LPS对大鼠肺微血管内皮细胞SSeCKS的表达影响

目的研究细菌脂多糖（LPS）对大鼠肺微血管内皮细胞（rat pulmonary microvascular endothelial cell，RPMVEC）Src抑制的蛋白激酶C底物（Src-suppressed C kinase substrate，SSeCKS）表达和细胞内定位的影响，探讨SSeCKS参与细胞骨架结构改变的可能机制。方法用植块培养法体外培养大鼠肺微血管内皮细胞，用抗大鼠CD31抗体进行细胞鉴定。LPS刺激体外培养的RPMVEC，用定量PCR、免疫印迹方法检测LPS刺激RPMVEC不同时间SSeCKS mRNA和蛋白的表达情况；用0．05μmol／L蛋白激酶C（PKC）抑制剂（Calphostin C）预处理RPMVEC30min后再用LPS刺激6h，免疫荧光细胞化学法观察Calphostin C对LPS诱导SSeCKS与纤维状肌动蛋白（filamentous—actin，F-actin）细胞内定位和结构改变的影响。结果定量PCR结果显示LPS刺激RPMVEC1h后SSeCKS表达水平达到最高，Westernblot结果与定量PCR结果相一致，同时，LPS以时间依赖的方式诱导SSeCKS磷酸水平增加。免疫荧光结果显示LPS刺激后，F-actin发生重构，细胞内形成应力纤维，SSeCKS向核周、细胞膜纤维、板状伪足末端聚集；Calphostin C部分抑制LPS对内皮细胞F-actin和SSeCKS细胞内定位改变的影响。结论LPS能够诱导内皮细胞SSeCKS表达增加和细胞内定位改变，PKC参与I娲诱导内皮细胞F-ac，6n的重构和SSeCKS重新分布；提示SSeCKS可能与LPS诱导内皮细胞F-actin的重构有关。     

人参二醇皂苷对LPS休克大鼠肺组织AQP1表达的影响

目的：观察内毒素(LPS)诱导的休克大鼠肺泡毛细血管内皮细胞膜水通道蛋白1(AQP1)的表达变化，及人参二醇皂苷（PDS）和糖皮质激素对其的影响。方法：应用HE染色观察肺组织病理学变化，通过免疫组织化学和免疫印迹分析的方法检测AQP1在肺组织中的表达。结果：（1）病理组织学结果显示：模型组（LPS）：肺组织可见较弥漫的间质炎性改变，细支气管周围及血管周围有明显的炎性渗出物，并可见出血，部分肺泡腔内含有水肿液，炎症病变较轻处可见代偿性肺气肿改变。然而，地塞米松组（DEX）、人参治疗组（PDS）大鼠肺脏改变明显减轻。（2）免疫组织化学显示：正常对照组（CTR）肺泡周围毛细血管内皮细胞 AQP1呈阳性表达。LPS组肺泡周围毛细血管内皮细胞AQP1呈微弱表达。DEX组和PDS 3个剂量组大鼠肺泡周围毛细血管内皮细胞 AQP1呈阳性表达，但较正常对照组弱。（3）免疫印迹分析结果显示:LPS组AQP1表达水平明显低于CTR组，PDS 3组及DEX组的AQP1表达水平虽低于CTR组，但明显高于LPS组结论：人参二醇皂苷与地塞米松有减轻LPS诱导的肺损伤作用;LPS具有抑制LPS休克肺AQP1表达的作用，而人参二醇皂苷与地塞米松能使其表达提高，这进一步证实AQP1与肺水肿形成有关。     

高迁移率族蛋白1对内毒素急性肺损伤大鼠中性粒细胞凋亡改变的影响

目的 观察体外高迁移率族蛋白1（HMGB1）对内毒素急性肺损伤（ALI）大鼠中性粒细胞（PMN）凋亡改变的影响，以探讨HMGB1在ALI发病机制中的作用。方法 脂多糖注射复制大鼠急性肺损伤模型，在LPS致伤后不同时相点（有或无正丁酸钠干预时）获取肺组织、外周血中性粒细胞（PMN）、支气管肺泡灌洗液（BALF）。RT-PCR检测肺组织HMGB1 mRNA表达，流式细胞术（FCM）、Giemsa染色及TUNEL法检测PMN的凋亡改变。结果 与对照组比较，LPS急性肺损伤大鼠PMN凋亡率逐渐减低，鼠BALF中PMN凋亡开始时间及无存活细胞时间明显延长；LPS致伤后6-24h肺组织HMGB1 mRNA表达明显增高。正丁酸钠（SB）处理组动物肺组织于伤后6、12h肺组织HMGB1 mRNA表达均显著抑制，与LPS组比较，差异有显著性意义（P〈0．05）；形态学检查显示，LPS致伤后大鼠肺组织出现水肿及明显的病理变化，SB干预可减轻肺损伤的严重程度。致伤后肺损伤程度与肺组织HMGB1表达水平及PMN凋亡改变有关。结论 LPS致伤后，鼠肺HMGB1 mRNA高表达发生较晚，但持续较长时间；SB处理可削弱LPS诱导的PMN凋亡延迟及抑制，下调肺组织HMGB1 mRNA表达。HMGB1可能参与内毒素急性肺损伤时PMN的凋亡延迟及抑制效应。     

LPS和TNF-α对血管内皮细胞SSeCKS的表达影响

目的：研究细菌脂多糖（LPS）、肿瘤坏死因子（TNF-α）对牛肺动脉内皮细胞（BPAEC）Src抑制的蛋白激酶C底物（Src-suppressed C Kinase Substrate，SSeCKS）表达的影响和对细胞骨架结构的影响，探讨SSeCKS参与细胞骨架结构改变的可能机制。方法：应用LPS、TNF-α刺激体外培养的BPAEC，应用原位杂交、免疫印迹方法检测不同刺激条件下BPAEC中SSeCKS mRNA和蛋白的表达情况；免疫细胞荧光法观察LPS、TNF-α对内皮细胞中SSeCKS与纤维状肌动蛋白（F-actin）定位和结构的影响。结果：静息状态的BPAEC表达极少量的SSeCKS；经LPS刺激后，SSeCKS表达没有明显变化；而TNF-α以浓度和时间依赖的方式诱导内皮细胞SSeCKS表达增加；LPS和TNF-α刺激后，F-actin发生重构，且SSeCKS向核周、细胞膜纤维、板状伪足聚集；蛋白激酶C（PKC）抑制剂Ro-31．8220抑制LPS和TNF-α对内皮细胞F-actin和SSeCKS细胞内定位改变的影响。结论：TNF-α能够诱导内皮细胞SSeCKS表达增加，PKC参与LPS、TNF-α诱导内皮细胞F-actin的重构和SSeCKS重新分布。提示SSeCKS可能与LPS和TNF-α诱导内皮细胞F-actin的重构有关。     

TRPV1激活对内毒素血症小鼠肺组织炎症损伤的影响及机制

 目的：探讨用辣椒素（CAP）激活瞬时受体电位阳离子通道V亚族成员1(TRPV1)对内毒素血症所致肺损伤在炎症反应产生的影响及相关机制。方法：SPF级ICR小鼠108只随机分为6组：正常对照组、CAP对照组、抗辣椒碱（CAPZ）对照组、内毒素血症组、CAP干预组和CAPZ干预组。脂多糖（LPS）经腹腔注射,CAP及CAPZ均在LPS注射前30 min经皮下注射。分别在LPS注射后3 h、8 h和16 h取肺组织,ELISA法检测肺组织TNF-α、IL-6、IL-10、P物质（SP）和降血钙素基因相关肽（CGRP）,Western blotting法检测肺组织Toll样受体4（TLR4）和核内NF-κB的表达水平,光镜下观察肺组织病理学改变。结果：内毒素血症组小鼠3 h、8 h和16 h肺组织TNF-α、IL-6和IL-10水平较正常对照组均显著升高（P<0.05）;CAP干预组各时点肺组织TNF-α和IL-6水平较内毒素血症组显著降低（P<0.05）,而IL-10均明显升高（P<0.05）;CAPZ干预组3 h、8 h和16 h 肺组织TNF-α和IL-6较内毒素血症组显著升高（P<0.05）,而IL-10水平均显著降低(P<0.05)。内毒素血症组和CAP对照组各时间点SP和CGRP较正常对照组均显著升高（P<0.05）,CAP对照组SP和CGRP水平明显低于内毒素血症组（P<0.05）;与同时点内毒素血症组相比,CAP干预组SP和CGRP显著升高（P<0.05）,而CAPZ干预组显著降低（P<0.05）。内毒素血症组小鼠肺组织TLR4和核内NF-κB表达较正常对照组显著升高（P<0.05）;与内毒素血症组相比,CAP干预组和CAPZ干预组小鼠肺组织TLR4表达均无显著差异（P>0.05）,而CAP干预组核内NF-κB表达显著降低（P<0.05）,CAPZ干预组核内NF-κB表达显著升高（P<0.05）。光镜下,CAP对照组和CAPZ对照组较正常对照组病理学变化不明显,内毒素血症组肺组织在8 h和16 h损害明显,CAP干预组较内毒素血症组损害减轻,CAPZ干预组较内毒素血症组肺组织损害加重。结论：TRPV1激活后能显著降低内毒素血症小鼠肺组织TNF-α、IL-6和核内NF-κB水平,升高IL-10水平,提高肺组织SP和CGRP表达,减轻肺组织炎症损伤程度,但不改变肺组织TLR4水平。     

地塞米松对急性肺损伤中TREM-1表达的影响

目的　探讨地塞米松（Dexamethasone,Dex）对脂多糖（Lipopolysaccharide, LPS）诱导的急性肺损伤(acute lung injury, ALI)小鼠肺组织中髓样细胞表达的触发受体1（triggering receptor expressed on myeloid cells-1,TREM-1）表达的影响。 方法　以昆明小鼠为研究对象,腹腔注射LPS(10 mg/kg)建立ALI模型,30 min后给予不同浓度的Dex（5、10、20、40 mg/kg）处理6 h;选用Dex(10 mg/kg)处理不同的时间（6、12、24、36 h）。HE染色法观察肺组织病理损伤程度; RT-PCR检测肺组织TREM-1mRNA的表达;ELISA检测小鼠支气管肺泡灌洗液中可溶性TREM-1（sTREM-1）蛋白水平。 结果　Dex可减轻肺病理损伤;Dex呈时间依赖性地下调ALI小鼠肺组织的TREM-1 mRNA的表达,且在6 h即可降低;Dex呈剂量依赖地下调ALI小鼠肺组织中TREM-1 mRNA的表达,并在10 mg/kg时开始降低。Dex可降低ALI小鼠支气管肺泡灌洗液中sTREM-1的蛋白水平。 结论　Dex可呈剂量及时间依赖性下调ALI小鼠肺组织中的TREM-1mRNA的表达,并减少肺内髓样细胞胞膜TREM-1的脱落,提示Dex可能通过调节TREM-1的表达,从而抑制ALI早期的炎症级联反应,参与保护肺组织。     

脂多糖诱导小鼠肺损伤模型巨噬细胞活化及共刺激分子CD40上调研究

目的观察肺泡巨噬细胞（AM）活化过程和共刺激分子CD40表达变化，探讨其在脂多糖（LPS）诱导的小鼠急性肺损伤（ALI）模型中所发挥的作用。方法BALB／c小鼠分为正常对照组和LPS处理组。光镜观察24、48h肺组织病理变化；RT-PCR测定活化巨噬细胞（activated macrophage，AMφ）中TLR4表达；电泳迁移率变动分析（EMSA）检测AMφ核提取物中NF-κB的活性；Northern blot检测CD40 mRNA表达，流式细胞术检测CD40蛋白表达；ELISA测定肺泡灌洗液（BALF）中TNF-α、MIP-2及IL-1β的含量。结果小鼠吸入LPS后，肺泡隔断裂、肺间质充血及肺泡腔中性粒细胞浸润，并检测到AMφ表面TLR4的表达、核转录因子NF-κB活性增强、共刺激分子CD40mRNA和蛋白显著表达，并随着时间延长出现增加趋势，BALF中炎症因子释放增加，正常对照组无明显变化（P〈0．05）。结论LPS诱导的ALI中，AM活化和共刺激分子CD40上调，导致瀑链式炎症反应，造成肺急性炎症损伤。     

钩藤碱降低内毒素血症小鼠死亡率的机制研究

目的： 观察钩藤碱对内毒素血症小鼠死亡率及器宫损伤的影响，并探讨其作用机制。方法: 雄性小鼠随机分为对照组、脂多糖（LPS）组、钩藤碱（Rhy）防治组和Rhy对照组，分别予以生理盐水、Rhy皮下注射，1 time/d，连续3 d，第3 d皮下注射后1 h，腹腔注射生理盐水或LPS（20 mg/kg）。观察各组小鼠的死亡率，肺、小肠组织病理改变；测定注射LPS后12 h各组肺湿/干重比值 (W/D)及血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、门冬氨酸氨基转移酶（AST）、尿素氮（BUN）和肌酐（Cr）的水平；用酶联免疫吸附法（ELISA）测定血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）及白细胞介素-10（IL-10）的含量，用硝酸还原酶法试剂盒测定血清一氧化氮（NO）的含量。进一步复制盲肠结扎穿孔的脓毒症模型， 观察钩藤碱对脓毒症小鼠生存率的影响。结果: LPS攻击后24 h小鼠的生存率明显低于对照组，8、16 mg/kg的钩藤碱防治组小鼠生存率高于LPS组。但钩藤碱并不能降低CLP小鼠的死亡率，而且，8 mg/kg钩藤碱治疗组小鼠的死亡率反而高于CLP小鼠的死亡率。LPS攻击后12 h病理检查发现LPS组小鼠肺及小肠组织均有严重的炎症表现；肺W/D、血清ALT、AST、BUN、Cr水平显著高于对照组；LPS攻击后2 h血清TNF-α、IL-1β及IL-10含量及8 h血清NO水平显著高于对照组。LPS攻击后12 h， Rhy防治组肺及小肠组织损伤无明显改善；肺W/D、血清ALT、AST、BUN、Cr水平与LPS组比较无显著差异；LPS攻击后2 h血清TNF-α水平显著低于LPS组，但2 h血清IL-1β及IL-10含量及8 h血清NO水平与LPS组比较无显著差异。结论: 钩藤碱能降低内毒素血症小鼠的死亡率，但不能降低脓毒症小鼠的死亡率，抑制TNF-α的生成可能是钩藤碱降低内毒素血症小鼠死亡率的机制之一。     

亚精胺减轻脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤

目的　观察亚精胺（spermidine）对脂多糖（LPS）诱导的急性肺损伤（ALI）的影响。 方法　采用5 mg/kg的LPS经气管滴注,建立ALI小鼠模型。用小动物呼吸机检测亚精胺对ALI小鼠呼吸功能的影响;观察亚精胺对ALI小鼠肺组织形态变化的影响;检测ALI小鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）中总蛋白、总细胞数及中性粒细胞数目,并检测髓过氧化物酶（MPO）的水平;qPCR检测ALI小鼠肺组织中TREM-1 mRNA的表达;ELISA检测ALI小鼠BALF中sTREM-1的蛋白水平。 结果　亚精胺可改善ALI小鼠的呼吸功能;减轻LPS诱导的肺部病理损伤;减少蛋白渗出和中性粒细胞浸润;降低ALI小鼠肺内炎症放大受体TREM-1的表达。 结论　亚精胺能减少炎症细胞浸润,抑制炎症因子表达,从而减轻LPS诱导的ALI,其机制可能与亚精胺可抑制ALI小鼠肺组织TREM-1表达有关。     

亚精胺减轻脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤

目的　观察亚精胺（spermidine）对脂多糖（LPS）诱导的急性肺损伤（ALI）的影响。 方法　采用5 mg/kg的LPS经气管滴注,建立ALI小鼠模型。用小动物呼吸机检测亚精胺对ALI小鼠呼吸功能的影响;观察亚精胺对ALI小鼠肺组织形态变化的影响;检测ALI小鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）中总蛋白、总细胞数及中性粒细胞数目,并检测髓过氧化物酶（MPO）的水平;qPCR检测ALI小鼠肺组织中TREM-1 mRNA的表达;ELISA检测ALI小鼠BALF中sTREM-1的蛋白水平。 结果　亚精胺可改善ALI小鼠的呼吸功能;减轻LPS诱导的肺部病理损伤;减少蛋白渗出和中性粒细胞浸润;降低ALI小鼠肺内炎症放大受体TREM-1的表达。 结论　亚精胺能减少炎症细胞浸润,抑制炎症因子表达,从而减轻LPS诱导的ALI,其机制可能与亚精胺可抑制ALI小鼠肺组织TREM-1表达有关。     

Dexamethasone attenuates LPS-induced changes in expression of urea transporter and aquaporin proteins,ameliorating brain endotoxemia in mice

Aim: AQP4 in the brain is involved in the occurrence and development of a variety of encephalopathy. AQPs family changes in kidney were accompanied by altered UTs family. The aim of this study was to observe AQP4 and UT-A3 expression in CNS and to explore their role in the pathogenesis of endotoxemia encephalopathy following peripheral LPS injection in mice. Methods: Endotoxemia was induced in C57Bl/6 mice by intraperitoneal injection of LPS. The expression of UT-A3 and AQP4 in brain were detected by Western blot and immunohistochemistry, the level of cytokines were detected by ELISA, and the content of LDH, AST/ALT, BUN and CREA were detected by colorimetric method. Results: As compared with the control group, in model group, the brain weight/ body weight ratio increased by 13%. Meanwhile, a 2.5 fold increase in LDH and a 1.2 fold increase in AST/ALT were found in peripheral serum (P < 0.05), and also, BUN and CREA increased 2.5 fold (P < 0.01). In addition to severe CNS injury in response to lipopolysaccharide, the contents of cytokines and the expression of AQP4 protein in hippocampal is increased (P < 0.05), while the expression of UT-A3 protein in the hippocampus and cortical astrocytes decreased (P < 0.05). And, in part, Dexa pretreatment attenuated those effects. Conclusions: In endotoxemia encephalopathy, AQPs and UTs which regulate the functions of cell membrane are both altered. We suggested that the molecular mechanisms of regulation in endotoxemia may provide a new strategy for clinical treatment of the disease and drug binding sites.     

骨质疏松症患者血清CT、Ca和P的水平观察

目的：为了研究血清降钙素（CT）、钙（Ca）和磷（P）的水平对激素引起男、女性骨质疏松症（OP）的影响。方法：放射免疫分析了血清CT的水平,生化法测定了血钙和血磷,发光免疫分析了性激素水平,并都做了相关性分析。结果：67例男性OP的血清Ca、P和E2均明显高于正常对照组（P均〈0.01）,而血清CT和T较正常对照组明显降低（P〈0.01）。在治疗前,60例女性OP患者血清Ca、P和T均明显高于正常对照组（P均〈0.01）,而血清CT和E2较正常对照组明显降低（P〈0.01）;治疗后女性OP患者血清CT和E2较治疗前明显增高,血清Ca、P和T明显降低,血清CT、E2和T较正常对照组接近（P均〉0.05）,而血清Ca和P较正常对照组仍增高（P〈0.05）。结论：由性激素引起的OP与血清CT、Ca、P和性激素相互之间存在着相关关系。在女性OP治疗时,以CT、E2和T水平为随访的最佳指导。     

脑血栓形成患者LPA、MDA、SOD检测的临床分析

目的:探讨溶血磷脂酸(LPA)和氧自由基在脑血栓形成的病理过程中的作用.方法:通过检测90例脑血栓形成患者(CT组)血清中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、LPA的浓度情况,并与短暂性脑缺血发作(TIA)组(45例)、对照组(45例)比较.结果:血清中SOD的浓度,CT组(治疗前)低于TIA组和对照组(P<0...     

黑龙江省汉族及朝鲜族成年人血压的差别及相关因素分析

目的 比较黑龙江省汉族与朝鲜族血压差别,分析血压差别相关因素.方法 采用BIOZ.com<'TM>心功能监测仪检测1247名汉族和676名朝鲜族19～80岁人群体循环血管阻力(SVR)、血压等指标.采取生化方法检测血脂血糖.用SPSS16.0统计结果.结果 民族(汉为1,朝鲜为2)与收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、血糖(CLU)、Ca2+正相关.排除性别、年龄和BMI影响后,朝鲜族收缩压/舒张压比汉族高3.73/3.54 mmHg.单因素回归分析:TG、LDL、GLU和Ca<'2>+分别引起朝-汉之间SBP/DBP差别变化达-0.5%/0.5%、-36.1%/-61.7%、-74.6%/-83.0%和-71.4/-81.6%.结论 血脂、血糖及血钙水平差别在两民族血压差别中起重要作用.     

独立成分分析在生物医学信号处理中的应用

独立成分分析(independentcomponentanalysis熏ICA)已经成功地应用到生物医学信号处理中,并被证明是一种分析生物医学信号的强有力的工具,近年来一直受到国内外学者的广泛关注。本文系统地介绍了独立成分分析在生物医学信号(EEG,MEG,fMRI)处理中的应用,分析了其应用方法,最后简要地探讨了独立成分分析应用到生物医学信号中的优势及存在的一些不足。     

脑磁图在耐药性癫(癎)术前定位中的价值及影响因素探讨

目的:评价脑磁图(MEG)在耐药性癫癎术前定位中的价值并探讨影响其定位的因素。方法:在47例术前均行MEG,VEEG,MRI检查的耐药性癫癎病例中,以术中皮层脑电图(ECoG)为金标准,比较VEEG和MEG定位准确性,并作影响MEG和VEEG定位的logistic多因素分析。结果:47例颞叶癫癎中,MEG与ECoG完全吻合32例(68％),部分吻合8例(17％);VEEG与ECoG完全吻合18例(38％),部分吻合23例(49％)。MEG与ECoG完全吻合病例明显多于MEG与VEEG吻合例(P <0．05)。MEG定位的多因素分析显示发作频率对MEG定位有影响(P<0．05)。结论:MEG的应用有助于致癎灶的准确定位和手术方式的选择,在难治性颞叶癫癎的术前定位中有重要的临床应用价值。     

Identification of 197 genetic variations in six human methyltranferase genes in the Japanese population

Methylation is an important event in the biotransformation pathway for many drugs and xenobiotic compounds. We screened DNA from 48 Japanese individuals for single-nucleotide polymorphisms (SNPs) in six methyltransferase (MT) genes (catechol-O-MT, COMT; guanidinoacetate N-MT, GAMT; histamine N-MT, HNMT; nicotinamide N-MT, NNMT; phosphatidylethanolamine N-MT, PEMT; and phenylethanolamine N-MT, PNMT) by direct sequencing of their entire genomic regions except for repetitive elements. This approach identified 190 SNPs and seven insertion/deletion polymorphisms among the six genes. Of the 190 SNPs, 33 were identified in the COMT gene, 6 in GAMT, 41 in HNMT, 8 in NNMT, 98 in PEMT, and 4 in PNMT. Nine were located in 5′ flanking regions, 156 in introns, 10 in exons, and 15 in 3′ flanking regions. These variants may contribute to a more precise understanding of possible correlations between genotypes and disease-susceptibility phenotypes or risk for side effects from drugs. Received: May 17, 2001 / Accepted: June 18, 2001     

新生儿缺氧缺血性脑病患者血浆ET、SS测定的临床意义

目的:探讨了新生儿缺氧缺血性脑病患者血浆内皮素(ET)和生长抑素(SS)水平的变化及临床意义.方法:应用放射免疫分析对63例新生儿缺氧缺血性脑病患者进行了血浆ET和SS检测,并与35名正常健康新生儿作比较.结果:病儿组血浆ET水平显著高于正常儿组,而SS水平则显著低于正常儿组(P＜0.01).结论:新生儿缺氧缺血性脑病的发生发展与ET和SS水平的变化密切相关.     

ACI患者治疗前后血清Hcy、ACA、APN联检的临床意义

目的:探讨了急性脑梗死(ACI)患者治疗前后血清Hcy、ACA和APN水平的变化及临床意义.方法:应用放免法和酶联法对32例ACI患者进行了治疗前后血清Hcy、ACA、脂联素(Adiponectin,APN)检测并与35名正常健康人作比较.结果:在治疗前血清Hcy、ACA水平非常显著地高于正常人组(P<0.01),而A...