胎儿有核红细胞在DMD产前基因诊断中的应用

目的探讨胎儿有核红细胞（FNRBCs）在DMD产前基因诊断中的可行性。方法对6例进行性肌营养不良症携带者孕妇（孕12～18周）抽取外周血进行密度梯度离心，富集胎儿细胞，在显微操作下吸取胎儿有核红细胞。对所富集细胞经提取DNA进行人Y染色体特异DNA扩增，判定胎儿性别。将其应用于DMD产前诊断中，并与用羊水进行产前诊断比较。结果SRY片段经PCR后，3例男性胎儿可见特异性条带，3例女性胎儿未见此电泳条带。母体外周血FNRBCs的DNA产前诊断中，2例为女性正常胎儿，1例为女性携带者，2例为正常男性胎儿，1例为DMD患儿，结果与用羊水进行产前诊断和产后个体性别证实一致。结论密度梯度离心结合显微操作方法分离FNRBCs能用于性别鉴定和遗传病的产前诊断。     

对孕妇外周血中的单个有核红细胞及游离DNA来源的鉴定

目的：探讨孕妇外周血中单个胎儿有核红细胞及游离DNA在非创伤性产前诊断的可行性。方法：对116个孕妇外周血进行检测。（1）对51例14－26孕周的妇女外周血经密度梯度离心后用显微操作分离单个有核红细胞。（2）提取65例孕妇（5－40孕周）外周血血浆DNA。（3）应用巢式聚合酶链反应（PCR）扩增单个有核红细胞的男性SRY基因,应用引物延伸预扩增（PEP）法及巢式PCR扩增孕妇血浆游离DNA的SRY基因。结果（1）分选单个有核红细胞的成功率为90．20％（46／51）。（2）单细胞SRY基因的结果与胎儿实际性别的符合率为82．61％（38／46）,敏感性为80．00％（24／30）,特异性为87．50％（14／16）。（3）游离DNA的SRY基因的结果与胎儿实际性别的符合率为90．77％（59／65）,敏感性为89．13％（41／46）,特异性为94．74％（18／19）。结论（1）孕妇外周单个有核红细胞及游离的DNA可来自胎儿,它可成为产前诊断的胎儿物质来源。（2）单细胞分离技术使孕妇外周血中的胎儿有核红细胞的分选纯度几乎达到100％。解决了母胎细胞混合的难题,为非创伤性产前诊断提供了一条新思路。     

从母血浆提取胎儿DNA行产前诊断的研究

目的：从孕妇血浆中提取胎儿DNA， 寻找一种非创伤性产前诊断的新方法。方法：采用煮沸法从血浆中提取DNA，结合巢式聚合酶链反应技术对40例10－40孕周的孕妇血浆中的胎儿DNA进行特异性扩增，扩增的基因为Y染色体的重复序列（DYZ1）基因，扩增片段大小为102bp。结果：30例孕育男性胎儿孕妇中有26例血浆中出现DYZ1基因扩增带。10例孕育女性胎儿孕妇血浆中，仅1例出现假阳性结果。结论：采用巢式聚合酶链技术在不同的孕期检测母体血浆中的胎儿DNA均有较高的灵敏度和特异性，作为一种非创伤性产前诊断的方法应用于临床具有可行性。     

用孕妇外周血诊断胎儿性别及其在X连锁遗传病诊断中的应用

目的建立一种非创伤性的取材和快速胎儿性别诊断方法，并应用于Ｘ连锁遗传病的产前诊断。方法采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，从３５例孕妇和４例有Ｄｕｃｈｅｎｎｅ肌营养不良（ＤＭＤ）男性生育史的孕妇外周血中扩增Ｙ染色体长臂上的ＤＹＺ—１基因。结果３５例孕妇经ＰＣＲ检测，１９例有一条４４６ｂｐＹ染色体特异荧光带，提示胎儿为男性；１６例无此荧光带，提示胎儿为女性。４例ＤＭＤ高危胎儿中，３例出现４４６ｂｐ荧光带，提示为男性；１例无此荧光带，提示为女性。检测结果与随访新生儿出生性别或引产后外生殖器检查结果完全一致。结论本方法快速、灵敏而准确，推广应用对Ｘ连锁遗传病的产前诊断具有重要意义。     

HCMV感染孕妇外周血胎儿细胞的分离及HCMV—DNA检测

目的运用不连续密度梯度离心及免疫磁珠分离法分选孕妇外周血中的胎儿有核红细胞以进行人巨细胞病毒-DNA（HCMV—DNA）的检测。方法取20名人巨细胞病毒抗原血症（pp65）阳性的孕妇外周EDTA抗凝血,经不连续密度梯度离心初步富集、免疫磁珠法分选及胎儿细胞特异性抗体-HbF标记、识别的胎儿有核红细胞经全基因组扩增后,对产物进行HCMV—DNA的检测。结果20名PP65阳性孕妇外周血中分选到胎儿有核红细胞的有16例,将此16例胎儿有核红细胞进行HCMV—DNA的检测,检出阳性2例,10份未妊娠妇女外周血细胞涂片中均未发现胎儿有核红细胞;10份正常妊娠妇女外周血细胞涂片中发现胎儿有核红细胞数9例,其量不等。结论不连续密度梯度离心及免疫磁珠分离法结合特异性抗体-HbF标记、识别能有效地分选出母血中胎儿有核红细胞,应用于进一步的无创性产前诊断,将有着良好的应用前景。     

小片段游离胎儿DNA检测Y染色体性别决定区的临床意义

目的研究从早孕妇女外周血中提取小片段游离胎儿DNA检测胎儿Y染色体性别决定区（SRY）的方法,提高PCR检测的特异性和敏感性,评估利用小片段游离胎儿DNA对性连锁遗传病进行无创性产前诊断可行性。方法收集80例孕妇外周血,提取游离的胎儿DNA和提纯小片段游离胎儿DNA,PCR检测SRY基因。结果80例受试者中2种样本敏感性和特异性比较差异有统计学意义。结论可利用孕妇外周血中小片段游离胎儿DNA检测胎儿Y染色体性别决定区,敏感性和特异性优于总游离DNA,可用于孕早期性连锁遗传疾病和单基因突变疾病产前诊断。     

Rh阴性孕妇外周血基因鉴定胎儿RhD血型的方法

目的建立可靠有效的检测孕妇外周血中胎儿游离DNA的方法,探讨其在非创伤性产前诊断中的价值。结论采用PCR技术对5例RhD阴性孕妇外周血血浆DNA进行分析,然后对出生后婴儿脐带血进行Rh血清学表型分析,回顾性评价无创性预测胎儿RhD基因分析的准确性。结果 5例RhD阴性血浆标本扩增出180bp与156bp两条特异性片段,产后新生儿脐血血清学检测结果为RhD阳性,与PCR检测结果完全吻合。结论孕妇外周血浆中胎儿游离DNA的测定能实现对胎儿RhD基因型的预测判定。孕妇外周血检测胎儿DNA可应用于非创伤性产前诊断。     

应用分子标记对Duchenne型肌营养不良胎儿的产前基因诊断

目的:对未知遗传类型的Duchenne肌营养不良(DMD)家系早期妊娠风险胎儿进行产前基因诊断,确定能否接续妊娠,并探讨检测技术。方法:通过TRIzol方法从孕妇羊水中提取胎儿DNA,用Promega提血试剂盒提取家系其他成员外周血中的DNA。选取Xp21.1区附近的6对荧光引物对12个样本DNA进行PCR扩增和多态性连锁分析,以确定风险X染色体;通过DMD50和SRY2对引物的多重PCR扩增确定胎儿性别。连锁分析与性别鉴定相结合对胎儿进行产前诊断。结果:发现该胎儿为1正常女胎,未携带风险X染色体,且胎儿产后复查结果与产前检测一致。结论:这种方法提示对缺失或/和非缺失型DMD风险胎儿的检测可一步完成,而且扩大了基因的检测范围,诊断结果更为准确可靠。     

孕妇外周血血浆胎儿DNA的检测

目的：建立可靠有效的检测孕妇血浆胎儿DNA的方法,探讨其在非创伤性产前诊断中的价值。方法：采用引物引伸预扩增（PEP）法及巢式PCR技术对65例孕妇外周血血浆DNA进行正常男性SRY基因检测。结果：单用巢式PCR技术和联合应用PEP,PCR技术对怀男胎的孕妇血中SRY基因检出率分别为65．2％（30／46）和89．1％（41／46）,两组差异有极显著性,对怀女胎孕妇血中SRY基因的未检出率为78．9％（15／19）和94．7％（18／19）,两组差异无显著性。结论：应用PEP法可对胎儿DNA进行全基因组扩增使DNA模板量增加,并使继后的PCR技术检测SRY基因的敏感性明显提高,PEP法是解决母血中胎儿细胞数量太少的途径之一,孕妇血浆中胎儿DNA可成为非创伤性产前诊断的胎儿物质来源。     

母血浆胎儿游离DNA检测SRY基因

【目的】建立一种比较稳定可靠的无创性获取胎儿遗传物质的方法。【方法】从孕妇外周血血浆中提取胎儿游离DNA,以Y染色体上的SRY区域为靶序列进行扩增,扩增产物经DNA测序进行确认,由此来确定我们获得的胎儿DNA。【结果】我们利用获取胎儿游离DNA的方法对16例孕妇进行检测,10例获得了成功,除1例未随访到结果之外,其他9例的随访结果和我们实验判断结果一致。【结论】我们初步建立的这种获得胎儿游离DNA的方法具有可靠性,胎儿游离DNA可以用于性连锁遗传病和单基因疾病的产前诊断。     

Detection of Fetal Nucleated Erythrocytes and Fetal DNA from Peripheral Blood of Pregnant Women

Prenatal diagnosis of inherited disorders by non-invasive techniques has aroused great interestthroughout the world.Nowadays,the most impor-tantapproachesare based on the detection offetalnu-cleated erythrocytes(FNRBCs) in maternalperipher-al blood and the analysis of fetal DNA from maternalplasma.However,due to the rarity of FNRBCs,theabsence of ideal separation methods and the difficultyin accurate identification of fetal cells or DNA frommaternal,it is impossible for these techniques …     

母血中胎儿有核红细胞的荧光原位杂交法在产前诊断中的可行性探讨

探讨荧光原位杂交法（FISH）对母血中胎儿有核红细胞（NRBC）进行无创性产前诊断的可行性。20例孕龄15-20周的孕妇外周血经不连续密度梯度离心、制片、显微镜下识别并共计数NRBC及定位，然后行Y染色体的FISH检测。结果发现10例孕男性胎儿的孕妇外周血细胞涂片中每例均有阳性杂交信号出现；阳性率为60％（24/40）。10例孕女性胎儿的孕妇外周血细胞涂片中1例出现阳性杂交信号；阴性率为95％（38/40），假阳性率仅为5％（2/40）。结果提示FISH法对于用母血中分离到的胎儿细胞进行染色体异常的无创性产前遗传学检查具有重要意义。     

Studies on Activity of NK Cells in Preeclampsia Patients

Preeclampsiaisoneofseverepregnantsyndromeandcharacterizedwithpregnantwomen ,withahighmorbidityupto 9.4 %inChinesepopulation .Preeclampsiabadlycompromisesthehealthofmoth ersandinfants .However ,itsetiologyandpathogene sisisnotknownclearly .Somepreviousrepo…     

先兆子痫患者母、脐血NK细胞增殖能力及杀伤功能测定

目的:测定先兆子痫患者母、脐血NK细胞增殖能力及杀伤功能,探讨先兆子痫的病因。方法:采用MTT法和51Cr释放法分别对先兆子痫患者(n=18)和正常晚孕妇女(n=18)的母血、脐血NK细胞进行细胞增殖能力和杀伤功能测定,同时测量NK细胞含量,并以NK-92细胞作为阳性对照。结果:先兆子痫患者和正常晚孕妇女脐血NK细胞数均高于母血(P<0.05);先兆子痫患者NK细胞增殖能力高于正常晚孕组(P<0.05);2组中脐血NK细胞增殖能力高于母血(P<0.05);先兆子痫患者NK细胞杀伤能力高于正常晚孕组(P<0.05)。结论:先兆子痫患者体内NK细胞数量及功能均表现增强状态,且脐血明显高于母血,从而在妊娠过程中影响母胎免疫耐受。     

孕期人乳头状瘤病毒亚临床感染与母婴垂直

目的 :探讨不同孕期人乳头状瘤病毒 ( HPV)亚临床感染及母婴垂直传播情况。方法 :采用 PCR技术检测 3 0例孕早期、 4 2例孕中期、 3 2例孕晚期妇女的宫颈分泌物、母血、绒毛或胎盘、羊水、脐血及新生儿咽部抽吸物标本 HPV- 6、 11、 16、 18型 DNA。结果 :早孕期 :5例宫颈分泌物 HPV阳性 ( 5 /3 0 ) ,7例母血 HPV阳性 ( 7/3 0 ) ,3例绒毛 HPV阳性 ( 3 /3 0 ) ;中孕期 :12例宫颈分泌物 HPV阳性 ( 12 /4 2 ) ,11例母血 HPV阳性 ( 11/4 2 ) ,9例胎盘 HPV阳性 ( 9/4 2 ) ;另 2 2例羊水标本中 ,仅 1例 HPV阳性 ( 1/2 2 ) ;晚孕期 :2 3例宫颈分泌物 HPV阳性( 2 3 /3 2 )、 18例母血 HPV阳性 ( 18/3 2 ) ,12例胎盘 HPV阳性 ( 12 /3 2 ) ;另 3 1例羊水标本中 ,4例 HPV阳性 ( 4 /3 1) ,3 1例脐血标本中 ,12例 HPV阳性 ( 12 /3 1)。分析羊水、脐血与母血 HPV感染的相对危险度高于宫颈分泌物 ,而产时新生儿咽部抽吸物与宫颈分泌物 HPV感染的相对危险度高于母血。结论 :在整个孕期中 ,孕晚期的HPV亚临床感染明显。孕期 HPV亚临床感染的母婴传播不但可经产道直接接触传播 ,还可经羊水、胎盘发生宫内传播 ,其宫内传播率的高低主要与母血 HPV感染相关。新生儿脐血的 HPV感染主要与母血感染相关 ,而产时新生儿咽部的 HPV     

妊娠期携带乙型肝炎病毒的母儿细胞免疫状况的研究

[目的]探讨孕妇无症状携带乙型肝炎病毒(HBV)对母儿细胞免疫功能的影响。[方法]采用直接免疫荧光标记法流式细胞仪检测30例慢性HBV感染孕妇外周血及其新生儿脐血的T淋巴细胞亚群和自然杀伤(NK)细胞,并与30例健康孕妇外周血及其新生儿脐血对照。[结果]研究组孕妇与对照组孕妇外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞、白细胞分类比较无统计学差异(P>0.05);研究组新生儿脐血与对照组新生儿脐血T淋巴细胞亚群、NK细胞、白细胞分类比较也无统计学差异(P>0.05)。孕妇外周血与其新生儿脐血对应的各T淋巴细胞亚群、NK细胞、白细胞分类无相关性(P>0.05)。[结论]孕妇慢性携带HBV对母儿细胞免疫功能无明显影响。     

一氧化氮对正常妊娠时子宫-胎盘-胎儿循环的调节

通过测定１４例未孕妇及２５例正常晚孕妇母血及脐血一氧化氮（ＮＯ）的含量及部分病例子宫动脉及脐动脉最大收缩期与舒张末期血流速度之比（Ｓ／Ｄ），研究正常妊娠时母体及胎儿循环ＮＯ的变化。结果脐血ＮＯ含量显著高于母血（Ｐ＜０．０１），且与脐动脉Ｓ／Ｄ值呈现显著负相关（ｒ＝－０．５２，Ｐ＜０．０５）。说明ＮＯ对正常妊娠母体及胎儿循环均有重要调节作用     

母体外周血液中胎儿有核红细胞的检测及比例与孕周的关系

目的探讨孕周与母体外周血液中胎儿有核红细胞比例的关系。方法回顾性分析我院2008年2月～2011年3月收治入院的孕10～35周的孕妇80例,采用SYSMEX XE-2100血细胞计数仪对孕妇外周血中胎儿有核红细胞进行计数,并对表达转铁蛋白受体的阳性细胞（CD71＋细胞）进行技术分选。另外选择我院同期健康体检未孕妇女80例和80例新生儿进行检查对比。结果妊娠组的CD71＋细胞比例明显高于健康未孕组和新生儿脐血组（P〈0.01）。在孕妇组中,CD71＋细胞最高峰值出现于第17、18孕周。结论 SYSMEX XE-2100血细胞计数仪计数特异性、灵敏性较强。利用母体血循环中的胎儿细胞做产前诊断的最佳时间在第17、18孕周。