近交系大鼠后肢移植模型的建立及意义

目的:介绍异体复合组织移植研究中操作难度较大的大鼠后肢移植模型的建立方法,操作体会及此动物模型在复合组织移植中的意义。方法:以近交系BrownNorway(RT1n)大鼠为供体,Lewis(RT11)大鼠为受体,吻合股动、静脉为供血血管,进行近交系大鼠后肢异体移植。实验分为2组:急性排斥组(A组)术后不予免疫抑制治疗;免疫抑制组(B组)术后腹腔注射FK506剂量为1mg/kg/天。术后观察移植肢体的排斥情况及其存活时间,并取皮肤进行组织病理学检查,以此对动物模型的可靠性和实用性进行评价。结果:A组移植皮瓣均在术后(4±1)天发生明显的逐渐加重的急性免疫排斥反应;B组移植肢体均可良好存活,存活时间均>100天。皮肤组织病理学检查上,A组有血管炎、毛囊炎及真皮炎症等典型急性排斥反应表现;B组均无明显免疫排斥病理学表现。术后IL-2水平与肢体外观表现及病理学检查所见排斥反应程度相一致。结论:近交系大鼠后肢移植模型是得到广泛承认的复合组织移植模型,也是最具挑战性的动物模型之一,完善近交系大鼠后肢移植模型的建立方法,使模型不断规范化,对复合组织异体移植研究的发展具有重要意义。     

局部转染CTLA-4Ig抑制大鼠异体复合组织移植急性排斥反应的研究

目的：观察腺病毒介导融合基因细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4（cytotoxic T-lymphocyte associated antigen-4,CTLA-4Ig）局部转染大鼠同种异体移植的复合组织对急性排斥反应的抑制作用。方法：以近交系Brown Norway大鼠为供体,Lewis大鼠为受体,采用腹部游离皮瓣作为异体复合组织移植（composite tissue allotransplantation,CTA）模型。将受者分为3组,A组（空白对照组）：异体皮瓣离体保存时不感染腺病毒,只灌注PBS溶液;B组（阴性对照组）：异体皮瓣离体保存时灌注携带增强型绿色荧光蛋白的重组腺病毒（Ad—EGFP）;C组（基因治疗组）：异体皮瓣离体保存时灌注AdCTLA-4Ig。术后观察各组移植皮瓣的排斥情况及存活天数,进行组织病理学检查,并观察CTLA-4Ig在移植组织中的表达情况及对急性排斥反应的抑制作用。结果：①A组、B组皮瓣移植物平均生存时间分别为（7．8±1．5）天和（7．1±1．6）天,C组移植皮瓣平均存活时间为（10．4±2．3）天,C组存活期长于A组和B组,差异有统计学意义（P〈0．01）;②移植皮瓣病理学检查：术后第7天,A组与B组移植皮瓣均发生严重急性排斥反应,而C组排斥反应较A组和B组轻微,但C组术后第11天也表现出严重急性排斥反应;③移植前后血清白细胞介素2（interleukin-2,IL-2）水平：各组移植术后早期发生急性排斥反应时,IL-2均有明显升高,但实验组血清IL-2水平在第3天、第7天时均明显低于两对照组（P〈0．01）。结论：建立了一种新的异体复合组织移植局部基因转染模型,皮瓣灌注AdCTLA-4Ig能获得融合基因在移植复合组织中的表达,局部产生的CTLA-4Ig能抑制急性排斥反应的发生,延长移植物存活时间。     

大鼠异体皮瓣移植后不用免疫抑制剂情况下移植物坏死的主要原因

目的 探讨大鼠异体皮瓣移植后不用免疫抑制剂情况下移植物坏死的主要原因.方法 实验分为3组,每组受者均为8只,以股动、静脉为蒂进行下腹部皮瓣移植.A组:以BrownNorway(BN)大鼠为供者,Lewis(LEW)大鼠为受者,移植术后2周内使用免疫抑制剂西罗莫司4mg·kg-1·d-1腹腔注射;B组:以BN大鼠为供者,LEW大鼠为受者,移植后不使用任何药物;C组:为LEW大鼠自体移植对照组,术后不使用任何药物.术后观察各组移植物的大体变化,并取移植物进行病理学检查,比较各组的病理学变化.结果 A组自术后17 d起,陆续出现皮瓣红斑,表皮脱落,真皮及皮下组织则最后坏死;B组受者排斥反应进展迅速,表皮不出现脱落现象,皮瓣直接完全发黑、坏死.C组移植物长期存活,未见排斥反应征象.A、B两组从出现排斥反应迹象到组织完全坏死的时间分别为(16.7±3.0)d和(5.4±1.1)d.病理检查显示:A组表皮组织首先被排斥,真皮和皮下组织由于大量淋巴细胞浸润而坏死.B组则为移植皮瓣真皮下血管网内皮细胞坏死,血管栓塞,皮肤内细胞缺血而坏死.结论 微血管栓塞是大鼠异体皮瓣移植后不应用免疫抑制剂情况下移植物坏死的主要原因.     

他克莫司局部用药在异体复合组织移植中的应用研究

目的:探索在异体复合组织移植后局部应用他克莫司预防免疫排斥的效果。方法:以Lewis鼠和Brown Norway鼠为实验动物,进行腹部游离皮瓣异体移植,其中Brown Norway大鼠为供体,Lewis大鼠为受体。实验分为3组:全身用药组(A组),局部用药组(B组)和空白对照组(C组),在移植术后10天内均先给予腹腔注射环胞素A(20mg/kg/天),此后A组继续全身用药,而B组和C组仅在皮瓣局部分别给予他克莫司涂抹剂或赋形剂氮酮(均为2mg/kg/天)。通过观察皮瓣存活时间,皮瓣组织病理学检查,他克莫司血药浓度和局部组织药物浓度以及全身IL-2的变化,探讨局部应用他克莫司的效果。结果:三组皮瓣平均存活时间分别为:>100天(A组),25天(B组)及17天(C组),〉通过对比和统计学分析可以看出,局部用药可以延长异体皮瓣的存活时间,但是仅靠局部用药仍无法避免排斥反应的发生。结论:局部用药可以延长异体皮瓣的存活时间,但是仅靠局部用药仍无法避免排斥反应的发生。对于异体复合组织移植,局部应用他克莫司可以延长皮瓣的存活时间,但存活时间有限;但是在全身用药的基础上,局部用药可以降低全身用药的剂量,而保证异体皮瓣长期存活。因此,为了减少全身用药所带来的毒副作用,对于异体复合组织移植来说,局部应用他克莫司是一种可行的方案。     

异体复合组织移植皮肤淋巴引流隔绝动物模型的建立

目的:通过SD大鼠下腹部游离皮瓣及皮管的移植,建立大鼠异体复合组织移植皮肤淋巴引流隔绝模型。方法:7～8周龄雄性SD大鼠切取下腹部皮瓣并游离行同种异体移植,皮肤隔离组(A组):将供体皮瓣边缘对合、缝合成管状,底边留血管蒂出口用隔离器隔离皮肤,显微外科吻合血管,皮管缝合于隔离器,隔离器固定于受体;皮肤未隔离组(B组):将供体游离皮瓣卷制成管状,显微外科吻合血管并将供受体皮肤对位缝合;空白对照组(C组):行下腹部游离皮瓣异体移植。大体观察每组皮瓣或皮管存活时间,于术后3、5、7、14、28、35d取移植物皮肤组织行HE染色,观察病理学变化。结果:A组:皮管存活时间为32(34,32)天;B组:皮管存活时间为15(16,15)天;C组:皮瓣存活时间为6(7,6)天。A组与C组、B组与C组、A组与B组存活率差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:本实验成功建立了大鼠的异体复合组织移植淋巴引流隔绝模型,并证实了隔绝皮肤淋巴引流能有效延长移植物的存活时间。     

靶向CD40的shRNA干扰抗大鼠异体肢体移植急性排斥反应的实验研究

目的 探讨靶向CD40的RNA干扰对大鼠异体肢体移植急性排斥反应的影响. 方法以纯系SD大鼠为供体,纯系Wistar大鼠为受体,行同种异体右后肢移植.27只大鼠肢体移植后随机分为三组,A组:注射入梭华.Sofast.siCD40-2/pSilencer载体复合物600 μL;B组:注射Sofast-pSilencer4.1-CMV neo空载体复合物600 μL;C组:注射生理盐水600μL,以上均通过阴茎背静脉注射.观察移植物排斥反应征象及存活情况,并于第7天对产生免疫耐受大鼠进行混合淋巴细胞反应,同时进行组织学检查. 结果与B、C组相比,A组移植物发生排斥反应的时间及存活时间均显著延长,差异有统计学意义(P＜0.01)(＞13 d),未见排斥反应征象;B、C组均于术后近期发牛排斥反应.A组大鼠对供体的淋巴细胞呈现低反应性,移植的供体同系大鼠的肢体得以存活. 结论术后不应用免疫抑制剂的情况下,靶向CD40的shRNA干扰可以抗大鼠异体肢体移植急性排斥反应.     

PFC,TNF-α,NO在猪胰腺移植急性排斥反应中的意义

目的　研究胰周渗液细胞学 (PFC)检查、血清肿瘤坏死因子 (TNF α)和一氧化氮 (NO )在猪胰腺移植急性排斥反应中的价值。方法　建立猪胰腺移植模型后随机分成 3组 ,每组 6头。A组为同种异体胰腺移植 ,不使用免疫抑制治疗 ;B组为同种异体胰腺移植 ,使用免疫抑制治疗 ;C组为自体胰腺移植 ,不使用免疫抑制治疗。术后行连续穿刺活组织检查确立急性排斥反应的发生 ,并观察急性排斥反应发生时PFC以及血清TNF α和NO等的变化。结果　 ( 1)A组胰腺移植成功 5只 ,失败 1只。存活 5只均发生急性排斥反应 ;B组 6只均移植成功 ,其中 2只发生轻度急性排斥反应 ;C组移植成功 4只均未发生急性排斥反应。 ( 2 )A组术后第 6天PFC阳性率 80 .0 % ( 4 /5 ) ,B组 16.7% ( 1/6)和C组 0 % ( 4 /4 ) ;术后第 7天A组血清TNF α和NO显著升高 ,B和C组术后升高不显著。结论　PFC ,TNF α ,NO可望作为猪胰腺移植急性排斥反应早期观察指标 ,对诊断急性排斥反应具有重要意义     

大鼠同种异体肢体移植急性排斥反应的实验研究

目的通过大鼠同种异体肢体移植模型,旨在分析大鼠同种异体肢体移植中各种不同组织的急性排斥反应特点,确定反映肢体移植排斥反应最具有代表性的组织类型.方法将29只Sprague-Dawley成年大鼠随机分成2组,对照组15只为自体肢体再植组,实验组14只为Wistar→SD同种异体肢体移植组,术后不用免疫抑制剂,观察急性排斥反应出现的时间及表现,并对移植肢体中各组织进行组织病理学检查.结果异体肢体移植术后第(3.36±1.15)d开始出现皮下水肿和皮肤红斑,这是最早的急性排斥反应表表现;移植肢体的平均存活时间为(7±0.78)d;移植肢体中皮肤组织的排斥反应程度最强.结论Wistar→SD同种异体肢体移植中皮肤是最具有代表性的、最易于观察排斥反应的组织类型.     

小鼠颈部游离皮瓣移植模型的构建

目的构建一种小鼠颈部游离皮瓣移植模型, 并初步探讨同种异体皮瓣移植排斥规律。方法选择MHC不相符的近交系BALB/c小鼠(第四军医大学动物实验中心)作为供体, 以C57bl/6小鼠为受体, 将小鼠利用随机数字表法分为3组, 包括同基因移植组:C57bl/6→C57bl/6;急性排斥组:BALB/c→C57bl/6不用药;免疫抑制剂组:BALB/c→C57bl/6联合输注3 mg/(kg·d)雷帕霉素。供体腹股沟皮瓣以小鼠股动静脉为蒂, 获取皮瓣后, 将血管穿过套管, 并将内膜翻折出并固定;受体区域选择小鼠颈部, 在颈部去除皮肤, 舌下腺等结构后暴露颈动脉和颈外静脉, 利用血管套管技术, 将皮瓣股动脉与颈动脉相接, 将皮瓣股静脉与颈外静脉相接。观察皮瓣存活, 病理染色检查血管通畅情况, 生存资料采用Kaplan-Meier方法统计, 组之间的差异采用Log-Rank法来比较。结果供体皮瓣获取时间为(43±3) min, 总手术时间为(91±7) min, 皮瓣整体缺血时间(73±2) min。同基因移植组皮瓣均获得长期存活, 急性排斥组皮瓣在术后10 d左右均发生了排斥;免疫抑制组皮瓣中...     

VEGF在大鼠原位肝移植急性排斥反应中的表达研究

目前从血管内皮细胞和炎症反应相互作用横向联系角度来进一步探讨其机制的研究还非常罕见.参与移植器官急性排斥反应过程的细胞因子有多种,但血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)起着介导免疫炎症反应和血管新生相互作用.材料与方法1.动物模型与分组:采用经典的二袖套法建立近交系DA(RT1a),LEW( RT11)原位肝脏移植急性排斥反应模型,进行大鼠原位肝移植.48只大鼠分2组:对照组24只,LEW( RT11 )-DA(RT1a)大鼠间移植为同系移植耐受(syngeneic OLT,OLTS),实验组24只,DA( RT1a)-LEW( RT11)大鼠间移植为同种异体移植急性排斥(acute allograft rejection OLT,OLTR).对照组和实验组均按移植术后1,3,7天分亚组,每个亚组8只大鼠.     

Long‐Term Follow‐Up in Composite Tissue Allotransplantation: In‐Depth Study of Five (Hand and Face) Recipients

Composite tissue allotransplantations (CTAs) have clinically shown little, if any, evidence of chronic rejection. Consequently, the effect of chronic rejection on bones, joints, nerves, muscles, tendons and vessels may still have undescribed implications. We thoroughly assessed all allograft structures by histology, magnetic resonance imaging, ultrasonography and high resolution peripheral quantitative computed tomography scan in four bilateral hand‐grafted patients (10, 7, 3 and 2 years of follow‐up, respectively) and in one facial allotransplantation (5 years of follow‐up). All the recipients presented normal skin structure without dermal fibrosis. Vessels were patent, without thrombosis, stenosis or intimal hyperplasia. Tendons and nerves were also normal; muscles showed some changes, such as a variable degree of muscular hypotrophy, particularly of intrinsic muscles, accompanied by fatty degeneration that might be related to denervation. In the majority of hand‐grafted patients graft radius and recipient tibia showed a decrease in trabecular density, although in the graft radius the alterations also involved the cortices. No deterioration of graft function was noted. In these cases of CTA no signs of chronic graft rejection have been detected. However, the possibility that chronic rejection may develop in CTA exists, highlighting the necessity of close continuous follow‐up of the patients.     

异体睾丸移植的研究进展

异体睾丸移植是治疗男性不育或性腺功能减退的有效方法之一。自18世纪开展第一例实验睾丸移植至今已经历了近3个世纪,有关这方面的研究在不同领域都取得了长足进展,但涉及其中的诸多问题依然值得关注。现结合众多文献资料,就睾丸移植的历史、现状及展望作较全面的阐述。     

同种异体双手移植术细胞因子的动态监测

目的探讨同种异体双手移植术细胞因子动态监测的临床应用价值.方法 2000年9月～11月,采用ELISA法动态监测异体手移植术患者移植前后,血清中可溶性白细胞介素-2受体(solube interleukin-2,receptor,sIL-2R)、白细胞介素-2(interlukin-2,IL-2)和白细胞介素-6(IL-6)水平的变化,并与15名健康对照血清中相应细胞因子水平进行比较.结果血清IL-2和IL-6水平于术后诱导期明显下降,与术前比较有统计学意义(P＜0.05),而后回升,在维持期保持较术前略高水平,与诱导期比较有统计学意义(P＜0.05);sIL-2R水平术后明显上升,并维持于较高水平.血清IL-2水平与对照组比较,在移植前后均有统计学意义(P＜0.01);IL-6水平与对照组比较,术后诱导期有统计学意义(P＜0.05).结论血清IL-2、IL-6和sIL-2R的动态监测可能有助于排斥反应的诊断,以及预防机会性感染、肿瘤及移植物抗宿主疾病的发生.     

ABO-incompatible organ and bone marrow transplantation: current status

Despite the presence of preformed antibodies against AB oligosaccharide epitopes on the donor vascular endothelium, approximately one-third of ABO-incompatible organ allografts are not rejected by a humoral mechanism. With the growing immune-manipulation of the recipient, survival rates can be raised considerably, although they remain significantly inferior to those of ABO-compatible transplantation. Data from the Collaborative Transplant Study indicate a 1-year graft survival rate of approximately 50-60% following cadaveric ABO-incompatible kidney, liver or heart transplantation, compared with 70-80% for an ABO-compatible organ. The results for infants and young children, however, are very much better than those of adults, particularly for liver and heart transplantations, and the data suggest that B-cell tolerance can develop in the infant age group. We here review clinical and experimental experience with ABO-incompatible organ and bone marrow allotransplantation and address the mechanisms by which organs or cells survive in the presence of natural anti-carbohydrate antibodies.     

Near‐infrared lymphography as a minimally invasive modality for imaging lymphatic reconstitution in a rat orthotopic hind limb transplantation model

Wider application of vascularized composite allotransplantation (VCA) is limited by the need for chronic immunosuppression. Recent data suggest that the lymphatic system plays an important role in mediating rejection. This study used near‐infrared (NIR) lymphography to describe lymphatic reconstitution in a rat VCA model. Syngeneic (Lewis–Lewis) and allogeneic (Brown Norway–Lewis) rat orthotopic hind limb transplants were performed without immunosuppression. Animals were imaged pre‐ and postoperatively using indocyanine green (ICG) lymphography. Images were collected using an NIR imaging system. Co‐localization was achieved through use of an acrylic paint/hydrogen peroxide mixture. In all transplants, ICG first crossed graft suture lines on postoperative day (POD) 5. Clinical signs of rejection also appeared on POD 5 in allogeneic transplants, with most exhibiting Grade 3 rejection by POD 6. Injection of an acrylic paint/hydrogen peroxide mixture on POD 5 confirmed the existence of continuous lymphatic vessels crossing the suture line and draining into the inguinal lymph node. NIR lymphography is a minimally invasive imaging modality that can be used to study lymphatic vessels in a rat VCA model. In allogeneic transplants, lymphatic reconstitution correlated with clinical rejection. Lymphatic reconstitution may represent an early target for immunomodulation.     

Modified Le Fort II approach with adequate vascularization preservation in midface allotransplantation: Mock surgery

IntroductionIt is critical to preserve adequate vascularization in midface allotransplantation, the major complication of which is inadequate blood supply in palate area supplying mainly by internal maxillary artery. Therefore, the aim of this study is to explore a modified Le Fort II approach entailing midface vascularization enhancement.Materials and methodsTen cadaveric heads were used in mock surgery. A conventional approach was used on seven cadaveric heads to harvest external carotid artery-facial artery-internal maxillary artery axis. On the remaining three cadaveric heads, modified Le Fort II approach was applied where the internal maxillary artery was harvested after cutting off zygomatic arches and rami of the mandible.ResultsThe conventional approach had difficulty harvesting internal maxillary artery, which left the facial artery the only blood supply to midface. Modified Le Fort II approach with Computerized surgical planning (CSP) assisted, on the other hand, could completely unveil and harvest intact internal maxillary artery after osteotomy of mandibular ramus.ConclusionThe modified Le Fort II approach with CSP and ultrasonic bone cutter assisted can maximally preserve internal maxillary system with ease. This approach optimizes midface allotransplantation in clinical practice in future.     

异体脸面移植的研究进展

目的 追溯国内外有关异体脸向移植的发展及应用。方法 广泛查阅近年来关于异体脸面移植的文献进行综述。结果 由于异体脸面移植技术的复杂性以及涉及免疫、心理、社会、伦理等各种问题。迄今为止尚有各种争论。结论 异体脸面移植将使严重毁容患者从这项新技术中受益。