,结合临床症状及其它检测诊断为HbE复合B~ 地中海贫血病例。家系调查其父为轻型β地中海贫血;其母与患儿有相同的异常Hb,为HbE特征。近年来我国对异常Hb及Hb病进行了广泛研究,我省某些地区的Hb普查表明在某些人群中的发生率较高并作了结构分析证实。本文报导使用一般实验室所能进行的手段,确诊一例HbE/β~ 地中海贫血双重杂合子。     

甘肃临夏发现HbG_(Tai hei)一例

本文报告在甘肃省临夏市发现一例HbG_(Taipeio)先证者男性,11岁,汉族,世居临夏市。Hb醋酸纤维素薄膜电泳出现慢泳异常Hb区带,位于HbA与HbA_2之间,属G组异常Hb。按Clegg法,将珠蛋白在羧甲基纤维素CM—23上层析解链,分离出慢速β~x链。β~x链胰蛋白酶酶解物指纹分析显示β~ATp3肽斑消失,β~ATp5左下方出现变异新肽斑。经用Chang氏微量DABITC/PITC双偶合法测定氨基酸顺序相氨基酸分析,证实β链第22位谷氨酸被甘氨酸所取代。因此确定为HbG_(Taipeio)β22 Glu→Gly,并对其遗传、病理、地理分布和民族分布等进行了讨论。     

异型血红蛋白一级结构研究方法进展

异型血红蛋白(Hb)是迄今研究得较多的一种遗传性分子病.全世界目前发现并作出一级结构鉴定的异型Hb近四百种.本文就其一级结构研究方法的进展作一简述.Clegg 在鉴定Hb Chesapeake和HbJ(Bangkok)的结构变异时,总结了异型Hb一级结构测定方法的程序如下:①、比较异型Hb与已知结构Hb的电泳行为;②、纯化异型Hb;③、鉴定异常肽链;④、分离α-和β-链;⑤、从异常肽链的酶解产物中分离异常肽段;⑥、鉴定异常肽段中的氨基酸取代.     

在中国首次发现的一例异常血红蛋白——Hb Hikari一级结构分析

本文报道了应用醋酸纤维薄膜电泳普查时,在河南省内黄县发现的一例快速异常血红蛋白。通过肽链柱层析分离、酶解、氨基酸组分及顺序分析,证实其β链 N 端第61位的赖氨酸为天冬酰胺替代,为 Hb Hikari(β61(E5)LyS→Asn。本例异常血红蛋白在中国属首例报告。     

蓖麻毒素及其A、B链的提取分离纯化的研究

本文研究蓖麻毒素及其A、B链的提取、分离、纯化,根据B链能与Sepharose-6 B上的半乳糖结合,而A链不具有这一性质,用β-巯基乙醇使蓖麻毒素直接在Sepharose-6B柱上断链,然后分别用Tris-HCl和Tris-HCl-半乳糖溶液洗脱,首次把蓖麻毒素的制备、纯化以及A、B链的断链、分离结合起来,大大简化了工艺。     

长白山白眉蝮蛇毒磷脂酶A2的提纯

应用ＣＭ－ＳｅｐｈａｄｅｘＣ－５０离子交换层析法，从长白山白眉蝮蛇毒中分离出２个具有磷旨酶Ａ２（ＰｈｏｓｐｈｌｉｐａｓｅＡ２，ＰＬＡ２）活性的蛋白质组分。其中之一再经ＤＥＡＥ－ＣｅｌｌｕｌｏｓｅＡ－５２离子交换层析和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０凝胶过滤进一步纯化，经两种不同类型的聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定均为单一条带，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０凝胶过滤呈单一对称的峰形。     

人C反应蛋白的提取、纯化和鉴定

本实验用各种含磷酸胆碱配体的亲和吸附剂进行亲和层析,从转移癌病人胸腹水中提取C反应蛋白,再经琼脂糖柱钙依赖反向亲和层析纯化,纯度达98％,经聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定为一条带,免疫化学鉴定不含免疫球蛋白和补体等杂蛋白。产量为41.9％。本方法与其它纯化方法比较,具有简便、产量较高的特点。     

新鲜蚕豆超氧化物歧化酶的分离纯化

将本地产新鲜蚕豆用组织捣碎机打成匀浆，采用冷丙酮分段沉淀，ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００层析，分离纯化出一种超氧化物歧化酶（ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅｄｉｓｍｕｔａｅｓ，ＳＯＤ），经聚丙烯酰胺凝胶电泳呈现一条区带，该酶的比活３０４．１（Ｕ／ｍｇ蛋白），活力回收３３．４％，提纯倍数２３．６     

小鼠脑Ca~(2+)/CaM依赖性蛋白激酶Ⅱ的鉴定及苄普地尔对其酶活力的抑制作用

用DE_(52)、磷酸纤维素和Sephaery S—300柱层析从小白鼠脑中提纯了Ca~(2+)/CaM依赖性蛋白激酶Ⅱ并进行了鉴定。凝胶过滤法测定全酶分子量为55万,在SDS-PAGE中显示出两条区带,其亚基分子量分别为5万和5.7万。该酶活力依赖于Ca~(2+)和CaM,AC_(50)分别为28μmol/L和2.2μmol/L。苄普地尔对酶有抑制作用,IC_(50)约为250μmol/L。     

纯化小鼠腹水中抗富含组氨酸糖蛋白单克隆抗体方法的比较

用羟基磷灰石柱层析法，辛醚－硫酸铵沉淀法以及辛酸－硫酸按沉淀法加羟基磷灰石柱层析法从小鼠腹水中提取纯化抗富含组氨酸糖蛋白单克隆抗体。结果表明，羟基磷灰石柱层析法简便，快速，其单克隆抗体产量和纯度均高，适合大多数实验室采用。     

葡萄球菌核酸酶去C-末端的肽段52和79的分离纯化

①目的建立金黄色葡萄球菌核酸酶（ＳＮａｓｅ）去Ｃ－末端的肽段５２（ＳＮ５２）和７９（ＳＮ７９）的提纯方法，并鉴定其纯度。②方法应用低温乙醇沉淀，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０和ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－１００柱层析分离纯化；十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）和高效液相层析（ＨＰＬＣ）鉴定其纯度。③结果纯化的ＳＮ５２和ＳＮ７９经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ鉴定均为单一区带；ＨＰＬＣ鉴定均为一个峰。④结论纯化的ＳＮ５２和ＳＮ７９已达电泳纯和层析纯，可用于其构象的比较研究。     

Purification of Avidin with Affinity Chromatography on 2-1minobiotin-AH-Sepharose 4B

The affinity between 2-iminobiotin and avidin decreases with the decreasing ofpH.According to this property,avidin was purified in its natural state without alterationof its properties with affinity chromatography on 2-iminobiotin-AH-sepharose 4B column.The purified avidin had high activity to bind with biotin,showed one band onpolyacrylamide electrophoresis,and was much purer than the products commerciallyavailable.     

全自动毛细管电泳仪在血红蛋白分析中的应用

目的 探讨全自动毛细管电泳仪在血红蛋白分析中的临床应用价值.方法 使用全自动毛细管电泳仪及配套试剂进行血红蛋白电泳(法国Sebia公司Capillarys 2),检测了5 088例标本,分析异常发生频率;选出229例同时进行毛细管电泳和地贫基因分析,比较其符合率.结果 全自动毛细管电泳仪测定5 088例标本,发现异常1 042例,其中β地贫757例(HbA2＞4.0％),HbF增高23例,异常Hb 262例.229例同时进行毛细血管电泳与地贫基因检测比较,与β地贫符合率100％,与HbH病和HbCS的符合率分别是97.83％和95.00％.结论 全自动毛细管电泳仪检测Hb电泳精密度及准确度较好,能够分离和量化出HbA2、HbF异常增高及HbE、HbH、HbBart's、HbCS等异常血红蛋白条带,可为地中海贫血及血红蛋白病筛查及诊断提供快速准确的诊断依据.