免疫血小板减少性紫癜病人抗血小板自身抗体对血小板功能的影响

本文调查了抗血小板自身抗体对血小板凝集和ATP分泌的影响。检测了血小板相关IgG(PAIgG)和血小板结合IgG(PBIgG)的值以及它们与血小板功能的关系。血小板和血浆标本来源于60例慢性免疫性血小板减少性紫癜(ITP)病人和10例健康对照者。所有血标本均制成富舍血小板血浆(PRP)。通过免疫BALB/C小鼠制备抗人血小板膜的单克隆抗体(mAb)。并检测血小板凝集和ATP分泌功能。用流动细胞计数法测PAlgG和PBIgG值以及mAb结合血小板值。并进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western斑点杂交分析。     

间接法血小板放射性抗球蛋白试验在免疫性和非免疫性血小板减少性紫癜中的应用

作者应用间接法放射性抗球蛋白试验测定483例各种原因的血小板减少症血清中可与血小板结合的游离IgG及补体C_3,认为此法可用作免疫性血小板减少性紫癜(ITP)的病情估计和随访。方法:取O型健康人血以Sepharose 2B凝胶过滤法快速分离血小板,调整数量为700—1000×10_-~3/L,取0.1ml与患者血清0.4ml混和,置37℃孵育30分钟,以生理盐水洗3次后加入~(125)Ⅰ标记的抗-IgG0.4ml,置22℃×30分钟,血小板移置于比重为1.017的硅油柱上,13,000g离心1分钟,剪下离心管底,以γ计算器测量血小板结合的~(125)Ⅰ的量。补体C_3的测定方法类似。     

血小板抗体值与特发性血小板减少性紫癜(ITP)的治疗反应无相关性

早先认为ITP系一种IgG抗体介导而引致血小板毁坏的疾患。作者用定量抗球蛋白消耗试验测定67例成人ITP血小板结合的IgG(抗血小板抗体,PBIgG),观察血小板抗体值与类固醇治疗及脾切除的疗效之间的相关性。67例病人血小板计数均<50×10~9/l,PBIgG正常值的上限为14.8ng/10~6血小板。全部病人先给予强的松1mg/kg/日,持续2周,然后减至20-30mg/日,而后再在6-8周内逐渐减完。开始治疗后2周血小板数未升至正常(>150×10~9/l)(无效)或2周升至正常,但逐渐减量时又下降者(部分有效),均属治疗失败。停止治疗后血小板数仍正     

酶联免疫吸附试验测定血小板抗体

本文作者介绍一种简单、灵敏和重复性好的酶联免疫吸附试验(ELISA),测定特发性血小板减少性紫癜(ITP)的血小板抗体。一、材料和方法:取正常人或患者EDTA抗凝血,分离血小板,把它悬浮于EDTA-VBS液中,调整血小板计数至50,000个/mm~3。用碱性磷酸酶标记抗人IgG(Anti-IgG~(AP))。准确取0.1ml血小板悬液,加入0.1ml1/250的Anti—IgG~(AP),37℃30分钟,离心,洗沉淀物3次。加1ml基质(P-硝基苯磷酸二钠),37℃5分钟,加1ml 5N NaOH终止反应,离心,将上清液于410nm测OD。取0.1ml生理盐水作标准与1/2500的Anti-IgG~(AP)保温,以下步骤同上。用Bo-     

固相红细胞吸附法用于输注血小板前的配合试验

近期开展的固相红细胞吸附试验(Sp-RCA)可同时检测出HLA,血小板和血型抗原的相容性,操作简易,可筛选成批的献血员。方法为取献血员的全血,以EDTA抗凝,离心200×g,10分钟,制成富含血小板的血浆(PRP),无需计数血小板含量。加两滴PRP于专用的结合血小板的U型微孔板内,将板离心35×g、经5分钟以形成固相血小板层,未结合的血小板用0.85%NaCl轻轻地洗涤6-8次除掉。再加入受检者的血清1滴,低离子强度溶液3滴,混匀,于37℃作用30分钟,未结合的血清以0.85%NaCl轻洗5次除去,再加1滴0.2-0.4%抗IgG结合的指示红细胞,使与血小板结合的抗体作用;将板离心700×g、1分钟后肉眼观察结果。阳性者指示红细胞吸附于整个孔的表面,阴性者只有孤立的含细胞的斑点。     

第一次日本血小板型研讨会报告

日本血小板型研讨会参加的机构有13个,第一次会议的主要目的:①评价方法,②建全配组血小板.指定的检查方法为MPHA(混合被动凝集法),其余方法任选,包括PSIFT(血小板悬浮荧光抗体法),C-FDA(Carboxyfluoresceln diacetate),FACS(流动细胞计数法)和EIA(酶联免疫测定法).MPHA法采血:用20G注射器,按ACD液1:全血7的比例采血.血小板粘附微板制作:①400×G,离心10分钟,获得PRP(富含血小板血浆).②加PRP总量10%的ACD液,1100×G,离心15分钟.③沉降的血小板用生理盐水洗2次(1100×G,     

女性血小板减少性紫癜与自身免疫状态分析

目的 观察女性血小板减少性紫癜与自身免疫状态关系,自身免疫状态的观察指标为血清免疫球蛋白、抗核抗体、抗可提取性核抗原谱、补体C3/C4.方法 选取濮阳市安阳地区医院近0.5a来因外周血血小板减少入住的女性患者,骨髓穿刺检查排除其他疾病,共16例,通过免疫比浊法测定血清球蛋白及补体含量,免疫印迹法检测抗可提取性核抗原谱,间接免疫荧光法检测抗核抗体.结果 血小板减少患者抗可提取性核抗原阳性率高,抗核抗体阳性率明显高于正常人,且免疫球蛋白与补体C3/C4呈负相关.结论 对女性血小板减少性紫癜患者行自身免疫状态检查是有必要的.     

离心制备无白细胞的血小板浓缩物

反复输注随机供血者的血小板常引起受体抗血小板输注,最近的研究认为这一现象并不是由血小板引起,而是由血小板中污染的白细胞所致.本文报道用标准血小板浓缩物制备无白细胞污染的血小板的离心技术.3单位血小板浓缩物在一转移袋内混和(150ml),在以下条件室温离心:200×g,10分钟;300×g,5分钟;300×g,10分钟;370×g,5分钟.吸出上清液,袋内留约30ml 血浆。离心前后,对每袋混合浓缩物作白细胞和血小板计数,根据离心后血小板浓度     

HPA配型在免疫性血小板输注无效中的应用研究

目的探讨以HPA配型解决免疫性血小板输注无效的方案。方法 1)建立PCR-SSP方法检测HPA-1～5基因型检测方法,建立机采血小板供者库;2)采用微柱凝胶法和Capture-P法对32名血小板输血无效患者作血小板同种抗体筛查,并对2种方法比较;3)对血小板同种抗体筛查阳性患者采用已知HPA基因型的标准谱血小板作抗体鉴定并采取HPA基因型同型输注的原则寻找供者。结果 1)采用PCR-SSP方法成功检测出HPA-1～5基因型,并对1 000名血小板供者的HPA-1～5基因型定型;2)32例血小板输注无效病例中,微柱凝胶法检测血小板同种抗体阳性率为50%,Capture-P法血小板抗体阳性检出率为40%;3)32例血小板输血无效病例中2种方法同时血小板抗体阳性13例,其中2例鉴定为抗-HPA,分别为抗-HPA-5b(P=1/84)、抗-HPA-1a(P=1/55)。结论对抗-HPA引起的血小板输注无效患者采用HPA基因型相合的方法寻找供者是有效的。     

固相放射免疫分析检测结合抗血小板抗体——对45例自身免疫性血小板疾患的研究

一九七五年Doxin等采用补体介导红细胞溶解抑制技术对结合血小板抗体进行了定量测定。但是技术比较复杂,本文作者介绍了一种固相放射免疫分析用来检测血小板结合IgG。此种分析技术比较敏感,可以检测微微克(pg)水平的抗体,操作比较简单,可在7-8小时内完成。材料和方法 (一)制备血小板:将收集的血液置于含有EDTA(乙二胺四乙酸)减压试管中,于4℃150×g离心20分钟。取出富有血小板的血浆并于2000×g离心15分钟,取出血小板     

在成分血生产过程中制备少白细胞浓缩血小板

用含CPD—1保养液的三联袋采集1单位全血于第一袋中,以2200rpm 离心5分钟,加速时间为1分钟,减速过程为3分钟,此时全血为压缩红细胞(RBCs)和富含血小板血浆(PRP),二部分加压使PRP 通过去除白细胞的滤器(由表面处理过的聚酯微纤维制备)进入血小板收藏袋(第二袋),即得少白细胞PRP.再以3250rpm 离心15分钟,加速时间为1.6分钟,降速时间为3.5分钟,然后将上层少血小板血浆挤入第三袋作为新鲜冰冻血浆使用,在第二袋中留下50—60ml 即为少白细胞浓缩血小板。用此方法共制备15份少白细胞浓缩血小板,平均体积为56.7ml.第5天血小板含量平均为8.6×10~(10)/单位。第5天白细胞含量平均为0.83±0.7×10~4/单位(0.14白细胞/μl),而对照组14例,白细胞平均含量为5.95±2.86×10~7/单位,白细胞去除率99.9%。11例配对比较,样本组血小板为7.3±1.4×10~(10)/单位,而对照组为7.7±1.5×10~(10)/单位,血     

免疫性血小板输注无效血液病患者血小板抗体特异性检测及分析

目的对本中心送检的免疫性血小板输注无效血液病患者进行血小板抗体特异性检测与分析。方法采用固相凝集法对多次输注血小板并发生血小板输注无效(PTR)的血液病患者进行血小板抗体筛检,对其中血小板抗体阳性患者采用PAKPLUS试剂盒进行血小板抗体鉴定。结果共筛选出血小板抗体阳性标本115例,其中抗-HLA-Ⅰ类69例(60.00%),抗-HPA 3例(2.61%),抗-HLA-Ⅰ类和抗-HPA 43例(37.39%);46例抗-HPA阳性标本中,单一血小板膜糖蛋白抗体22例(47.83%),其中抗GPⅡb/Ⅲa 6例(13.04%),抗GPⅠa/Ⅱa 10例(21.74%),抗GPⅣ6例(13.04%),多个血小板膜糖蛋白抗体24例(52.17%)。结论抗-HLA-Ⅰ和抗-HPA是导致血液病患者免疫性PTR的主要因素,血小板抗体检测可为临床血小板输注策略提供依据,提高血小板输注效果。     

双抗体夹心法微量ELISA测定人血小板因子4

测定血小板因子4(PF_4)有多种方法,但是都有一定的局限性。本文介绍一种敏感性强、特异性高、重复性好的方法,即双抗体夹心微量酶联免疫吸附试验(ELISA)。测定过程如下:(1)包被:聚苯乙烯微板的每个孔加150μl缓冲液稀释的抗人PF_4抗体,置37℃孵育20小时,用PBST(磷酸盐缓冲盐水-吐温20溶液)洗4次。(2)抗原孵育:加200μl/孔含1％牛血清白蛋白的PBS,37℃1小时,板用PBST洗1次,再加入50μl/孔含已知量抗原的抗原标准液及血浆标本,37℃1小时,板用PBST洗3次。(3)标记抗体孵育:加100μl/孔用PBST稀释的辣根过氧化物酶标记     

用前到腺素E_1制备的浓缩血小板在体内的恢复与存活

贮存5-7天的浓缩血小板(PC)在输注后恢复和存活不如新鲜血小板。作者首先在新鲜富血小板血浆(PRP)中加入一种生化激活剂后进行制备,并与常规PC制备法对照。方法:采集至少10天未服药的男性献血者全血,枸橼酸-磷酸-葡萄糖(CPD)抗凝,室温离心(1000g,7分钟)制备PRP。加入用正常盐水稀释的前列腺素E_1(PGE_1)使其最终浓度为1.3×10(~-8)M,然后室温3500g离心7分钟制备PC。PC于22℃±1℃贮存5天后,在使用前2-3小时以自身血浆浸泡血小板,然后弃液体,计数血小板、白细胞,测定pH,按Kunickl法作形态学积分,每个单位浓缩血小板加入250μCi铬酸钠(~(51)Cr)标记,22℃孵育30分钟,以自身血浆洗涤后配成30ml悬液,于输入后1.5、2.0、24、     

荧光抗体用于血小板抗体定量

免疫性血小板减少症[尤其是特发性血小板减少性紫癜病(ITP)]是属于血小板自身抗体免疫性疾病。因而,对血小板抗体的检测可用于该病的诊断。但到目前为此,对于血小板抗体的检验方法,多半是基于血小板结合免疫球蛋白 IgG(PAIgG)的测定。如 PaIgG 的测得值高,表明可能有很强的血小板抗体存在,则具有一定的诊断意     

血小板输注无效患者血小板特异性糖蛋白抗体表达的实验研究

目的探讨血小板输注无效(PTR)患者血小板特异性糖蛋白抗体的表达情况。方法采用ELISA方法检测56名临床上确诊为PTR患者的血小板特异性糖蛋白抗体、应用PCR方法检测其血小板特异性抗原(HPA)1-6,15基因分型。结果 56名PTR患者检出血小板特异性糖蛋白抗体,8例表达阳性(占14.3%),包括血小板特异性糖蛋白GPⅡb/Ⅲa阳性7例,GPⅠa/Ⅱa阳性1例、GPⅠb/Ⅰx阳性1例、GPⅣ阳性1例。结合8例患者的抗体检测反应格局和HPA抗原基因型结果分析抗体的特异性为:4例存在抗-HPA3b、3例存在抗-HPA3a、1例存在抗-HPA5b。结论反复输血的血小板输注无效患者,应选择HPA抗原相匹配的血小板供者,以改善血小板输注效果。     

特发性血小板减少性紫癜患者抗血小板自身抗体相关微粒子

特发性血小板减少性紫癜(ITP)是一种由循环抗体引起的综合征,据认为与血小板相关IgG、IgM、C_3(PAIgG、PAIgM、PAC_3)增高有关。最近的研究表明,由血小板释放的微粒子(MP)对ITP可能具有潜在的功能作用。为此,作者采用血流细胞计测定了56例ITP患者血浆血小板相关Ig及抗血小板抗体相关MP水平。同时,为了解MP形成与糖蛋白(GP)自身抗体间的关系,还对这些患者进行了有关GP抗体测定。所有患者均有血小板数减少,但巨核细胞正常或增高,无其他类型免疫性血小板减少证据。亦无输血史。采用血小板悬液免疫荧光法检测血浆PAIgG、IgM、C_3及MP水平。MP的检测分两个不同刺激系统     

对测定血小板寿命的一种生化方法的评价

血小板寿命的测定一直沿用同位素法。这种方法操作复杂,临床上难以采用。新的方法已有报导(Stuart,M.J.等,1975),其原理为用阿斯匹林(乙酰水杨酸)不可逆地抑制丙二醛(MDA)的形成。而MDA是对血小板具有促聚集作用的血栓素A_2(P-roaggregating thromboxane A_2)的降解产物。本文作者对此法的应用可能性作了评价。MDA测定:取12毫升静脉血,加入EDTA溶液(9:1,体积:体积);离心140g,15分钟,得富含血小板血浆;再离心1200g,8分钟,得血小板沉淀;使其悬浮于磷酸盐缓冲液(0.15M,pH7.4)中。计数后,加     

血小板相关IgG的检测及其临床应用价值

随着人们对原发性血小板减少性紫癜(ITP)发病机理研究的逐步深入,抗血小板(Pt)抗体的病理作用已基本得到确认。血小板相关IgG(PAIgG)的测定业已成为诊断ITP的一项重要指标。本文拟就目前常用检测PAIgG的方法、PAIgG对ITP诊断的价值、对病情、疗效的估价及它在其它疾病中的意义作一综述。一、PAIgG的主要检测方法对ITP患者抗体的检测,最初主要测定血清中抗Pt抗体,但因其阳性率不高(60%左     

新ELISA法测定血清结合抗血小板抗体

血小板减少常与免疫机制有关。特发性血小板减少性紫癜(ITP)就要首先测定与血小板糖蛋白抗原有关的Ig部份。通常使用两种方法测定抗血小板抗体,即测定血小板相关性Ig(PAIG)和测定血清结合血小板Ig(SPBIG)。测定SPBIG结合技术虽简易,但灵敏度低下。本文介绍既特异又灵敏的实用的ELISA法能可靠测定ITP中的SPBIG。制备包被血