胶质瘤细胞与星形胶质细胞骨架荧光成像的比较

目的探讨C6胶质瘤细胞与侵袭性相关的骨架构筑特点。方法利用免疫荧光技术对C6胶质瘤细胞及星形胶质细胞的骨架成分进行成像及比较分析,流式细胞仪检测两种细胞F-actin的荧光强度。结果C6胶质瘤细胞的三种骨架成分呈网架结构,以核为中心向外周放射,边界不齐、毛糙,此外,微丝发达密集,中间丝呈高度网络结构。星形胶质细胞三种骨架成分呈网架结构,但细胞边界整齐,微丝稀疏,中间丝发达密集,呈栏栅状排列。C6胶质瘤细胞内F-actin的荧光强度(202.54±11.06)明显强于星形胶质细胞内F-actin的荧光强度(62.64±10.23),P<0.01。结论C6胶质瘤细胞骨架呈网架结构,边界不齐、毛糙,微丝发达密集,中间丝呈高度网络结构,可能均与侵袭性相关的特征结构表现,C6胶质瘤细胞含有丰富的F-actin与侵袭性有关。     

星形胶质细胞和星形胶质瘤细胞骨架的光镜和电镜观察

目的观察正常星形胶质细胞和星形胶质瘤细胞系ＳＷＯ－３８的细胞骨架的区别。方法分别用光镜和电镜观察正常 星形胶质细胞和ＳＷＯ－３８的细胞骨架。结果和结论两种方法都很清晰地显示出微管和微丝。正常星形胶质细胞微管和 微丝发达,属丰满型;粗大的张力纤维贯穿细胞全长,接近平行分布,偶见交叉呈“Ｚ”形状。而ＳＷＯ－３８细胞的微管则明显 减少,属稀疏型;细胞中仅见少量纤细的张力纤维,多数微丝束形成点状或树根状肌动蛋白小体,微管和微丝呈收缩趋势。     

星形胶质细胞和星形胶质瘤细胞骨架的光镜和电镜观察

目的：观察正常星形胶质细胞和星形胶质瘤细胞系SWO-38的细胞骨架的区别。方法：分别用光镜和电镜观察正常星形胶质细胞和SWO-38的细胞骨架。结果和结论：两种方法都很清晰地显示出微管和微丝。正常星形胶质细胞微管和微丝发达,属丰满型;粗大的张力纤维贯穿细胞全长,接近平行分布,偶见交叉呈“Z”形状。而SWO-38细胞的微管则明显减少,属稀疏型;细胞中仅见少量纤细的张力纤维,多数微丝束形成点状或树根状肌动蛋白小体,微管和微丝呈收缩趋势。     

正常与肿瘤性星形神经胶质细胞细胞间直接通讯的比较

用ＭＴＴ法测定了体外培养的正常星形胶质细胞与恶性ＳＷＯ３８星形胶质瘤细胞的细胞增殖速率，用粘附式细胞仪（ＡＣＡＳ５７０）对２种细胞间隙连接通讯进行测试。结果正常胶质细胞比胶质瘤细胞分化程度高，生长慢（ＯＤ值分别为０．２０１±０．００８和１．０９２±０．０７５，Ｐ〈０．０１），前者间隙连接通讯（１０．０５±８．７２％，ｎ＝２０）显著高于后者（２．８３±５．５％，ｎ＝３８，Ｐ〈０．０５）     

正常与肿瘤性星形神经胶质细胞细胞间直接通讯的比较

用MTT法测定了体外培养的正常星形胶质细胞与恶性SWO38星形胶质瘤细胞的细胞增殖速率，用粘附式细胞仪（ACAS570）对2种细胞间隙连接通讯进行测试。结果正常胶质细胞比胶质瘤细胞分化程度高，生长慢（OD值分别为0.201±0．008和1.092±0.075，P＜0．01），前者间隙连接通讯（10．05±8.72％，n＝20）显著高于后者（2.83±5.5％，n＝38，p＜0．05）。     

伽玛刀治疗鼠脑胶质瘤后的星形胶质细胞形态学变化

目的 对脑胶质瘤大鼠行伽玛刀治疗,观察肿瘤区及其周围正常脑区星形胶质细胞(astrocyte,AS)的数量、分布和形态变化.方法 制作C6大鼠胶质瘤模型80只,随机分为对照组和伽玛刀治疗组,治疗组于接种后14 d在MRI定位下行伽玛刀治疗,给予肿瘤周边剂量35 Gy.于治疗后48 h、7、14、21 d取肿瘤所在区脑块,石蜡切片后行HE染色和胶质原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)免疫组织化学染色,通过共聚焦激光显微镜观察两组大鼠肿瘤区及周围正常脑区AS的数量、分布和形态变化.结果 对照组大鼠肿瘤内部及周围可见少量病理状态的肥大型星形胶质细胞,随时程变化细胞数量变化不明显;治疗组大鼠于伽玛刀照射后48 h即可见脑内肥大型星形胶质细胞的增生,随时程推后数量增多,越靠近肿瘤,变化越明显.在伽玛刀治疗后21 d,肿瘤内部可见星形胶质细胞形成的胶质瘢痕.伽玛刀治疗后,随着肿瘤组织的坏死和水肿加重,治疗组大鼠肿瘤区及其周围脑组织内AS数量明显增多.计算并比较两组阳性细胞面密度,与对照组相比,治疗组阳性细胞面密度明显增高(P＜0.05).结论 AS参与了伽玛刀治疗的放射生物学反应.     

星形胶质细胞水通道4表达变化与胶质瘤性脑水肿的关系

目的 研究脑胶质瘤细胞对体外血脑屏障模型水转运及星形胶质细胞水通道4的影响。方法 利用重水的荧光特性及高效液相系统检测体外血脑屏障模型对水转运的变化。采用半定量RT-PCR的方法分析胶质瘤细胞作用后星形胶质细胞水通道4的表达变化。结果 胶质瘤细胞可以明显增强体外血脑屏障模型对水由内皮细胞腔面至基底面的扩散。这一过程不依赖于白蛋白等大分子物质的通透性变化。同时，胶质瘤细胞明显降低了胶质细胞水通道4的表达水平。结论 胶质瘤细胞可以明显增强体外血脑屏障模型对水由内皮细胞腔面向基底面的扩散。胶质瘤性脑水肿不一定是血浆中大分子物质通透性增加的结果。胶质瘤细胞对胶质细胞水通道4的影响可能是胶质瘤性脑水肿产生的分子机制之一。     

细胞凋亡与细胞骨架的改变

细胞凋亡时,细胞形态会发生一系列特征性的改变.近年来,发现细胞骨架也会发生相应的变化,包括细胞骨架网状结构降解、凝聚和分布不均等.通过对细胞骨架蛋白的生物活性、功能及细胞凋亡时细胞骨架结构形态的动态变化、相关调控因素等研究,显示凋亡细胞骨架改变是细胞凋亡形态学改变的基础,提示可通过改变细胞骨架结构来诱导细胞凋亡,以达到治疗肿瘤及其他疾病的目的.     

不同起源胶质瘤中microRNA-210表达差异及其与星形胶质细胞肿瘤级别的相关性

目的:探讨microRNA-210(miR-210)在星形胶质细胞肿瘤和少突胶质细胞肿瘤中的表达差异及意义?方法:将组织标本分为正常脑组织?少突胶质细胞肿瘤?星形胶质细胞肿瘤3组,星形胶质细胞肿瘤再分为A[毛细胞型星形细胞瘤(WHO Ⅰ级)]?B[弥漫性星形细胞瘤(WHO Ⅱ级)]?C[间变性星形细胞瘤(WHO Ⅲ级)]?D[胶质母细胞瘤(GBM,WHO Ⅳ级)]4个亚组?采用实时定量PCR方法检测各组中miR-210的表达水平?统计学分析miR-210的表达和星形胶质细胞肿瘤级别的相关性?结果:miR-210在各级别星形胶质细胞肿瘤中的表达水平依次为D> C> A和B,除A?B组间外,其他组间的差异都具有统计学意义(P < 0.001),星形胶质细胞肿瘤级别越高,miR-210表达水平越高;然而miR-210在少突胶质细胞肿瘤中呈低表达(P < 0.05),且间变性少突胶质细胞瘤中表达量低于少突胶质细胞瘤中的表达量?结论:miR-210在不同起源?不同级别胶质瘤中的表达水平不同,可以作为不同起源胶质瘤病理检查的辅助鉴别手段,也可作为星形胶质细胞肿瘤恶性进展的生物学标志物?     

人恶性胶质瘤细胞系CHG-5和SHG-44细胞骨架的比较研究

目的：比较人恶性肿瘤胶质瘤细胞系CHG－5和SHG－44的细胞骨架系统成分,以进一步了解胶质瘤细胞骨架特征与其分化程度的关系。方法：利用免疫荧光细胞化学染色结合激光共聚焦显微镜观察两种细胞系微管、微丝、中间丝的含量及分布,并比较几种常用固定剂和缓冲液对各骨架成分检测的影响。结果：除微管和微丝均被染色外,所有细胞表达Vimentin(波形蛋白）,而只有部分细胞呈胶质纤维酸性蛋白（GFAP）阳性。微管及中间丝在两种细胞胞质中的分布特征基本相似,但两种相细胞微丝的定位、分布及荧光强度有一定差异。Vimentin型中间丝在SHG－44细胞中表达较强,而GFAP在CHG－5细胞中表达较强。丙酮、75％酒精和4％多聚甲醛对微管的固定效果较好;用醛类固定后中间丝（尤其是Vimentin）染色极弱。结论：CHG－5分化程度较SHG－44高,两种细胞系细胞骨架状态的差异可能是二者生物学特性差异的结论基础。     

大鼠星形胶质细胞与C6胶质瘤细胞的蛋白质组学分析

目的探讨星形胶质瘤细胞与星形胶质细胞间的蛋白谱变化。方法选择星形细胞来源的C6胶质瘤细胞和体外培养纯化大鼠皮层的星形胶质细胞进行蛋白组学分析。星形细胞和C6细胞双向凝胶电泳（2-DE）的凝胶图像用PDQuest软件比较,差异蛋白质点进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）和生物信息分析,部分蛋白质的差异表达结果用半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）验证。结果获得了24个有明显表达变化的蛋白点;17个蛋白质得到质谱结果,与星形胶质细胞相比,经生物信息学分析确认的6个蛋白质中,磷酸甘油酸变位酶1、生物转化酶、谷胱甘肽S-转移酶P、钙网织蛋白和膜联蛋白A2在C6细胞中表达量较高,而波形蛋白和肌动蛋白γ-肌动蛋白在C6细胞中表达量较低。磷酸甘油酸变位酶1、膜联蛋白A2和波形蛋白经半定量RT-PCR验证与2-DE结果相符。结论本研究发现的差异表达蛋白质与许多重要的细胞生理活动和功能有密切关系,包括无氧酵解过程、细胞骨架组装、生物转化和信号转导,可能与胶质瘤的生长迅速、浸润迁移和抗药性相关。     

SHG-44神经胶质瘤干细胞分化为胶质瘤细胞前、后miR-92b基因的表达变化

目的观察SHG-44神经胶质瘤干细胞分化为胶质瘤细胞前、后miR-92b基因表达的变化。方法从人胶质瘤SHG-44细胞中筛选出肿瘤干细胞并进行荧光免疫鉴定;将肿瘤干细胞诱导分化为胶质瘤细胞;逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法和实时荧光定量PCR法测定分化前、后miR-92b基因前体的转录水平。结果 RT-PCR产物的电泳结果显示,在干细胞及分化后的胶质瘤细胞中均出现miR-92b基因前体的目标条带。运用实时荧光定量PCR法对目的基因进行表达相对定量的2-ΔΔt法,以干细胞miR-92b前体基因为参照,分化后的胶质瘤细胞miR-92b基因前体表达量为2.95,约为干细胞表达量的3倍。结论 miR-92b基因可能在神经胶质瘤干细胞的分化过程中发挥了重要作用。     

荧光模式下胶质瘤显微切除体会

目的 探讨用荧光素钠标记的荧光模式下显微切除胶质瘤的安全性及可靠性.方法 应用Zeiss Pentero 900显微镜,结合荧光素钠标记的荧光模式和普通光模式切除胶质瘤,根据术中黄荧光判断肿瘤组织范围及边界,留取黄荧光组织做病理检查,术后72 h内复查头颅MRI,判断切除程度.结果 11例胶质瘤患者接受荧光模式下手术切除,其中多形性胶质母细胞瘤4例,间变室管膜瘤1例,间变少突胶质细胞瘤1例,星形细胞瘤2例,少突星形细胞瘤1例,毛细胞星形细胞瘤2例.11例胶质瘤中3例为复发胶质瘤.随访18个月,复发2例.高级别胶质瘤的黄荧光染色组织对应的胶质瘤病理结果,其强荧光组织敏感度为100.0%,特异度为83.3%.结论 荧光模式下的荧光素钠标记胶质瘤组织能帮助术者判断高级别胶质瘤的边界,强荧光组织对应的高级别胶质瘤有很好的敏感度和特异度,术中应尽量切除强荧光组织,提高肿瘤全切除率.但是对于低级别胶质瘤荧光显影不明显.     

DEPTOR蛋白对胶质瘤间叶细胞转化能力影响及机制的探讨

目的 探讨siRNA干扰降低DEPTOR蛋白表达对U87细胞侵袭能力的影响及其机制.方法采用Western blot方法 检测U87细胞中DEPTOR蛋白表达.应用siRNA干扰技术转染U87细胞株,并用Western blot法检测瞬时转染以后DEPTOR蛋白的表达.体外侵袭实验观察转染后侵袭能力的改变.DEPTOR蛋白降低后,用Western blot检测间叶细胞来源的T-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白和调节因子Snail、Twist1、Slug、Zeb1的表达.结果 转染DEPTOR质粒的U87细胞DEPTOR表达降低.DEPTOR表达降低的SiDEPTOR/U87细胞侵袭并穿透Matrigel膜基质的细胞数量为(42±0.789),明显比SCR/U87组(22±1.197)多,差异有统计学意义(P＜0.05);同时Western blot结果显示:T-cadherin降低,N-cadherin、Vimentin蛋白表达量升高,与间质转化相关的转录因子仅Twist1的表达升高,而转录因子Slug、Snail、Zeb1表达无明显改变.结论 应用siRNA干扰技术降低DEPTOR蛋白的表达使U87细胞侵袭转移能力增强,同时T-cadherin降低,N-cadherin、Vimentin蛋白和转录因子Twist1的表达量升高,提示DEPTOR蛋白表达降低可通过调节转录因子Twist1进一步影响U87细胞的侵袭.     

胶质瘤U251细胞中CD133表达及干细胞特性分析

目的： 探讨CD133⁺细胞的生物学特性,分析CD133作为胶质瘤干细胞标记的可行性。方法： 利用免疫荧光染色检测U251细胞中CD133、巢蛋白（nestin）、神经元特异性烯醇化酶( NSE )、神经胶质细胞纤维酸性蛋白(GFAP)等蛋白表达,分析CD133⁺细胞与CD133^－细胞中巢蛋白、NSE、GFAP阳性细胞存在的差异。结果： U251中CD133⁺细胞比例为0.060±0.003,在CD133⁺细胞中,巢蛋白阳性细胞,NSE和GFAP阴性细胞比CD133^－中明显增多;在CD133^－细胞中,也存在巢蛋白阳性细胞,数目较CD133⁺中明显减少,相反巢蛋白阴性细胞,NSE和GFAP阳性细胞明显增多。结论： 胶质瘤U251细胞存在CD133⁺细胞,在CD133阳性和阴性细胞中,均存在干细胞样细胞,但是在CD133⁺细胞中此类细胞更多。     

在恶性胶质瘤中1H-MRS与荧光强度相关性的研究

目的明确磁共振波谱分析（MRS）测得代谢产物的比值与荧光强度定量的相关性,验证代谢与荧光强度定量、肿瘤恶性度是否相联系,为5-ALA荧光引导显微手术切除胶质瘤提高重要客观依据。方法对MRI检查怀疑恶性胶质瘤患者,应用Functiontool软件得到波谱图像及代谢物解剖图。对术前3小时患者口服5-ALA（20mg/kg）,在Leica荧光显微镜辅助下切除肿瘤。应用荧光分光光度计测量各部分肿瘤标本荧光强度,得到肿瘤中聚光剂原卟啉Ⅸ荧光强度值。结果 MRS测得代谢产物比值与荧光强度定量显著相关。胶质瘤组织中荧光强度与Cho/Cr比值成正相关;与NAA/Cr比值成负相关。结论 1）胶质瘤肿瘤实质区的荧光强度明显高于近肿瘤组织和远肿瘤组织。2）MRS测得代谢产物比值与荧光强度定量显著相关,实现了代谢与荧光强度定量、肿瘤恶性度相联系。能够对5-ALA荧光引导显微手术切除胶质瘤前起到指导作用。     

内皮祖细胞与胶质瘤关系的研究进展

内皮祖细胞（EPC）作为内皮细胞的前体细胞，经动员入外周血，能特异性归巢胶质瘤并参与肿瘤血管生成，但其机制目前尚不明了。内皮祖细胞有潜力成为细胞靶向载体，有助于研究胶质瘤血管生成机制及内皮祖细胞介导的靶向血管生成治疗胶质瘤的作用机制。     

血管平滑肌细胞表型转化与骨架蛋白表达之间的关系

目的:探讨体外培养血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)表型与细胞骨架蛋白表达之间的生物学意义.方法:体外培养大鼠主动脉VSMCs,实验分组为:对照组、血清饥饿组、血清再培养组,RT-PCR检测表型基因平滑肌22α(smooth muscle 22 alpha,SM22α)mRNA的表达;免疫细胞化学检测细胞骨架蛋白F-肌动蛋白(F-actin)的表达.结果:在体外培养条件下,对照组SM22α表达较低,细胞呈多角形或短梭形,细胞多有板状突起,F-actin的荧光强度明显减低;血清饥饿组SM22α表达恢复上调,VSMCs多细长,呈梭形,少见分裂相细胞,F-actin的荧光强度升高;血清再培养后SM22α表达减少,细胞呈增殖状态,见核分裂现象,F-actin的荧光强度减低.结论:VSMCs的表型和细胞骨架形态和数量表达之间有着重要的相互联系,它们在维持细胞功能、血管重构及在心血管疾病(高血压、动脉粥样硬化)的发生、发展中起重要作用.