博莱霉素的肺毒性反应及其防治

本文对博莱霉素肺毒性反应的发生机制、临床表现、危险因素及其防治措施作一综合报道.博莱霉素所致的肺毒性反应的发生率约占使用含博莱霉素化疗患者的2%～46%,因肺毒性死亡的患者约占所有用博莱霉素治疗患者的3%;博莱霉素的肺毒性是严重的、有时甚至是致命的副作用.一些危险因素可能会增加博莱霉素的致病率或致死率.降低博莱霉素的累积剂量可能是目前最有效的预防方法.     

氨基胍对博莱霉素诱发大鼠肺毒性的抑制作用

目的:观察氨基胍(AG)对博莱霉素A_5(BLMA_5)诱发大鼠肺毒性作用的影响。方法:BLM-A_5(5mg·kg~(-1))气管滴注诱发大鼠肺损伤和肺纤维化形成;在气管滴注BLM-A_5的同时及之后21d腹腔注射AG(20mg·kg~(-1)·d~(-1),ip)。化学比色法测定肺组织羟脯氨酸含量、肺泡巨噬细胞培养上清液中NO_2~-/NO_3~-含量、出肺血中NO_2~-/NO_3~-含量;HE染色组织切片上观察组织形态学变化。结果:(1)滴注BLM-A_5后d14至30,肺组织羟脯氨酸含量和出肺血中的MDA含量逐渐升高;注BLMA_5后d30,肺间质可见萎陷的和纤维化的肺泡,并出现大量的成纤维细胞。(2)滴注BLM-A_5后d7至14,出肺血NO_2~-/NO_3~-含量升高;肺泡灌流液中巨噬细胞培养上清液中NO_2~-/NO_3~-含量升高。(3)AG明显抑制出肺血MDA含量和肺羟脯氨酸含量的升高;AG还减轻肺间质组织形态学变化。(4)AG明显抑制出肺血NO_2~-/NO_3~-含量的升高。结论:AG对BLM-A_5诱发的大鼠肺损伤和纤维化有抑制作用,此作用与其抑制肺内NO大量生成有关。     

茯苓多糖对Lewis肺癌小鼠自发肺转移的抑制作用及其机制研究

目的 研究茯苓多糖对Lewis肺癌小鼠自发肺转移的影响,并探讨其作用机制。方法 C57BL/6小鼠右腋皮下接种Lewis肺癌细胞,分为茯苓多糖高（0.50 mg/只）、低（0.33 mg/只）剂量组,顺铂组（顺铂0.04 mg/只）,模型组（生理盐水）,接种瘤细胞后第2天开始尾iv给药,隔天一次。观察小鼠一般状态,造模后第7天开始,隔天测量肿瘤体积。造模后21 d取肺,计数肺表面转移灶个数,HE染色检测肺微小转移灶个数,检测外周血白细胞数量及脾质量、脾指数。结果 茯苓多糖高、低剂量对实体瘤无明显抑制,茯苓多糖高剂量可减少肺表面转移灶个数,增加白细胞CD11bmRNA表达,不影响外周血白细胞数、脾质量及脾指数,一般状况较好;茯苓多糖低剂量对肺表面转移灶个数、外周血白细胞数、脾质量及脾指数无明显影响,可增加白细胞CD11b、CD18mRNA表达,一般状况较好。结论 茯苓多糖对Lewis肺癌小鼠实体瘤无明显抑制作用,但能够抑制其自发肺转移,对外周血白细胞数量、脾质量及脾指数无明显影响,可增加外周血白细胞CD11b、CD18mRNA表达,活化外周血白细胞可能是茯苓多糖抑制肿瘤转移的机制之一。     

丹参对博莱霉素所致大鼠肺纤维化保护作用的实验研究

目的:探讨丹参对博莱霉素所致大鼠肺纤维化的保护作用及其作用机理.方法:通过气管内注射博莱霉素复制大鼠肺纤维化模型,在造模后的d 1和d 7开始给予丹参注射液治疗,分别在d 7、d 28处死大鼠,对肺组织匀浆中的脂质过氧化物(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、羟脯氨酸(HYP)和肺组织病理学变化测量.结果:在造模后d 1给予丹参注射液治疗能抑制实验性肺纤维化大鼠的肺组织匀浆中的MDA、HYP异常升高和GSH的下降,减轻其肺部的病理损害;在造模后d 7给予丹参注射液治疗,丹参治疗组与模型组上述观察指标比较无统计学差异.结论:丹参注射液可预防大鼠肺纤维化,对已形成的肺纤维化无逆转作用.     

环磷酰胺和紫杉醇联合化疗诱导小鼠Lewis肺癌细胞的凋亡

目的观察小剂量环磷酰胺(Ctx)和紫杉醇(Px)联合化疗对小鼠Lewis肺癌细胞凋亡的影响并探讨其可能的机制。方法建立小鼠Lewis肺癌模型,将38只C57BL/6♂小鼠随机分为4组:生理盐水对照组(A)、Ctx单药组(B)、Px单药组(C)、Ctx Px组(D)。采用免疫组化技术检测各组肿瘤组织中Bcl-2、Bax及Caspase-9的蛋白表达水平。结果D组Bcl-2蛋白表达水平明显低于A、B、C组,D组Bax、Caspase-9蛋白表达水平及Bax/Bcl-2则明显高于A、B、C组。结论小剂量Ctx和Px联合化疗比单用具有更强的促进小鼠Lewis肺癌细胞凋亡的作用,其机制可能与增加Bax/Bcl-2比值和激活Caspase-9等有关。     

褐藻胶寡糖对刀豆蛋白A诱导的急性肝损伤保护作用及机制初探

目的 研究褐藻胶寡糖对刀豆蛋白A (Concanavalin A, ConA)诱导急性肝损伤的保护作用及其可能的作用机制。方法 本实验以分子量为3kDa的甘露糖醛酸寡糖（M-3k）和古罗糖醛酸寡糖（G-3k）为受试样品,通过检测ConA注射后14h血清转氨酶水平及肝组织病理学评估肝脏损伤;通过酶联免疫法(ELISA) 检测TNF-α、IL-6水平;Western Blotting法检测Bcl-2、Bax蛋白表达。结果 与模型组相比,褐藻胶寡糖预防组显著降低了ConA急性肝损伤小鼠血清AST和ALT水平(P＜0.05),且组织病理学观察发现,肝细胞损伤、炎性浸润和凋亡程度减轻;与模型组相比,褐藻胶寡糖预防组显著降低了肝组织匀浆中促炎因子TNF-α、IL-6水平(P＜0.05);褐藻胶寡糖预防组Bcl-2蛋白表达明显高于模型组(P＜0.05),Bax蛋白表达水平明显低于模型组(P＜0.05)。讨论 说明褐藻胶寡糖对ConA诱导小鼠急性肝损伤具有一定保护作用,并且其作用机制可能部分与抑制肝脏炎症反应和干扰凋亡过程有关。     

葡萄籽原花青素对博莱霉素诱导的大鼠实验性肺纤维化的治疗作用

目的探讨葡萄籽原花青素(GSP)对大鼠肺纤维化的治疗作用及其机制。方法 45只SD雄性大鼠随机分为正常对照组(N组)、模型组(M组)、GSP组(G组),每组15只。M、G组大鼠气管内一次性注入博莱霉素生理盐水溶液0.2~0.3 m L(5 mg·kg~(-1))造模,N组气管内注射等容生理盐水。术后第2日开始,G组大鼠给予GSP生理盐水溶液0.1 m L·10 g~(-1)(500 mg·kg~(-1)·d~(-1))灌胃,M组和N组给予等容生理盐水,每日1次。给药7、14、28 d每组随机处死5只大鼠,取肺组织。观察肺组织病理变化,检测肺组织匀浆羟脯氨酸(HYP)含量,RT-q PCR法和Western blot法检测血管内皮生长因子(VEGF)及其受体1(VEGFR1)m RNA和蛋白质的表达。结果各时间点M组Ashcroft评分均高于N组(P<0.01)和G组(P<0.05),N组大鼠肺组织无明显病变,M组肺组织炎症反应和肺纤维化明显,G组各期肺泡炎症和纤维化程度均低于M组。各观察时点,M组大鼠肺组织HYP含量、VEGF和VEGFR1蛋白及m RNA表达均明显高于N组(P<0.01)。G组肺组织HYP含量、VEGF蛋白及m RNA表达均低于M组(P<0.05或P<0.01),给药7、14 d肺组织VEGFR1蛋白及m RNA表达低于M组(P<0.05),给药28 d与M组比较差异无显著意义(P>0.05)。结论 GSP能抑制大鼠肺纤维化,降低肺组织VEGF和VEGFR1蛋白和m RNA的表达可能为其作用机制之一。     

内皮素受体拮抗剂CPU0213对博莱霉素及油酸的小鼠肺损伤及纤维化的改善作用

目的：本实验采用两种小鼠急性肺损伤与肺纤维化相关的模型,探讨新内皮素受体拮抗剂CPU0213对肺纤维化病变明显的肺动脉高压是否具有改善作用。方法：实验分正常组、博莱霉素或油酸模型组、阳性药硝苯地平（10mg/kg）组和CPU0213（50、100、200mg/kg）治疗组（n=10）。博莱霉素模型中,观察肺重系数、支气管肺泡灌洗液（BALF）回收率、BALF白细胞数量及分类、丙二醛（MDA）含量以及肺组织羟脯氨酸含量。油酸模型中,小鼠尾静脉注射伊文氏兰（50mg/kg）1h后,接着静注油酸100mg/kg,4h后分离左肺,烘干后测定小鼠左肺中伊文氏兰的含量。结果：CPU021350、100、200mg/kg可以降低肺重系数,减少肺组织和血清MDA含量,减少肺组织羟脯氨酸含量,降低油酸所致肺纤维化模型中肺组织通透性的增加。其中,CPU0213200mg/kg的治疗效果优于阳性药硝苯地平（10mg/kg）。结论：内皮素受体拮抗剂CPU0213能减轻小鼠两种急性肺损伤与纤维化病变,对临床肺动脉高压有较好疗效。     

肽6A对大鼠异丙肾上腺素心肌损伤的治疗作用

给大鼠异丙肾上腺素(30 mg·kg~(-1).d~(-1)·sc)造成心肌损伤的模型上.用合成的纤维蛋白原降解肽片断——肽6A(50μmol·kg~(-1)·d~(-1))治疗.可明显减轻由异丙肾上腺素引起的心肌损伤.抑制心肌肌酸磷酸激酶、α-羟丁酸脱氢酶、乳酸脱氢酶和谷草转氨酶的漏出.降低血浆纤维蛋白原的含量.阻止异丙肾上腺素引起的心肌组织钙聚积.表现了明显的心肌保护作用。提示肽6A可能对于缺血性心脏疾病的治疗具有潜在临床应用价值。     

绿原酸对Lewis肺癌小鼠及人A549肺癌的实验研究

目的 研究绿原酸对肺癌的影响及联合用药后对化疗药物的增敏作用.方法 采用MTT法研究绿原酸对人肺癌A549细胞增殖的影响,绿原酸对移植瘤的影响及对化疗药物的增敏作用.结果 绿原酸对人肺癌A549细胞增殖无影响,对Docetaxel(1.6 μg·mL-1)无增敏作用;对A549肺癌有一定抑制趋势,可明显抑制Lewis肺癌的生长;联合用药在一定程度上可提高抗肿瘤作用,但对化疗药物的抗肿瘤作用无协同性.结论 绿原酸对人肺癌A549细胞无细胞毒作用;对A549肺癌无明显抑制作用,但可明显抑制Lewis肺癌的生长,联合阿霉素用药对抗肿瘤无增敏作用.     

Apelin-13抑制I/R损伤引起的肾小管上皮细胞炎症

目的：在I/R（肾缺血再灌注）刺激的肾小管上皮细胞HK-2中研究Apelin-13抑制I/R引起的细胞炎症。方法：在I/R刺激的HK-2细胞中给予不同剂量的Apelin-13,通过细胞免疫组化实验技术检测HK-2细胞中Apelin的蛋白水平。MTT检测各组的细胞增殖情况,Real time-PCR（实时定量荧光PCR）技术检测各实验组HK-2细胞中HIF1A（缺氧诱导因子1A）、APJ（G蛋白偶联受体）、ICAM1（细胞间黏附分子-1）和MCP1（单核细胞趋化蛋白-1）基因的mRNA水平变化。结果：（1）I/R刺激引起HK-2细胞中Apelin表达量显著性下降,给药Apelin-13（30 pmol·L^-1和300 pmol·L^-1）能够上升HK-2细胞中Apelin的蛋白水平。（2）MTT检测结果显示I/R刺激的HK-2细胞生长速度明显低于NC组（P<0.01）,同时给予Apelin-13（30 pmol·L^-1和300 pmol·L^-1）后细胞的生长速度明显上升（P<0.05）,差异有统计学意义。（3）与CT组细胞相比,I/R组HK-2细胞中HIF1A、ICAM1和MCP1的基因和蛋白水平显著性上升（P<0.05）;给药Apelin-13（300 pmol·L^-1）能显著性抑制I/R刺激的HK-2细胞中HIF1A、ICAM1和MCP1的基因和蛋白水平（P<0.05）。另外,在I/R刺激的HK-2细胞中Apelin受体APJ的基因和蛋白水平显著性下降,而给予Apelin-13后能显著性上调HK-2血细胞中APJ的基因和蛋白水平。结论：在I/R刺激的HK-2细胞中给予Apelin-13能I/R引起的炎症基因的表达,从而抑制细胞死亡。     

CCR5膜外一、二环模拟短肽对二甲苯致小鼠耳肿胀抑制作用的研究

目的研究与CC趋化因子受体5（CC chemokine receptor 5,CCR5）第一、二膜外襻特异结合的模拟肽,对二甲苯致小鼠耳肿胀抑制作用。方法用噬菌体随机7肽库筛选与CCR5特异结合的多肽序列,建立二甲苯致小鼠耳肿胀模型;合成4段氨基酸序列分别为STFTTTL（SL）、TPITQLL（TL）、SLPLPKP（SP）、QTSSAAL（QL）的CCR5模拟肽,将4段短肽分别腹腔内注射至耳肿胀模型小鼠,以阿司匹林为抗炎药效学实验的阳性对照药。分别通过称重小鼠左、右耳片和将小鼠耳片HE染色的方法,观察4段CCR5模拟肽对二甲苯致小鼠耳肿胀模型小鼠的抗炎活性。结果左、右耳片通过称重,HE染色后,发现4段CCR5模拟肽均能显著抑制二甲苯致小鼠耳肿胀模型小鼠耳朵水肿、充血和炎性细胞的浸润。抑制率分别为53.4%、47.3%、31.3%、25.2%,效果显著（P〈0.05）。结论合成的4段CCR5模拟肽具有对二甲苯致耳肿胀模型小鼠明显的抑制作用,提示CCR5可能在二甲苯致耳肿胀模型小鼠的发病进程中发挥着重要的作用。     

博来霉素A_6对小鼠肺毒性的电子显微镜观察

用电子显微镜观察比较博来霉素A_6和目前临床使用的博来霉素(复合物)对小鼠的肺毒性。博来霉素A_6和博来霉素分别以相当于1/40、1/20和1/10 LD_(50)剂量给小鼠ip 7d或10 d。病变表现为肺毛细血管的损伤,内皮细胞胞浆空泡、皂泡样变、网状化、伪足样突起、血小板粘着和微血栓形成等最为常见。博来霉素A_6引起的肺病变明显地较博来霉素为轻,提示博来霉素A_6有可能成为肺毒性较低的博来霉素类抗癌药物。     

内源性过氧亚硝基阴离子在博莱霉素A5诱发大鼠肺损伤和肺纤维化中的作用

目的：观察内源性过氧亚硝基阴离子(ONOO^-)在博莱霉素A5诱发大鼠肺损伤和肺纤维化中的作用．方法：通过测定出肺血脂质过氧化物水平和观察肺组织学变化(包括用偏振光显微镜观察天狼猩红染色的I、Ⅲ型胶原的变化)来判断肺损伤和肺纤维化;用硝基酪氨酸的免疫组化判断过氧亚硝基阴离子的表达．结果：气管内给予博莱霉素A5第14天观察到(1)出肺血脂质过氧化物含量升高;肺泡壁增厚,肺间质巨噬细胞浸润,且其邻近有成纤维细胞及增多的I、Ⅲ型胶原．(2)肺泡上皮细胞和肺间质细胞内ONOO^-高表达．(3)诱导型一氧化氮合酶(iNOS)抑制剂氨基胍减轻上述变化．结论：内源性ONOO^-介导BLM-A5的肺毒性作用;氨基胍对肺损伤和肺纤维化的治疗部分是通过减少内源性ONOO^-的形成实现的．     

高效液相色谱法测定盐酸平阳霉素软膏的含量

目的 :采用高效液相色谱法测定平阳霉素软膏中盐酸平阳霉素含量。方法 :Kromasil C8( 2 5 0 mm× 4 .6 mm,5μm)柱为色谱柱 ;流动相为戊烷磺酸钠溶液 -甲醇 -乙腈 ( 81∶ 13∶ 6 ) ;柱温 4 0 o C;流速 0 .8ml/ min;检测波长 2 5 4 nm;峰面积外标法。结果 :平阳霉素在 17.3～ 86 .6μg/ ml范围内呈良好的线性关系 ,r =0 .9998,平均回收率为 10 0 .0 % ( n =9) ,结论 :本方法简便、快速 ,结果准确 ,重现性好     

二硫代氨基甲酸吡咯烷对小鼠免疫性肝损伤的抑制作用

目的探讨二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)对免疫性肝损伤的抑制作用及其机制。方法设正常对照、脂多糖(LPS)、卡介苗(BCG)、BCG+LPS、PDTC和BCG+PDTC+LPS组。除正常对照、LPS和PDTC组外,其余各组小鼠经尾静脉注射BCG(每只2.5mg)。10d后,LPS和BCG+LPS组分别给予LPS(0.2mg·kg-1,ip),PDTC和BCG+PDTC+LPS组在给予LPS前24和2h分别给予PDTC(100mg·kg-1,ip),对照组给予等体积生理盐水。每组15只小鼠用于观察LPS处理后72h的死亡率;每组6只小鼠于LPS处理后1.5h处死,取肝脏,用RT-PCR检测肝脏组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)mRNA表达水平,用凝胶电泳迁移率分析法测定肝脏核因子κB(NF-κB)结合活性;每组12只小鼠于LPS处理后6h取血,处死,留取肝脏,测定血清谷丙转氨酶(GPT)活性、一氧化氮(NO)水平和肝组织还原型谷胱甘肽(GSH)含量,制备肝组织切片进行HE染色,观察组织病理变化。结果与正常对照组比较,BCG和LPS组小鼠肝脏炎症细胞明显增加,血清GPT活性升高,肝脏GSH含量显著下降,肝脏TNF-α与IL-1β mRNA表达增强,各组均未见小鼠死亡;PDTC组除血清GPT活性升高外,上述其他指标均未发生明显改变。与BCG和LPS组比较,BCG+LPS组血清GPT活性进一步升高,并伴有大面积肝脏坏死和大量炎症细胞浸润,肝脏NF-κB结合活性显著升高,TNF-α和IL-1β表达进一步增强,GSH水平下降,血清NO水平增加,小鼠死亡率40%。与BCG+LPS组比较,PDTC预处理明显抑制BCG+LPS引起的肝脏NF-κB活性、TNF-α及IL-1β mRNA表达增强,升高肝脏GSH含量,降低血清GPT活性和NO水平,减轻BCG+LPS引起的肝脏炎症和坏死,未见小鼠死亡。结论PDTC可抑制BCG+LPS引起的小鼠免疫性肝损伤,其机制可能与其抗炎和抗氧化作用有关。     

双环醇对刀豆蛋白A引起肝损伤小鼠肝脏基因表达谱的影响

本实验研究双环醇对刀豆蛋白A(concanavalin A，Con A)静脉注射引起免疫性肝损伤小鼠肝脏基因表达谱变化的影响，探讨双环醇肝保护作用的分子机制。小鼠于注射Con A 26.5 mg·kg^-1前24、 8及1 h分别口服双环醇250 mg·kg^-1。测定血清丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase，ALT)及天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase，AST)水平，提取小鼠肝脏总RNA，经反转录用Cy3-dUTP和Cy5-dUTP分别标记制备cDNA探针。将cDNA探针与BiostarM-40S小鼠基因表达谱芯片进行杂交，经ScanArray 4000扫描仪扫描芯片并用GenePix Pro 3.0软件进行分析。双环醇可显著抑制刀豆蛋白A引起的血清ALT和AST升高。与刀豆蛋白A对照组相比，双环醇给药组有287条基因发生差异表达，占芯片基因总数的7.00%。其中166条基因表达量明显下调，121条基因表达量明显上调。表达变化的基因主要涉及代谢与细胞色素P450、应激与炎症凋亡、细胞周期调控、信号传导以及再生等相关功能。双环醇对刀豆蛋白A引起小鼠肝损伤肝脏基因表达谱变化具有一定的影响，此结果对今后深入研究双环醇的肝脏保护作用特点和临床应用具有重要意义。     

博来霉素A_5抑制血管生成和抗肿瘤转移作用的实验研究

目的:证实博来霉素A5抑制血管生成和抗肿瘤转移作用。方法:将含有0.5μg博来霉素A5的载体置于胚龄7d的鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)上,48h后观察抑制血管生成情况。Lewis肺癌皮下接种C57BL6小鼠6d后,在移植瘤周围及其基底部多处局部注射博来霉素A5,每鼠每次0.6mg,每5天1次,共3次,接种后25d处死小鼠,观察皮下移植瘤血管生成抑制情况和对肺转移的抑制作用。结果:博来霉素A5可使载体周围CAM新生血管明显减少甚至消失。Lewis肺癌皮下移植瘤体积小,颜色苍白,毛细血管稀少,很少出血,坏死常见。肺转移抑制率为80%。结论:博来霉素A5能强烈抑制鸡胚CAM和Lewis肺癌皮下移植瘤的血管生成,瘤周局注具有抗转移作用。提示博来霉素A5是一有潜力的血管生长抑制剂。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对博莱霉素所致大鼠肺纤维化的干预作用及其机制研究

目的观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对实验性大鼠肺纤维化的干预作用及可能的作用机制。方法大鼠随机分为正常对照组、模型组、醋酸泼尼松组和EGCG大、中、小剂量组。通过气管内注入博莱霉素(BLM)复制大鼠肺纤维化模型,于造模后d 2各治疗组开始给药,给药后d7、14、28处死大鼠,取肺组织,观察形态学变化,并测定生化指标。结果EGCG能减少实验性肺纤维化大鼠肺组织中胶原沉积及降低肺系数(P<0.05,P<0.01),提高T-AOC、SOD水平(P<0.05,P<0.01),减轻肺部的病理损害。结论EGCG对BLM诱导产生的大鼠肺纤维化有一定的抑制作用。